Acteoside'i eelised - ravige glioblastoomi

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

TAE WOONG HWANG;DONG HUN KIM; DA BI KIM1;TAE WON JANG;GUN-HWA KIM;MINHO MOON;KYUNG AH YOON;DAE EUN CHO;JAE HO PARK;JWA-JIN KIM

1. Sissejuhatus

Glioblastoomon kõige levinum pahaloomulise primaarse ajukasvaja tüüp ning kõige invasiivsem ja laastavam primaarne ajukasvaja (1,2), mille keskmine elulemus on ~18 kuud agressiivse multimodaalsusraviga. Praegused raviotsused on piiratud ja hõlmavad kiiritust, kemoteraapiat ja operatsiooni koos alküüleeriva aine temozolomiidiga (TMZ) (3,4). Hoolimata agressiivsete ravimeetodite kättesaadavusest on patsientidelglioblastoomüldiselt on prognoos halb (5). TMZ on peamine kemoterapeutiline ravim, mida kasutatakse pahaloomulise aine kliinilises ravisglioblastoom(6‑8); seeria alküülimisainena on see võimeline tungima vere-aju barjääri (9-11). Pahaloomulise glioblastoomi progresseerumise ja ulatusliku invasiooni ajal kogu ajus vähendab pidevalt kasvav ravimiresistentsus TMZ-le selle terapeutilist efektiivsust (12,13). Sellest tulenevalt on uudsed terapeutilised ravimid, et võideldaglioblastoomNeid otsitakse kiiresti.

Varasemad uuringud on näidanud, et glioomirakud läbivad rakusurma autofaagia või II tüüpi programmeeritud rakusurma kaudu vastuseks TMZ-le (14,15). Autofaagiat saab inhibeerida 3-metüüladeniiniga (3-MA) mikrotuubulitega seotud valgu 1 valgusahela 3 (LC3)-I muundamise kaudu LC3-II-ks, vähendades seeläbiglioblastoomraku surm (16,17); kuid autofaagia roll sõltub raku kontekstist. Välja arvatud tsütotoksiline roll TMZ-i toime ajal, on autofaagia induktsioon rakulise stressiga tsütopensiivne protsess, mis kõrvaldab stressist põhjustatud tsütoplasmaatilised agregaadid, organellid ja makromolekulid imetajate rakkudes lüsosomaalse süsteemi kaudu. Homöostaasi säilitamisega seotud rakud omakorda saavad energiat nende kataboolsete protsesside kaudu (18,19). Autofaagia keerulised rollid viitavad sellele, et autofaagi aktivaatoril võib olla vähivastane toime koos TMZ-raviga, kutsudes esileglioblastoomraku autofaagia ilma kahjulikke mõjusid avaldamata või normaalsetele kudedele kasu pakkumata. Pange tähele, et TMZ-l on koos D-vitamiiniga ilmnenud sünergiline terapeutiline toime, sealhulgas rakkude elujõulisuse pärssimine ja täiustatud autofaagiaglioblastoomLahtrid. Lisaks on näidatud, et TMZ ja D-vitamiini kombinatsioon avaldab in vivo vähivastast toimet, sealhulgas kasvaja suuruse vähenemist ja pikaajalist elulemust. Need uuringud näitavad, et kombineeritud ravil võib olla sünergiline vähivastane toime TMZ-põhiste autofaagiliste mehhanismide kaudu.glioblastoomravi (15).

Acteosideon fenüületanoidi glükosiid, mis on laialt levinud mitmetes tonifitseerivates traditsioonilistes Hiina taimsetes ravimites (20,21). Mitmed farmakoloogilised toimed, sealhulgas antioksüdant, vähivastane aine, põletikuvastane, antinefriitne ja antimetastaatilised toimed, on seotudacteoside(22‑24). Varasemad uuringud on näidanud, etacteosideomab kaitsvat toimet süsinik tetrakloriidi ja D-galaktosamiini põhjustatud maksakahjustuse vastu. Aktiosiidi kaitsva toime aluseks olevad mehhanismid on tõenäoliselt seotud selle võimega pärssida P450 vahendatud bioaktiveerimist ja süsiniku tetrakloriidiga kokkupuutest põhjustatud vabade radikaalide püüdmise mõju (25,26).

Seetõttu näitavad tõendid, et mõlemadacteosideja TMZ indutseerivad vähivastast toimet rakusurma kaudu. Kuid nende seos ja vähivastane mõju seosesglioblastoomjääb selgusele. Seetõttu oli käesoleva uuringu eesmärk kontrollida sünergilist vähivastast toimet, misacteosidekoos TMZ-gaglioblastoomravi. C6 kombineeritud ravi vähivastaste mõjude analüüsimiseks viidi läbi rakkude elujõulisuse analüüs.glioblastoomrakud (rottglioblastoomja tulemusi võrreldi ainult TMZ-ga ravile järgnenud tulemustega. Täiendavalt uurida rakusurma mehhanismi, mis on põhjustatud ravimisestacteosideuuriti TMZ-d, apoptoosi ja autofaagiaga seotud geene C6-rakkudes.

acteoside kasvajavastane

2. Materjalid ja meetodid

Rakukultuur:

C6 rottglioblastoomrakuliin osteti American Type Culture Collectionist (Rockville, MD, USA). Rakke kasvatati steriilsetes tingimustes 37 °C juures niiskes keskkonnas, kus Dulbecco modifitseeritud Eagle'i keskkonnas (DMEM) kasvatati 5% CO2-st, millele lisandus 10% loote veiste seerum (FBS) ning 1% antibiootikume ja antimükootikume (kõik Welgene, Daegu, Korea).

Taimne materjal:

Abeliophyllum distichum Nakai [vautšer nr. Park1001 (ANH)] koguti Misun-hyangi teemaparki Seongbul-Mountain Recreation Forestis, Koreas.

Kalluse induktsioon:

Kalluse moodustumise (27) esilekutsumiseks eraldati värsketest taimedest 1 cm2 lehtede eksplantid. Eksplanti kasvatati Murachige ja Skogi keskkonnas (4% sahharoosi, 0,9% agarit täiendati 1 mg/l rasktaleeni äädikhappega ja 1 mg/l 2,4-dikloro fenoksüäädikhappega, pH 5,7) 25 °C juures. Kallus indutseeriti 20 päeva hiljem. Piisav kogusacteosidesaadi subkultuuri kaudu eraldamiseks ja puhastamiseksacteosidekallusest (joonis 1). Erinevad partiid puhastatudacteosideNeid kasutati igas eksperimendis. Iga katse viidi läbi kolm korda, kasutades erinevat partiid.

Isolatsioon ja puhastamine:

Etüülatsetaadi fraktsioonid koondati vacuosse ja neid kasutati aktiosiidi puhastamiseks proovina.Acteosideisoleeriti ja puhastati kiirendatud kromatograafilise isolatsiooni süsteemiga (Isolera™ Spektra, Biotage, Uppsala, Rootsi), kasutades SNAP KPHOSPHO-SIL ja SNAP Ultra kassette (biotaaž). acteosidekallusest puhastatud analüüsiti kvantitatiivselt standardse aktiosiidi abil HPLC-PDA analüüsi abil. Lõpuks saadi kallusest ≥95% puhtusega aktiosiid, mida kasutati temozolomiidil põhineva kemosomoidil põhineva kemoteraapia proovina.glioblastoom.

3-(4,5-Dimetüülthiazol-2-l)-,5-difenüültetrazolium bromiid (MTT) analüüs:

Et tuvastada TMZ poolinniksimaalne inhibeeriv kontsentratsioon (IC50 väärtus) C6 rakkude suhtes, külvati 1x104 üherakuliste suspensioonide rakku 96-kaevuliste plaatide üksikutesse kaevudesse ja inkubeeriti 24 tundi 37 °C juures enne TMZ-ravi näidatud kontsentratsioonides (1, 5, 10 ja 20 mM) 37 °C juures 24 h juures. Pärast TMZ IC50 väärtuse määramist 5 mm-ks töödeldi rakke 24 tundi 5 mM TMZ-ga, 50 μM-igaacteosidevõi nende kahe kombinatsioon (5 mM TMZ ja 50 μMacteoside). Igale süvendile (10 μl) lisati MTT lahus (5 mg/ml) ja seda kasvatati 37 °C juures 2 tunni jooksul. Seejärel eemaldati söötme ja DMSO lisati mahus 200 μl ja reageeriti toatemperatuuril 30 minutit. Rakkude elujõulisuse kindlakstegemiseks mõõdeti neelduvust 595 nm juures.

Haavade paranemise analüüs:

C6-rakkude suspensioon 1 ml-s kasvatati 12-kaevulises plaadis ja kasvatati konsolideerumiseks. Rakke raviti TMZ-ga,acteosidevõi TMZ +acteosideja seejärel kriimustatud steriilse 10-μl pipeti otsaga, et luua kunstlik haav. 0 ja 24 h pärast haavamist jäädvustati ümberpööratud mikroskoobi abil haavade paranemise protsessi digitaalsed pildid. Rakkude rännet kvantifitseeriti, mõõtes armi suurust 0 ja 24 h juures, kasutades pildianalüüsi tarkvara, ImageJ 1.43u / Java1.6.0_22 tarkvara (NIH, Bethesda, Maryland, USA). Iga katse viidi läbi kolm korda ja mõõtmised viidi läbi kolmekordselt.

Immunoblotting:

C6 rakke raviti TMZ-ga,acteosidevõi TMZ +acteoside24 tundi. Rakud lüüsiti jääl RIPA poolt (25 mM Tris-HCl, pH 7,5, 150 mM NaCl, 1% Nonidet P-40, 1% naatriumdeoksükolaadi, 0,1% SDS) lüüsipuhvrit täiendati proteaasi ja fosfataasi inhibiitorite kokteiliga (Roche, Basel, Šveits) 30 minutit. Pärast tsentrifuugimist 18 341 x g juures 15 minutit 4 °C juures saadi supernatant. Valgu kontsentratsioon määrati Bradford Protein Assays (Bio-rad, Hercules, CA, USA) abil. Võrdsed valgud (30 μg) laaditi ühte kaevu ja fraktsioneeriti elektroforeesi kaudu 10-15% SDS-PAGE'i kaudu. Valgud kanti elektro üle polüvinüülideeni difluoriidi membraanidesse (EMD Millipore, Bedford, MA, USA). Pärast inkubeerimist blokeerimislahuses, mis sisaldab 5% rasvata piima Tweeni/Tris-puhvri soolalahuses 30 minutit toatemperatuuril. Blots uuriti 1:1000 lahjendatud primaarsete antikehadega (kass nr 9662, kaspaas 3; Raku signalisatsioonitehnoloogia, Inc., Danvers, MA, USA), B0-rakuline lümfoom 2 (ks-7382, Bcl-2), Bcl-2-ga seotud X-valk (kass nr 2772, Bax), fosforüülitud (p-)p53 (sc-101762), kokku-p53 (sc-6243), β-aktiin (kass nr 4970; kõik; Santa Cruz Biotechnology, Inc., Dallas, TX, USA), LC-3 (L8918, Sigma; Merck KGaA, Darmstadt, Saksamaa), Rab7 (kass nr 9367, Cell Signaling Technology, Inc.), p62 (kass nr 114), p-p38 (kass nr 9211), kokku-p38 (kass nr 9212), p-c-Jun N-terminaalne kinaas (kass nr 9251, p-JNK), total-JNK (kass nr 9252), p-ekstratsellulaarne signaal-reguleeritud sugulane (kass nr 9101, p-ERK), kokku ERK (kass nr 9102; kõik Cell Signaling Technology, Inc.) üleöö temperatuuril 4°C. Sellele järgnes inkubatsioon mädarõika peroksüdaasi konjugeeritud sekundaarsete antikehadega (1:2000; LF-SA8001A, kitse hiirevastane IgG-HRP) või LF-SA8002A (kitsede küülikuvastane IgG-HRP), AB Frontier, Seoul, Korea.) 2 tundi toatemperatuuril. Seejärel visualiseeriti valke kokkupuutel Chemi-Dociga (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, cA, USA).

Immunofluorestsentsvärvimine:

Lüsosomaalselt seotud membraanivalk 1 (LAMP1) ja LC3 on lüsosomaalse ja autofaagia markerid. Rakud (1x105 rakku/ kaevu) valmistati steriliseeritud klaasist kattekihtidel (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, USA) kolmekordselt. Pärast ravi TMZ-ga,acteosidevõi TMZ +acteoside24 tunni jooksul fikseeriti rakud 4% paraformaldehüüdis 30 minutiks, blokeeriti 5% tavalise kanaseerumiga (S-3000; Vector Laboratories, Inc., Burlingame, CA, USA), 0,1% Triton X-100 ja seejärel inkubeeritud 1 h permeabiliseerimiseks ja mittespetsiifiliste valgu-valgu interaktsioonide blokeerimiseks. Seejärel inkubeeriti rakud LAMP1-vastaste (1:200; sc-19992, Santa Cruz Biotechnology, Inc.) ja anti-LC3 (1:400; PM036, MBL International, Woburn, MA, USA) üleöö temperatuuril 4 °C. Seejärel pesti rakke kaks korda PBS-iga ja inkubeeriti veel 2 tundi pimedas Alexa Fluor 488 ja 594 sekundaarse antikeha seguga (1:200; Alexa Fluor 488 (A-11008) ja 594 (A-11007), Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA) ja pestakse uuesti PBS-iga. Tuumad värviti 4,6-diamidino-2-fenüülindooliga (Sigma; Merck KGaA) ja seejärel pestakse kaks korda PBS-iga. Seejärel paigaldati slaidid ja pildid jäädvustati LSM-700 laserkonfokaalmikroskoobi alla.

Joonis 1. Aktiosiidi keemiline struktuur.

Voolutsütomeetria.

Rakke analüüsiti Mitotracker Greeni ja MitoSOX-i jaoks voolutsütomeetria abil FACSCanto II voolutsütomeetri abil, nagu on näidanud tootja (BD Biosciences). Pärast kahte pesemist PBS-iga fikseeriti rakud 4% paraformaldehüüdis 30 minutiks toatemperatuuril ja permeabiliteeriti 0,25% Triton X-100-ga PBS-is 20 minutiks. Rakud värviti primaarsete antikehadega üleöö temperatuuril 4 °C (1:200) ja seejärel sekundaarsete antikehadega 1 h jääl. Pärast kahte PBS-iga pesemist fikseeriti rakud 4% paraformaldehüüdiga ja analüüsiti kohe. Voolutsütomeetria andmeid koguti 10 000 raku abil ja neid analüüsiti FlowJo 7.6.1 tarkvara abil (Tree Star, Inc., Ashland, OR, USA).

Statistiline analüüs:

Kõiki andmeid analüüsiti GraphPad Prism 5.0 abil ja need on esitatud keskmise ± standardse vea keskmisena. Andmeid analüüsiti ühesuunalise analüüsiga erinevuse kohta Tukey mitme võrdlusega post hoc testiga keskmiste väärtuste võrdlemiseks mitme rühma vahel. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Cistanche Echinacoside: Anti-apoptosis

3. Tulemused

3.1 Koostöö TMZ ja aktioside'iga pärsibglioblastoomrakkude vohamine ja ränne.

Kombineeritud ravi TMZ-ga jaacteosidepärssis C6 rakkude elujõulisust. TMZ vähendas rakkude elujõulisust annusest sõltuval viisil (joonis 2A), samas kui ainuüksi aktiosiidil ei olnud olulist mõju ühelgi ravitasemel (joonis 2B). Pärast inkubeerimist kultuurikeskkonnas, mis sisaldas TMZ-d aktiosiidiga või ilma 24 tunni jooksul, tehti MTT analüüs, et võrrelda erinevate ravitasemete tsütotoksilisust. TMZ pärssis oluliselt rakkude elujõulisust, samas kui aktioside ei pärssinud oluliselt rakkude kasvu. Kombineeritud töötlemine TMZ ja aktiosiidiga vähendas märgatavalt rakkude elujõulisust (joonis 2C). Ravi TMZ-ga või acteoside'iga üksi vähendas haavade paranemise võimet (joonis 3A). Haava kaugust (%) mõõdeti joonisel 3A näidatud tulemuste abil ImageJ tarkvaraga. Haava kaugus suurenes oluliselt pärast kombineeritud ravi (joonis 3B) võrreldes kummagi individuaalse raviga. Need tulemused näitavad, et ravi TMZ ja aktioside'iga oli tõhus inhibiitorglioblastoomrakkude vohamine ja ränne.

3.2 Acteoside ja TMZ mõjutavad Apoptoosi sünergiliselt C6 rakkudes.

Lääne blot analüüsi tulemused näitasid, et lõhutud kaspaasi-3, Bax ja fosforüleeritud p53 tase oli kõrgem ja Bcl-2 tase oli madalam pärast kombineeritud töötlemist TMZ-ga jaacteosidekui ravi ainult TMZ-ga (joonis 4A).ActeosideSeejärel täheldati TMZ-ga töödeldud C6-rakkudes vahendatud mitokondriaalset funktsiooni ja reaktiivsete hapnikuliikide (ROS) teket, mis on apoptootilise signaalimise peamised vahendajad. MitoTracker Greeni abil viidi mitotracker Greeni abil läbi fluorestsentsaktiveeritud rakkude sorteerimise analüüs.acteosidetulemuseks oli suurem mitokondriaalne mass kui ravi ainult TMZ-ga (joonis 4B). ROS-i genereerimine oli pärast TMZ ja acteoside'iga ravi oluliselt suurem kui ravi ainult TMZ-ga (joonis 4C). Need tulemused näitavad, et ROS-i genereerimine ja mitokondriaalne funktsioon on olulised Apoptoosi korral, mis on põhjustatud ravist TMZ + aktiogaasiga. Ravi TMZ ja aktioside'iga indutseerib autofaagiat C6 rakkudes. On teatatud, et TMZ indutseerib autofaagia (28,29); seetõttu uuriti käesolevas uuringus, mil määral põhjustas autofaagia TMZ + acteoside ravi. C6 rakke raviti TMZ-ga aktiogaasiga või ilma; 24 tunni pärast värviti rakud immunofluorestsentsiks, et tuvastada LAMP1 ja LC3 autofaagia markeritena. Pärast kombineeritud ravi täheldati LAMP1 ja LC3 suuremat ekspressioonitaset (joonis 5A). Uuriti ka autofaagiaga seotud valgu ekspressiooni ja leiti, et TMZ indutseeris LC3-I muundamise LC3-II-ks, mis on autofagosoomi põlvkonna allkiri. Pärast ravi TMZ ja acteoside'iga täheldati LC3-I LC3-II-ks konversiooni kõrgemat määra kui ravi ainult TMZ-ga. Rab7 ja p62 ekspressioonitasemed näitasid autofaagilist induktsiooni TMZ-töödeldud rakkudes (joonis 5B). Need leiud viitavad sellele, et koostöö TMZ ja acteoside'iga parandas autofaagilist protsessiglioblastoomLahtrid.

3.3 Acteoside indutseerib MAPK raja geeniekspressiooni TMZ-põhises ravis.

Varasemad uuringud on näidanud, et TMZ reguleerib MAPK rada, sealhulgas p38, JNK ja ERK (30). Seetõttu uuriti käesolevas uuringus, kasacteosidemõjutab TMZ-ga seotud MAPK geeniekspressiooni. C6 rakke raviti TMZ-ga koos või ilmaacteoside. Pärast 24 h, TMZ ravi tulemuseks oli kõrgem ekspressiooni tase p-p38, p-JNK ja p-ERK. TMZ-ga reguleeritud geenide ekspressioon oli pärast TMZ + acteoside ravi oluliselt suurem kui ravi ainult TMZ-ga (joonis 6). Need tähelepanekud viitavad sellele, etacteosidemõjutab TMZ-põhiseid ravimehhanisme MAPK raja kaudu.

Acteoside anti-glioblastoom

Arutelu

Käesoleva uuringu tulemused näitavad, et kombineeritud ravi TMZ-gaacteosidepakub terapeutilist potentsiaaliglioblastoomja esitada tõendeid selle kohta, et kemosensibiliseerimine TMZ jaacteosidevõib toimuda autofaagia täiustamise kaudu. Nagu mutatsioonglioblastoomrakud võivad põhjustada apoptootilise raja inaktiveerimist, autofaagia induktsiooni TMZ + pooltacteosideravi võib olla alternatiivne meetodglioblastoomravi. Kuid kas autofaagia on ainus mehhanismglioblastoomteraapia TMZ+-gaacteosideravi tuleb veel selgitada.

Autofaagia on oluline rakumehhanism valkude ja tsütoplasma organellide lagunemiseks. Indutseeritud autofaagia kataboolne eelis võib olla stressirohketes tingimustes oluline; seetõttu võib autofaagia esilekutsumine olla adaptiivne mehhanism rakkude surma ennetamiseks (31-33). Varasemad uuringud on näidanud, et vähenenud autofaagia on korrelatsioonis vähiga (34-36). Lisaks dereguleeritakse pahaloomulise transformatsiooni käigus mitmed autofaagiaga seotud valgud ja signaalrajad, mille tulemuseks on autofaagilise aktiivsuse vähenemine. LC3 kõrget ekspressioonitaset on seostatud ka suurenenud elulemuse määraga patsientidel, kellel onglioblastoomkehvade tulemustega (37,38). Samamoodi näitavad käesoleva uuringu tulemused, et normaalse autofaagia taastamine võib olla varjatud strateegiaglioblastoomravi ja võib olla mehhanism ebanormaalsete kasvajarakkude kasvu piiramiseks.

Tavalises autofaagias isoleeritakse autofagosoomides teatud tsütoplasmaatilised komponendid, mis seejärel sulavad kokku laguneva ja ringlussevõetava lüsosoomiga (39,40). Kui autofaagia on ülesreguleeritud, ületavad autofagosoomi moodustumise määrad lüsosomaalse lagunemise määra; Seda seisundit nimetatakse autofaagiliseks stressiks. Kui stress või ebanormaalne autofaagia jätkub, võib rakkude surm tekkida energia ammendumise või bekliini-1 / Bcl-2 tasakaalu muutuste kaudu. Apoptoosi võib põhjustada ka autofagosoomne hüperaktiivsus, mis neelab tsütoplasmalisi organelle, sealhulgas mitokondreid või endoplasmaatilist retiikulumit (41). On oletatud, et üldine autofaagia võib põhjustada rakusurma normaalse tsütoplasmaatilise ja organelli käibe ajal tervetes rakkudes. Selles protsessis rakk "kannibaliseerib" ennast seestpoolt, mis on II tüüpi programmeeritud rakusurma peamine omadus. Kuigi mehhanismid, mille abilacteosidesuurendab TMZ-põhise terapeutilist toimetglioblastoomravi tuleb veel täielikult selgitada, käesolevas uuringus uuritud kombineeritud raviga ilmnenud vähivastased toimed võivad olla seotud nende autofaagiliste mehhanismidega.

Acteosideon taimedest saadud fenüületanoidglükosiid (22,26). Varasemad uuringud on teatanud aktiosiidi erinevatest bioloogilistest tegevustest. Muutused tükeldatud kaspaasi-3 ja LC3 ekspressioonitasemetes käesolevas uuringus näitavad, et ravi TMZ jaacteosideindutseeritud apoptoos ja autofaagia C6 rakkudes (joonised 4 ja 5). Näidati, et kombineeritud ravil on sünergiline mõjuglioblastoomLahtrid. Kuigi nende sünergiliste mõjude muud võimalikud mehhanismid on veel selgitamisel, tuvastati käesolevas uuringus, et autofaagia esilekutsumine on oluline kasvajaline mehhanism.acteosidekemosensensitiseerimine TMZ-põhise ajalglioblastoomravi.

Acteoside ravida glioblastoomi

Viited

1. Friedman HS, Kerby T ja Calvert H: Temozolomide ja pahaloomulise glioomi ravi. Clin Cancer Res 6: 2585-2597, 2000.

2. Mrugala MM ja Chamberlain MC: Haiguse mehhanismid: Temozolomide jaglioblastoomVaata tulevikku. Nat Clin Pract Oncol 5: 476-486, 2008.

3. Agarwala SS ja Kirkwood JM: Temozolomide, uudne alküülimisaine, mille aktiivsus on kesknärvisüsteemis, võib parandada kaugelearenenud metastaatilise melanoomi ravi. Onkoloog 5: 144-151, 2000.

4.Stevens MF, Hickman JA, Stone R, Gibson NW, Baig GU, Lunt E ja Newton cG: Antitumor imidazotetrazines. 1. 8-karbamoüül-3-(2-kloroetüül)imidazo süntees ja keemia[5,1-d]-1,2,3, 5-tetrasiin-4(3 H)-üks, uudne laia spektriga kasvajavastane aine. J Med Chem 27: 196-201, 1984.

5. Fulda S: Rakusurmal põhinev raviglioblastoom. Raku surm dis 9: 121, 2018.

6. Chen PH, Shen WL, Shih CM, Ho KH, Cheng CH, Lin CW, Lee CC, Liu AJ ja Chen KC: CHAC1-inhibeeritud Notch3 rada on seotud temozolomiidi põhjustatud glioomi tsütotoksilisusega. Neurofarmakoloogia 116: 300-314, 2017.

7. Oshiro S, Tsugu H, Komatsu F, Ohmura T, Ohta M, Sakamoto S, Fukushima T ja Inoue T: Temozolomiidi ravi efektiivsus kõrge kvaliteediga glioomiga patsientidel. Vähivastane Res 29: 911-917, 2009.

8. Van den Bent MJ: kõrgekvaliteediliste glioomide Adjuvant ravi. Ann Oncol 17 (Suppl 10): x186-x190, 2006.

9. Shen W, Hu JA ja Zheng JS: temozolomiidi poolt indutseeritud kasvajavastase toime mehhanism glioomirakkudele. J Int Med Res 42: 164-172, 2014.

10.Barciszewska AM, Gurda D, Głodowicz P, Nowak S ja Naskręt-Barciszewska MZ: Temozolomide toime uus epigeneetiline mehhanism glioomirakkudes. PLoS One 10: e0136669, 2015.