Uuring Rouchongrongi (Cistanche Deserticola) fenüületanoidglükosiidide ekstrakti parandava toime kohta lipiidide metabolismile ApoE maksas - / - rasvarikka dieediga hiired, mis põhinevad ACOX1 - CPT2 ekspressioonide reguleerimisel

KOKKUVÕTE Eesmärk:Et uuridaFenüületanoidglükosiidide ekstrakti mõjualatesCistanche deserticola(PGCD) lipiidide metabolismi kohta ApoE- / - hiirte maksas, mis on põhjustatud kõrge rasvasisaldusega dieedist. Meetodid: 70 isast ApoE-/- hiirt, keda toideti kõrge rasvasisaldusega dieediga, jagati 5 rühma, mudel (MOD) rühm, positiivne kontrollrühm hiirtele manustati atorvastatiini [20 mg/(kg·d)] + esetimiibi [20 mg/(kg). ·d)](A + E), anti PGCD madala, keskmise ja suure annuse rühmadPGCD[250, 500, 1000 mg / (kg·d)]; veel 14 isast C57BL/6J hiirt achow dieediga määrati normaalseks kontrollrühmaks (CON). 12. nädalavahetusel tuvastati vastavalt kasutusjuhendile TG sisaldus ning ALT ja ASAT aktiivsus seerumis ja maksakoes. Värske maksakude homogeniseeriti ja rasvhapete süntaasi (FAS), pika ahelaga atsüül-CoA dehüdrogenaasi (LCAD) ja glutatioonperoksidaasi (GSH - Px) sisaldus,superoksiiddismutaas (SOD)tegevusi testiti ELISA-meetodiga, samal ajal tuvastati malondialdehüüdi (MDA) ja lipiidperoksiidi (LPO) sisaldus kidmeetoditega. Atsüül-koensüüm A oksüdaasi 1 (ACOX1) ja karnitiini palmitoüültransferaas 2 (CPT2) mRNA ekspressioonid tuvastati RT-PCR katsetega.

80% TEADMISEKS KLIKI SIIAFENÜÜLETANOIDGLYKOSIIDIDLOODUSLIK ORGAANILINE TASTANŠEEKSTRAKT

Wecistanche'i tugiteenus - Hiina suurim tsistanšeksportija:

E-post:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Lisateabe saamiseks ostke:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Tulemused:Erinevalt mudelirühmastkolmeannuseline PGCD vähendas kõik TG tasetmaksas ja seerumis annusest sõltuval viisil ning alandas ALAT ja ASAT aktiivsust seerumis. Kolmeannuseline PGCD vähendas kõik FAS-i sisaldust annusest sõltuval viisil ja tõstis oluliselt LCAD-i sisaldust maksas.PGCD reklaamitudGSH-Px ja SOD-i aktiivsus vähendas oluliselt MDA ja LPO sisaldust maksas. RT-PCR katsed näitasid, et PGCD tõstis ACOX1 ja CPT2 mRNA taset maksakoes.

Järeldus:PGCD võib parandada lipiidide metabolismi ja oksüdatiivset stressivastust ning vähendada lipiidide ladestumist maksakoes, reguleerides ACOX1 ja CPT2 mRNA ekspressioone.

Märksõnad:Cistanche deserticola fenüületanoidglükosiidide ekstrakt; ACOX1; CPT2;lipiidide metabolism;oksüdatiivne stress; ApoE- / - hiired

Alkoholivaba rasvmaksa haigus(NAFLD) on üks levinumaid maksahaigusi maailmas, mille levimus elanikkonnast on peaaegu 30%. Rasvmaksahaigus kasvab Hiinas 0,594% aastas [1]. NAFLD esinemine ja areng on tihedalt seotud organismi liigse kaloraažiga. Rasvarikas dieet põhjustab rasva liigset kogunemist maksas ja indutseerib NAFLD-d[2] ning selle patogeneesi algetapp on triatsüülglütserooli (TG) ladestumine maksarakkudesse[2] 3]. Praeguseks ei ole NAFLD patogeneesile suunatud spetsiifilisi terapeutilisi ravimeid. Teadlaste oluliseks ülesandeks on saanud ohutute, tõhusate ja selgete mehhanismidega ravimite leidmine NAFLD-i ennetamiseks ja raviks. Cistanche deserticola YC Ma on parasiitaim perekonnast Cistanche perekonnast Orobanchaceae. Selle põhikomponendil, fenüületanoidglükosiididel, on organismi immuunfunktsiooni tugevdamise, vananemisvastase, kiirgusevastase, antioksüdandi ja hepatoprotektiivse ning muude toimete funktsioonid[4-5]. Selle uuringu eesmärk on läbi viia esialgne uuring selle mehhanismi kohtaCistanche deserticola fenüületanoidglükosiidid(PGCD) lipiidide metabolismi parandamisel.

1 Katsematerjalid

1.1 Eksperimentaalsed ravimid

Cistanche deserticola lihavad varred (niiskussisaldus 8,5%) osteti ettevõttelt Hotan Dichen Pharmaceutical Co., Ltd.; fenüületanoidglükosiidid (peamised komponendid verbaskosiid ja ehhiaatsiid) (mõlemad puhtus > 98%) osteti ettevõttelt Manster, Chengdu, Sichuan Biotechnology Co., Ltd.; Atorvastatiin: Pfizer Shanghai; Esetimiib: Merck Pharmaceuticals Co., Ltd.

1.2 Katseloomad

6–8 nädala vanused isased C57BL/6J hiired ja ApoE-/- hiired, kehakaal (20 ± 2) g, ostetud ettevõttest Changzhou Cavins Experimental Animal Co., Ltd., litsentsi number: SCXK (Su) 2016-0010 , 12 h / 12 h valgustsükkel, temperatuur (22 ± 1) kraad , niiskus 50% ~ 60%, toidu ja vee vaba tarbimine. Enne katset toideti hiiri kohanemiseks 1 nädala jooksul standardse dieediga. Kõik loomade hooldamine ja katsed järgivad Shandongi esimese meditsiiniülikooli katseloomade eetikakomitee eeskirju (eetikanr: W202107080303).

1.3 Eksperimentaalne reagendid

Rasvane sööt: Harlan Teklad; TG, ALT, AST komplektid: Beijing Solebao Biotechnology Co., Ltd.; FAS, LCAD komplektid: Shanghai Langton Biotechnology Co., Ltd.; GSH-Px komplekt: Shanghai Jining Biotechnology Co., Ltd.; SOD, MDA, LPO, BCA komplektid: Nanjing Jiancheng Biotechnology Co., Ltd.; Trizol komplekt: Invitrogen, Carlsbad, CA; ACOX1 ja CPT2 praimerid: kujundas Sangon Bioengineering (Shanghai) Co., Ltd.

1. 4 eksperimentaalset instrumenti Hei – VAP Expert Rotary Auruti: Saksamaa

Heidolph; Varioskan LUX multifunktsionaalne mikroplaadi lugeja: ThermoFisher; FD8508 vaakumkülmkuivati: Ilshin, Lõuna-Korea; F6/10 homogenisaator: Shanghai Fluoroco; Kõrgefektiivne vedelikkromatograaf Agilent1260, UV-spektrofotomeeter Cary 3500: Agilent Technologies Ltd.; Quant studio5RT – PCR-seade: Thermo Fisher Biochemicals, Inc.

2.3.1 Kehamass ja maksaindeks

12. nädala lõpus paastuti hiired ja kaaluti. Hiired anesteseeriti naatriumpentobarbitaaliga ja surmati. Maksad koguti maksaindeksi arvutamiseks.

2.3.2 Seerumindikaatori tuvastamine

Võtke seerum ja tuvastage seerumi aspartaataminotransferaasi (AST) ja alaniinaminotransferaasi (ALT) aktiivsused järjestikku vastavalt komplekti toimimisele; BCA määrab seerumis valgusisalduse ja tuvastab TG sisalduse.

2.3.3 Maksakoes lipiidide metabolismiga seotud tegurite tuvastamine

4 kraadi juures kaaluge sobiv kogus värsket maksa ja homogeniseerige see PBS-is, tsentrifuugige (tsentrifuugi raadius 7,5 cm, 3 000 p/min) homogenaati 1 minut, võtke supernatant ja mõõtke maksa valgusisaldus. maksakude BCA abil. TG sisaldus koes, ELISA meetod rasvhapete süntaasi (FAS) ja pika ahelaga atsüül-CoA dehüdrogenaasi (LCAD) sisalduse tuvastamiseks maksakoes.

2.3.4 Maksakoega seotud oksüdatiivsete tegurite tuvastamine

4 kraadi juures kaaluge sobiv kogus värsket maksa ja homogeniseerige see PBS-is, tsentrifuugige homogenaati (tsentrifugaalraadius 7,5 cm, 3 000 p/min) 15 minutit, võtke supernatant ja mõõtke maksa valgusisaldus. maksakude koos BCA-ga. Järgige reaktiive Karbis olevad juhised tuvastavad superoksiidi dismutaasi (SOD) ja glutatioonperoksidaasi (GSH-Px) aktiivsused ning tuvastavad samaaegselt malondialdehüüdi (MDA) ja lipiidperoksiidi (LPO) tasemed.

2. 3. 5 RT-PCR tuvastamine

ACOX1/CPT2 mRNA ekspressioon maksakoes: võtke sobiv kogus värsket maksakudet, kasutage Trizol komplekti kogu maksakoe mRNA ekstraheerimiseks, kasutage cDNA sünteesimiseks MuLV pöördtranskriptaasi ja kasutage cDNA-d mallina reaalajas kvantitatiivse fluorestsentsi teostamiseks. PCR (Qpcr) tuvastamine. , reaktsioonitingimused olid järgmised: eeldenatureerimine 95 kraadi juures 2 minutit; denatureerimine 95 kraadi juures 10 sekundit, lõõmutamine: 60 kraadi 30 sekundit, pikendamine 72 kraadi juures 35 sekundit, 34 tsüklit ja lõpuks pikendamine 72 kraadi juures 5 minutit ning reaalajas kvantifitseerimine automaatse analüsaatori abil. ACOX1 ja CPT2 mRNA ekspressioon. Rotor-gene Q tarkvara. Andmete analüüsiks kasutati 1.7 (Qiagen) ning mRNA ja GAPDH suhteliste tasemete loendamiseks kasutati 2-△△Ct meetodit. Iga katserühm viidi läbi paralleelselt > 3 korda. Praimeri järjestused on järgmised: GAPDH, ülesvoolu: 5' - GCCACCC AGAAGACTGTG - 3', allavoolu: 5' - ATGTAGGCCATGAGGTCCAC - 3'; ACOX1, ülesvoolu: 5' -CGCCACCTT CAATCC AGAGT - 3' allavoolu: 5' -TCTGCGATGCCAAATTCCCT - 3'; CPT2, ülesvoolu: 5'- TCCTCCTACTC AGGACGCAA - 3' allavoolu: TTGGGATCTTCCGCTCACAC.

2.4 Statistilised meetodid

Andmete analüüsimiseks kasutati SPSS 20.0 statistikatarkvara. Mõõtmisandmed väljendati (x ± s). Rühmadevaheliseks võrdlemiseks kasutati ühesuunalist dispersioonanalüüsi. P < 0,05 peeti statistiliselt oluliseks erinevuseks.