Simuleeritud mikrogravitatsioon mõjutab kopsuvähi immuunsusega seotud biomarkereid

Abstraktne: Mikrogravitatsioon on uudne strateegia, mis võib olla täiendav vahend tulevaste vähiteraapiate väljatöötamiseks. Kopsuvähi puhul on hästi käsitletud mikrogravitatsiooni mõju rakuprotsessidele ja rakkude migratsioonivõimele. Selle mõju kopsuvähi progresseerumist juhtivatele mehhanismidele on aga alles lapsekingades. Selles uuringus näidati, et 13 erinevalt ekspresseeritud geeni on seotud kopsuvähi prognoosiga simuleeritud mikrogravitatsioonis (SMG). Geenikomplekti rikastamise analüüsi kasutades rikastatakse neid geene humoraalse immuunsuse radadega. Selle asemel eksponeeriti alveolaarseid basaalepiteeli (A549) rakke SMG-ga 2D klinostaatsüsteemi kaudu in vitro. Lisaks morfoloogia muutustele ja proliferatsioonikiiruse vähenemisele muutis SMG A549 epiteeli-mesenhümaalseks ülemineku (EMT) fenotüübi, mis on vähi progresseerumise võtmemehhanism. Seda tõestas suurenenud epiteeli E-kadheriini ekspressioon ja mesenhümaalse N-kadheriini ekspressiooni vähenemine, mis näitab vähem metastaatilise seisundit. Huvitaval kombel täheldasime FCGBP, BPIFB, F5, CST1 ja CFB suurenenud ekspressiooni ning nende korrelatsiooni EMT-ga SMG all, muutes need potentsiaalseteks kasvaja supressori biomarkeriteks. Need leiud koos näitavad uusi võimalusi kopsuvähi ravi uute terapeutiliste strateegiate loomiseks.

Märksõnad: simuleeritud mikrogravitatsioon; EMT; kopsuvähk; metastaasid; kasvaja supressor; biomarker

Cistanche ürdi kasvajavastane toime

1. Sissejuhatus

Kosmos on tuntud selle poolest, et puudub gravitatsioonivektor, mis mõjutab keha elundite, kudede ja raku tasandil. Mikrogravitatsioon, näilise kaaluta oleku seisund, on märkimisväärne ruumistressor, mis teadaolevalt mõjutab märkimisväärselt inimeste tervist, nagu luukadu, lihaste atroofia ja südame seisundi halvenemine [1, 2]. Mikrogravitatsiooni mõju vähirakkudele on olnud ka kosmose- ja vähiuuringute kasvav huvipunkt. On näidatud, et mikrogravitatsioon pärsib immuunrakkude aktiivsust ja häirib mitme keha süsteeme, mis võib suurendada vähiriski [2–4]. Nende ilmsete terviseprobleemide tõttu on mikrogravitatsioonikeskkond võimaldanud teadlastel uurida mikrogravitatsiooni mõjutatud biofüüsikalisi mehhanisme ja aidanud leida ravimeid neurodegeneratiivsete häirete, immunoteraapiate ning potentsiaalselt paremate ja sihipärasemate vähivastaste ravimeetodite jaoks [4–6]. Arvukad uuringud on hästi dokumenteerinud ja läbi vaadanud mikrogravitatsiooni suurt mõju rakkude progresseerumisele, proliferatsioonile ja apoptoosile arvukates kasvajarakuliinides, sealhulgas kopsuvähi puhul [7–12]. Siiski on näidatud, et paljud teised uuringud, mis hõlmavad mikrogravitatsiooni, kutsuvad esile muutusi geeniekspressioonis, mis on seotud vähirakkude proliferatsiooni, metastaaside ja ellujäämisega, nihutades rakke vähem agressiivse fenotüübi poole [13, 14]. See võib tuua valgust uutele arusaamadele kasvaja bioloogiast ja diagnoosimisest, tuues seega esile mikrogravitatsiooni kui uuendusliku vahendi uudsete sihtmärkide avastamiseks, lootes välja töötada uudseid uurimismeetodeid ja parandada ravistrateegiaid. Kopsuvähk, mille kõige silmapaistvam tüüp on mitteväikerakk-kopsuvähk (NSCLC), on peamine surmapõhjus, moodustab 12% kõigist vähivormidest ja on kõige sagedamini diagnoositud vähk [15]. Mikrogravitatsiooniga seotud uuringutes, mis võivad aidata meil kantserogeenset protsessi paremini mõista, näitasid, et kopsuvähirakud kaotavad pärast kokkupuudet mikrogravitatsiooniga oma tüve, mõjutades seega vähirakkude kasvu ja funktsiooni [11]. Ahni jt uuring. näitas, et kopsuvähirakkude (A549) kokkupuude mikrogravitatsiooniga kutsus esile kiire migratsiooni ja proliferatsiooni. Seda seletati maatriksi metalloproteaaside (MMP-2 ja MMP-9) ülesreguleeritud tasemega mikrogravitatsiooni mõjul, mängides seega otsustavat rolli vähi invasioonis ja migratsioonis [10]. Teises uuringus on Chung et al. leidis, et simuleeritud mikrogravitatsioon ei mõjutanud oluliselt kopsuvähirakkude proliferatsiooni, vaid pigem suurendas migratsiooni võrreldes kontrollrühmaga normaalse raskusjõu korral [16]. Vastupidi, Chang et al. näitas migratsiooni vähenemist kopsuvähi rakuliinis A549 pärast 24-tunnist kokkupuudet mikrogravitatsioonitingimustega [17]. Vaatamata mikrogravitatsiooni olulisele mõjule raku käitumisele, mis hõlmab apoptoosi, migratsiooni ja invasiivsust, ei ole selle mõju kopsuvähile veel täielikult välja selgitatud. On hästi teada, et epiteelirakud läbivad mitmeid biokeemilisi muutusi, et luua mesenhümaalne fenotüüp, mis suurendab apoptoosi resistentsust, invasiivsust ja rändevõimet. Sellist bioloogilist protsessi tuntakse kui epiteeli-mesenhümaalset üleminekut (EMT), mis on vähi progresseerumise tunnus [18]. EMT seost vähi progresseerumisega on hästi arutatud. On teada, et kasvajad aktiveerivad EMT-d, reguleerides üles transkriptsioonifaktoreid, ekspresseerides rakupinna valke ja tootes ECM-i lagundavaid ensüüme. Kui EMT on aktiveeritud, kaotavad kasvajarakud oma rakkude ja rakkude adhesiooni ning omandavad migratsiooni- ja invasiivsed omadused [19]. Ainult kaks uuringut on näidanud, et simuleeritud mikrogravitatsioon kutsub keratinotsüütides esile mööduva epiteeli-mesenhümaalse ülemineku (EMT) [9]. Lisaks tõsteti selliseid nähtusi esile MCF-7 rakkudes ja HUVEC [20]; aga ükski uuring ei ole keskendunud mikrogravitatsiooni mõjule kopsuvähi EMT-le. Hoolimata paljudest olulistest avastustest, mis on tehtud mikrogravitatsiooni võime kohta moduleerida vähi tuumorigeenseid ja metastaatilisi protsesse, jäävad mikrogravitatsioonilinna poolt juhitavad täpsed mehhanismid suhteliselt tundmatuks, tekitades seega lahtisi küsimusi molekulaarsel tasandil toimuvate adaptiivsete muutuste kohta. Selles uuringus tuvastasime immuunsüsteemiga seotud geenide (FCGBP, BPIFB1, F5, CFB ja CST1) allkirja, mis näitas simuleeritud mikrogravitatsiooni (SMG) mõjul märkimisväärselt suurenenud mRNA ekspressiooni A549 rakkudes. Lisaks oleme EMT regulatsiooni kaudu hinnanud SMG panust A549 vähi progresseerumisse. FCGBP, BPIFB1, F5, CFB ja CST1 ning nende korrelatsioon EMT võtmemarkeritega näitasid SMG all potentsiaalselt vähem metastaatilist kopsuvähi fenotüüpi. Selle uuringu tulemused annavad aluse tulevastele uuringutele, mis on vajalikud aluseks olevate mehhanismide tuvastamiseks, mis arendavad meie arusaamist ja aitavad välja töötada uudseid terapeutilisi strateegiaid kopsuvähi raviks.

Cistanche tubulosa-Antitumor eelised

2. Tulemused

2.1. Kopsuvähirakkudes simuleeritud mikrogravitatsiooni (SMG) mõjul identifitseeritud levinumad erinevalt ekspresseeritud geenid võrreldes maapinna gravitatsiooniga (GG)

Kopsuvähiga seotud geenide tuvastamiseks simuleeritud mikrogravitatsiooni (SMG) all uurisime algselt geene, mida SMG all ekspresseeritakse erinevalt inimese kopsuvähi maapealse gravitatsiooniga (GG), kasutades avalikult kättesaadavat Gene Expression Omnibus (GEO) andmebaasi. Valiti kaks andmekogumit, GSE78210 ja GSE36931, mis sisaldavad kahe erineva inimese kopsuvähi rakuliini A549 ja Colo699 geeniekspressiooni, mida kasvatati 2D ja 3D rakukultuuri tingimustes. SMG ja GG proovide geneetiliste ekspressiooniprofiilide erinevused esitati vulkaanidiagrammidel (joonis 1). Iga andmestiku tuvastatud erinevalt ekspresseeritud geenid (DEG-d; joonis 2) jagati nendeks, mis on kopsuvähi korral ülesreguleeritud (21 geeni GSE78210 andmestiku A549-s ja 29 geeni Colo699-s ja 47 geeni GSE36931 andmestiku A549-s) ja nendeks. mis on alareguleeritud I kopsuvähk (40 geeni GSE78210 andmekogumis A549 ja 27 geeni Colo699 andmestikus GSE78210 ja 87 geeni GSE36931 andmestiku A549), nagu on näidatud tabelis 1. Kolmteist DEG-d ekspresseerusid oluliselt kõrgelt GSE783693 ja GSE783613 andmestiku A549 rakkudes. SMG võrreldes GG seisukorraga. Kõige levinumad geenid tuvastati InteractiVienni veebitööriista abil (joonis 2A). Kandidaatgeenide hulka kuuluvad AZGP1, CFB, NOX1, VTCN1, AGR3, GDA, TCN1, CST1, F5, CEACAM6, BPIFB1, FCGBP ja BPIFA1. Et teha kindlaks, kas tuvastatud DEG-d on seotud ühiste radadega, laaditi kandidaatgeenid üles Metascape'i (//metascape.org; juurdepääs 11. novembril 2021). Huvitaval kombel on need geenid rikastatud radadega, mis hõlmavad humoraalset immuunvastust ja reguleeritud eksotsütoosi (joonis 2B).

Joonis 1. Vulkaani graafik, mis näitab erinevalt ekspresseeritud geene (DEG), kasutades GEO Omnibusi. (A) Vulkaanigraafik, mis näitab DEG-sid SMG ja GG efektide all A549 rakkudes, kasutades (A) GSE78210 ja (B) GSE36931 andmekogumeid. (C) Vulkaani graafik, mis näitab DEG-sid SMG ja GG efektide all Colo699 rakuliinis, kasutades GSE78210 andmekogumit. Punane värv näitab ülesreguleeritud geene, sinine värv aga allareguleeritud geene.

Tabel 1. SMG-ga võrreldes GG-ga erinevalt ekspresseeritud geenide koguarv kopsuvähi rakuliinides A549 ja Colo699. Igas andmestikus oli voltimismuudatusi kohandatud, et eraldada DEG-de ülemine 5%. GSE36931 puhul kohandati kordne muutus (FC) nii, et see hõlmaks ainult geene, mille FC on suurem või võrdne 4 või väiksem või võrdne -4. GSE78210 puhul kohandati FC-d nii, et see hõlmaks ainult geene, mille FC on suurem või võrdne 3 või väiksem või võrdne -3.

Joonis 2. Kolmteist tavaliselt jagatud DEG-d GSE78210 ja GSE36931 andmekogumite vahel kopsuvähi korral. (A) Venni diagramm, mis näitab 134° GSE36931-s (A549 rakuliin), 61° GSE78210-s (A549 rakuliin) ja 56° GSE78210-s (Colo699 rakuliin) SMG tingimustes võrreldes GG-ga. Kokku tuvastatud 251 geenist leiti, et 13 DEG-d on A549 rakuliinis kahe andmestiku GSE78210 ja GSE36931 vahel ühised. Venni diagramm genereeriti InteractiVinni abil.

2.2. Erinevalt ekspresseeritud geenid on korrelatsioonis kopsu adenokartsinoomi patsientide kliinilise prognoosiga

Diferentsiaalselt ekspresseeritud geenid korreleerusid kopsuadenokartsinoomi patsientide kliinilise prognoosiga Kandidaatgeenide kliinilise prognostilise väärtuse hindamiseks kopsu adenokartsinoomiga patsientidel kasutati Kaplan-Meieri plotterit (http://www.kmplot.com/; juurdepääs 11. novembril 2. {44}}21) kasutati kõrge/keskmise ja madala kandidaatgeenide ekspressiooniga kopsu adenokartsinoomi (LUAD) patsientide üldise elulemuse (OS) võrdlemiseks (joonis 3). NOX1 kõrge mRNA ekspressioonitase (riskisuhe (HR), 1,45; 95% usaldusvahemik (CI), 1,11–1,9; p=0.0058), GDA (HR) , 1,74; 95% CI, 1,33–2,26; p=3,2e-05), TCN1 (HR, 1,62; 95% CI, 1,26–2,08; p=0,00014), ja BPIFA1 (HR, 1,44; 95% CI, 1,12–1,84; p=0,0026) olid märkimisväärselt seotud halva prognoosiga (joonis 3A–D). Teisest küljest seostati FCGBP kõrgeid mRNA ekspressioonitasemeid (HR, 0,63; 95% CI, 0,46–0,85; p=0,0026) LUAD-i patsientide parema prognoosi ja kõrgema üldise elulemusega (joonis 3E). mRNA vahel ei olnud olulist korrelatsiooni

Joonis 3. FCGBP, CST1, F5, CFB ja BPIFB1 korreleerusid kopsu adenokartsinoomiga patsientide kliinilise prognoosiga. Kandidaatgeenide mRNA ekspressioonitasemete Kaplan-Meieri ellujäämiskõverad: (A) NOX1; (B) GDA; (C) TCN1; (D) PLUNC; (E) FCGBP; (F) AZGP1; (G) H2Bf; (H) B7X; (I) AGR3; (J) CEACAM6; (K) F5; (L) BPIFB1; ja (M) CST1 kopsu adenokartsinoomiga patsientidel. HR: ohusuhe.

cistanche toidulisandi eelised-kasvajavastane

Cistanche toodete vaatamiseks klõpsake siin

【Küsi lisa】 E-post:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2.3. FCGBP, BPIFB1, F5, CFB ja CST1 ekspressioon A549 rakkudes simuleeritud mikrogravitatsioonis

In silico tuvastatud geenide (AZGP1, CFB, NOX1, VTCN1, AGR3, GDA, TCN1, CST1, F5, CEACAM6, BPIFB1, FCGBP ja BPIFA1) ekspressiooni kinnitamiseks viidi läbi in vitro rakendus qRT-PCR abil. Huvitaval kombel näitasid meie andmed qRT-PCR-i kasutades FCGBP mRNA ekspressiooni olulist ülesreguleerimist, eriti 48 ja 72 tunni pärast A549 rakkudes, pärast SMG-d, võrreldes GG-ga (joonis 4A). Lisaks olid CFB, F5 ja BPIFB1 mRNA ekspressioonid oluliselt ülesreguleeritud 72 tundi pärast SMG-d ja võrreldes GG-ga A549 rakkudes (joonis 4B, C, E). SMG tingimustes tuvastati CTS1 mRNA ekspressiooni kerge, kuigi mitte märkimisväärne suurenemine võrreldes GG-ga (joonis 4D). AZGP1, AGR3, GDA, VTCN1, BPIFA1, NOX1, CEACAM5 ja TCN1 ekspressioonid olid nii SMG kui ka GG jaoks määramata (andmeid pole näidatud).

Joonis 4. FCGBP, CST1, F5, CFB ja BPIFB1 ülesreguleerimine SMG tingimustes in vitro. (A) FCGBP, (B) CFB, (C) F5, (D) CTS1 ja (E) BPIFB1 mRNA ekspressioonitasemed, kvantifitseeritud qRT-PCR abil ja normaliseeritud GAPDH-ga A549 rakkudes, mis allutati GG ja SMG tingimustele 24 , 48 ja 72 tundi. Tulpdiagrammid näitavad 3 sõltumatu katse tulemusi (n=3). * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0,001 ja **** p < 0,0001.

Üldiselt viitavad need andmed sellele, et erinevalt ekspresseeritud FCGBP, F5, CFB ja BPIFB1 kopsuvähi korral võivad mängida olulist rolli kopsuvähi progresseerumisel.

2.4. Simuleeritud mikrogravitatsioon vähendab A549 kopsuvähi rakuliinis rakkude elujõulisust ja muudab epiteeli-mesenhümaalseks ülemineku

Et uurida, kas SMG mõjutab A549 rakkude proliferatsioonipotentsiaali, viidi läbi rakkude elujõulisuse test, kasutades trüpaansinise välistamistesti. Meie andmed näitasid, et SMG kutsus oluliselt esile rakkude proliferatsiooni ajast sõltuva vähenemise (joonis 5B). Rakkude proliferatsiooni vähenemine oli märkimisväärne peamiselt pärast 48 ja 72 tundi pärast SMG-d, võrreldes GG-ga, mis näitas A549 rakkude rakkude proliferatsiooni suurenemist. Paralleelselt tuvastati SMG all A549 rakkudes raku morfoloogia muutus. Nende muutuste hindamiseks eemaldati rakud SMG seisundist, külvati 24-süvendi plaatidele ja vaadeldi valgusmikroskoopias pärast 1-tunnist SMG pealekandmist. Huvitav on see, et SMG-ga kokku puutunud rakud näitasid pärast SMG-d granuleeritud, klombitud morfoloogiat. (Joonis 5A).

Joonis 5. Simuleeritud mikrogravitatsioon vähendab rakkude elujõulisust ja kutsub A549 rakkudes esile morfoloogilisi muutusi ajast sõltuval viisil. (A) Tüüpilised mikropildid vanematest A549 rakkudest (GG) ja A549 rakkudest, mida töödeldi SMG-ga 24, 48 ja 72 tundi enne nende külvamist 1 tunni jooksul GG all. Pildid tehti 10X suurendusega. (B) A549 rakkude elujõulisust hinnati trüpaansinise värvaine välistamise testi abil. Kolme sõltumatu katse keskmine rakkude elujõulisus kuvatakse kontrolli protsendina. **** p < 0.0001. Joonis 5. Simuleeritud mikrogravitatsioon vähendab rakkude elujõulisust ja kutsub A549 rakkudes esile morfoloogilisi muutusi ajast sõltuval viisil. (A) Tüüpilised mikropildid vanematest A549 rakkudest (GG) ja A549 rakkudest, mida töödeldi SMG-ga 24, 48 ja 72 tundi enne nende külvamist 1 tunni jooksul GG all. Pildid tehti 10-kordse suurendusega. (B) A549 rakkude elujõulisust hinnati trüpaansinise värvaine välistamise testi abil. Kolme sõltumatu katse keskmine rakkude elujõulisus kuvatakse kontrolli protsendina. **** p < 0,0001.

Hiina herb tsitanche taim-kasvajavastane

Saadud andmete mõistmiseks A549 vähenenud rakkude proliferatsiooni kohta hindasime SMG panust epiteeli-mesenhümaalse ülemineku (EMT) mehhanismi. EMT on tunnus ja oluline mehhanism, mis juhib vähi progresseerumist ja metastaase, suurendades seeläbi selle rakkude liikuvust ja invasiivseid omadusi [19]. Peamised EMT markerid (E-kadheriin, N-kadheriin, ZO-1 ja Snail) ning metalloproteinaaside MMP-2 ja MMP-9 mRNA ekspressioonitasemed mõõdeti qRT-PCR-ga A549 all. nii GG kui ka SMG (joonis 6). SMG pealekandmisel täheldati E-kadheriini mRNA ekspressiooni olulist suurenemist, paralleelselt N-kadheriini mRNA ekspressiooni olulise vähenemisega 48 ja 72 tundi pärast SMG-d (joonis 6A, B). SMG-ga tuvastati ZO-1 ja MMP-9 mitteoluline suurenemine ning tigude transkriptsioonifaktori vähenemine (joonis 6C–E). MMP-2 vähenes oluliselt A549 puhul 48 tundi pärast SMG-d (joonis 6F), mis viitab vähem invasiivsele vormile. Need andmed toetavad ühiselt mesenhümaal-epiteeli ülemineku (MET) fenotüüpi, mille SMG indutseerib A549-s.

Joonis 6

2.5. Epiteeli-mesenhümaalse ülemineku rada korreleerub FCGBP, BPIFB1, F5, CFB ja CST1 ekspressiooniga

Et saada täiendavat mehhaanilist ülevaadet tuvastatud geenide potentsiaalsest rollist A549-s ja nende võimalikust korrelatsioonist EMT-ga SMG tingimustes, viidi läbi geenide interaktsiooni analüüs, kasutades GeneMANIAt EMT geenimarkerite vastu. Joonisel 7 on kujutatud geenide interaktsioonid vastavalt EMT geenide E-kadheriin (CDH1), N-kadheriin (CDH2), TJP1, CTNNB1, SNAI1 (Snail), ZO-1 ja -kateniini vahel. Teades nende olulist rolli vähi invasioonis ja migratsioonis, kaasati analüüsi ka metalloproteinaasid MMP-2 ja MMP-9. Sõlmed tuvastavad sõlme paksuse põhjal erineva tugevusega geenide koekspressioonimustrid. Kandidaatgeenid näitavad üksteise vahel teatavat kaasekspressiooni; BPIFB1 ekspresseeritakse koos CFB ja CST1-ga; FCGBP ekspresseeritakse koos F5, CST1 ja CFB-ga; CST1 ekspresseeritakse koos CFB-ga ja F5 ekspresseeritakse koos CFB, CST1 ja BPIFB1-ga. EMT geenide ja kandidaatgeenide vahel tuvastati ka koekspressioonisõlmed; CDH1 ekspresseeritakse koos FCGBP ja F5-ga; CDH2 ekspresseeritakse koos F5, CST1, BPIFB1 ja FCGBP-ga; CTNNB1 ekspresseeritakse koos CST1 ja FCGBP-ga; SNAI1 ekspresseeritakse koos CST1, F5 ja BPIFB1-ga; TPJ1 ekspresseeritakse koos CST1, FCGBP ja F5-ga; CTNNB1 ekspresseeritakse koos CST1 ja FCGBP-ga; MMP2 ekspresseeritakse koos BPIFB1 ja CST1-ga; ja MMP9 ekspresseeritakse koos F5, CST1, FCGBP ja CFB-ga. Need leiud viitavad olulisele korrelatsioonile uute tuvastatud geenide ja EMT markerite vahel SMG tingimustes, mis võib olla seotud EMT radadega.

Joonis 7. FCGBP, CST1, F5, CFB ja BPIFB1 korreleeruvad EMT rajaga. Valitud kandidaatgeenide geenide ja geenide interaktsioonivõrgustik; FCGBP, CST1, F5, CFB ja BPIFB1 EMT geenidega; CDH1, CDH2, TJP1, CTNNB1 ja SNAI1, samuti rakkude migratsiooniga seotud geenid MMP2 ja MMP9, mille genereeris GeneMANIA (http://genemania.org/; juurdepääs 11. novembril 2021), et tuvastada kandidaatgeenide ja EMT ja rakkude migratsiooni markerid. Võrguserva erinevad värvid näitavad kasutatavaid bioinformaatilisi meetodeid: veebisaidi ennustamine (oranž), füüsilised interaktsioonid (punane), koosekspressioon (lilla), jagatud valgu domeenid (pruun), rada (helesinine), kaaslokaliseerimine (tume) sinine) ja geneetilised koostoimed (roheline)

3. Arutelu

Cistanche tee

Arutelu Kopsuvähk, üks olulisemaid ja ülemaailmselt ähvardavaid haigusi, on viimasel ajal pälvinud "Kosmoseuuringutes" suurt tähelepanu. Vaatamata edusammudele selles valdkonnas on kopsuvähi progresseerumine ja selle ravivastus siiski vastuoluline, kuna puuduvad lõplikud hindamisstrateegiad, mis aitaksid vähki ennetada või ravida [21]. Meile teadaolevalt on see esimene aruanne, mis tuvastab geenide komplekti kopsuvähi progresseerumise allkirjana simuleeritud mikrogravitatsiooni (SMG) poolt indutseeritud mehaanilises keskkonnas. Toome esile immuunvastusega seotud geenide FCGBP, BPIFB, F5, CST1 ja CFB suurenenud ekspressiooni ning nende korrelatsiooni epiteeli ja mesenhümaalse üleminekuga (EMT) SMG all, muutes need potentsiaalseteks kopsuvähi progresseerumise biomarkeriteks. Siin rõhutame ka indutseeritud SMG mõju EMT regulatsioonile, mis on vähi progresseerumise tunnus [18, 22], toetades mesenhümaal-epiteeli ülemineku (MET) fenotüüpi. Üldiselt pakub see uuring aluse tuvastatud geenide seostamiseks EMT-ga; Siiski on vaja täiendavaid uuringuid, et selgitada välja täpsed mehhanismid, mis aitavad välja töötada kopsuvähi uudset sihipärast ravi. Selles uuringus näitasime kolmteist geeni (AZGP1, CFB, NOX1, VTCN1, AGR3, GDA, TCN1, CST1, F5, CEACAM6, BPIFB1, FCGBP ja BPIFA1), mis ekspresseerusid oluliselt kopsuvähi korral simuleeritud mikrogravitatsiooni (SMG) all. võrreldes maapinna gravitatsiooniga in silico. Meie andmed näitasid, et need erinevalt ekspresseeritud geenid on rikastatud peamiselt humoraalse immuunsuse ja reguleeritud eksotsütoosiga seotud radadega. Huvi paralleelselt meie leidudega, kuigi FCGBP põhifunktsioon on endiselt ebaselge [23]. See võib osaliselt olla tingitud vastuolulistest rollidest, mis sellel on erinevates kasvajates [25]. Näiteks on näidatud, et FCGBP on märkimisväärselt seotud parema üldise prognoosi ja haigusspetsiifilise elulemusega pea- ja kaelavähi, käärsoolevähi ja osteosarkoomiga patsientidel [25–27], samas kui munasarja- ja eesnäärmevähi korral on FCGBP-d seostati kehvema üldise elulemusega [28]. Pange tähele, et FCGBP rolli on omistatud immuunkaitsemehhanismidele, põletikuvastastele reaktsioonidele ja rakukaitsele [29, 30], mistõttu on see oluline prognostiline marker [31]. Kasutades in vitro rakendusi, oleme hinnanud tuvastatud geenide ekspressiooni kopsuvähis ja SMG tingimustes 2D klinstaadi kaudu. Välja on töötatud lai valik klinostaate ja muid mikrogravitatsiooniplatvorme. Nende hulka kuuluvad 1/2/3 D klinostaatsüsteemid, liugkolbidega (peamiselt kilpnäärmevähirakkude jaoks) varustatud juhusliku positsioneerimismasinad ja NASA väljatöötatud pöörleva seinaga anumad. Igaüks neist on loodud teatud uurimiseesmärgi täitmiseks, kusjuures mõned on mõeldud kleepuvate või suspensioonirakkude kasvatamiseks ja teisi kasutatakse kineetiliste vastuste võrgus mõõtmiseks. Pange tähele, et klinostaat on üks lihtsamaid ja kohandatavamaid platvorme, mida erinevad eksperimentaalsed rakendused kasutavad. Põhimõtteliselt iseloomustab 2D klinostaati pöörlemistelg, mis pöörleb pidevalt reguleeritud konstantsel kiirusel ja suunas, mis on Maa gravitatsioonivektori suunaga risti, luues seega tsentrifugaaljõude, mis jäljendavad tõelist mikrogravitatsiooni [14,32,33 ]. Huvitav on see, et kolmeteistkümnest geenist suurenesid FCGBP, BPIFB, F5, CST1 ja CFB ekspressioonid märkimisväärselt vastusena 2D klinostaadi poolt indutseeritud SMG-le A549 rakkudes. Enim mõjutatud olid FCGBP ja BPIFB ekspressioonid, mis näitasid olulist suurenemist kõigil hinnatud ajahetkedel: 24, 48 ja 72 tundi pärast SMG-d. Sarnaselt FCGBP-ga aitab BPIFB1 teadaolevalt kaasa kaasasündinud immuunsusreaktsioonidele [34]. BPI volti sisaldav perekonna B liikme 1 valk (BPIFB1), mida toodab peamiselt hingamisteede epiteel, on osutunud osalevaks peremees-kaitsemehhanismides koos bakteritsiidse ja põletikuvastase toimega [35]. Hingamisteede haiguste korral on BPIFB1-l näidatud kasvaja- ja metastaatilise toimega toime; täpsed mehhanismid jäävad siiski ebaselgeks, mis nõuab edasist uurimist [34, 36]. Üks Wei jt uuring. leidis, et BPIFB1 pärsib nasofarüngeaalse kartsinoomi migratsiooni ja invasiooni [37]. Arvestades seda, leiti, et BPIFB1-s esinevad mutatsioonid soodustavad kopsuvähi riski ja selle alareguleerimine põhjustab kopsuvähiga patsientide halva prognoosi [38, 39]. Lisaks FCGBP ja BPIFB rollile on näidatud, et komplemendi faktor B (CFB) ja kimäärne kasvaja supressor 1 (CST1) avaldavad vähi korral kaitsvat rolli. Näiteks teatati, et CFB kõrge ekspressioon oli seotud patsientide üldise ja haigusvaba elulemusega kopsuvähiga patsientidel [40]. Lisaks on komplemendi süsteem esimene kaitseliin patogeenide vastu, toimides nii kaasasündinud kui ka omandatud immuunsüsteemi peamise komponendina [41]. Mis puudutab CST1, siis erinevad uuringud tõid esile selle huvitavad omadused, nagu selle võime pärssida rakkude kasvu, indutseerida apoptoosi ja resistentsus p53 onkogeensete vormide inaktiveerimise suhtes, muutes selle metsiktüüpi p{ atraktiivseks, kuid alternatiivseks terapeutiliseks sihtmärgiks. {74}}resistentsed inimese kasvajad [42]. Lisaks FCGBP, BPIFB1, F5, CFB ja CST1 suurenenud ekspressioonile näitasid meie andmed huvitaval kombel SMG all kahte rakuga seotud A549 rakkude fenotüüpi - morfoloogia muutust agregaatideks ja tükikujulisteks rakkudeks ning proliferatsiooni olulist vähenemist. määr pärast SMG-d. See toimub paralleelselt mõne muu uuringuga, kus SMG-ga kokku puutunud rakkudel ilmnesid väikesed tükid või mitmekihilised rakuagregaadid [43, 44]. Neid morfoloogilisi erinevusi peegeldavad samaaegsed dramaatilised funktsionaalsed muutused rakuprotsessides, millest osa on EMT. EMT on metastaatilise protsessi tunnus, mis on seotud immuunseire põgenemise ja veresoonte invasiooniga, võimaldades seega rakkudel levida sekundaarsetesse organitesse [19, 22]. Põhimõtteliselt läbivad pahaloomulised epiteelirakud kasvaja arengu primaarsetes staadiumides EMT mehhanismi, kus need rakud kalduvad ekspresseerima mesenhümaalseid omadusi, millel on suurenenud liikuvus, mis hõlbustab nende põgenemist primaarsest nišist, samas kui metastaatilised rakud moodustuvad sekundaarsel küljel. vähem dediferentseeritud omadused võrreldes nende vastavate primaarsete kasvajatega. Siin on MET (mesenhümaalt epiteelini) protsess osa metastaatilise kasvaja moodustumise progresseerumisest. See ei jäta aga tähelepanuta EMT-de osalemist vähi progresseerumise erinevates etappides, sest sekundaarsetes kohtades olevad vähirakud kas jätkavad kasvu ja vohamist või jäävad puhkeolekusse [45, 46]. Selline mitme geeni koordineerimine ja spetsiifiliste migratsioonimarkerite ilmumine, mis reguleerivad vähirakkude metastaatilist progresseerumist, võivad SMG-ga kokkupuutel põhjustada erinevaid tulemusi [47]. Näiteks oli mikrogravitatsiooni tingimustes erinevatel rinnavähirakkudel mikrogravitatsiooniga kokkupuutel erinev morfoloogia, rakkude adhesioon ja migratsiooniomadused [5]. Tuleb märkida, et EMT peamine omadus on raku adhesioonimolekuli E-kadheriini kadu, mõjutades seega rakkude terviklikkuse vaikset. Teisest küljest põhjustab neuraalse kadheriini (N-kadheriini) suurenemine rakkude adhesiooni muutusi. Seda indutseerib peamiselt transformeeriv kasvufaktor (TGF-), mis aktiveerib pleiotroopselt ekspresseeritud transkriptsioonifaktoreid, nagu Snail-, Twist- ja Zeb-valgud ning muud metastaatilistes radades rakendatud signaalirajad [18, 48, 49]. Siin kirjeldame epiteelimarkeri E-kadheriini (CDH1) võimendamist ja mesenhümaalse N-kadheriini (CDH2) mRNA taseme, mis on EMT peamised markerid, allareguleerimist [49]. See tähendab, et koos meie andmetega A549 vähenenud proliferatsioonikiiruse kohta on rakkudel vähem metastaatiline olek. Huvitaval kombel kaasnes peamiste EMT markerite muutunud ekspressiooniga ka maatriksi metalloproteinaasi MMP{105}} oluline allareguleerimine, mis on põhimembraani põhikomponent, mis tavaliselt eraldab epiteelikihi ümbritsevast mesenhüümist, põhjustades seega basaalmembraani kaotus [50]. See toimub paralleelselt Changi jt uuringuga, kus nad teatasid oma avastustest inimese kopsu adenokartsinoomi rakkude metastaatilise potentsiaali vähendamise kohta MMP2 ekspressiooni muutmise kaudu [17]. Üldiselt on MMP roll olnud hästi seotud pahaloomuliste kasvajate, sealhulgas metastaaside progresseerumisega, kus MMP (MMP-2 ja MMP-9) ekspressioon ja ensümaatiline aktiivsus on iseloomulikud vähem metastaatilisele fenotüübile [ 50–52]. Kuna EMT-l on metastaasides oluline roll, rõhutavad meie andmed FCGBP, BPIFB, F5, CST1 ja CFB olulist korrelatsiooni EMT geenimarkeritega ning rakkude migratsiooniga seotud geenidega MMP2 ja MMP9. Huvitaval kombel Xiong et al. on näidanud, et FCGBP on EMT peamine regulaator sapipõies [53]. See tähendab, et tuvastatud geenid võivad olla potentsiaalsed biomarkerid tulevastes uuringutes, mis võimaldavad ennustada ja paremini mõista kopsuvähi progresseerumist. Kokkuvõttes klassifitseerivad meie leiud tuvastatud geenid EMT peamisteks regulaatoriteks, soodustades vähem metastaatilise fenotüübi võimalikku paranemist kopsuvähirakkude mesenhümaal-epiteeli ülemineku (MET) kaudu.

4. Materjalid ja meetodid

4.1. Andmekogud, mis võimaldavad tuvastada simuleeritud mikrogravitatsioonile avatud kopsuvähi rakuliinides levinud diferentsiaalselt ekspresseeritud geene (DEG)

Esialgseks analüüsiks ekstraheeriti asjakohased andmekogumid avalikult kättesaadavast Gene Expression Omnibus (GEO) andmebaasist. Seda andmebaasi kasutatakse suure läbilaskevõimega geeniekspressiooni andmete ja mikrokiipide avalikult kättesaadava funktsionaalse genoomika analüüsina. Valitud andmekogumid vastasid järgmistele kriteeriumidele: andmestikud, mis kasutavad ainult inimese kopsuvähi rakuliine, uuringud, mis hõlmavad maapealsete gravitatsioonitingimuste (GG) tingimuste sobitamist, kopsuvähi rakuliinide määratletud klassifikatsiooniga andmekogumid ja inimese kopsuvähi raku geeniekspressiooni andmestikud. kasutades mikrokiibi. Sellele kriteeriumile sobivad kaks andmekogumit, GSE78210 ja GSE36931. Kokku kaasati uuringutesse 25 proovi ja 14 kopsuvähi rakuliini proovi simuleeritud mikrogravitatsioonis (SMG) võrreldi 11 GG kontrolliga, nagu on näidatud tabelis 2 (https://www.ncbi.nlm.nih.gov). /geo/; vaadatud 11. novembril 2021).

Tabel 2. Geenekspressiooni omnibusist (GEO) ekstraheeritud andmekogumite üksikasjad, mida kasutati simuleeritud mikrogravitatsiooni (SMG) ja maapealse gravitatsiooni (GG) kopsuvähirakkude vahelise DEG esialgseks identifitseerimiseks.

4.2. GEO2R geenikomplekti rikastamise analüüs DEG-de genereerimiseks igas andmekogus

GEO2R (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/geo2r; juurdepääs 11. novembril 2021), interaktiivset võrgutööriista, mida kasutatakse GEO seeriate võrdlemiseks, kasutati igas andmestikus rühmitamiseks. ja tuvastada üles- ja allareguleeritud geenid SMG tingimustes võrreldes GG tingimustega. Geenid, mille p-väärtused olid alla 0, 05 ja kordne muutus suurem kui 2, valiti SMG tingimustes erinevalt ekspresseeritud geenideks DEG. Järelikult ristusid iga andmekogumi DEG-d üksteisega ja tuvastati ühised geenid

4.3. Identifitseeritud geenide kliinilise patoloogilise kaasatuse kvantifitseerimine

Järgmisena valideeriti saadud nimekirjas olevad geenid Kaplan-Meier Plotteri (http://www.kmplot.com/; juurdepääs 11. novembril 2021) abil, mis on veebipõhine avalik andmebaas, mis hindab valitud geenide mõju patsiendi kliinilistele tulemustele. Üldine elulemus (OS) määratleti kui kestus diagnoosimisest (kuudes) kuni surmani. Geeniekspressiooni andmed ja ellujäämisteave on saadud geeniekspressiooni koondkogust (GEO), vähi genoomi atlasest (TCGA) ja Euroopa genoomifenoomi atlasest (EGA). Patsiendid jaotati kahte rühma: (1) kõrge ekspressioon (TPM väärtused ülemise kvartiili kohal) ja (2) madal / keskmine ekspressioon (TPM väärtused ülemisest kvartiilist madalamal). Kaplan-Meieri graafikuid kasutati kopsu adenokartsinoomi (LUAD) patsientide operatsioonisüsteemi võrdlemiseks kõrge / keskmise ja madala kandidaatgeenide ekspressiooniga.

4.4. Rikastatud ontoloogia klasterdamine tuvastatud geenide jaoks

Et uurida, kas tuvastatud geenidel on ühised rajad, viidi identifitseeritud geenide jaoks läbi Gene Ontology (GO) raja rikastamise analüüs, kasutades Metascape'i veebitööriista (https://metascape.org/; juurdepääs 11. novembril 2021), et koostada põhjalik geeniloendi annotatsioon. ja analüüsiressurss koos GEO2R-iga

4.5. Rakuliin ja rakukultuur

Inimese adenokartsinoomi alveolaarse basaalepiteeli (A549) rakuliin, mida kasutatakse laialdaselt kopsu adenokartsinoomi mudelina, kasvatati Roswell Park Memorial Institute Medium (RPMI)-1640 söötmes, millele oli lisatud 10% veise loote seerumit. (FBS; Sigma, St. Louis, MO, USA) ja 100 ühikut/ml penitsilliini/streptomütsiini (P/S; Sigma, St. Louis, MO, USA). Rakuliini kultiveeriti 37 ◦C niisutatud inkubaatoris 5% CO2 atmosfääris. Kui rakud jõudsid ühinemiseni, koguti need 0, 5% trüpsiini abil, tsentrifuugiti 100 × g juures 5 minutit ja kasutati vajaduse korral.

4.6. Mikrogravitatsioon

Kopsuvähirakke (A549) kasvatati 2D-klinostaatsüsteemis, mis jäljendas peaaegu nullilähedast gravitatsioonikeskkonda (mikrogravitatsioon). See Rotary Culture Max (RCMW™; Synthecon® Inc – Houston, TX, USA) on bioreaktor, mis on varustatud rakukultuuri anumaga, mis sisaldab mikropoorset perfusioonisüdamikku ja in-line oksügenaatori süsteemi, mis tagab söötme toitainete ja välise gaasistamise, seega korralik gaasivahetus ja madala nihkejõuga rakukultuuri keskkond. Kamber pakiti rakke sisaldava söötmega. See kamber pöörles horisontaalselt ümber ühe telje, mis oli risti gravitatsioonijõuga kiirusel 10 pööret minutis. 2D klinostaat asetati 37 ◦C niisutatud inkubaatorisse 5% CO2 atmosfääri. A549 rakud koguti simuleeritud mikrogravitatsiooniga (SMG) 24, 48 ja 72 tunni pärast. Võrreldava kopsuvähi keskkonna loomiseks kultiveeriti A549 rakke kultiveerimisplaatidel GG juures, pööramata või staatilises olekus ja neid hoiti seadme läheduses niisutatud inkubaatoris (37 ◦C). Neid rakke nimetatakse kontrollrühmaks ja need koguti ka 24, 48 ja 72 tunni pärast.

4.7. Rakkude elujõulisuse test

GG tingimuste jaoks külvati A549 rakud 24-süvendiga rakukultuuriplaatidele tihedusega 30 × 104 rakku 500 µl kohta. Rakud koguti trüpsiniseerimisega 24, 48 ja 72 tundi pärast külvamist, seejärel tsentrifuugiti 200 × g juures 5 minutit. Saadud rakupelletid taastati söötmes. SMG tingimuste jaoks külvati A549 rakud 2D-klinostaadi pöörlevasse süsteemi tihedusega 6, 0 × 104 rakku 1 ml kohta. Rakud koguti 24, 48 ja 72 tundi pärast SMG-ga kokkupuudet, seejärel tsentrifuugiti 200 × g juures 5 minutit. Saadud rakupelletid taastati söötmes. Viidi läbi trüpaansinise (Sigma, USA) värvi välistamise test. Rakkude arv määrati CellDrop™ Automated Cell Counter abil.

4.8. Kvantitatiivne reaalajas polümeraasi ahelreaktsioon (qRT-PCR)

In silico tuvastatud geenide (AZGP1, CFB, NOX1, VTCN1, AGR3, GDA, TCN1, CST1, F5, CEACAM6, BPIFB1, FCGBP ja BPIFA1) geeniekspressioonitasemed (mRNA tasemed) koos EMT geenimarkeritega (tabel 3) määrati ka A549 rakkudes qRT-PCR abil. Lühidalt, kogu RNA ekstraheerimine rakkudest viidi läbi RNEasy Mini Kitiga (QIAGEN, Hilden, Saksamaa) 24, 48 ja 72 tundi GG juures ning pärast kokkupuudet SMG-ga, järgides tootja protokolle. Üks µg kogu RNA-st pöördtranskribeeriti üheahelaliseks komplementaarseks DNA-ks (cDNA) 20 µl reaktsioonimahus, kasutades iScript™ cDNA sünteesikomplekti (Thermo, Waltham, MA, USA). qRT-PCR viidi läbi PowerUp™ Sybr™ Greeni põhisegu (Thermo, USA) abil Quant Studio 5 pcr masinas (Thermo, USA). PCR amplifikatsiooni etapid olid järgmised: esialgne denaturatsioonietapp temperatuuril 95 °C 3 minutit, sihtgeeni anniilimistemperatuur 30 sekundit ja seejärel 72 °C 30 sekundit. Iga geeni jaoks saadi fluorestsentsi lävi tsükli väärtus. ∆∆Cq-meetodit kasutati geeniekspressiooni suhtelise muutuse arvutamiseks pärast majapidamisgeeni, glütseraldehüüdi 3-fosfaatdehüdrogenaasi (GAPDH) normaliseerimist.

Tabel 3. Inimese praimerite loend. NOX1, NADPH oksüdaas 1; GDA, guaniini deaminaas; TCN1, transkobalamiin 1; FCGBP, Fc Gamma Binding Protein; BPIFA1, BPI voltimine, mis sisaldab perekonda A liiget 1; AZGP1, alfa-2-glükoproteiin 1; CFB, komplementfaktor B; VTCN1, V-Seti domeen, mis sisaldab T-rakkude aktiveerimise inhibiitorit 1; AGR3, eesmine gradient 3; CTS1, kimäärne kasvaja supressor 1; F5, hüübimisfaktor V; CEACAM6, CEA rakuadhesioonimolekul 6; BPIFB1, BPI volti sisaldav perekond B liige 1; ZO-1, Zonula occludens proteiin 1; MMP-9, maatriksi metalloproteinaas 9; MMP-2, maatriksi metalloproteinaas 2; ja GAPDH, glütseraldehüüdi 3-fosfaatdehüdrogenaas

4.9. Geeni ja geeni interaktsiooni analüüs

In vitro qRT-PCR andmeid rakendati geenide ja geenide interaktsiooni analüüsis, kasutades in silico veebitööriista GeneMANIA (http://genemania.org/; juurdepääs 11. novembril 2021), võrgualgoritmi geenifunktsioonide ennustamiseks, kasutades suurt hulka funktsionaalsete seoste andmed. See viidi läbi, et täiendavalt hinnata interaktsioone valitud kandidaatgeenide vahel/vaheliste vahel; FCGBP, CST1, F5, CFB ja BPIFB1 EMT geenidega; CDH1, CDH2, TJP1, CTNNB1 ja SNAI1, samuti rakkude migratsiooniga seotud geenid MMP2 ja MMP9.

4.10. Statistiline analüüs

Statistilise analüüsi läbiviimiseks kasutati GraphPad Prism tarkvara. Tulemused väljendatakse üksikandmetena või keskmisena ± standardhälbe (SD). Erinevate rühmade võrdlemiseks kasutati Studenti t-testi. Rühmadevahelisi erinevusi hinnati ühesuunalise dispersiooni ANOVA (ANOVA) abil. määrati p-väärtused ja määrati p < 0.05, p < 0,01, p < 0,001 (vastavalt *, ** ja ***) peetakse oluliseks. Kõik katsed viidi läbi kolmes eksemplaris (n=3).

Viited

1. Valge, RJ; Averner, MJN Inimesed kosmoses. Loodus 2001, 409, 1115–6828. [CrossRef]

2. Bradbury, P.; Wu, H.; Choi, JU; Rowan, AE; Zhang, H.; Poole, K.; Lauko, J.; Chou, J. Mikrogravitatsiooni mõju modelleerimine rakutasandil: mõju inimese haigustele. Esiosa. Cell Dev. Biol. 2020, 8, 96. [CrossRef] [PubMed]

3. Yuan, M.; Liu, H.; Zhou, S.; Zhou, X.; Huang, Y.-E.; Hou, F.; Jiang, W. Regulatiivse mooduli integreeriv analüüs paljastab mikrogravitatsiooni seosed mitme kehasüsteemide talitlushäirete ja tuumorigeneesiga. Int. J. Mol. Sci. 2020, 21, 7585. [CrossRef] [PubMed]

4. Crucian, BE; Chouker, A.; Simpson, RJ; Mehta, S.; Marshall, G.; Smith, SM; Zwart, SR; Heer, M.; Ponomarjov, S.; Whitmire, A.; et al. Immuunsüsteemi düsregulatsioon kosmoselennu ajal: potentsiaalsed vastumeetmed süvakosmose uurimise missioonide jaoks. Esiosa. Immunol. 2018, 9, 1437. [CrossRef] [PubMed]

5. Nassef, MZ; Melnik, D.; Kopp, S.; Sahana, J.; Infanger, M.; Lützenberg, R.; Relja, B.; Wehland, M.; Grimm, D.; Krüger, M. Rinnavähirakud mikrogravitatsioonis: uued aspektid vähiuuringutes. Int. J. Mol. Sci. 2020, 21, 7345. [CrossRef]

6. Takamatsu, Y.; Koike, W.; Takenouchi, T.; Sugama, S.; Wei, J.; Waragai, M.; Sekiyama, K.; Hashimoto, M. Kaitse neurodegeneratiivsete haiguste vastu Maal ja kosmoses. NPJ Microgravity 2016, 2, 16013. [CrossRef]

7. Nassef, MZ; Kopp, S.; Wehland, M.; Melnik, D.; Sahana, J.; Krüger, M.; Corydon, TJ; Oltmann, H.; Schmitz, B.; Schütte, A. Tõeline mikrogravitatsioon mõjutab inimese rinnavähirakkude tsütoskeleti ja fokaalseid adhesioone. Int. J. Mol. Sci. 2019, 20, 3156. [CrossRef]

8. Dietz, C.; Infanger, M.; Romswinkel, A.; Strube, F.; Kraus, A. Apoptoosi esilekutsumine ja rakkude kleepumise muutmine inimese kopsuvähi rakkudes simuleeritud mikrogravitatsioonil. Int. J. Mol. Sci. 2019, 20, 3601. [CrossRef]

9. Ricci, G.; Cucina, A.; Proietti, S.; Dinicola, S.; Ferranti, F.; Cammarota, M.; Filippini, A.; Bizzarri, M.; Catizone, A. Mikrogravitatsioon indutseerib inimese keratinotsüütides mööduvat EMT-d E-kadheriini varajase allareguleerimise ja rakuadhesiooni remodelleerumise kaudu. J. Appl. Sci. 2020, 11, 110. [CrossRef]

10. Ahn, CB; Lee, J.-H.; Han, peadirektoraat; Kang, H.-W.; Lee, S.-H.; Lee, J.-I.; Poeg, KH; Lee, JW Simuleeritud mikrogravitatsioon ujuva keskkonnaga soodustab mitteväikerakk-kopsuvähi migratsiooni. Sci. Rep. 2019, 9, 14553. [CrossRef] [PubMed]

11. Pisanu, ME; Noto, A.; De Vitis, C.; Masiello, MG; Coluccia, P.; Proietti, S.; Giovagnoli, MR; Ricci, A.; Giarnieri, E.; Cucina, A. Kopsuvähi tüvirakud kaotavad pärast mikrogravitatsiooniga kokkupuudet oma tüve vaikeoleku. BioMed Res. Int. 2014, 2014, 470253. [CrossRef] [PubMed]

12. Infanger, M.; Kossmehl, P.; Shakibaei, M.; Bauer, J.; Kossmehl-Zorn, S.; Cogoli, A.; Curcio, F.; Oksche, A.; Wehland, M.; Kreutz, RJC; et al. Simuleeritud kaaluta olek muudab tsütoskeleti ja rakuvälise maatriksi valke papillaarsetes kilpnäärme kartsinoomirakkudes. Cell Tissue Res. 2006, 324, 267–277. [CrossRef] [PubMed]

13. Chen, J.; Mikrogravitatsioon, L. Kasvajarakud mikrogravitatsioonis. Kosmosesse: teekond sellest, kuidas inimesed mikrogravitatsioonis kohanevad ja elavad; IntechOpen: London, Suurbritannia, 2018; 139. köide, lk 259–268.

14. Grimm, D.; Schulz, H.; Krüger, M.; Cortés-Sánchez, JL; Egli, M.; Kraus, A.; Sahana, J.; Corydon, TJ; Hemmersbach, R.; Wise, PM Võitlus vähi vastu mikrogravitatsiooni abil: mitmerakuline sferoid kui metastaaside mudel. Int. J. Mol. Sci. 2022, 23, 3073. [CrossRef]

15. Schabath, MB; Cote, ML Vähi areng ja prioriteedid: kopsuvähk. Vähiepidemiool. Biomark. Eelmine 2019, 28, 1563–1579. [CrossRef] [PubMed]

16. Chung, JH; Ahn, CB; Poeg, KH; Yi, E.; poeg, HS; Kim, H.-S.; Lee, SH Simuleeritud mikrogravitatsiooni mõju mitteväikerakk-kopsuvähi rakkude proliferatsioonile ja migratsioonile. Aerosp. Med. Humm. Esitage. 2017, 88, 82–89. [CrossRef]

17. Chang, D.; Xu, H.; Guo, Y.; Jiang, X.; Liu, Y.; Li, K.; Pan, C.; Yuan, M.; Wang, J.; Li, T.; et al. Simuleeritud mikrogravitatsioon muudab inimese kopsu adenokartsinoomi rakuliini metastaatilist potentsiaali. Vitr. Kamber. Dev. Biol. Anim. 2013, 49, 170–177. [CrossRef]

18. Hanahan, D.; Weinberg, R. Vähi tunnused: järgmine põlvkond. Cell 2011, 144, 646–674. [CrossRef]

19. Ribatti, D.; Tamma, R.; Annese, T. Epiteeli-mesenhümaalne üleminek vähis: ajalooline ülevaade. Tõlk. Oncol. 2020, 13, 100773. [CrossRef]

20. Shi, S.; Li, Q.; Cao, Q.; Diao, Y.; Zhang, Y.; Yue, L.; Wei, L. EMT transkriptsioonifaktorid on seotud rakkude muutunud adhesiooniga simuleeritud mikrogravitatsiooniefekti või ülekoormuse korral E-kadheriini reguleerimise tõttu. Int. J. Mol. Sci. 2020, 21, 1349. [CrossRef]

21. Topal, U.; Zamur, C. Mikrogravitatsioon, tüvirakud ja vähk: uus lootus vähiraviks. Stem Cells Int. 2021, 2021, 5566872. [CrossRef]

22. Ksiazkiewicz, M.; Markiewicz, A.; Zaczek, AJ Epiteeli-mesenhümaalne üleminek: metastaaside moodustumise tunnus, mis ühendab ringlevaid kasvajarakke ja vähi tüvirakke. Pathobiology 2012, 79, 195–208. [CrossRef] [PubMed]

23. Yan, T.; Tian, ​​D.; Chen, J.; Tan, Y.; Cheng, Y.; Jah, L.; Deng, G.; Liu, B.; Yuan, F.; Zhang, S. FCGBP on prognostiline biomarker ja on seotud immuunsüsteemi infiltratsiooniga gliomas. Esiosa. Oncol. 2021, 11, 769033. [CrossRef] [PubMed]