Hüdrofiilsete valgendusainete samaaegne HPLC määramine kosmeetikatoodetes
Mar 22, 2022
Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Miaw-Ling Chang a, Chur-Min Chang b,*
Abstraktne
Kõrgefektiivne vedelikkromatograafiline meetod nelja kõige sagedamini kasutatava hüdrofiilse aine kvantifitseerimiseksvalgendamineaine*/glükoolhape (GA), askorbiinhape (AA),arbutiin(ART) ja Mg-askorbüülfosfaat (MAP) on välja töötatud. Isokraatne eraldamine viidi läbi, kasutades C18 kolonni, kus liikuva faasina oli ioonpaar. Analüüdid tuvastati ultraviolettkiirguse neeldumise teel lainepikkustel vastavalt 220 ja 240 nm. Kalibreerimiskõverad olid lineaarsed 8.0-36 mg/ml (GA), 10.0-300 mg/ml (AA ja ART) ja 5.6-451 mg/ml ( KAART). Lineaarse regressioonianalüüsi korrelatsioonikordaja oli vahemikus 0.9974-0.9997. Nelja analüüdi saagised olid vahemikus 94,8–100,1 protsenti ja selle meetodi täpsus oli parem kui 6,9 protsenti suhtelisest standardhälbest (RSD) (n=3). Leiti, et AA lagunes vesilahuses. Veendumaks, et AA oli HPLC analüüsi ajal stabiilne, lahustati kõik analüüdid destilleeritud vees ja need lahused puhastati hapniku eemaldamiseks gaasilise lämmastikuga ja säilitati temperatuuril 25 8C. Katsetulemused näitavad, et protseduur on kiire, lihtne, selektiivne meetod ja sobib tavapärasteks kommertsanalüüsideks.kosmeetika.# 2003 Elsevier BV Kõik õigused kaitstud.
Märksõnad: Kosmeetikatoode; Hüdrofiilne valgendav aine; Glükoolhape; Askorbiinhape; arbutiin; Mg askorbüülfosfaat; HPLC
Cistanche herbaon looduslik valgendav aine.
1. Sissejuhatus
Läänlased peavad pargitud nahka terveks ja ilusaks. Vastupidi, heledat nahka peetakse idamaades ilusaks. Seetõttu on valgendavad vedelikud idamaades väga populaarsed. Neid kasutatakse naha valgendamiseks. Keemilist koorimist kasutatakse tavaliselt aknest, melasmist, tüügastest jne tekkinud kahjustatud näonaha kliinilises ravis. Selles tehnikaskosmeetilineNahale kantakse kemoterapeutikumi sisaldavaid tooteid, mis stimuleerivad naharakkude uuenemist. Naha värvus muutub heledamaks. Seega nimetatakse seda kemoterapeutikumi ka avalgendamineagent [1-6]. On teatatud, et valgendav aine nagu glükoolhape (GA), üks hüdroksühapetest, suurendab naha hüdratsiooni ja annab seetõttu siledama välimuse, mille tulemuseks on vähem näojooni ja kortse [7,8]. Valgendusaineid on kahte tüüpi: lipofiilsed valgendusained ja hüdrofiilsed ained. Lipofiilsete valgendavate ainete näideteks on kojihape, salitsüülhape, askorbüülpalmitaat, aselaiinhape ja adapaleen. Hüdrofiilsete valgendusainete näideteks on glükoolhape (GA), askorbiinhape (AA),arbutiin(ART) ja magneesiumaskorbüülfosfaat (MAP). Siin uuritakse hüdrofiilseid valgendavaid aineid, kuna nende polaarsetel rühmadel on halb afiinsus HPLC-s kasutatava C18 kolonni suhtes ja neid on HPLC-s raske eraldada. Selle probleemi lahendamiseks kasutasime ioonpaari meetodit.
Nende hüdrofiilsete ainete keemilised struktuurid ja maksimaalne kontsentratsioonvalgendamineained on toodud tabelis 1. Taiwanis ei ole kosmeetikatoodetes kasutatavate GA ja AA kontsentratsiooni piiranguid. ART-i saab aga kasutada kuni 7 massiga. protsenti ja MAP kuni 3 massiprotsenti. Kuigi kosmeetikatoodetes kasutatava GA kontsentratsioon ei ole piiratud, teatas USA Toidu- ja Ravimiamet, et see valgendav aine võib põhjustada tõsiseid põletusi või naha turset [9]. Üldiselt umbes 30-40 wt. protsenti GA-st kasutataksekosmeetikakasutamiseks ilusalongides ja suurema kontsentratsiooniga, 50-70wt. protsenti kasutatakse arstide kasutatavates kosmeetikatoodetes [10].
Selle uuringu eesmärk on välja töötada kvantitatiivne analüüsimeetod, et mõõta täpselt kosmeetikatoodete valgendusainete taset. See töö on avaliku julgeoleku seisukohalt väga oluline. Kuigi on palju väljaandeid, mis kirjeldavad valgendajate hinnangut kosmeetikatoodetes [11-16], ei ole kirjanduses veel kirjeldatud samaaegselt kvantitatiivseid analüüsimeetodeid. See uuring on seotud analüütilise meetodiga, mis suudab tuvastada ja samaaegselt kvantifitseerida hüdrofiilsust.valgendamineagendid.
Hüdrofiilnevalgendamineained ei ole vesilahuses alati stabiilsed. Need alluvad oksüdatsioonile. Kuigi on teatatud mitmetest AA stabiilsuse uuringutest [17-19], ei sobi nendes aruannetes olev AA keskkond HPLC jaoks hüdrofiilsete valgendite samaaegseks määramiseks. Tulemuste täpsuse huvides on oluline veenduda, et hüdrofiilsed valgendusained on analüüsi ajal stabiilsed.
2. Eksperimentaalne
2.1. Reaktiivid ja standardid
GA, AA, ART ja MAP ning kaubik osteti firmalt Alfa Co. (Ameerika), AlfaCo. (Ameerika), Wako (jaapanlane) ja Lipo. Co. (Ameerika), vastavalt. Metüülparabeen ja U{0}} saadakse ettevõttest Induchem. Co. (Šveits). Sidrunhape, tetrabutüülammooniumhüdroksiid (TBAH), sorbitool, fosforhape ja kaaliumdihüdrofosfaat osteti ettevõttelt AldrichCo. (Ameerika). Kõik kemikaalid olid analüütilise reaktiivi kvaliteediga. Kaubanduslikkosmeetilineerinevate tootjate tooteid osteti jaekauplustest ja kohalikust apteegist. Lahustid ja vesi filtreeriti läbi 0,45 mm membraani ja degaseeriti.
2.2. Instrumentatsioon
HPLC-seade (Hitachi Co., Jaapan) koosnes modulaarsest kromatograafilisest süsteemist. Millele on lisatud pump (mudel I-7100), UV-detektor (mudel I-7420; muutuva lainepikkusega) ja sissepritseventiil. 25 ml proovisilmusega (Model7725, Rheodyne, Cotati, USA). Andmete kogumine ja töötlemine viidi läbi personaalarvutiga, kasutades SISC tarkvara (Taiwan). Proovide süstimine viidi läbi 25 ml süstlaga (Hamilton, Šveits). Kasutati 5 mm, 250 mm / 4,60 mm ID A roostevabast terasest Mightysil RP{10}}GP kolonni.
2.3. Kromatograafilised tingimused
Kromatograafiline analüüs viidi läbi ühe kolonni isokraatliku pöördfaasi meetodiga. Ioonide sidumise meetodi puhul oli liikuvaks faasiks 0.{{10}}05 M kaaliumdihüdrofosfaadi puhverlahus, mis sisaldas kolme kemikaali: TBAH, metanool ja fosforhape. Nende kolme kemikaali kogusel on suur mõju HPLC spektri eraldamisele ja eraldusvõimele. TBAH kontsentratsioon varieerus vahemikus 1 kuni 10 mM; metanool 1 kuni 10 mahuosa. protsenti . Puhverlahusele lisati erinev kogus fosforhapet, et reguleerida pH väärtusi vahemikus 2,5 kuni 5,0. Testimistulemused võimaldavad valida sobiva liikuva faasi hea lahutusvõime saavutamiseks. Kõik liikuvad faasid filtriti läbi Milliporefiltri, pooride suurus 0,45 mm, ja degaseeriti enne kasutamist ultraheliga töötlemise teel. Kasutati voolukiirust 1,1 ml/min. Analüüdid tuvastati UV-absorptsiooniga 220 või 240 nm juures. Nelja koostisosa identsus määrati kromatograafia abil autentsete standarditega. Kvantifitseerimine viidi läbi piigi integreerimisega välise standardimismeetodi abil.
cistanche eelisedkohtavalgendav tõhus nahk
2.4. Kalibreerimiskõver
Põhilahused valmistati ainete täpse kaalumisega ja seejärel vees lahustamisega. Nelja analüüdi viis töölahust valmistati värskelt nende põhilahustest suhtega {{0}} destilleeritud veega. Nende töölahuste sobiv lahjendamine andis kontsentratsiooniks 10/300 mg/ml, välja arvatud GA ja MAP, kus kontsentratsioonid olid vastavalt 8.0-36,0 mg/ml ja 5,6 /451 mg/ml. Kalibreerimiskõverad koostati, joonistades iga komponendi piikide pindalad kontsentratsiooni suhtes ja andes iga kalibreerimiskõvera kalde väärtused koos lõike- ja korrelatsioonikoefitsiendiga. Kalibreerimiskõverad olid mõeldud nelja kvantifitseerimiseksvalgendamineagentide neljas kommertsnäidiskosmeetika.
2.5. Taastumise uuring
Näidiskreemi, mis sisaldab nrvalgendamineaineid kasutati taastumisuuringus kontrollina. Sellele kontrollkreemile lisati erinevas koguses nelja hüdrofiilset valgendusainet, GA, AA, ART ja MAP. Kontsentratsioon on toodud tabelis 4. Umbes 1 g igast valmistatud proovikreemist kaaluti klaaskolbi ja lisati 30 ml destilleeritud vett ning seejärel sukeldati kolb ultrahelivanni 15 minutiks, mis oli termosteeritud temperatuuril 25 8 C. Saadud lahus viidi destilleeritud veega mahuni 100 ml, seejärel filtriti ja hapnikuvabalt eemaldati N2-ga umbes 3 minutit ning seejärel suleti Bakelitese kruvikorgi ja silikoonrõngaga.
3. Tulemused ja arutelu
3.1. Kromatograafia ja eraldusvõime
Nelja struktuurvalgendamineained, GA, AA, ART ja MAP, on näidatud tabelis 1. Kõik need on väga polaarsed molekulid. Polaarsete analüütide puhul kasutatakse HPLC C18 kolonnis või tsüanopropüülkolonnis liikuva faasi komponendina tavaliselt metanooli või atsetonitriili. Metanooli või atsetonitriili kasutamisel leiti aga nende polaarsete analüütide kooselueerimine. Seetõttu on neid analüüte võimatu eraldada. Selle kooselueerimise probleemi lahendamiseks kasutati ioonide sidumise meetodit, et vähendada nende polaarset iseloomu, et saada aktsepteeritud retentsiooniaeg. Lisaks on oluline leida sobiv eraldustingimus nelja analüüdi samaaegseks analüüsiks.kosmeetilinetooted. Optimaalse analüütilise seisundi saavutamiseks võetakse siinkohal arvesse liikuva faasi ja selle pH väärtuste mõju. Saadud tulemusi on illustreeritud joonisel 1. TBAH kontsentratsioon liikuvas faasis varieerus vahemikus 1 kuni 10 mM. Arvutatud võimsustegur väheneb, kui TBAH kontsentratsioon suureneb (vt joonis 1(a)). See mahuteguri väärtuste langus on MAP-i puhul järsk, kuid GA, ART ja AA puhul väga kerge. MAP-i ja teiste mahtuvusteguri märkimisväärne erinevus võib olla tingitud MAP-i tugevast ioonilisest iseloomust. Väiksem erinevus mahtuvusteguris annab HPLC-s mõistliku retentsiooniaja. Seetõttu valiti liikuva faasi jaoks TBAH kontsentratsiooniks 10 mM. Metanooli koguse mõju mahutegurile on näidatud joonisel 1(b). Sarnased tulemused saadi TBAH tulemustega. Suurem metanooli kontsentratsioon, väiksem mahtuvusteguri erinevus ja lühem retentsiooniaeg HPLC-s. Sel juhul valiti kümme protsenti metanooli mahust.
Eespool mainitud puhverlahusele lisati erinev kogus fosforhapet, et muuta pH väärtused 2,5 kuni 5.0. pH väärtusel 5.{5}} täheldati kromatograafi tulemustes laia ja mitmekordset piiki. GA, AA ja ART kromatograafi piigid kattuvad üksteisega. Erinevalt eelmistest tulemustest suureneb mahutegur MAP-i pH väärtuste tõustes (vt joonis 1(c)). PH väärtustest tulenev muutus mahtuvusteguris on GA, AA ja ART puhul väga väike. Hea lahutusvõime tagamiseks HPLC-s on oluline valida pH-väärtus, mis annab piisavalt erinevusi mahtuvusteguri väärtustes. Nendel põhjustel valiti pH väärtus 2,5. Selle tulemusena on HPLC analüüsi jaoks sobiv mobiilne faas 0,005 M kaaliumdihüdrofosfaadi puhverlahus, mis sisaldab 10 mM TBAH, 10 mahuosa. protsenti metanooli ja fosforhapet. Fosforhapet kasutati puhverlahuse pH väärtuse reguleerimiseks 2,5-ni.
3.2. UV-detektori lainepikkuse määramine
Nende UV-spektervalgendamineliikuvas faasis lahustatud ained saadi UV-spektrofotomeetri abil. Maksimaalne neeldumispiik on GA puhul 220 nm, AA puhul 243 nm, ART puhul 227 nm ja MAP puhul 238 nm juures. 240 nm juures on UV-detektor AA ja MAP tuvastamisel väga tundlik, kuid GA puhul väga madal. ja ART (vt joonis fig. 2(b)). 220 nm juures olid HPLC kromatograafil selged piigid kõigi nelja valgendava aine puhul (vt joonis 2(a)). Kõigi analüütide parema tundlikkuse saamiseks reguleeriti detektori lainepikkuseks nelja analüüdi tuvastamiseks ja kvantifitseerimiseks 220 nm. Protseduur on suhteliselt kiire, analüütiline tööaeg toatemperatuuril (umbes 26 8C) on 12,1 minutit.
3.3. Valgendusainete stabiilsusuuring
AA laguneb vees lahustatuna dehüdroaskorbiinhappeks (DHA). Seetõttu on tulemuste täpsuse huvides oluline hoida teoskobiinhape analüüsi ajal stabiilsena. Fernandes et al. teatas, et lagunemist mõjutavad peamised tegurid on hapnik ja temperatuur [19]. Nende uuringus oli lagunemine märkimisväärne 1 tunni jooksul ja lahuse pH väärtuste mõju lagunemisele mainiti ainult pH 5 juures.0 ja 5.6. Meie uuringus hinnati AA stabiilsust, kasutades lahuse kontsentratsiooni muutust. AA erinevates keskkonnatingimustes, nagu töödeldud või töötlemata lahus N2-ga, pH väärtus ja temperatuur. Mida pikem on oluliste muutuste aeg, seda stabiilsem on askorbiin.
Tulemused, mis on kokku võetud tabelis 3, näitavad tugevat korrelatsiooni stabiilsuse ja töödeldud või N2-ga töötlemata lahuse vahel. AA töötlemata lahuse kadu on kiirem kui töödeldud lahusest. Nagu on näidatud tabelis 3, kulus 10 8C ja pH 2 juures AAA 10 protsendiliseks lagunemiseks umbes 10 tundi ilma töötlemiseta ja umbes 48 tundi töödeldud lahuse puhul. See võib olla tingitud asjaolust, et oksüdatsiooni jaoks on saadaval palju vähem hapnikku. Märgitakse, et hapniku juuresolekul ja temperatuuril 25 8C täheldati AA taset 8,7 ja 71,2 protsenti 10 tunni pärast pH väärtustel 6,9 ja 2,0. Seda tulemust võib seletada dissotsieerunud AA suurema kogusega pH 6,9 juures ja see vorm peaks olema vähem stabiilne kui dissotsieerumata vorm [19]. Seevastu hapniku puudumisel ja temperatuuril 25 või{22}}C on AA vesilahus pH 6,9 juures palju paremini stabiilne. Põhjust, miks AA on stabiilsem, pole veel uuritud. Seoses lahuse temperatuuriga on töötlemata lahustes AA vähem stabiilne kõrgemal temperatuuril (25 8C) kui madalamal temperatuuril (10 8C). Kuid töödeldud lahuste puhul on AA vesilahus vähem stabiilne on stabiilne ja seda ei mõjutanud temperatuur.
3.4. Lineaarsuse kinnitamine ja täpsuse analüüs
Kirjeldatud kromatograafilisi tingimusi kasutades saavutati nende analüütide ja teiste analüüsitavate ühendite vahel mõistlik lahutusvõime.kosmeetilinetoode. Meetod valideeriti lineaarsuse ja täpsuse osas. Iga kalibreerimiskõvera arvutamiseks kasutati lineaarset kõveratvalgendamineagent. Tulemused on toodud tabelis 4. Suurepärane lineaarsus saadi vahemikus 5,6 kuni 451 mg/ml kõigi standardite puhul, välja arvatud GA puhul, mille vahemik oli 8 kuni 36 mg/ml. Korrelatsioonikoefitsient on vahemikus 0 .9974 kuni 0.9997. Meetodi täpsus arvutati nelja hüdrofiilset valgendit samas kontsentratsioonivahemikus sisaldavate testide suhtelise standardhälbena (RSD, n{{10}}). RSD vahemik leiti olevat 0,3–6,43 protsenti.
3.5. Taastumine
Kreem, mis sisaldab nrvalgendamineaineid kasutati taastumisuuringus kontrollina. Sellele kontrollkreemile lisati vähesel määral nelja valgendusainet. HPLC kromatograafia näitab, et kontrollkreemi puhul ei tuvastatud UV-kiirguse neeldumise piiki (vt joonis 3(a)) ja neid nelja valgendusainet sisaldava proovikreemi puhul leiti neli neeldumispiiki. Joonisel fig. 3(b), piik 1 on GA UV-neeldumise piik; piik 2 AA jaoks; tipp 3 ART jaoks; MAP-i tipp 4. Igal valgendusainel on oma säilivusaeg. Seda märki kasutatakse hiljem nende valgendusainete tuvastamiseks. Tulemused on kokku võetud tabelis 2. Nii madala kui ka kõrge kontsentratsiooni korral saadi nelja aine saagise vahemik 94-100 protsenti. Kolmest kordusest arvutatud dispersioonikoefitsiendid olid kõik alla 6,9 protsendi. Eksperimentaalsest preparaadist ekstraheeritud nelja analüüdi HPLC kromatogrammid on näidatud joonisel 3 ja häireid ei täheldatud.
cistanche taimonVananemisvastane, antioksüdantjanahahoolduse mõju
3.6. Rakendus
Neli kaubanduslikult saadavalkosmeetilinetooteid analüüsiti. Nemad onvalgendaminekreem (kosmeetiline number 1), C20 valgendav geel (kosmeetiline number 2), essence lotion (kosmeetiline number 3) ja koorimiskreem (kosmeetiline number 4). Neid kosmeetikatooteid analüüsiti selles uuringus kirjeldatud protseduuri abil. Nende nelja kosmeetikavahendi kromatograafid on toodud joonisel 4(a/d). Kromatograaf 4(a) annab piigi 4 väikese neeldumispiigi, st kosmeetiline number 1 sisaldab MAP-i. Kromatograaf 4 (b) näitab tippu 2, mis näitab, et kosmeetikanumber 2 sisaldab AA-d. Kromatograafist 4 (c) ja (d) tuvastati ART kosmeetilises numbris 3 ja nii GA kui ka AA kosmeetilises numbris 4. Seal on märgistamata piigikromatograaf 4 (d). Selle UV-kiirguse neeldumispiigi peetumisaeg on pikem kui piigil 3, kuid palju lühem kui piigil 4. On selge, et see märgistamata neeldumispiik ei tulene valgendavatest ainetest, vaid muudest koostisainetest, kosmeetiline number 4. Nende valgendusainete kvantifitseerimise viis läbi piikide integreerimine kromatograafiasse välise standardimismeetodi abil. Valgendavate ainete tase nendes neljaskosmeetikaon toodud tabelis 5. Tuleb märkida, et saadud tulemused kinnitavad täpsust ja näitavad vastavust märgistatud väitele.
4. Järeldus
Välja töötatud HPLC test on lihtne ja kiire hüdrofiilse aine samaaegseks analüüsiksvalgendamineagendid. HPLC jaoks sobiva liikuva faasi valimiseks kasutati mahtuvustegurit. Tuleb valida tingimus, mis annab väiksema erinevuse võimsusteguris mõistliku säilitusaja jaoks. Hea lahutusvõime tagamiseks HPLC kromatograafis on oluline, et valitud tingimused annaksid piisavalt erinevusi mahtuvusteguri väärtustes. Selle tulemusena on HPLC analüüsi jaoks sobiv mobiilne faas 0,005 M kaaliumdihüdrofosfaadi puhverlahus, mis sisaldab 10 mM TBAH, 10 mahuosa. protsenti metanoolist ja fosforhappest. Fosforhapet kasutati puhverlahuse pH väärtuse reguleerimiseks 2,5-ni. Parem tuvastamise lainepikkusvalgendamineHPLC jaoks on 220 nm juures. Lisaks on saadud mugav meetod AA stabiliseerimiseks analüütilises protseduuris. Mis on tulemuste täpsuse seisukohalt oluline.
cistanche tubulosaviilud
