Uuring Cistanche Tubulosast pärineva polüsahhariidi vesiekstrakti eraldamise ja immunokompetentsuse kohta

lisateabe saamiseks:ali.ma@wecistanche.com

Ailadan·Maimaitiaili1,LI Yang1,YAO juuni1,YUAN Jie2

(1. Farmaatsiakool, Xinjiangi Meditsiiniülikool, Urumqi 830011, Hiina;2. Houbo kollaaž, Xinjiangi meditsiiniülikool, Xinjiang Klamayi 834000, Hiina)

ABSTRAKTNE EESMÄRK:Veeekstrakti eraldamiseksCistanche tubulosa polüsahhariididja uurida nende immuunpädevust in vitro. MEETODID: C. tubulosa polüsahhariidi värvi eemaldamiseks kasutati makropoorset adsorptsioonivaiku AB{{{{30}}}}. Värvusetustamise protsessi optimeeriti ortogonaalse testiga, mille põhjalik skoor oli polüsahhariidi retentsioonimäär ja värvitustamise kiirus ning teguritena kasutati adsorptsioonikiirust, värvitustamise aega, proovi kontsentratsiooni. Viidi läbi kontrollkatsed. Värvitu C. tubulosa polüsahhariidi veeekstrakti eraldamiseks kasutati DEAE-650M ioonivahetuskolonni. CCK-8 testi kasutati polüsahhariidi (6.25-100 ug/mL) erinevate kontsentratsioonide mõju tuvastamiseks enne ja pärast isoleerimist hiirte makrofaagide RAW264.7 proliferatsioonikiirusele. Griessi meetod ja ELISA test võeti kasutusele, et tuvastada madala, keskmise ja kõrge polüsahhariidi kontsentratsiooni (12,5, 25, 50 ug/mL) mõju NO, IL-6 ja TNF- vabanemisele. LPS-indutseeritud RAW264.7 rakkudes. TULEMUSED: AB-8 makropoorse adsorptsioonivaigu optimaalses värvitustamise protsessis oli adsorptsiooni voolukiirus 1,2 BV/h, värvitustamise aeg 9 tundi ja proovi kontsentratsioon oli 25 mg/ml. Kolmekordse kontrolltesti põhjalik hind oli vastavalt 63,43%, 63,29% ja 63,34%, keskmiselt 63,35%. C. cistanche polüsahhariidist eraldati üks neutraalne polüsahhariid (CTZ) ja 5 happelist polüsahhariidi (CT1, CT2, CT3, CT4, CT5), mille sisaldus oli 299,2 168.0,123,2,121,6,54. 11,2 mg/g. Võrreldes kontrollrühmaga 6.25-100 ug/mL CTZ (välja arvatud 6,25 μg/mL), CT2, CT4, CT5 ja 6,25 μg/mL CTC (polüsahhariid enne eraldamist) võib proliferatsioonikiirust oluliselt suurendada RAW264.7 rakkude (P＜{{80}}.05）), samas kui 625-100 ug/mL CT1, CT3 ja 50 ug/ml CTC võivad vähendada RAW264 proliferatsioonikiirust. 7 rakku (P＜0,05). Võrreldes LPS-i rühmaga vähenes NO vabanemine märkimisväärselt madala, keskmise ja kõrge kontsentratsiooniga rühmades CTC, CT2, CT3 ja CT5, CTZ madala kontsentratsiooniga rühmas (P＜0,05), samas kui see suurenes oluliselt CT1 kõrge kontsentratsiooniga rühmades. ja CT4 （P＜0,05）. IL-6 (välja arvatud kõrge kontsentratsiooniga CT1 ja CT5 madala kontsentratsiooniga rühm) ja TNF-i (välja arvatud keskmise kontsentratsiooniga CT1 rühm) vabanemine vähenes oluliselt madala, keskmise ja kõrge kontsentratsiooniga rühmades (P＜0,05). ）. JÄRELDUSED: Makropoorse adsorptsioonivaigu optimeeritud värvitustamise tehnoloogia on uuringus stabiilne ja teostatav. C. tubulosa polüsahhariidide vesiekstraktist saab eraldada ühe neutraalse polüsahhariidi ja 5 happelist polüsahhariidi, millest CT2 polüsahhariidil on tugevam põletikuvastane toime.

MÄRKSÕNAD:Cistanche tubulosa polüsahhariid; Värvuse kaotamine; eraldamine; immuunkompetentsus

Cistanche tubulosaon kuiv, lihav vars koos soomuslehtedegaCistanche tubulosa (Schenk) WightLidanaceae sugukonnast. Kaasaegsed uuringud on näidanud, et Cistanche Tubula sisaldab fenetüülalkoholi glükosiide, iridoidglükosiide, lignaane, polüsahhariide, alkaloide ja muid bioloogiliselt aktiivseid aineid, millel on afrodisiaakumid, lahtistavad, maksa kaitsvad ja vananemisvastased omadused. , Väsimusevastane tugevdatud immuunsus ja nootroopne toime [1-4], mida saab kasutada neeru-yangi puudulikkuse, essentsi ja vere puuduse, impotentsuse ja viljatuse, talje ja põlvede nõrkuse, lihaste ja lihaste nõrkuse kliiniliseks raviks. luud, kuivad sooled ja kõhukinnisus [5].

Klõpsake Cistanche herba toodete vaatamiseks

Veeekstrakt onCistanche tubulosa polüsahhariidon pruunikaskollane. Meie uurimisrühma eelmises katses leiti, et lisaksCistanche tubulosa polüsahhariid, sisaldab veeekstrakt ka mittesihtkomponente, nagu vees lahustuvad pigmendid ja valgud. See aitab kaasa polüsahhariidide eraldamisele ja puhastamisele. Bioloogilise aktiivsuse uurimine on tekitanud suuri raskusi. Traditsiooniline orgaanilise lahusti värvitustamine hävitab toorekstrakti sihtkomponendi keemilise struktuuri ja vähendab inimese farmakoloogilist aktiivsust ja kahjulike koostisosade sattumist inimkehasse [6]. Makropoorne adsorptsioonivaik on levinud materjal polüsahhariidide värvitustamiseks Hiina meditsiini ekstraktides. See on kulutõhus polümeeri adsorptsioonimaterjal, millel on stabiilsed füüsikalised ja keemilised omadused. Seda saab sihtida selle valikulise adsorptsiooni ja pigmendikomponentide sõelumise abil. Traditsioonilise hiina meditsiini ekstraktides sisalduvate pigmentide eemaldamiseks saab seda lisaks regenereerida marineerimise ja leelispesuga, mistõttu kasutatakse seda laialdaselt [7]. Selle uuringu eesmärk on kasutada Cistanche Tubula polüsahhariidi veeekstrakti värvituks muutmiseks makropoorset adsorptsioonivaiku ja värvitustamise tingimuste optimeerimiseks ortogonaalset katset; pärast ekstrakti värvitustamist plaanitakse vastavalt polüsahhariidi poolt kantava rühma erinevale iseloomule kasutada. Ioonivahetuskolonnkromatograafia meetod eraldab polüsahhariidis täiendavalt neutraalsed ja happelised polüsahhariidi komponendid.Cistanche tubulosa.

Uuringud on näidanud, etcistanche taimpolüsahhariididel on immunomoduleeriv toime ja need on looduslikud immunomodulaatorid, mis võivad aktiveerida komplemendisüsteemi ja immuunrakke, nagu T/B lümfotsüüdid, makrofaagid, looduslikud tapjarakud (NK) ning võivad samuti soodustada mitmesuguseid tsütokiinide vabanemist ja soodustada antikehade tootmist. jne [8-11]. Lipopolüsahhariid (LPS) võib aktiveerida makrofaagide põletikuliste signaalide rada, indutseerida lämmastikoksiidi (NO) ja põletikueelseid tsütokiine, nagu interleukiin 6 (IL-6) ja kasvaja nekroosifaktor-alfa (TNF-). Süntees ja vabanemine, vallandades seeläbi organismis rea põletikulisi reaktsioone [12]. Selle uuringu eesmärk on luua LPS-indutseeritud hiire RAW264.7 makrofaagipõletiku mudel, alustades Cistanche Tubula polüsahhariidi mõjust makrofaagide proliferatsioonile, põletikuliste faktorite sekretsioonile ja NO tootmisele ning esialgsest hinnangust selle mõju kohta organismi immuunaktiivsusele. Selle eesmärk on luua teoreetiline alus põletikuvastase toimeaine põhjalikuks uurimiseksCistanche tubulosapolüsahhariid ja selle polüsahhariidiressursside arendamine.

Esialgsed uuringud on leidnud, et kui Cistanche cistanche'is olevad polüsahhariidid ekstraheeritakse veega, lahustub koos rohkem vees lahustuvaid aineid, mis mõjutab puhtust.cistanche cistanche polüsahhariidid. Seetõttu võib nende edasine eraldamine ja puhastamine panna aluse polüsahhariidmaterjali baasi ja bioloogilise aktiivsuse uurimisele. Makropoorse adsorptsioonvaigu meetod on tavaliselt kasutatav värvitustamise meetod [17-19]. Kuna pigmendi koostise osas on endiselt ebaselgeCistanche tubulosa, seega kasutas uurimisrühm staatilise adsorptsiooni katseid, et eri polaarsusega makropoorsetest adsorptsioonivaikudest välja sõeluda sobivaim makropoorse adsorptsioonivaiku AB-8. Cistanche deserticola polüsahhariidil on hea säilivusvõime. Parema värvitustamise efekti saavutamiseks tugineb käesolev uurimus varasematele uuringutele ja on kasutatud ortogonaalseid katseid värvitustamise protsessi määramiseks (pesemine Desorptsiooni voolukiirus, värvitustamise aeg ja proovi massikontsentratsioon) on optimeeritud. Selle tulemusena oli Cistanche tubulosa polüsahhariidi optimaalne värvitustamise meetod elueerimise voolukiirus 1,2 BV/h, värvitustamise aeg 9 tundi ja proovi massikontsentratsioon 25 mg/ml. Kontrollkatse tulemused näitavad, et värvitustamise meetod on teostatav.

Looduslike polüsahhariidide puhtus ja tüüp on olulised tegurid, mis mõjutavad selle aktiivsust. Seetõttu on looduslike aktiivsete polüsahhariidide uurimistöö keskmes endiselt vastav polüsahhariidide eraldamise ja puhastamise meetodite uurimine. Tavaliselt kasutatavad meetodid polüsahhariidide eraldamiseks hõlmavad sadestamist, geelkromatograafiat, anioonivahetuskromatograafiat, makropoorset vaigu kolonnkromatograafiat ja ultrafiltrimist [20]. Monosahhariidide erineva koostise tõttu on polüsahhariididel erinevad laenguomadused. Neid saab jagada neutraalseteks polüsahhariidideks ja happelisteks polüsahhariidideks. Neutraalsed polüsahhariidid on polümeerid, mis koosnevad kahest või enamast erinevast suhkrupõhisest monomeerist, mis ei sisalda orgaanilisi happeid. Happelised polüsahhariidid on koostise ja struktuuri poolest keerulisemad kui neutraalsed polüsahhariidid, välja arvatud see, et need sisaldavad rohkem kui kahte suhkrupõhist monomeeri. , Sisaldab ka uroonhappe mono Body [21]. Anioonivahetuskolonnkromatograafias kasutatakse polüsahhariidide laengu erinevust, et eraldada neutraalsed polüsahhariidid happelistest polüsahhariididest [22]. Sel põhjusel kasutati selles uuringus Cistanche Tubula polüsahhariidide eraldamiseks DEAE-650M ioonivahetuskolonnkromatograafia kolonni ning eraldati kokku 1 neutraalne polüsahhariid ja 5 happelist polüsahhariidi. Makrofaagid on immunokompetentsed rakud, mis suudavad reguleerida immuunsust patogeensete mikroorganismide neelamise ja tapmise kaudu. Uuringud on näidanud, et kui inimkeha stimuleerib patoloogiline või mehaaniline kahjustus, võib ravimi sekkumine aktiveerida makrofaagid, et suurendada LPS-i poolt indutseeritud makrofaagide fagotsüütvõimet, pärssides seeläbi NO ja mitmete põletikuliste rakkude, nagu IL{{, tootmist. 9}} ja TNF-faktori sekretsioon, kaitstes seeläbi peremeesorganismi patogeenide eest [23]. Sel eesmärgil testiti selles uuringus erinevate Cistanche tubulosa polüsahhariidide mõju RAW264.7 rakkude proliferatsioonikiirusele, samuti mõju LPS-i indutseeritud makrofaagidele NO, IL-6 ja TNF- vabastamisel. Selle tulemusena ei soodustanud see massikontsentratsioonivahemikus 12,5, 25 ja 50 ug/ml mitte ainult RAW264.7 rakkude proliferatsiooni, vaid inhibeeris oluliselt ka RAW264.7 rakkude proliferatsiooni.

TheCistanche tubulosa polüsahhariidRAW264.7 rakkudes, mille LPS indutseerib vabastama NO, IL-6 ja TNF- on CT2. Asjakohased uuringud on näidanud, et polüsahhariidide monosahhariidide koostis ja molekulmass mõjutavad seda.immunomoduleerivtegevust. Monosahhariidid, nagu galaktoos, arabinoos, mannoos ja glükoos, on positiivses korrelatsioonis polüsahhariidide immuunaktiivsusega [24]. Suurema molekulmassiga polüsahhariidid võivad sisaldada kõrgemaid Mitu väga korduvat sõlme Struktuur, võivad plasmamembraani pinna retseptoreid ristühendada mitmesuunaliselt ja spetsiifiliselttugevdada immunomoduleerivat toimetmõju [25]. Seetõttu võib happelise polüsahhariidi CT2 monosahhariidide koostis selles uuringus sisaldada spetsiaalseid monosahhariide või mitut monosahhariidi, mis on positiivselt seotud immuunaktiivsusega ning molekulmass võib olla suurem kui neutraalsed polüsahhariidid ja muud happelised polüsahhariidid, kuid selle kinnitamiseks on vaja täiendavaid uuringuid. . Kokkuvõttes on selle uurimistöö optimeeritud makropoorse adsorptsioonivaigu värvitustamise protsess stabiilne ja teostatav; Cistanche cistanche cistanche vesiekstraktist saab eraldada 1 neutraalse polüsahhariidi ja 5 happelist polüsahhariidi, mille hulgas on happelise polüsahhariidi CT2 tugevam immunoloogiline aktiivsus. See uuring võib panna eksperimentaalse aluse Cistanche Tubula polüsahhariidide väljatöötamiseks ja kasutamiseks.