Naha vananemine on füsioloogilisest langusest tingitud kompleksne bioloogiline nähtus

Palun võtke ühendustoscar.xiao@wecistanche.comrohkem informatsiooni

Abstraktne:Selle uuringu eesmärk oli testida Washingtonia filifera puuviljaekstraktide pärssivat toimet naha vananemisega seotud ensüümidele. Viljalihaekstraktid ei avaldanud olulist ensüümi inhibeerimist, samas kui W.filifera seemneekstraktidel on elastaasi-, kollagenaasi- ja türosinaasi-vastane toime. Türosinaas inhibeeriti kergelt, samas kui elastaasi ja kollagenaasi inhibeerimisel täheldati tugevamat toimet. Alkoholiekstraktid andsid paremaid tulemusi kui vesiekstraktid. Nende hulgas näitasid metanooliekstraktid silmapaistvat ensüümi inhibeerivat toimet, kuna elastaasi ja kollagenaasi IC5o väärtus oli võrreldav ja isegi parem kui võrdlusühend. Kõige aktiivsemate ekstraktide inhibeerimisrežiimi uuriti Lineweaver-Burki graafiku analüüsiga. W.filifera seemneekstrakte uuriti ka nende fotokaitsva toime osas Mansuri võrrandi abil ning W.filifera ekstrakti antioksüdantset aktiivsust hinnati oksüdatiivse stressiga rakkudes. Ekstrakti ohutuse hindamiseks analüüsiti selle mõju inimese keratinotsüütide rakkude elujõulisusele.kadunud impeerium cistancheMetanooliekstrakt avaldas rakusüsteemis parimat fotokaitset ja avaldas antioksüdantset toimet ilma tsütotoksilise toimeta. Üldised tulemused näitavad, et W.filifera ekstraktid on paljulubavad bioaktiivsete ühendite allikad, mida saaks kasutada kosmeetika- ja farmaatsiatoodete valmistamisel.

Märksõnad:ensüümi inhibeerimine; kollagenaas; elastaas; türosinaas; taimeekstraktid; seemned; naha vananemine; Washingtonia filifera

Lisateabe saamiseks klõpsake siin

1. Sissejuhatus

Naha vananemine on keeruline bioloogiline nähtus, mis on tingitud naha funktsioonide füsioloogilisest halvenemisest ja mitmetest välistest keskkonnateguritest, nagu UV-kiirgus, kemikaalid ja reaktiivsed hapniku liigid (ROS). Nahk on keha suurim ja enim eksponeeritud osa ning kokkupuude päikese UV-kiirgusega on üks olulisemaid väliseid stressi tekitavaid tegureid: oksüdatiivse stressiga seotud fotost põhjustatud naha vananemine. UV-kiirguse poolt indutseeritud ROS võib algatada keerulisi molekulaarseid teid, sealhulgas ensüümide aktiveerimist, mis lagundavad rakuvälise maatriksi (ECM) valke pärisnahas, muutes naha terviklikkust [1]. Naha vananemise üheks peamiseks tunnuseks on tõepoolest ECM-i struktuuri kadu, mis sisaldab arvukalt valke, sealhulgas kollageeni ja elastiini, mis kõik mängivad olulist rolli naha elastsuse säilitamisel [2]. ECM-i lagunemine on peamiselt tingitud proteolüütiliste ensüümide, nagu kollagenaas ja elastaas, suurenenud aktiivsus. Nende ensümaatiliste aktiivsuste pärssimine looduslike taimsete ühenditega võib olla paljulubav lähenemisviis naha vananemise ennetamisel [3]. Kollagenaas (EC 3.4.24.3) kuulub maatriksi metalloproteinaaside perekonda ja võib füsioloogilistes tingimustes lagundada kollageeni kolmikspiraalset piirkonda.mikroniseeritud puhastatud flavonoidfraktsioon 1000 mg kasutusalasidKollageen on ECM-i kiuline komponent ja peamine struktuurvalk inimese nahas, pakkudes struktuurset tuge luudele, kõõlustele, sidemetele ja veresoontele. Elastaas (EC3.4.21.36) on proteolüütiline ensüüm, mis osaleb naha elastsuse eest vastutava ECM-valgu elastiini füsioloogilises lagunemises. Elastaasi aktiivsuse suurenemist on leitud mitmete haiguste puhul, näiteks psoriaas, dermatiit, põletikulised protsessid ja naha enneaegne vananemine, mis on tihedalt seotud kortsude tekkega[4].

Cistanche on vananemisvastane toime

Veelgi enam, üks peamisi muutusi, mis on seotud eakate kortsude tekkega, on hüperpigmenteeritud laikude ilmumine, mida tuntakse ka seniilse lentiigo või vanuselaikudena. Need on otseselt seotud ebaühtlase pigmentatsiooniga teise vananemisega seotud ensüümi türosinaas aktiivsuse tõttu. Türosinaas (EC 1.14.18.1) on melaniini metabolismi kiirust piirav ensüüm. See katalüüsib L-türosiini hüdroksüülimist 3,4-dihüdroksüfenüülalaniiniks (L-DOPA), millele järgneb L-DOPA oksüdeerimine dopakinooniks. Dopakinooni derivaatide oksüdatiivne polümerisatsioon tekitab melaniini [5]. Melaniini pigmentide süntees on füsioloogiline protsess, mis mängib üliolulist rolli UV-kiirguse poolt põhjustatud nahakahjustuste ärahoidmisel UV-päikesekiirguse neelamise kaudu. Vaatamata selle eelistele põhjustab melaniini liigne tootmine või ebanormaalne kogunemine nahaprobleeme, nagu tüüpilised vanuselaigud. Kuna nahk on keha kõige nähtavam organ, võivad kortsude enneaegne ilmumine ja hüperpigmentatsioon tekitada mõnele inimesele emotsionaalset stressi.

Seega võivad kõigi ülalkirjeldatud ensüümide inhibiitorid olla üha olulisemad koostisosad kosmeetikatoodetes ja ravimites, et vältida naha vananemist [6]. Looduslikud taimsed saadused võivad olla paljulubavad bioaktiivsete ühendite allikad. Vananemisvastaste rakenduste jaoks pakuvad ekstraktid erilist huvi, kuna neil on mitmeid kasulikke funktsioone, nagu vananemisega seotud ensüümide pärssimine ja vabade radikaalide eemaldamise võime.

Oma eelmises töös kirjeldasime W.filifera seemneekstraktide antioksüdantset võimekust ja mitmeid bioloogilisi toimeid [7]. Washingtoni filifera (Lindl.) H. Wendl., üldtuntud kui California lehvikupalm või kõrbepalm, on igihaljas palmipuu, mis on pärit Lõuna-Californiast, Arizonast, Mehhikost ja kõrbealadest.oteflavonoidSee 15-20 m kõrgune palm ei anna datleid, kuid sellel on magusad ja maitsvad söödavad puuviljad. Nendel marjadel on väga suur pruun seeme, mida ümbritseb õhuke viljaliha (joonis 1). W.filifera't on uuritud näiteks seoses selle kasutamisega uute tsellulooskiudude potentsiaalse allikana [8] ja selle viljade toiteväärtusega [9]; leen on teatanud ka õhust osade fenoolsest koostisest ja antioksüdantsest aktiivsusest [10]. Eelmises uuringus teatasime W heast antioksüdantsest aktiivsusest.puritaanid c-vitamiinfilifera seemneekstraktid, mis näisid olevat fenool- ja flavonoidmolekulide allikad[7]. Samad ekstraktid avaldasid inhibeerivat toimet ksantiinoksüdaasi ja koliinesteraasi ensüümidele, mis esindavad vastavalt podagra ja Alzheimeri tõve ravis võtmeensüüme.

Selle töö eesmärk oli laiendada selle taime iseloomustust ja hinnata selle ekstraktide võimalikku kasutamist vananemisvastase ainena. Seetõttu uuriti viljaliha- ja seemneekstraktide elastaasi, kollagenaasi ja türosinaasi aktiivsust inhibeerivat toimet, kuna need on peamised sihtensüümid naha fotovananemise ennetamisel ja ravimisel; Veelgi enam, W.filifera ekstrakte, mis näitasid parimat paljutõotavat toimet, analüüsiti nende in vitro tsütotoksilisuse, raku antioksüdantse aktiivsuse ja fotokaitsva toime osas.

2. Tulemused ja arutelu

2.1.Ensüümi inhibeerimine

W. filifera viljaliha ja seemne ekstrakte testiti esmalt kontsentratsioonil 50 ug/ml.sistancheKõik viljalihaekstraktid ei avaldanud olulist ensüümi inhibeerimist (andmeid pole näidatud). Seemneekstraktide ensüüme inhibeeriv toime arvutati ja väljendati poole maksimaalsest inhibeerivast kontsentratsioonist (ka). Tabelis 1 on näidatud seemneekstraktidest saadud ICso väärtused võrreldes standardsete inhibiitorite omadega, et hinnata proovide inhibeerivat tugevust. Nagu võis täheldada, inhibeerivad kõik ekstraktid nõrgalt türosinaasi aktiivsust, kusjuures ICso väärtused on kõrgemad kui standardsel kojic happel. Täheldati paremat elastaasi ja kollagenaasi aktiivsuse inhibeerimist ning etanooli (EEG ja EES) ja metanooli (MEG ja MES) ekstraktid avaldasid parimat mõju. Nende proovide inhibeeriv toime elastaasi suhtes oli sarnane; ICso väärtused jäid vahemikku 10,75–19,75 ug/mL ja olid võrreldavad positiivse kontrolli (oleanoolhape; ICso=11,75 ug/mL) omaga.

Selle asemel inhibeerisid ekstraktid tugevalt kollagenaasi aktiivsust, mis näitas suuremat tugevust kui standardne epigallokatehhiingallaat, kusjuures ICso oli kuni kolm korda madalam kui positiivsel kontrollil. Arvestades, et ekstraktid olid mitme ühendi segu, oli üksikute aktiivsete molekulide kontsentratsioon isegi madalam kui IC50 väärtus, muutes ekstraktid veelgi paljulubavamaks inhibeerivate ühendite allikateks.

2.2.Kineetiline analüüs Lineweaver-Burki graafiku järgi

Keskendasime oma tähelepanu etanoolile ja metanooliekstraktidele, et uurida nende ensüümide inhibeerimisviisi, kuna neil oli parem toime elastaasi ja kollagenaasi aktiivsuse vastu. Inhibeerimise kineetika määrati Lineweaver-Burki kahekordse vastastikuse diagrammi abil. Analüüsid viidi läbi, suurendades vastava substraadi kontsentratsiooni erinevate kontsentratsioonidega ekstraktide puudumisel ja juuresolekul.

Tabel 2 näitab, et EEG ja EES toimisid elastaasi vastu mittekonkureerivate inhibiitoritena. Tegelikult andis nende ekstraktide kineetiline analüüs paralleelsete joonte perekonna ekstrakti kontsentratsiooni suurendamiseks (joonis 2A, B). See kireetiline analüüs näitab, et need ekstraktid võivad seostuda ensüümi-substraadi kompleksiga. Tasakaalukonstant (Krs) arvutati lõikepunktide (1/Vmax) ja inhibiitori kontsentratsiooni ümberarvestamisel, mille tulemusena saadi EEG ja EES väärtused vastavalt 3,91 ja 8,89 ug/mL. Metanooliekstraktide inhibeerimise viis näitas tõepoolest, et need ekstraktid toimivad mittekonkureerivate inhibiitoritena. Tegelikult leiti ekstraktide kontsentratsiooni suurendamisel erinevate kaldega sirgjoonte perekond, mis kõik lõikuvad abstsissil (joonis 2C, D). See analüüs näitab, et ekstraktid võivad seonduda mitte ainult ensüümi-substraadi kompleksiga, vaid ka vaba ensüümiga. Vaba ensüümiga (Kj) ja ensüümi-substraadi kompleksiga (Kis) seondumise tasakaalukonstandid saadi kas kalde (Km/Vmax) või 1/Vmax väärtuste (y-lõikepunktide) põhjal, mis on esitatud graafikul versus inhibiitori kontsentratsioon. vastavalt.Lõpuks on kollagenaasi kineetiline käitumine ekstraktide erinevatel kontsentratsioonidel näidatud joonistel 3A-D. Kõik ekstraktid toimisid mittekonkureerivate inhibiitoritena Krs väärtustega vahemikus 7.58-13.04 ug/mL (tabel 2).

Eelmises töös analüüsisime W. filifera seemnete alkoholiekstrakte, kasutades HPLC-DAD-ESI/MS. Oleme rõhutanud, et nende ekstraktide peamised fenoolsed ühendid koosnevad flavan-3-oolist [7]. Nende hulgas olid B-tüüpi protsüanidiinid peamised ühendid W.filifera seemnete ekstraktides. Eelmises artiklis [11, 12] täheldati positiivset seost protsüanidiini polümerisatsiooniastme ja protsüanidiinide elastaasi inhibeerimise võime vahel. Lisaks on teatatud mõnede protsüanidiiniühendite inhibeerivast toimest elastaasi ja kollagenaasi vastu [13,14]. Nende ühendite sünergiline toime võib aidata selgitada W.filifera metanooliekstrakti olulist inhibeerimist mõlema ensüümi suhtes.

2.3.Päikesekaitsefaktor

Võimalike nahale kandvate ühendite puhul on fotoprotektiivne toime väga oluline, seetõttu määrasime oma ekstraktidele päikesekaitsefaktori (SP). SPF näitab aine võimet absorbeerida UV-kiirgust, kaitstes nahka sellise kiirguse tekitatud toksiliste mõjude eest. Taimsel kosmeetikal on suur potentsiaal UV-kiirguse neelamisel, sest taimeekstraktid sisaldavad polüfenoole, näiteks flavonoide või karotenoide. Need aromaatsete rõngastega ühendid võivad absorbeerida UV-kiirgust ja seetõttu toimida päikesefiltrina. Kuna W.filifera alkohoolsed seemneekstraktid sisaldavad fenool- ja flavonoidühendeid [7], hinnati nende ekstraktide fotokaitset. Nagu on näidatud tabelis 3, näitasid kõik analüüsitud ekstraktid kontsentratsioonis 100 ug/ml SPF väärtused vahemikus 1,52 kuni 3,35. Selgus, et metanooliekstraktidel on parim fotokaitsev toime. UV-kiired põhjustavad nahahaigusi ja käivitavad protsesse, mille tulemuseks on naha vananemine, oksüdatiivne stress ja kortsude teke. Seega suurendab selle kiirguse neeldumise vähendamine kaudsel viisil antioksüdantset toimet ja vananemisega seotud ensüümide pärssimist.

2.4. Rakkude elujõulisus ja rakusisene ROS-i tase

Kuna oksüdatiivne stress on võtmetegur vananemise ja vanusega seotud kahjustuste põhjustamisel, uurisime ka seda, kas W. filifera ekstraktid inhibeerivad HO2-indutseeritud ROS teket rakusüsteemis. Eelmises artiklis kirjeldasime seemneekstraktide antioksüdantset aktiivsust spektrofotomeetrilise meetodi (ABTS-testi) abil[7]. Selgus, et proovid on hea antioksüdantsete omadustega fenoolühendite allikas, kusjuures parimat aktiivsust näitas MEG. Kuna sellel ekstraktil oli parim antioksüdantne toime ja ka suur potentsiaal, siis arvestades testitud ensüümi (koliinesteraas, ksantiinoksüdaas ja siin toodud vananemisensüümid) vastast inhibeerivat toimet, otsustasime kinnitada MEG antioksüdantset võimet rakumudelis.

Esiteks uuriti W.filifera ekstrakti mõju rakkude elujõulisusele HaCaT rakkudes. Immortaliseeritud inimese keratinotsüütide HaCaT rakuliini on laialdaselt kasutatud mudelina epidermaalse homöostaasi uurimiseks [15]. Selle ekstrakti ohutuse kindlaksmääramiseks töödeldi rakke 24 tundi proovi erinevate kontsentratsioonidega ja uuriti MTT testiga. Tulemused näitavad, et ekstrakt ei olnud HaCaT rakkudes tsütotoksiline ja 100 ug/ml juures täheldati vaid väikest langust (elujõulisus 80 protsenti) (joonis 4). Kuna elujõulisust ei mõjutanud enne 50 ug/ml (elujõulisus 96 protsenti), otsustasime teha täiendavaid rakulisi katseid, kasutades kuni seda ekstrakti kontsentratsiooni. Hindasime ROS-i taset rakkudes enne ja pärast oksüdatiivset stressi ning pärast MEG-ga töötlemist. Uuring viidi läbi, kasutades 21,7'-diklorofluorestseiindiatsetaati (DCFH-DA), mis hajub kergesti läbi rakumembraani ja hüdrolüüsitakse endogeensete esteraaside toimel DCFH-ks. DCF-i kiire tõus näitab DCFH oksüdeerumist rakusisese ROS-i poolt, nagu näiteks H2O2. Nagu on näidatud joonisel 5, suurendas H2O2 inkubeerimine märkimisväärselt ROS-i moodustumist HaCaT-rakkudes, kuid ekstraktiga töötlemine suutis inhibeerida H2O2-indutseeritud ROS-i tootmist annuse-vastuse viisil. Seega kinnitavad need tulemused antioksüdantide analüüse ja viitavad sellele, et MEG võib samuti vähendada ROS-i moodustumist rakkudes.

Selles artiklis analüüsitud metanooliekstrakt näitas kõrgeid antioksüdantseid omadusi. Selle ekstrakti fenoolne koostis koosnes flavan{0}}oolist ja peamised fenoolsed ühendid olid B-tüüpi protsüanidiinid [7]. On teatatud, et protsüanidiinidel, polüfenoolsete bioflavonoidide rühmal, on lai valik bioloogilisi, farmakoloogilisi ja kemoprotektiivseid omadusi hapniku vabade radikaalide vastu[16,17]. Eelnev uuring on näidanud, et protsüanidiinide radikaalidevastane toime on kõrgete kontsentratsioonide korral tugev[18]. Lisaks on proantotsüanidiini ekstraktid tõhusamad superoksiidi radikaalide püüdjad kui antioksüdant C-vitamiin ja Trolox [19].

3. Materjalid ja meetodid

3.1.Kemikaalid

Kõik keemilised reaktiivid saadi puhaste kaubanduslike toodetena firmast Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA), kui pole märgitud teisiti, ja neid kasutati ilma täiendava puhastamiseta.

3.2.Taimeproovi ettevalmistamine

W.filifera viljad koguti Tuneesias Gabes'i (G) ja Sousse'i (S) piirkondades ning taimsed materjalid valmistati eelnevalt kirjeldatud protseduuri kohaselt [7]. Viljaliha ja seemned lüofiliseeriti eraldi ning taimseid materjale (25 g) ekstraheeriti 100 ml vees (AE, vesiekstrakt), etanoolis (E, etanooliekstrakt) või metanoolis (ME, metanooliekstrakt) 72 tundi toas. temperatuuril, pidevalt segades. Pärast filtreerimist ja tsentrifuugimist kiirusel 10, 000 pööret minutis lüofiliseeriti vesiekstraktid, samal ajal kui saadud etanooli- ja metanooliekstraktid kontsentreeriti vaakumis, kasutades edasiseks analüüsiks rotaatoraurustit. Kuivatatud kogused (1 mg/ml) lahustati enne kasutamist DMSO-s.

3.3.Ensümaatiline inhibeerimine

Kõikide allpool kirjeldatud testide tulemused väljendati protsendina tühiproovi kontrollist. Ekstraktide kontsentratsioonid, mille tulemuseks oli ensüümi aktiivsuse (ICso) 50-protsendiline inhibeerimine, määrati annuse-vastuse kõverate interpoleerimisega. Inhibeerimismudel määrati, tehes teste substraadi erinevatel kontsentratsioonidel ning ekstraktide puudumisel ja olemasolul erinevatel kontsentratsioonidel. Kineetika andmeid analüüsiti Lineweaver-Burki diagrammi abil. Aktiivsustestide andmed registreeriti spektrofotomeetriga Ultrospec 2100 (Biochrom Ltd., Cambridge, UK).

3.3.1. Türosinaasi inhibeerimise test

Türosinaasi aktiivsuse inhibeerimine W.filifera ekstraktide poolt määrati, kasutades substraadina 3,4-dihüdroksüfenüülalaniini (L-DOPA) [20]. Reaktsioonisegu sisaldas 25 mM fosfaatpuhvrit (pH 6,8), seene türosinaasi (100 U/mL, lõppkontsentratsioon) koos taimeekstrakti lahusega või ilma. Seejärel lisati segule L-DOPA (0,5 mM) ja aktiivsus määrati neeldumise suurenemise järgi 492 nm juures, mis tulenes dopakroomi produkti moodustumisest. Seene türosinaasi inhibeerimise testis kasutatud ekstrakti kontsentratsioonivahemik oli 0-0,3 mg/ml. Ilma taimeekstraktideta tehtud testides lisati reaktsioonisegule pimekatsena DMSO. Positiivse kontrollina kasutati kojichapet.

3.3.2.Elastaasi inhibeerimise test

Elastaasi inhibeerimist testiti, jälgides p-nitroaniliini vabanemist substraadi N-sukk-(Ala)3-nitroaniliidi (SANA) lõhustamise ajal ensüümi toimel kirjeldatud meetodil [21]. väikesed muudatused. Analüüs viidi läbi 0,1 M Tris-HCl puhvris (pH8.{10}}). Sigade pankrease elastaasi (3,3 ug/ml) inkubeeriti koos ekstraktiga või ilma selleta 20 minutit ja pärast inkuleerimist lisati substraat (1,6 mM) ja ensüümi aktiivsust jälgiti lainepikkusel 410 nm. Kontroll viidi läbi DMSO-ga, samas kui positiivse kontrollina kasutati oleanoolhapet.

3.3.3. Kollagenaasi inhibeerimise test

Clostridium histolyticumi kollagenaas valmistati Tricine puhvris {{0}}.05 M, pH 7,5, sisaldas 0,4 M NaCl ja 0,01 M CaClz, ning inkubeeriti (1 U). /mL) erinevate kontsentratsioonidega uuritavate proovidega 15 minuti jooksul. Seejärel lisati reaktsiooni käivitamiseks sünteetiline substraat N-(3-[2-Fury]]-akrüloüül)-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA), mis valmistati samas puhverlahuses ( lõppkontsentratsiooniga 0,8 mM). Neeldumist jälgiti lainepikkusel 340 nm [21]. Kontroll viidi läbi DMSO-ga, samas kui positiivse kontrollina kasutati epigallokatehhiingallaati.

3.4. In vitro päikesekaitsefaktori määramine

W. filifera ekstraktide päikesekaitsefaktor määrati UV neeldumise meetodil Mansur et al. kirjeldatud metoodika järgi. (1986) [22]. Ekstraktide neeldumised (0,1 mg/mL) mõõdeti vahemikus 290-320 nm 5 nm sammuga ja igas punktis tehti kolm määramist. SPF arvutati Mansuri võrrandi rakendamisel: kus CF=parandustegur(10); EE(A)= kiirguse erütemogeenne toime lainepikkusega λ;I（）= päikese intensiivsuse spektriga; Abs（λ= spektrofotomeetrilised neeldumisväärtused lainepikkusel λ. EE (A) × I (A) väärtused on konstantsed. Need määrasid Sayre jt. (1979)[23] ja on näidatud tabelis 4.

3.5. Rakukultuur ja intratsellulaarsed ROS-i tasemed

Inimese naha keratinotsüütide rakuliini HaCaT kultiveeriti Dulbecco modifitseeritud Eagle'i söötmes (DMEM), mis sisaldas 10 protsenti veise loote seerumit (FBS, Gibco, NY, USA) ja 1 protsenti penitsilliini/streptomütsiini temperatuuril 37 kraadi, niisutatud atmosfääris, 5 protsent CO2. Rakkude elujõulisus tuvastati kolorimeetrilise 3-(4)5-dimetüültiasool-2-üül)-2.5-difenüültetrasooliumbromiidi (MTT) testiga, nagu eelnevalt kirjeldatud, väikeste muudatustega [24]. Pärast 24-tunnist inkubeerimist MEG-ga erinevatel kontsentratsioonidel (0-100 ug/mL) märgistati rakud MTT lahusega 3 tundi temperatuuril 37 °C. Saadud violetsed formatsaani sademed lahustati DMSO-s ja iga süvendi neeldumine määrati 560 nm juures, kasutades mikroplaadilugejat 630 nm etaloniga.

Raku ROS tasemed määrati DCFH-DA meetodil [25]. HaCaT rakke töödeldi erineva kontsentratsiooniga MEG-ga (0-50 ug/ml) 24 tundi. Seejärel inkubeeriti rakke DCFH-DA-ga (10 uM) 37 kraadi juures 30 minutit. Pärast inkubeerimist lisati süvenditesse 1 mM HzO2 ja DCF-i fluorestsentsi intensiivsus mõõdeti koheselt fluorestsentsplaadilugejaga ergastuslainepikkusel 485 nm ja emissioonilainepikkusel 530 nm, võttes näidud 5-minutilise intervalliga 50 nm. min.

3.6.Andmete analüüs

Kõik katsed viidi läbi kolmes korduses ja andmed väljendati keskmise 士 standardhälbena (SD). Statistilisi erinevusi hinnati GraphPad Prism tarkvara versiooni 8 (San Diego, CA, USA) abil. Rühmade võrdlus viidi läbi ühesuunalise dispersioonanalüüsi (ANOVA) abil, millele järgnes Tukey mitme võrdluse test. Ap-väärtust alla 0,05 peeti statistiliselt oluliseks.

4. Järeldused

Kokkuvõtteks teatame esimest korda, et W.filifera seemneekstraktid inhibeerivad tõhusalt peamisi ensüüme, mis on seotud naha vananemisega. Loomulik ehk "sisemine" vananemine on füsioloogiline nähtus, mis ilmneb aja möödudes kõigis inimkudedes. Kuid nahk puutub kokku ka väliste stressitekitavate teguritega, mis on naha enneaegse vananemise peamiseks põhjuseks. "Väline" vananemine on peamiselt seotud naha sidekoe UV-kiirguse põhjustatud kahjustustega. UV-kiired põhjustavad oksüdatiivset stressi, mis vastutab ECM-i lagundavate ensüümide aktiveerimise ning kortsude ja vanuselaikude ilmnemise eest. See käsikiri kirjeldab W.filifera seemnete tähtsust selles kontekstis. Nagu on näidatud joonisel 6, võivad ekstraktid ennetada enneaegset vananemist, toimides samaaegselt mitmel rindel.

Esiteks võivad ekstraktid toimida protsessi alguses oma fotokaitsva toime kaudu ja seega vähendada UV-kiirguse neeldumist. Seejärel näitasid nad metanooliekstraktiga head antioksüdantset toimet, takistades ROS-i moodustumist rakusüsteemis ilma raku toksilisuseta. Lõpuks võivad kõik ekstraktid, eriti metanooliproovid, inhibeerida kollagenaasi, elastaasi ja türosinaasi (viimast vähesel määral). Üldiselt näitavad saadud tulemused, et W.filifera võib olla bioaktiivsete molekulide allikas ja julgustada edasisi katseid, et eraldada üksikud aktiivsed komponendid, mis vastutavad vaadeldavate tegevuste eest.

See artikkel on välja võetud ajakirjast Plants 2021, 10, 151. https://doi.org/10.3390/plants10010151 https://www.mdpi.com/journal/plants