Traditsioonilise hiina meditsiini monomeeride terapeutiliste mõjude ja mehhanismide uuring hilise algusega hüpogonadismi rotimudelil

 

Abstraktne

Eesmärk
Hinnata kolme traditsioonilise hiina meditsiini (TCM) monomeeri terapeutilisi toimeid ja mehhanisme.icariin, verbascosidejaginsenosiid Rg1- seeshilise algusega hüpogonadism (LOH)rotimudelis ja uurida nende potentsiaaliloomulikud sekkumised vanusega seotud testosterooni languse vastukeskealistel meestel.

meetodid
Hilise algusega hüpogonadismi (LOH) mudel loodi eakatel meestelSprague-Dawley rotidintraperitoneaalse süstimise teeltsüklofosfamiid, simuleerib androgeenipuudust. Kolm TCM monomeeri -icariin, verbascosidejaginsenosiid Rg1- manustati suukaudselt 60 päeva jooksul.

Ravi lõpus mõõdeti kehakaal ja suguelundite (munandid, munandimanus, seemnepõiekesed jne) kaalu.Histopatoloogilised muutusedmunandikoes hinnati kasutadeshematoksüliin-eosiini (H&E) värvimine. Seerumi tasemedFSH, LHjatestosteroonkaudu testitiELISA. Väljendandrogeeni retseptor (AR)valku ja mRNA-d hinnati kasutadesWestern blotjakvantitatiivne reaalajas PCR (qRT-PCR).

 

 

 

Tulemused

Ginsenoside Rg1aastal näitas kõige olulisemat paranemistkehakaaljareproduktiivorganite kaal(P < 0,01).

Icariinsuurendas oluliselt selle kaalumunandid, epididümisjaseemnepõiekesed(P < 0,01).

Verbascosidemõõdukalt paranenud seemnepõiekeste kaal (P < 0,05).

Kõik kolm TCM monomeeri tõhusaltvastupidine munandite degeneratsioonLOH rottidel, taastades seemnetorukeste struktuuri ja suurendades nende arvuspermatogeensed rakudjaküps sperma.

Kõik monomeerirühmad näitasid võimetmadalam seerumi FSH ja LH tasesamal ajaltõsta seerumi testosterooni taset. Theicariin rühmnäitas kõige olulisemat endokriinsüsteemi paranemist (P < 0,01).

Väljendustasemedandrogeeni retseptor (AR)nii valgu kui ka mRNA puhul olid kõigis ravitud rühmades oluliselt ülesreguleeritud. Mõjuicariinolirohkem väljendunud kui testosterooni propionaat, mis näitab atugev regulatiivne mõju AR-signaalidele.

 

Järeldus

See uuring viitab selleleginsenosiid Rg1on parandamisel kõige tõhusamkeha ja elundi kaalLOH rottidel, samasicariinnäitab tugevaimat mõju aastalsuurendada testosterooni tootmistjaAR-i väljenduse parandamine. Kõik kolm monomeeri -icariin, verbascosidejaginsenosiid Rg1- demonstreeriskaitsev toime munandite degeneratsiooni vastujatoetab meeste reproduktiivset endokriinset funktsiooni, pakkudes paljutõotavaid looduslikke alternatiive haiguse haldamiseksvanusega seotud hüpogonadism.

 

Märksõnad

Hilise algusega hüpogonadism (LOH); Icariin; Verbaskosiid; ginsenosiid Rg1; Traditsiooniline hiina meditsiin; Looduslik testosterooni võimendaja; Vananeva mehe sündroom; Androgeeni retseptori ekspressioon; Taimne ravi meeste tervise jaoks

Seksuaaltervise TCM-i ürdi kohta lisateabe saamiseks klõpsake pildil

 

 

Taust

Hilise algusega hüpogonadism (LOH)keskealistel ja eakatel meestel on tihedalt seotudvanusega seotud androgeenide taseme langus, eriti testosterooni. 2021. aasta rahvastikupõhine epidemioloogiline uuring viidi läbi kuues Hiina tüüpilises provintsis, mis hõlmas6296 meest vanuses 40–79, näitasid järgmised LOH levimusmäärad:

3.2%50-aastastel meestel

11.2%60ndates eluaastates

24.0%70ndates [1]

LOH-d iseloomustabvähenenud seerumi testosterooni tasekoos tähtkujugaandrogeeni puudulikkuse sümptomidnäiteks:

Madal libiido

Erektsioonihäired

Depressioon ja ärrituvus

Kognitiivne langus ja mälukaotus

Need sümptomid võivadhalvendavad oluliselt füüsilist ja vaimset heaolu, samutielukvaliteeti [2–3].

Praegutestosterooni asendusravi (TRT)on LOH peamine ravi ja võib ajutiselt leevendada sümptomeid. Siiski on muretkardiovaskulaarne risk, eesnäärme tervisjapikaajaline ohutusjäävad [4]. Seetõttu kasvab huvi uurimise vastulooduslikud ja ohutumad alternatiivid, eriti alatesTraditsiooniline hiina meditsiin (TCM).

Selle uuringu eesmärk on hinnataterapeutilised toimed ja mehhanismidkolmest TCM monomeeristicariin, verbascosidejaginsenosiid Rg1- kasutades aLOH roti mudel.

 

1. Materjalid ja meetodid

1.1 Katseloomad

Kuuskümmend15-kuused isased Sprague-Dawley (SD) rotid(700–800 g) saadi 2022. aasta jaanuaris Hiina Three Gorges University loomkatsete keskusest. Litsentsi numbrid:

Loomatunnistus: ei. 42010200007997

Tootmislitsents: SCXK (E) 2022-0012

Rotte hoiti kontrollitud keskkonnas (temperatuur: 19–23 kraadi, suhteline õhuniiskus: 55–65%), loomuliku valguse-pimeduse tsükliga ning vaba juurdepääsuga toidule ja veele. Pärast1 nädal aklimatiseerumist, algasid katsed.

1.2 Reaktiivid ja instrumendid

Tsüklofosfamiid(Nanjing Jiancheng)

Icariin(Nanjing Guangrun Biotech)

Ginsenosiid Rg1(Shanghai Macklin)

Verbascoside(Shanghai Zhenzhuni biotehnoloogia)

AR antikeha(Santa Cruz, USA)

-aktiini antikeha(Sigma, USA)

H&E värvimiskomplektid(Shanghai Yiji Industrial)

ELISA komplektid seerumi FSH, LH, testosterooni jaoks(Shanghai Meilian)

qRT-PCR reaktiivid (SYBR Green I)(Shanghai Julu Biotech)

Instrumendid: termomikroplaadi lugeja, Olympuse optiline mikroskoop, LI-COR Odyssey pildisüsteem, ABI qRT-PCR masin

 

1.3 Loomade rühmitamine ja LOH mudeli esilekutsumine

Rotid määrati juhuslikult6 rühma (n=10 rühma kohta):

Kontrollgrupp:

0,9% soolalahuse intraperitoneaalne (ip) süstimine 5 päeva jooksul

Suukaudne soolalahus (1 ml/100 g) 60 päeva

Mudelirühm:

ip tsüklofosfamiid 20 mg/kg/päevas 5 päeva

Järgneb suukaudne soolalahus 60 päeva jooksul

Testosterooni propionaat (positiivne kontroll):

ip tsüklofosfamiid (sama, mis ülal)

Testosteroonpropionaadi subkutaanne süstimine 5 mg/kg/päevas 7 päeva jooksul

Icariin rühm:

ip tsüklofosfamiid (sama)

Suukaudne icariin 200 mg/kg/päevas 60 päeva jooksul

Verbascoside rühm:

ip tsüklofosfamiid (sama)

Suukaudne verbaskosiid 200 mg/kg/päevas 60 päeva

Ginsenoside Rg1 rühm:

ip tsüklofosfamiid (sama)

Suukaudne ginsenosiid Rg1 200 mg/kg/päevas 60 päeva jooksul

Kõik ravid tehti vahepeal8.00–11.30. Viidi läbi hinnanguid24 tundi pärast viimast annust.

 

1.4 Kehakaal ja suguelundite indeks

Pärast kaalumist eutaniseeriti rotid emakakaela dislokatsiooniga. Themunandid, munandimanused ja seemnepõiekesedtükeldati ja kaaluti.

Üksmunandit igalt rotiltfikseeriti sisse4% paraformaldehüüdi72 tunniks, dehüdreeritud sorteeritud alkoholiga, parafiiniga kaetud, sektsioonidega (5 μm) ja värvitudHematoksüliin-eosiin (H&E). Valgusmikroskoopias täheldati morfoloogilisi muutusi.

 

1.5 Seerumi hormoonanalüüsid

Rotid anesteseeriti3% naatriumpentobarbitaalja verd koguti selle kaudusüdame punktsioon. Seerum eraldatitsentrifuugimine kiirusel 3000 p/min 10 minutit 4 kraadi juures. Mõõtmiseks kasutati ELISA komplekteFSH, LH ja testosteroontasemed vastavalt tootja protokollidele.

 

1.6 AR valgu ekspressioon (Western Blot)

Munandite kude lüüsiti ja mõõdeti valgu kontsentratsioon. Võrdsed kogused valku lahustati10% SDS-LEHT, kantakse üle PVDF membraanidele ja inkubeeritakse primaarsete antikehadegaARja-aktiin (1:1000)üle öö. Sekundaarsele antikeha inkubeerimisele järgnes kemoluminestsentstuvastus.PiltJkasutati analüüsiks.

 

1,7 AR mRNA ekspressioon (qRT-PCR)

Kogu RNA ekstraheeriti munandikoest. cDNA sünteesiti pöördtranskriptsiooni teel. qRT-PCR viidi läbi SYBR Greeni meetodil.

AR-praimerid:

Edasi: 5′-CAGGGACCA CGTTTTACCCA-3′

Tagurpidi: 5′-TTCCCTTCCGCAGCTCTTTT-3′

-aktiini praimerid (sisekontroll):

Edasi: 5′-CCACCATGTACCCAGGCATT-3′

Tagurpidi: 5′-CGGACTCATCGTACTCCTGC-3′

Termiline tsükkel: 95 kraadi 15 minutit (eeldenatureerimine), millele järgneb 40 tsüklit 95 kraadi juures 15 sekundit ja 60 kraadi 1 min. Andmeid analüüsiti kasutades2^-ΔΔCtmeetod.

 

1.8 Statistiline analüüs

Andmeid analüüsiti kasutadesSPSS 26.0.

Tulemused on esitatud kujulkeskmine ± standardhälve (x̄ ± s)

t-testkasutati kahe rühma võrdlusteks

Ühesuunaline ANOVAkasutati mitme grupi võrdlemiseks

P < 0,05peeti statistiliselt oluliseks