Tsirkuleeriva eksosomaalse PD-L1 tuvastamise meetodid

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Tsirkuleeriva eksosomaalse PD-L1 tuvastamiseks on endiselt puudu aktsepteeritud ja tavapärastest meetoditest. PD-L1 tuvastamiseks ringlevates eksosoomides saab kasutada traditsioonilisi eksosoomide tuvastamise meetodeid, nagu ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs (ELISA) ja vooluanalüüs, ning ELISA on praegu kõige sagedamini kasutatav meetod. ELISA meetod võimaldab kvantitatiivselt tuvastada PD-L1 sisaldust ringlevates eksosoomides ja seda on lihtne kasutada. Voolutsütomeetriat saab kasutada tsirkuleeriva eksosomaalse PD-L1 kvantitatiivseks tuvastamiseks suurtes proovides, kuid selleks on vaja kõrgeid tuvastamisseadmeid. Eksosoomide põhjaliku uurimisega rikastatakse ja arendatakse ka eksosomaalsete valkude ja nukleiinhapete tuvastamise meetodeid ning ringlevates eksosoomides on PD-L1 tuvastamise valdkonda toodud mõned uued meetodid (joonis).

TuvastamineringlevadeksosomaalnePD-L1

1. Digitaalne PCR

Eksosoomides sisalduva väikese koguse nukleiinhappe tõttu on tavapäraste tuvastamismeetoditega raske nende geenikoopiate arvu täpselt tuvastada. Digitaalne PCR-tehnoloogia on ülikõrge tundlikkusega ja absoluutse kvantifitseerimisega nukleiinhapete tuvastamise meetod. Selle tundlikkus võib ulatuda ühe nukleiinhappemolekuli tasemeni, seega on sellel eelised eksosoomide nukleiinhappesisalduse tuvastamisel. Teadlased kasutasid digitaalset PCR-tehnoloogiat PD-L1 mRNA koopiaarvu täpseks kvantitatiivseks analüüsimiseks melanoomi ja mitteväikerakk-kopsuvähiga patsientide plasma eksosoomides ning näitasid seost plasma eksosomaalse PD-L1 mRNA koopiaarvu ja anti-PD1 korrelatsiooni vahel. ravitoimete vahel. Digitaalse PCR-tehnoloogia kasutuselevõtt on oluliselt parandanud eksosomaalse PD-L1 mRNA tuvastamisvõimet, millel on suur tähtsus eksosomaalse PD-L1 uurimisel. Siiski võib eksosomaalse PD-L1 mRNA sisalduse ja PD-L1 valgu ekspressiooni vahel esineda vastuolusid. Seetõttu võib ainult eksosomaalse PD-L1 mRNA tuvastamisel olla teatud defekte, mis vajavad täiendavat uurimist ja selgitamist.

Vähivastane kõrbetsitanche saab kasu cistanche ekstraktist

2. ELISA

ELISA on traditsiooniline immunoloogilise analüüsi meetod, mida kasutatakse sageli väikeste molekulaarsete valkude tuvastamiseks plasmas või söötmes. Sellel on kõrge tundlikkus ja seda saab kvantitatiivselt analüüsida. ELISA-d saab kasutada ka eksosomaalse PD-L1 valgu tuvastamiseks ja sellega saab saavutada suurte proovipartiide kvantitatiivse tuvastamise. ELISA meetodi põhimõttel põhinevat PD-L1 valgu tuvastamise komplekti on rakendatud ka plasma eksosomaalse PD-L1 valgu kvantitatiivseks tuvastamiseks. Chen et al. konstrueeris ELISA põhimõttel põhineva eksosomaalse PD-L1 valgu tuvastamise süsteemi, mida kasutati rakukultuuri söötmest või plasmast pärineva eksosomaalse PD-L1 valgu tuvastamiseks. Lineaarne tuvastamisvahemik oli {{10}}.2-12,0 ng/mL. ELISA on hea meetod eksosomaalse PD-L1 valgu tuvastamiseks, mida on lihtne kvantitatiivselt tuvastada ja millel on hea korratavus. Kuid vaba PD-L1 valgu olemasolu tõttu plasmas häirib see selle täpsust. Seetõttu tuvastab see meetod vereringe. Eksosomaalse PD-L1 valgu tundlikkust ja spetsiifilisust tuleb veel uurida.

Herba cistanche juur: vähivastane

3. Voolu analüüsi meetod

Voolutsütomeetriat kasutatakse sageli vedelikus suspendeeritud rakkude või muude bioloogiliste osakeste tüpiseerimiseks ja loendamiseks, seega on seda meetodit kasutatud ka eksosoomide tuvastamisel ja loendamisel. THEODORAKIS et al. kasutas esmalt kromatograafiat eksosoomide eraldamiseks pea- ja kaelapiirkonna vähihaigete plasmas ning seejärel vooluanalüüsi PD-L1-positiivsete eksosoomide tuvastamiseks ja loendamiseks. PD-L1 valgu ekspressioon väljendati fluorestsentsi intensiivsusena. Tulemused näitavad, et meetodil on hea reprodutseeritavus eksosomaalse PD-L1 valgu tuvastamisel ja selle indiviidisisene varieeruvus on 7 protsenti, kui ühe patsiendi prooviga tehakse mitu paralleelset analüüsi. Samal ajal kasutasid teadlased meetodi täpsuse kontrollimiseks eksosomaalse PD-L1 valgu tuvastamise võrdlusmeetodina konfokaalset fluorestsentsanalüüsi. Kolme proovi testiti paralleelselt ja tulemusi võrreldi ning leiti, et voolutsütomeetria ja konfokaalse fluorestsentsanalüüsi tulemused olid väga järjepidevad, mis näitab, et voolutsütomeetria oli täpne meetod eksosomaalse PD-L1 kvantitatiivseks analüüsiks. Lisaks on LUX jt. tuvastas edukalt ka eksosomaalsete PD-L1 ja c-Met valkude ekspressiooni pankreasevähiga patsientide seerumis voolutsütomeetria abil, kuid tuvastamismeetodi toimivust tuleb täiendavalt uurida. Praeguseks on turule tulnud ka spetsiaalselt eksosoomide tuvastamiseks kasutatavad vooluanalüsaatorid, näiteks Apogee ülitundlik nanovooluanalüsaator, mis sobib paremini eksosoomivalkude tuvastamiseks kui traditsioonilised vooluanalüsaatorid.

Tistanche tubulosa ekstrakti lisandi eelised: kasvaja- ja vähivastane toime

4. Pinnaga täiustatud Ramani hajumise tehnoloogia

Surface-enhanced Raman scattering (SERS) on ülitundlik sõrmejälgede spektroskoopia tehnika, mida on laialdaselt kasutatud biomeditsiini valdkondades. Praegu on teadlased kasutanud SERS-tehnoloogiat eksosomaalse PD-L1 valgu tuvastamiseks. Teadlased kasutasid esmalt TiO2-modifitseeritud magnethelmeid eksosoomide mittespetsiifiliseks adsorbeerimiseks plasmas ja seejärel PD-L1 antikehadega seotud SERS-sonde, et muuta kulla nanoosakesi ja seejärel inkubeerida eksosoomiproove kulla nanoosakestega. See moodustab magnethelmeste-eksosoomi-kulla nanoosakeste kompleksi struktuuri ja lõpuks kasutab kompleksi rikastamiseks ja eraldamiseks magnetvälja ning asetab seejärel tuvastamiseks laserkonfokaalsele Ramani spektromeetrile, et tuvastada PD-L1 positiivsed eksosoomid. . Kehasisalduse tuvastamine. Sellel meetodil on kõrge tuvastamise tundlikkus ja selle madalaim avastamispiir võib ulatuda 1 PD-L1 pluss eksosoomi / μL plasmani. Lisaks kasutasid teadlased seda meetodit erineva kontsentratsiooniga proovide rühma tuvastamiseks. Tulemused näitasid, et SERSi intensiivsus oli lineaarselt seotud eksosoomiproovide kontsentratsiooni logaritmiga, mis näitab, et tuvastamismeetodil on hea stabiilsus ja seda saab plasmas otseselt kasutada. Tuvastage eksosoomid ilma täiendava eksosoomi eraldamisetapita. Praegu on vähe uuringuid SERS-tehnoloogia otsese rakendamise kohta eksosomaalse PD-L1 valgu tuvastamisel, kuid on tehtud uuringuid SERS-tehnoloogia rakendamise kohta teiste eksosoomide tuvastamisel, millel on ka oluline viide. eksosomaalse PD-L1 valgu väärtuse tuvastamiseks.

Kõrbekas elav tsitanche kasvuolukord

5. HOLMES-ExoPD-L1 meetod

HOLMES-ExoPD-L1 meetod on eksosomaalse PD-L1 valgu uudne tuvastamismeetod. Selle meetodi puhul töötati välja uus MJ5C aptameer, mis on suunatud PD-L1 valgule, mis suudab tõhusalt siduda PD-L1 valku eksosoomi membraanil ja mida ei sega PD-L1 valgu glükosüülimine. Selle meetodi puhul inkubeeriti fluorestseeruvalt märgistatud MJ5C aptameeri ja eksosoome esmalt õhukeses kapillaaris, et omavahel seostuda, ja infrapunalaser fokuseeriti õhukesesse kapillaari, et moodustada mikronimõõtkava temperatuurigradient. Vaba MJ5C aptameeri ja eksosomaalsete MJ5C aptameeri komplekside termoforeesi kiirused olid oluliselt erinevad ning vaba aptameeri termoforeetiline ammendumine oli kiirem kui eksosoomi-aptameeri kompleksi oma. eraldatud. Seetõttu saab ergastusvalguse toimel määrata eksosomaalse PD-L1 valgu sisalduse, tuvastades fluorestsentsmärgistatud aptameeride fluorestsentsi intensiivsuse. Meetod on kõrge tundlikkusega ja avastamispiiriga 17,6 pg/ml. Lisaks on selle eeliseks väiksem proovi maht ja lühike tuvastamisaeg. See on väga originaalne meetod eksosomaalse PD-L1 valgu tuvastamiseks, mis on väga oluline uue väljatöötamiseks. Eksosomaalse PD-L1 valgu tuvastamise meetodil on valgustav väärtus.

Kasvajavastane: tsistanši lisand

Eksosomaalsel PD-L1-l on laialdased rakendusväljavaated pahaloomuliste kasvajate immunoteraapia valdkonnas ja sellest on saanud üks eksosoomiuuringute levialasid. Võrreldes koe PD-L1 ekspressiooni tuvastamisega on tsirkuleeriva eksosomaalse PD-L1 tuvastamisel lihtsam proove hankida ja reaalajas tuvastada, vältides samal ajal patoloogilisest proovide võtmisest põhjustatud kudede heterogeensuse probleemi; Eksosomaalne PD-L1 põhjustab ka kasvaja immuunsust. See on oluline põgenemise põhjus ja on seotud pahaloomuliste kasvajate progresseerumisega ning võib saada oluliseks näitajaks haiguse hindamisel ja prognoosi ennustamisel. Lisaks eeldatakse, et plasma eksosomaalset PD-L1 taset kasutatakse ka PD-L1-vastase immunoteraapia jaoks sobivate patsientide skriinimiseks ja nende ravivastuse prognoosimiseks. Siiski puuduvad endiselt tunnustatud ja tõhusad meetodid ringlevate eksosoomide PD-L1 tuvastamiseks. On vaja luua ideaalne ringlev eksosoom, millel on lihtne eraldamine või eraldamine, väiksem proovinõudlus, kõrge tundlikkus, hea korratavus ja vähem vastuvõtlikud tuvastamissignaalid. Meetod PD-L1 tuvastamiseks in vivo. Tsirkuleeriva eksosomaalse PD-L1 tuvastamismeetod vajab veel põhjalikumat uurimist, kuid arvatakse, et uute tuvastamismeetodite väljatöötamise ja rakendamisega tulevikus suudab ringlev eksosomaalne PD-L1 paremini suunata PD1-vastast immunoteraapiat. ja seda kasutatakse pahaloomuliste kasvajate diagnoosimisel ja ravil. mängivad olulisemat rolli.