Lycium Ruthenicum'i ja Cistanche Deserticola pulbri in vitro seedimise ja antioksüdantse toime uurimine

Abstraktne:

 

Eesmärk: Lycium ruthenicum pulbri toime jakõrbes elav cistanche herbkülmkuivatatud pulber pealfunktsionaalsed keemilised komponendidjaantioksüdantne aktiivsusallsimuleeritud seedetrakti seedimistuuriti in vitro. 【Meetod】: Pärast simuleeritud seedetrakti seedimist määrasime nendes pulbrites polüfenoolide, polüsahhariidide, antotsüaniinide ja fenüületanoidglükosiidide sisalduse ning mõõtsime nende eemaldavat toimet DPPH ja ABTS vabadele radikaalidele in vitro. 【Tulemus】: simuleeritud mao seedimise rühmas oli suurem toimeainete sisaldus võrreldes simuleeritud soole seedimise rühmaga. Polüfenoolide, antotsüaniinide ja fenüületanoidglükosiidide eemaldamise määrad DPPH ja ABTS-iga olid väga lineaarsed (p<0.05). 【Conclusion】:Gastric digestion improved the solubility of polyphenols, polysaccharides, anthocyanins, and phenylethanoid glycosides in Black fruit wolfberry powder and desertliving cistanche herb powder, thereby enhancing their scavenging rate of DPPH and ABTS free radicals. Intestinal digestion increased the solubility of polyphenols and phenylethanoid glycosides, decreased the content of polysaccharides and anthocyanins, and promoted the scavenging rate of ABTS free radicals. However, DPPH free radicals showed no promoting effect. These findings provide a novel direction for the development of new functional foods using Black fruit wolfberry and desertliving cistanche herb.

Märksõnad:Lycium ruthenicum;Cistanche deserticola Ma; Seedetrakti seedimine; Antioksüdatsioon

 

MÜÜA KÕRGE KVALITEETNE CISTANŠI EKSTRAKTI

Lisateabe saamiseks võtke meiega ühendust

 

 

Vananemisvastane ja tervise säilitamine: uuring Lycium ruthenicum'i ja Cistanche deserticola antioksüdantsete omaduste kohta

Vananemisvastasus ja tervise säilitamine on muutunud ühiskonna erinevate sektorite tähelepanu keskpunktiks. Praegu on levinud arvamus, et rakkude vananemise mehhanism on tihedalt seotud vabade radikaalide kahjustustega. Vabad radikaalid inimkehas on vananemise ja patoloogiliste muutuste peamine põhjus; liigne kogunemine võib tõsiselt ohustada inimeste tervist. Seetõttu algab vananemise ennetamine eelkõige liigsete vabade radikaalide kõrvaldamisest organismist. Mis puutub vananemisvastaste tervisetoodete koostisesse, siis enamik neist on peale mõne vitamiini- ja mineraalainelisandi valmistatud peamiselt traditsioonilistest Hiina meditsiinilistest materjalidest [1].

Lycium ruthenicum, perekonda kuuluv põõsasLütsiumperekond Solanaceae on tuntud oma viljade poolest, mida peetakse praegu üheks parimaks looduslikuks antotsüaniinide allikaks. Seetõttu nimetatakse seda "antotsüaniinide kuningaks" ja see on oluline looduslik antioksüdantide allikas [2,3]. Lisaks on see rikas polüsahhariidide, flavonoidide, fenoolhapete ja mitmesuguste mikroelementide poolest [4–6].

Cistanche deserticola, perekonda kuuluv taimCistancheOrobanchaceae perekonnast on traditsioonilises hiina meditsiinis sageli kasutatav toonik neeruessentsi taastamiseks [7]. See sisaldab mitmesuguseid bioaktiivseid ühendeid, nagu fenüületanoidglükosiide, ehhinakosiide, akteosiide ja polüsahhariide [1].

KombinatsioonLycium ruthenicumjaCistanche deserticolaArvatakse, et see ühtlustab yin ja yang neerudes, pärsib vere vabu radikaale, suurendab vastupanuvõimet, aeglustab vananemist, ennetab arterioskleroosi ja suurendab immuunsust [8]. Mõlemad on kaheotstarbelised (ravimid ja söödavad) kohalikud tooted Hiinas Gansu provintsis asuvast Hexi koridorist.

Praegu on läbi viidud ulatuslikud kodumaised ja rahvusvahelised uuringud, mis põhinevad farmakoloogiliste funktsioonide ja toimeainete ekstraheerimisel.Lycium ruthenicumjaCistanche deserticola. Gao Yani [9], Guo Qiaoli [10] ja Ailadan·Maimaiti Aili [11] uuringud on leidnud, et polüsahhariididCistanche deserticolaomavad kõrget antioksüdantset aktiivsust ja selle fenüületanoidglükosiididel on teatav antioksüdantne võime, tugev redutseerimisvõime ja tõhus sihtmärgi sidumisvõime. Yang Dailini [12] ja Lou Shutingi [13] uuringud näitavad, et polüfenoolsed ühendidLycium ruthenicumon keerulised ja rikkalikud, millel on tugevad antioksüdantsed omadused ning fenoolide ja antotsüaniinide üldsisaldus on tugevas korrelatsioonis antioksüdantse aktiivsusega.

Antotsüaniinid ja polüfenoolidLycium ruthenicum, samuti polüsahhariidid ja fenüületanoidglükosiididCistanche deserticola, millel kõigil on kinnitust leidnud vananemisvastane toime [14,15]. Siiski ei ole teatatud nende kahe koostisosa kombineeritud kasutamisestin vitrosimuleeritud seedetrakti seedimise ja antioksüdantide aktiivsuse katsed.

Seetõttu tehakse selles uuringus ettepanek kasutadaLycium ruthenicumpulber ja külmkuivatatudCistanche deserticolapulber seedimiskatsete peamise toorainena. ViidatesHiina farmakopöaja põhineb inimkeha nõudlusel peamiste aktiivsete komponentide järeleLycium ruthenicumjaCistanche deserticola, võetakse kasutusele kolm erinevat suhet (1:2, 1:1 ja 2:1). Simuleeritudin vitroviiakse läbi seedimise ja imendumise katsed, et mõõta antotsüaniinide, fenüületanoidglükosiidide, polüfenoolide ja polüsahhariidide muutusi seedimise ajal ning nende antioksüdantset aktiivsust. Uuringu eesmärk on hinnata võimalikku kasu tervisele ja anda uusi teadmisi funktsionaalsete tervisetoodete kombineerimise väljatöötamiseksLycium ruthenicumjaCistanche deserticola.

1 Materjalid ja meetodid

1.1 Materjalid ja reaktiivid

Materjalid:
Lycium ruthenicumpuuvilju koguti 2022. aastal Yumeni linnas Huahai linna tehismetsadest.Cistanche deserticolakoristati 2022. aasta mais kunstlikult nakatatudHaloksülonmetsad Gaotai maakonna liivamaal.

Reaktiivid:
Pepsiin (3000 U/g), trüpsiin (250 U/mg), gallushape, Folin-Ciocalteu reaktiiv, DPPH ja ABTS osteti ettevõttelt Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.

 

1.2 Instrumendid ja seadmed

DK-98-II digitaalne termostaadiga veevann (Tianjin Test Instrument Co., Ltd.)

QUINTIX-224 elektrooniline analüütiline kaal (Sartorius Scientific Instruments Co., Ltd.)

GL-12B lauaarvuti kiire jahutustsentrifuug (Hunan Hesi Instrument and Equipment Co., Ltd.)

DR6000 UV-nähtav spektrofotomeeter (Hach Company)

SPH-110X12 110X24 termostaadiga veevanni loksuti (Shanghai Shiping Laboratory Equipment Co., Ltd.)

 

1.3 Meetodid

1.3.1 Proovi ettevalmistamine

Lycium ruthenicumviljad kuivatati loomulikult õhu käes ning katkised viljad ja varred eemaldati. Proovid jahvatati veskiga ja lasti hilisemaks kasutamiseks läbi 50-silmalise sõela. VärskeCistanche deserticolapesti, viilutati ja leotati koheselt värvi kaitsvas lahuses, seejärel külmkuivatati, jahvatati ja lasti säilitamiseks läbi 50-mešši sõela.
Segapulbrite valmistamiseks:Lycium ruthenicumpulber jaCistanche deserticolapulber segati rühmade vahekorras - A-rühm: 1:2, B-rühm: 1:1, C-rühm: 2:1. Proovi kogukaal oli 0,75 g. Segatud proov segati deioniseeritud veega tahke ja vedeliku suhtega 1:40 ja loksutati 37 kraadi juures, et simuleerida seedetrakti seedimist. Pärast jahutamist tsentrifuugiti segu 15 minutit kiirusel 6000 p/min ja supernatant koguti edasiseks analüüsiks.

1.3.2 In vitro simuleeritud seedimine

In vitro seedimise meetod optimeeriti viite [16] põhjal ja koosnes kahest etapist:

1. etapp: mao seedimine (GD), 2 tundi
0,75 g proov (Lycium ruthenicum, Cistanche deserticolavõi segatud pulber) pandi 50 ml tsentrifuugitorusse koos sobiva koguse deioniseeritud veega ja segati. pH reguleeriti 2,0-ni, kasutades 1 mol/L HCl. Seejärel lisati 4 ml simuleeritud maomahla (3 g pepsiini lahustatuna 50 ml 0,01 mol/l HCl-s). Segu inkubeeriti seedimiseks loksutavas veevannis temperatuuril 37 kraadi ja kiirusel 100 pööret minutis. Seejärel inaktiveeriti ensüümi aktiivsus keevas veevannis 10 minutiks. Segu tsentrifuugiti 4 kraadi juures 15 minutit (6000 p/min) ja supernatant koguti testimiseks.

2. etapp: soolte seedimine (ID), 2 tundi
Mao seedimise järgse segu pH reguleeriti 7,0-ni, kasutades 1,0 mol/L NaHC03. Seejärel lisati trüpsiini lahus (0,3 g trüpsiini lahustatuna 50 ml 0,01 mol/l Na2CO3-s) ja segati hoolikalt. Seedimine viidi läbi loksutades kiirusel 100 pööret minutis 37-kraadises veevannis. Pärast seedimist inaktiveeriti ensüümi aktiivsus keevas veevannis 10 minutiks. Segu tsentrifuugiti 4 kraadi juures 15 minutit (6000 p/min) ja supernatant koguti analüüsiks.

 

1.3.3 Funktsionaalsete komponentide määramine

Polüfenoolide üldsisaldusmäärati Folin-Ciocalteu meetodil [17].

Polüsahhariidide sisaldusmõõdeti fenool-väävelhappe meetodil [18].

Antotsüaniini sisaldusmäärati pH diferentsiaalmeetodi abil [13].

Fenüületanoidglükosiidide sisaldusmõõdeti UV-nähtava spektrofotomeetria abil [19].

 

1.3.4 Antioksüdandi aktiivsuse määramine

1.3.4.1 DPPH radikaali eemaldamise aktiivsus
DPPH test viidi läbi vastavalt viites [20] kirjeldatud meetodile. DPPH radikaali eemaldamise määr arvutati valemi (1) abil:

DPPH radikaali eemaldamise määr (%)= (1−A1−A2A0)×100\\left(1 - \\frac{A_1 - A_2}{A_0} \\right) \\times 100(1−A0​A1​−A2​​) × 100
(Vormel 1)

Kus:

A1A_1A1​=proovi + DPPH lahuse neeldumine

A2A_2A2​=proovi neeldumine + deioniseeritud vesi

A0A_0A0​=DPPH lahuse + deioniseeritud vee neeldumine

1.3.4.2 ABTS-i radikaali eemaldamise tegevus
ABTS-analüüs viidi läbi vastavalt viites [21] kirjeldatud meetodile. ABTS-i radikaali eemaldamise määr arvutati valemi (2) abil:

ABTS-i radikaalide eemaldamise määr (%)= (1−A1−A2A0)×100\\left(1 - \\frac{A_1 - A_2}{A_0} \\right) \\times 100(1−A0​A1​−A2​​) × 100
(Vormel 2)

Kus:

A1A_1A1​=proovi + ABTS-lahuse neeldumine

A2A_2A2​=proovi neeldumine + deioniseeritud vesi

A0A_0A0​=ABTS lahuse + deioniseeritud vee neeldumine

 

1.4 Andmetöötlus

Kõik katsed viidi läbi kolmes eksemplaris. Andmeid analüüsiti kasutadesSPSS 22.0tarkvara ja graafikud loodi kasutadesMicrosoft Origin 2018.

 

2 Tulemused ja analüüs

2.1 Seedetrakti simuleeritud seedimise mõju selle aktiivsetele komponentidele ja antioksüdantsele aktiivsuseleLycium ruthenicumpulber

2.1.1 Seedetrakti seedimise mõju aktiivsetele komponentideleLycium ruthenicumpulber

Nagu näidatudJoonis 1-a, polüfenoolide sisaldus simuleeritud seedetrakti seedimise rühmasLycium ruthenicumesimese 1,5 tunni jooksul oluliselt suurenenud (p< 0,05), millele järgnes langus. Üldiselt suurenes polüfenoolide tase seedetrakti seedimisetappides.

VastavaltJoonis 1-b, simuleeritud mao seedimise rühmas polüsahhariidide sisaldusLycium ruthenicumoluliselt suurenenud 2 tunni jooksul (p< 0,05), samas kui simuleeritud soole seedimise rühmas näitas polüsahhariidide sisaldus olulist langustendentsi (p< 0,05).

Nagu näidatudJoonis 1-c, antotsüaniini sisaldus simuleeritud mao seedimise rühmas suurenes oluliselt 1,5 tunni jooksul (p< 0,05). Seevastu antotsüaniini sisaldus simuleeritud soole seedimise rühmas vähenes esimese 1,5 tunni jooksul veidi, kuid 1 tunni pärast ei olnud erinevus statistiliselt oluline (p> 0,05). Leeliselist keskkonda peetakse antotsüaniini lagunemise peamiseks põhjuseks [22].

 

2.1.2 Aktiivsete komponentide ja antioksüdantse aktiivsuse vaheline korrelatsioonLycium ruthenicumPulber pärast simuleeritud in vitro seedimist

Nagu näidatudJoonis 2-a, DPPH radikaalide eemaldamise kiirus simuleeritud mao seedimise rühmasLycium ruthenicumüldiselt suurenes 2-tunnise perioodi jooksul, kuigi 0,5 tunni pärast oli langus, millele järgnes tõus. Võrreldes soolestiku seedimise rühmaga, oli langus maorühmas tugevam ja statistiliselt olulisem (p< 0,05).

VastavaltJoonis 2-b, ABTS-i radikaalide eemaldamise kiirus simuleeritud mao seedimise rühmasLycium ruthenicumnäitas olulist tõusu 2 tunni jooksul, samas kui simuleeritud soolerühmas vähenes ABTS-i eemaldamise määr oluliselt (p< 0,05).

Tabel 1näitab, et simuleeritud mao seedimise rühmas on polüfenoolidLycium ruthenicumoli tugev korrelatsioon DPPH eemaldamisaktiivsusega (p<0, 05), samas kui antotsüaniinid ei näidanud olulist korrelatsiooni DPPH aktiivsusega mao tingimustes. Võrreldes DPPH-ga näitas ABTS tugevamat lineaarset korrelatsiooni nii polüfenoolide kui ka antotsüaniinidega (p< 0,01), tõenäoliselt kõrge antotsüaniinisisalduse tõttuLycium ruthenicum, mis on peamine antioksüdant.

Polüsahhariidid näitasid väga tugevat positiivset korrelatsiooni DPPH-ga (p< 0,01), kuid tugev negatiivne korrelatsioon ABTS-iga (p< 0,01). Simuleeritud soole seedimise rühmas olid nii polüsahhariidid kui ka antotsüaniinid tugevas korrelatsioonis DPPH ja ABTS eemaldamisaktiivsusega (p< 0,05). Nimelt oli lineaarne korrelatsioon polüsahhariidide ja antioksüdantide võime vahel tugevam kui antotsüaniinidel.

Seevastu polüfenoolidel oli tugev negatiivne korrelatsioon nii DPPH kui ka ABTS-iga (p< 0,01), mis viitab sellele, et seedimisaja pikenedes ei pruugita fenoolseid ühendeid täielikult ära kasutada ja need võivad laguneda, mis viib antioksüdantide potentsiaali kadumiseni [14].

 

Tabel 1

Korrelatsioon polüfenoolide, polüsahhariidide ja antotsüaniinide sisalduse vahelLycium ruthenicumja erinevad antioksüdandid

Indeks / 指标	Simuleeritud maomahla rühm		Simuleeritud soolevedeliku rühm
	DPPH	ABTS	DPPH	ABTS
Polüfenool / 多酚	0.585*	0.910**	-0.706**	-0.688**
Polüsahhariid / 多糖	0.841**	-0.980**	0.744**	0.770*
Antotsüaniin / 花色苷	0.463	0.835**	0.553*	0.610*

Märkus.
** näitab olulist korrelatsiooni (P< 0,05)
*** näitab äärmiselt olulist korrelatsiooni (P< 0,01)