Laminaria Japonica Fucoidani ja Cistanche Tubulosa ekstrakti sünergistlik põletikuvastane toime
Mar 03, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com
Abstraktne
Thepõletikuvastanefukoidaani jaCistanche tubulosa (CT) ekstrakti uuriti Vitro makrofaagide kultuurisüsteemis ja in vivo karrageenist põhjustatud õhukoti põletiku mudelis.Cistanche Tubulosaekstrakt inhibeeris lämmastikoksiidi tootmist aktiveeritud RAW 264.7 makrofaagirakkudest, samas kui fukoidaan oli inaktiivne. In vivo õhukotipõletiku mudel, karrageenist põhjustatud veresoonte eksudatsioon ning lämmastikoksiidi ja prostaglandiini E2 kontsentratsiooni suurenemine eksudaatides suruti sünergistlikult alla fukoidaani võiCistanche Ttubulosaväljavõte. Lisaks nõrgendas kombineeritud ravi kudede põletikku oluliselt. Siiski puudus sünergiline toime selle vastupõletikulinerakkude infiltratsioon, kuigi fukoidaan ja CT(Cistanche tubulosa)Iga ekstrakt vähendas märkimisväärselt rakkude arvu. Seetõttu tehakse ettepanek, et fukoidaan blokeerib infiltratsioonipõletikulinerakud, samas kui CT(Cistanche tubulosa) ekstrakt pärsib rakkude aktivatsiooni ja nende kombineeritud ravi võib olla paljutõotav kandidaat erinevat tüüpi põletike leevendamiseks.
Märksõnad: Karrageen, põletik, fukoidaan, Cistanche tubulosa ekstrakt.
Immuunvastusena võõrantigeenide vastu vabastavad makrofaagid põletikueelsed tsütokiine, nagu kasvaja nekroosifaktor (TNF-), interleukiin-1 (IL-1), IL-6 ja teised. [1,2]. Sellised tsütokiinid kutsuvad esile granulotsüütide, monotsüütide, lümfotsüütide ja nuumrakkude kemotaktilise sissevoolu kahjustatud koesse, mis soodustab antigeeni eemaldamist ja kudede taastumist [3,4]. Kuid rakkude liigne infiltratsioon ja aktiveerumine süvendab kudede vigastusi, põhjustades turset (veresoonte eksudatsiooni) ja valu, mis on hästi tuntud põletikunähtused.
TNF- on oluline tegur lämmastikoksiidi süntaasi (iNOS) geeniekspressiooni esilekutsumisel mitmes rakuliinis. iNOS-i aktiveerimine põhjustab lämmastikoksiidi (NO) tootmist[5-7], mis mitte ainult ei moduleeri mitmeid füsioloogilisi funktsioone, nagu bakteritsiidne ja vasodilatatsioon. vaid põhjustab ka põletikku [8,9]. Pärast koekahjustust tekitab rakumembraani fosfolipiidide lagunemine fosfolipaaside toimel arahhidoonhapet. Arahhidoonhape laguneb edasi tsüklooksügenaasi (COX) toimel prostaglandiinideks (PG-d) [10]. COX-II poolt moodustatud PGE2 liigne kogus kutsub esile mitmeid põletiku tsütokiine. Kuna nii NO kui ka PGE2 toimivad peamiste põletiku ja valu esilekutsumise teguritena, on TNF- ja COX-II-PGE2 rajad põletikulise protsessi peamised voolud, mida inhibeerivad kortikosteroidid ja mittesteroidsed ravimid.põletikuvastaneravimid (MSPVA-d) [10,11].
Kuigi põletikuliste haiguste raviks on mitmeid steroide ja MSPVA-sid, võivad need ravimid avaldada kahjulikku mõju immuunsüsteemile, seedetraktile, neerudele, maksale, kesknärvisüsteemile, vererõhule ja kardiovaskulaarsüsteemile [12-14 ]. Seetõttu on vaja minimeerida keemiliste ravimite kahjulikke mõjusid, asendades need või kasutades neid koos looduslike toodetega.
Paljudes riikides laialdaselt levinud merevetikatest, nagu Laminaria japonica ja Cladosiphonokamuranus, pärit fukoidaani, sulfaatpolüsahhariidide kompleksi on idamaade meditsiinis kasutatud pikka aega. Varasemates uuringutes on näidatud, et fukoidaanil on antioksüdatiivne, antikoagulatiivne, vähivastane japõletikuvastanetegevused [15,16]. Sellest tulenevalt köidab uurijate tähelepanu fukoidaani kasulik mõju põletikulistele haigustele, isheemiale, immuunpuudulikkusele ja kasvajatele [17,18]. Teiselt poolt,Cistanche tubulosa(CT) on Hiinas laialdaselt kasutatud ka traditsiooniliste ravimite jaoks. Teatati, et CT ekstrakt vähendab TNF-á ja IL-4 tootmist, mis on põletikulises rajas NO tootmise peamised tegurid [19].
Sellised varasemad leiud panid meid uurima fukoidaani ja CT kombineeritud efektiivsust(Cistanche tubulosa)ekstrakti kahe peamise põletikutee kohta. Toimemehhanismi selgitamiseks analüüsisime karrageenist põhjustatud õhukotipõletiku eksudaatides NO ja PGE2 [20].
Materjalid ja meetodid
Materjalid
CT poolpuhastatud fukoidaan ja veeekstrakt(Cistanche tubulosa)saadi firmalt Misuba RTech Co., Ltd. (Asan, Korea). Fukoidaani ja CT ekstrakti hoiti temperatuuril 4 °C, segati (1:3) ja lahustati enne kasutamist puhastatud vees ning manustati suukaudselt mahus 5 ml/kg.
Rakukultuur ja NO kvantifitseerimine
Hiire makrofaagi RAW 264.7 rakuliin osteti ettevõttest American Type Culture Collection (Manassas, USA) ja kultiveeriti Dulbecco modifitseeritud kotkasöötmes (Sigma, St. Louis, USA), mis sisaldas 10 protsenti veise loote seerumit ja antibiootikume [100 U/mL penitsilliini. Sigma) ja 100 µg/ml streptomütsiini (Sigma)]. Rakke inkubeeriti niisutatud 5% CO2 atmosfääris temperatuuril 37 oC.
Fukoidaani ja CT mõju hindamiseks(Cistanche tubulosa)NO sekretsiooni ekstrakti RAW 264.7 rakke (1 × 106 rakku/mL) inkubeeriti 5 minutit fukoidaani või CT ekstraktiga (1–320 µg/mL), millele järgnes interferoon- (IFN- , 10 U/mL) ja lipopolüsahhariidi (LPS, 10 µg/mL) 24 tunni jooksul. Meie esialgsetes uuringutes kinnitati, et töötlemine IFN-pluss LPS-iga RAW 264.7 rakkude aktiveerimiseks ei mõjutanud rakkude elujõulisust kuni 24 tunni jooksul ning et fukoidaan ja CT ekstrakt ei olnud tsütotoksilised kuni 1 mg/ml. NO oksüdeeritud produkti nitriti (NO2–) kontsentratsiooni mõõdeti NO indikaatorina. Kultuurikeskkond segati võrdse koguse Griessi reagendiga (1% sulfaniilamiid, 0,1% naftüületüleendiamiid 2,5% fosforhappes) [21] ja inkubeeriti toatemperatuuril 10 minutit. Nitriti kontsentratsiooni analüüsiti 540 nm juures, kus standardkõvera loomiseks kasutati NaNO2.
Loomad ja ravi
Isased ICR-hiired (7-nädalased) osteti ettevõttest Daehan Biolink (Eumseong, Korea) ja neid hoiti püsivate keskkonnatingimustega ruumis (22±2ºC; suhteline õhuniiskus 40-70 protsenti; 12-tunnine valgustus). -tume tsükkel; 150-300 luksi heledus). Pelletite sööt ja puhastatud vesi olid saadaval ad libitum. Kõik loomkatsed kiitis heaks Korea Chungbuki riikliku ülikooli (CBNU) institutsionaalne loomade hooldamise ja kasutamise komitee (IACUC) ja need viidi läbi vastavalt CBNU LaboratoryAnimal Research Centeri standardsetele tööprotseduuridele (SOP).
Hiiri (n=8/rühm) raviti suukaudselt fukoidaaniga (18 või 54 mg/kg), CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt (54 või 162 mg/kg) või nende segu (18 pluss 54, 54 pluss 162 või 90 pluss 270 mg/kg) üks kord päevas 7 päeva jooksul. Fukoidaani (18 mg/kg) ja CT ekstrakti (54 mg/kg) väikesed doosid pärinesid hinnangulistest inimdoosidest 100 mg/keha (70 kg) ja 300 mg/keha kohta pärast kehamassi pindala translatsiooni (Km{14). vastavalt }} inimese/km=3 hiire jaoks). Fukoidaani ja CT ekstrakti suured annused määrati 3-kordseks, eraldi või segus, ja suurima annusega segu fikseeriti 5-kordseks, et hinnata maksimaalset sünergistlikku mõju.
Fukoidaani ja CT 1. päeval(Cistanche tubulosa)ekstrakti töötlemisel süstiti hiirtele subkutaanselt 10 ml steriilset õhku tagaküljele, et moodustada kott [22, 23]. 2 ja 5 päeva pärast süstiti kotti uuesti 5 ml õhku. Üks tund pärast viimast töötlemist süstiti kotti 1 ml karrageeni (1% soolalahuses; Sigma) või selle kandjat (soolalahus).
Eksudaatide analüüsid
Õhukotti pesti 1 ml külma soolalahusega 6 tundi pärast karrageeni süstimist ja registreeriti loputusvedeliku kogumaht. Põletikuliste rakkude, neutrofiilide, monotsüütide ja lümfotsüütide koguarv määrati colteri loenduri abil. NO ja PGE2 kontsentratsioonid määrati Griessi reagendi (Sigma) ja ensüümi immuunanalüüsiga (EIA), kasutades vastavalt korrelatsiooni-EIA komplekti (Assay Designs, Ann Arbor, AnnArboUSA).
Histopatoloogiline uuring
Kotikesta kude eemaldati ja fikseeriti neutraalses formaliini lahuses. Parafiiniga manustatud koeslaidid värviti hematoksüliin-eosiiniga ja neid uuriti valgusmikroskoobi all põletikuliste kahjustuste suhtes.
Statistiline analüüs
Tulemused on esitatud keskmisena ± SE. Eksperimentaalsete rühmade võrdlus viidi läbi ühesuunalise dispersioonanalüüsi abil, millele järgnes Tukey testi parandus. P-väärtus<0.05 was="" considered="" statistically="">
Tulemused
In vitro RAW 264.7 rakukultuur, IFN- ja LPS-ravi suurendasid oluliselt NO tootmist (joonis 1). Eeltöötlus fukoidaaniga (1–320 µg/ml) ei mõjutanud NO vabanemist makrofaagide rakuliinist (joonis 1A). Võrdluseks, CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt (32–320 µg/ml) pärssis märkimisväärselt NO tootmist, mis näitabpõletikuvastanetegevus (joonis 1B).
Karrageeni süstimine hiire õhukotti suurendas märgatavalt eksudaadi mahtu kotis (joonis 2). Sellist suurenenud eksudatsiooni nõrgendas ravi fukoidaaniga (18 mg/kg) ja CT-ga(Cistanche tubulosa)ekstrakti (54 ja 162 mg/kg). Eelkõige fukoidaani ja CT kombineeritud ravi(Cistanche tubulosa)ekstrakt vähendas veelgi eksudaatide mahtu võrreldes individuaalsete toimetega, kuigi suuremate annuste kombinatsioonid (54 pluss 162 mg/kg ja 90 pluss 270 mg/kg) ei avaldanud madalaima annuse kombinatsioonile (18 pluss 54 mg/kg) täiendavat efektiivsust. (Joonis 2A). NO sisaldus kotis suurenes drastiliselt ka pärast karrageeni süstimist (joonis 2B). Võrreldes fukoidaani kerge toimega, on CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt alandas märkimisväärselt NO kontsentratsiooni. Fukoidaani ja CT ekstrakti kombineeritud ravi vähendas NO taset veelgi annusest sõltuval viisil. Samamoodi surus suurenenud PGE2 sisaldust sünergistlikult alla fukoidaani ja CT kombineeritud ravi(Cistanche tubulosa)ekstrakt (joonis 2C). Paralleelselt kotikeses olevate põletikuliste vahendajatega suurenes karrageeni süstimisel põletikuliste rakkude arv drastiliselt: neutrofiilide, monotsüütide ja lümfotsüütide kontrolltasemetest vastavalt 37,8, 4,8 ja 24,1 korda (tabel 1) . Kuid fukoidaan ja CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt vähendas oluliselt põletikuliste rakkude infiltratsiooni, milles fukoidaan oli mõnevõrra parem kui CT ekstrakt. Ootamatult ei saavutatud fukoidaani ja CT koosmanustamisel sünergistlikku toimet põletikuliste rakkude infiltratsioonis(Cistanche tubulosa)väljavõte.
Nagu järeldati põletikuliste rakkude infiltratsioonist eksudaatides, ilmnesid õhukotte ümbritsevas nahaaluses koes tõsised põletikulised kahjustused (joonis 3). Karrageeniga kokku puutunud paksenenud nahaaluses koes täheldati tohutult palju rakke (joonis 3B), võrreldes kontroll-loomade normaalsete omadustega (joonis 3A). Selliseid põletikulisi kahjustusi nõrgendas märkimisväärselt fukoidaaniga ravi (joonised 3C ja 3D) või CT(Cistanche tubulosa)ekstrakti (joonised 3E ja 3F). Eelkõige saadi fukoidaani ja CT kombineeritud ravi korral suurem põletikuvastane toime(Cistanche tubulosa)väljavõte (joonised 3G-3I)
Arutelu
Kasutades in vivo karrageeniga indutseeritud õhukottipõletiku mudelit, kutsub õhu süstimine näriliste seljale esile rakkude proliferatsiooni, mis kihistuvad õõnsuse pinnal, moodustades sünoviumiga sarnase struktuuri. Selles mudelis suurendas karrageenist põhjustatud põletikuliste rakkude infiltratsiooni süstimine eksudaati, mis viitab veresoonte lekkele. Õhukott toimib põletikurakkude ja vahendajate reservuaarina, mida saab lokaalselt kogunevas vedelikus kergesti mõõta.
Erinevate põletikuliste vahendajate hulgas, mis võivad indutseerida veresoonte läbilaskvust, on hästi teada, et NO ja PGE2 on peamised tegurid, mis on seotud paljude põletikuliste haiguste patogeneesiga [24, 25]. Neid tuntakse ka valu esilekutsumise ja tajumise vahendajatena[10,11]. iNOS, mida ekspresseeritakse ja aktiveeritakse erinevates rakutüüpides, stimuleerides põletiku ajal TNF- ja/või LPS-iga, tekitab kõrgeid püsivaid NO kontsentratsioone [3,5-7]. NO on oluline reguleeriv molekul mitmesugustes füsioloogilistes funktsioonides, nagu vasodilatatsioon, mis põhjustab veresoonte leket [8,9]. PGE2, mis tekib arahhidoonhappest koksi kaudu, aitab kaasa paljude põletikuliste haiguste tekkele [26,27] ja PGE2 ületootmine vastuseks erinevatele põletikulistele stimulatsioonidele on seotud COX-II taseme ülesreguleerimise ja põletiku progresseerumisega [28]. Seetõttu on TNF- -NO ja COX-II-PGE2 radasid peetud kaheks peamiseks põletikuliste protsesside vooluks, mida blokeerivad vastavalt iNOS-i (kortikosteroidid) ja COX-i (MSPVA-d) inhibiitorid [22,29].
Käesolevas uuringus fukoidaani ja CT koosmanustamine(Cistanche tubulosa)ekstrakt vähendas eksudaadi mahtu kotis, mis viitab sellele, et neil on veresoonte lekke vastu pärssiv toime (joonis 2A). Võrreldes iga fukoidaani ja CT individuaalse toimega(Cistanche tubulosa)ekstrakti, kombineeritud ravi suurenes veelgi, mis tähendab, et kahe ühendi toime on sünergistlik. Sellist sünergistlikku mõju fukoidaani ja CT ekstrakti vahel toetas nende tegevus NO ja PGE2 tasemetel eksudaatides (joonised 3B ja 2C).
Huvitaval kombel kinnitati aga, et fukoidaan ei inhibeeri otseselt makrofaagide aktiveerimist invitro testis (joonis 1A). Samamoodi oli fukoidaani inhibeeriv potentsiaal NO ja PGE2 akumulatsiooni suhtes biotestis suhteliselt madalam kui CT omal.(Cistanche tubulosa)väljavõte (joonised 2B ja 2C). Selline fukoidaani toimemehhanism erineb rakkude otsesest inaktiveerimisest CT ekstraktiga (joonis 1B). Võrdluseks, fukoidaanil oli kõrge efektiivsus põletikuliste rakkude infiltratsiooni pärssimisel kotikestes (tabel 1). Fukoidaan oli parem kui CT ekstrakt, blokeerides neutrofiilide, monotsüütide ja lümfotsüütide migratsiooni karrageenist põhjustatud koekahjustuse kohtadesse. Huvitaval kombel puudus sünergistlik migratsioonivastane toime, mis viitaks fukoidaani ja CT ekstrakti erinevatele toimemehhanismidele: st fukoidaan blokeerib põletikuliste rakkude infiltratsiooni, samas kui CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt pärsib rakkude aktivatsiooni.
Polümorfonukleaarsed rakud, eriti neutrofiilid, on peamised rakukomponendid, mis värvatakse karrageeni poolt indutseeritud ägedatesse põletikulistesse kohtadesse. Lisaks sellele mängivad põletikulises protsessis keskset rolli ka järgnevad põletikurakud, nagu makrofaagid ja lümfotsüüdid, sekreteerides tsütokiine [22,30,31]. Eeltöötlemisel fukoidaani või CT-ga(Cistanche tubulosa)karrageeniga süstitud õhukottidesse migreerunud valgete vereliblede arv vähenes märgatavalt. See tulemus oli kooskõlas kortikosteroidide, nagu deksametasooni, toimega, kuid mitte MSPVA-dega, sealhulgas indometatsiiniga [23, 30]. Seetõttu eeldatakse, et fukoidaan ja CT(Cistanche tubulosa)ekstraktil on osaliselt steroidide omadus.
Lisaks blokeerivale toimele põletikuliste rakkude kemotaksist, CT(Cistanche tubulosa)näis, et ekstrakt pärsib makrofaagide aktivatsiooni. Seda kinnitas selle inhibeeriv toime NO-le in vitro ja in vivo, mis on peamine makrofaagide poolt toodetud põletikuline vahendaja. Seega mõju CT(Cistanche tubulosa)Ekstrakt makrofaagidel võib olla tingitud mRNA ekspressiooni pärssimisest ja/või iNOS-i aktiivsuse otsesest pärssimisest nendes rakkudes.
PGE2 on ka üks peamisi põletikumediaatoreid. See suureneb paralleelselt kudede tursega, mida pärsivad mittesteroidsed põletikuvastased ravimid, COX-i inhibiitorid [21,22]. Karrageen võib suurendada PGE2 tootmist, indutseerides kotieksudaadis COX-II mRNA ja COX-II valku [32]. Selles mudelis suurendas karrageen märkimisväärselt PGE2 kogust ja CT surus seda oluliselt alla(Cistanche tubulosa)väljavõte. Huvitav on märkida, et see tulemus oli kooskõlas MSPVA-de indometatsiiniga saavutatava toimega [23]. Seetõttu järeldatakse tulemuste põhjal, et CT ekstraktil on MSPVA-de täiendav omadus. Kokkuvõttes arvatakse, et CT(Cistanche tubulosa)ekstrakt avaldas karrageenist põhjustatud põletikumudelis nii kortikosteroidi kui ka mittesteroidsete põletikuvastaste ravimite sarnaseid toimeid ning fukoidaan suurendaspõletikuvastaneCT ekstrakti mõju, blokeerides põletikuliste rakkude infiltratsiooni.
Kuigi täpse toimemehhanismi määratlemine nõuab täiendavaid uuringuid, fukoidaani ja CT segu(Cistanche tubulosa) ekstrakt nõrgendas märkimisväärselt põletikunähte, blokeerides TNF-NO ja COX-II-PGE2 radu karrageenist põhjustatud õhukoti põletikus. Need leiud näitavad, et fukoidaani ja CT kombineeritud ravi(Cistanche tubulosa)ekstrakt võib olla paljutõotav kandidaat kortikosteroididele või MSPVA-dele reageerivate erinevate põletike leevendamiseks.
Viited
1. Päev R. TNF-i inhibiitorite kõrvaltoimed reumatoidartriidi korral. Lancet 2002; 359(9306): 540-541.
2. Feldmann M, Brennan FM, Maini RN. Tsütokiinide roll reumatoidartriidis. Annu Rev Immunol 1996; 14: 397-400.
3. Eigler A, Sinha B, Hartmann G, Endres S. TNF-i taltsutamine: strateegiad selle põletikueelse tsütokiini ohjeldamiseks. Immunol Today 1997;18(10): 487-492.
4. Ershler WB, Keller ET. Vanusega seotud suurenenud interleukiini-6geeniekspressioon, hilises eas haigused ja nõrkus. Annu Rev Med2000; 51: 245-270.
5. Adams V, Nehrhoff B, Späte U, Linke A, Schulze PC, Baur A, Gielen S, Hambrecht R, Schuler G. iNOS-i ekspressiooni esilekutsumine skeletilihastes IL-1 ja NFkB aktiveerimisega: in vitro andin vivo uuring. Cardiovasc Res 2002; 54(1): 95-104.
6. Xie QW, Whisnant R, Nathan C. Kaltsiumist sõltumatut lämmastikoksiidi süntaasi kodeeriva hiire geeni promootor annab interferooni ja bakteriaalse lipopolüsahhariidiga indutseeritavuse. J ExpMed 1993; 177(6): 1779-1784.
7. Yui Y, Hattori R, Kosuga K, Aizawa H, Hiki K, Kawai C.Purification of nitric oxide synthase from rot macrophage. J BiolChem 1991; 266(19): 12544-12547.
8. Marletta MA, Yoon PS, Iyengar R, Leaf CD, Wishnok JS.L-arginiini makrofaagide oksüdatsioon nitritiks ja nitraadiks: lämmastikoksiid on vaheühend. Biokeemia 1998; 27(24): 8706-8711.
9. Moncada S, Palmer RM, Higgs EA. Lämmastikoksiid: füsioloogia, patofüsioloogia ja farmakoloogia. Pharmacol Rev 1991; 43(2):109-142.
10. Pang L, Hoult JR. Silikoosivastase alkaloidi tetrandriini makrofaagide tsütotoksilisus, millega kaasneb prostaglandiinide ületootmine. Biochem Pharmacol 1997; 53(6): 773-782.
11. Hunskar S, Hole K. Formaliini test hiirtel: põletikulise ja mittepõletikulise valu dissotsiatsioon. Valu 1987; 30:103-114.
12. Lester RS, Knowles SR, Shear NH. Süsteemsete kortikosteroidide kasutamise riskid. Dermatol Clin 1998; 16(2): 277-288.
13. Lichtenstein DR, Syngal S, Wolfe MM. Mittesteroidnepõletikuvastaneravimid ja seedetrakt. Kahe teraga mõõk. Rheum artriit 1995; 38(1): 5-18.
14. Mukherjee D, Nissen SE, Topol EJ. Selektiivsete COX-2 inhibiitoritega seotud kardiovaskulaarsete sündmuste risk. JAMA 2001; 286(8):954-959.
15. Feldman SC, Reynaldi S, Stortz CA, Cerezo AS, Damont EB. Antiviral properties of fucoidan fractions from Leathesiadifformis. Fütomeditsiin 1999; 6(5): 335-340.
16. Wang J, Zhang Q, Zhang Z, Song H, Li P. Laminaria japonicast ekstraheeritud madala molekulmassiga fukoidaani fraktsioonide potentsiaalne antioksüdant ja antikoagulant. Int J Biol Macromol2010; 46(1): 6-12.
17. Bojakowski K, Abramczyk P, Bojakowska M, Zwoliñska A, Przybylski J, Gaciong Z. Fucoidan parandab neerude verevoolu roti neeruisheemia/reperfusioonikahjustuse varases staadiumis. JPhysiol Pharmacol 2001; 52(1): 137-143.
18. Li N, Zhang Q, Song J. Laminaria japonicast ekstraheeritud fukoidaani toksikoloogilised hinnangud Wistari rottidel. Food ChemToxicol 2005; 43(3): 421-426.
19. Yamada P, Iijima R, Han J, Shigemori H, Yokota S, Isoda H. Cistanche tubulosast eraldatud akteosiidi inhibeeriv toime keemilise vahendaja vabanemisele ja põletikulise tsütokiini tootmisele RBL-2H3 ja KU812 rakkude poolt. Planta Med 2010; 76(14): 1512-1518.
20. Shin S, Jeon JH, Park D, Jang JY, Joo SS, Hwang BY, Choe SY, Kim YB.Põletikuvastaneangelica gigas'i etanooliekstrakti mõju karrageeni-õhukoti põletikumudelil.Exp Anim 2009; 58(4): 431-436.
21. Hevel JM, Marletta MA. Lämmastikoksiidi süntaasi testid. MethodsEnzymol 1994; 233: 250-258.
22. Romano M, Faggioni R, Sironi M, Sacco S, Echtenacher B, DiSanto E, Salmona M, Ghezzi P. Carrageenan induced acuteinflammation in the mouse air pouch synovial model. Kasvaja nekroosifaktori roll. Vahendajad Inflamm 1997; 6(1): 32-38.
23. Wallace JL, Chapman K, McKnight W. Limitedpõletikuvastanetsüklooksügenaasi-2 inhibeerimise efektiivsus karrageeni-õhukotti põletiku korral. Br. J. Pharmacol. 1999; 126(5): 1200-1204.
24. Guslandi M. Lämmastikoksiid ja põletikulised soolehaigused. Eur J Clin Invest 1998; 28(11): 904-907.
25. Ritchlin CT, Haas-Smith SA, Li P, Hicks DG, Schwarz EM. TNF- - ja RANKL-vahendatud osteoklastogeneesi ja luu resorptsiooni mehhanismid psoriaatilise artriidi korral. J Clin Invest 2003;111(6): 821-831.
26. Minghetti L. Tsüklooksügenaas-2 (COX-2) põletikuliste ja degeneratiivsete ajuhaiguste korral. J Neuropathol Exp Neurol 2004;63(9): 901-910.
27. St-Onge M, Flamand N, Biarc J, Picard S, Bouchard L, DussaultAA, Laflamme C, James MJ, Caughey GE, Cleland LG, BorgeatP, Pouliot M. Prostaglandiini E2 tekke iseloomustus tsüklooksügenaasi (COX) kaudu{ {3}} rada inimese neutrofiilides. Biochim Biophys Acta 2007; 1771(9): 1235-1245.
28. Choi YH, Park HY.Põletikuvastanespermidiini mõju lipopolüsahhariidiga stimuleeritud BV2 mikrogliia rakkudele. J Biomed Sci2012; 19:31.
29. Wallace JL, Chapman K, McKnight W. Limitedpõletikuvastanetsüklooksügenaasi-2 inhibeerimise efektiivsus karrageeni-õhukotti põletiku korral. Br. J. Pharmacol. 1999; 126(5): 1200-1204.
30. Oliveira de Melo J, da Conceição Torrado Truiti M, Muscará MN, Bolonheis SM, Dantas JA, Caparroz-Assef SM, Cuman RK, Bersani-Amado CA.PõletikuvastaneToorekstrakti ja Nectandra falcifolia lehtede fraktsioonide aktiivsus. Biol Pharm Bull2006; 29(11): 2241-2245.
31. Zanardo RC, Brancaleone V, Distrutti E, Fiorucci S, Cirino G, Wallace JL. Vesiniksulfiid on leukotsüütide poolt vahendatud põletiku endogeenne modulaator. FASEB J 2006; 20(12): 2118-2120.
32. Masferrer JL, Zweifel BS, Manning PT, Hauser SD, Leahy KM, Smith WG, Isakson PC, Seibert K. Indutseeritava tsüklooksügenaas 2 selektiivne inhibeerimine in vivo onpõletikuvastaneja mitteulc erogeenne. Proc Natl Acad Sci USA 1994; 91(8): 3228-3232.
