Sekreteeritud neutrofiilide želatinaasiga seotud lipokaliinil on tugevam võime pärssida ADPKD rakkude tsüstide suurenemist võrreldes sekreteerimata vormiga Ⅳ

4. Arutelu

Selles uuringus näitasime, et sekreteeritud mNGAL lisamine ja/või üleekspressioonvalk vähendas 2L3 rakkude proliferatsioonijainhibeeris tsüsti kasvu in vitro apoptoosi ülesreguleerimisegaja autofagia japroliferatsiooniga seotud signaaliradade allareguleerimine. Et teha kindlaks, kas M-1 rakke, mis on loodud hiire neerutuubulite sarnastest lookustest nagu 2L3 rakud, saab kasutada metsiktüüpi kontrollrakkudena 2L3 rakkude jaoks, M-1 ja 2L3 rakkude lektiini värvimine LTL-ga ja viidi läbi DBA (joonis 1D). Hiire neerude diferentseerunud proksimaalsete tuubulite ja kogumiskanalite tuvastamiseks kasutati vastavalt LTL-i ja DBA-d [45, 46]. Leiud näitavad, et M-1 rakkude morfoloogia (joonis 1C) ja neerutuubulite päritolu (joonis 1D) on sarnane 2L3 rakkudega; seetõttu valiti M-1 rakuliin 2L3 rakkude metsiktüüpi kontrolliks.

UUED ÜRTID JAOKSADPKD(POLÜTSÜSTILINE NEERUHAIGUS)

Enamikul kliinilistel juhtudel on ADPKD patsientidel uriinis kõrgem NGAL tase kui tavalistel inimestel [19,47–49]. Selles uuringus kasutatud ADPKD hiiremudelil on ka kõrgem NGAL ja NGAL-R ekspressioonitase [31]. Nii RT-qPCR kui ka Western blot tulemused näitasid, et 2L3 rakud ekspresseerisid kõrgemaid NGAL tasemeid kui M-1 metsiktüüpi rakuliin (joonis 1F, H), samas kui NGAL-R ekspressioonitasemes olulist erinevust ei tuvastatud kaks rakuliini (joonis 1G, H), mis ei ole kooskõlas in vivo tulemustega [31]. See erinevus võib olla tingitud keerulisest interaktsioonist hiire kudedes, mida palju lihtsamas rakusüsteemis ei esine.

Western blot tulemused näitasid, et mNGAL otsene manustamine ja/või geneetiline üleekspressioon 2L3-s inhibeeris ERK rada. Nagu on näidatud joonistel 4A ja 8A, oli p-ERK1 (44 kDa) signaal nõrgem kui p-ERK2 (42 kDa), samas kui ERK1 (44 kDa) oli intensiivsem kui ERK2 (42 kDa), põhjustades märgatava tõusu. p-ERK2/ERK2 võrreldes p-ERK1/ERK1-ga kõigis katserühmades. ERK1 ja ERK2 on kaks ERK-i isovormi, millel on väidetavalt erinev mõju rakkude proliferatsioonile [50]. On kindlaks tehtud, et ERK1 indutseerib rakkude ellujäämist ja kasvu; ERK2 aga soodustab rakkude diferentseerumist ja blokeerib rakkude kasvu [51]. Meie uuringus oli p-ERK2 / ERK2 suhe kõigis rühmades märkimisväärselt kõrgem kui p-ERK1 / ERK1 suhe, mis näitas, et rakud kaldusid diferentseeruma ja kasvu vähendama. Kuid nii mNGAL-i lisamine kui ka üleekspressioon alandasid järsult nii p-ERK1/ERK1 kui ka p-ERK2/ERK2 suhet võrreldes kontrollrühmaga ja tõi kaasa oluliselt madalama p-ERK/ERK suhte, mis näitas mNGAL-i efekti. rakkude proliferatsiooni pärssimisel.

3D-kultuuriplatvormi loomiseks tsüstide moodustumise iseloomustamiseks ja ravi hindamiseks 2L3 rakkudes prooviti mitmeid tingimusi. On näidatud, et Matrigeli kontsentratsioon 3D-kultuuri jaoks mõjutab in vitro moodustunud struktuursete tsüstide ja tuubulite protsenti [25, 52, 53]. Meie uuringus leidsime, et 40% Matrigel oli parim valem 2L3 rakkude optimaalse tsüstistruktuuri moodustumise näitamiseks. 3D-kultuuride jaoks oli mitmeid tingimusi, sealhulgas manustatud mustrid ja peal olevad mustrid [54]. Tsüstide paremaks ja lihtsamaks analüüsimiseks valisime on-top meetodi (võileivalaadne muster) (joonis 6). Kuid meie kogemus näitas, et 2L3 rakkude tsüstid ei olnud piisavalt suured, kui neid kasvatati ilma indutseerijata 3D-kultuuris kuni 14. päevani. Forskoliini kasutatakse tavaliselt tsüstide moodustumise esilekutsumiseks, aktiveerides adenülüültsüklaasi (AC), et suurendada tsüklilist adenosiinmonofosfaadi (cAMP) taset. [11,55]. Seetõttu kasutasime oma uuringus forskoliini (20 µM), et indutseerida tsüstide moodustumist 2L3 rakkudes enne vaimset ravi.

Meie eelmine uuring näitas, et neeruspetsiifilise NGAL-i üleekspressioon 2L3 hiirtel võib aeglustada ADPKD progresseerumist, vähendades tsüstide suurust, kuid mitte tsüstide arvu 2L3 hiirtel [31]. Käesolevas uuringus pärssis psüühika lisamine oluliselt 2L3 rakkude tsüstide suurenemist, vähendades tsüstide läbimõõtu, pindala ja suurte tsüstide protsenti (joonis 6F, G, I), samas kui koguarvu suurenemises ei olnud olulist erinevust. tsüsti number (joonis 6H). 2L3 tsüsti progresseerumise tulemused 3D-kultuuris olid kooskõlas in vivo tulemustega. Kuid mNGAL-ravi pärssis 2L3-rakkude tsüstide kasvu 3D-kultuuris, samal ajal kui me kasutasime MTT-testi uurimiseks kõrgemat mNGAL-i kontsentratsiooni (2 mg/mL) (joonis 6) kui eelmistes 2D-katsetes (600 µg/ml). mNGAL-i mõju rakkude elujõulisusele (joonis 3). Spekuleerisime, et E. coli-st puhastatud rekombinantsel mNGAL-il puudus posttranslatsiooniline modifikatsioon [56,57] ja tulemuseks oli rekombinantse mNGAL-i madal bioaktiivsus. NGAL-i üleekspressioon 2L3 rakkudes pN + LS ja pN - LS konstruktide transfektsiooni abil võib aidata seda küsimust selgitada.

Et teha kindlaks, kas mNGAL-i kõrgem kontsentratsioon (2 mg/ml), mida 3D-kultuuris 2L3 rakkude tsüstide suurenemise pärssimiseks (joonis 6) kasutati, tulenes mNGAL-i translatsioonijärgse modifikatsiooni puudumisest, ja testida, kas NGAL-i peab sekreteerima ja interakteeruma NGAL-R apoptoosi esilekutsumiseks ja tsüsti progresseerumise edasiseks inhibeerimiseks transfekteeriti pN + LS ja pN - LS konstruktid 2L3 rakkudesse, et üleekspresseerida sekreteeritud ja mittesekreteeritud NGAL valke (joonis 7). Ühendatud transfekteeritud rakud koguti nädal pärast blastitsidiini selektsiooni ning nii pN + LS kui ka pN - LS transfektsioon suurendasid oluliselt Lcn2 (kokku, sealhulgas nii endogeense kui ka eksogeense NGAL) ja Lcn2-c-myc (eksogeenne) mRNA ekspressioonitasemeid. NGAL) võrreldes kontrollrühmaga (joonis 7F, G) ning Lcn2 ja Lcn2-c-myc pN + LS ja pN − LS rühmade vahel ei olnud olulist erinevust (joonis 7F, G). Lcn{{20}}myc ekspressioon pN + LS ja pN − LS rühmades oli ligikaudu 8500- korda suurem kui 2L3 rakkudes (joonis 7G); aga Lcn2 ekspressioon pN + LS ja pN - LS rakkudes oli ligikaudu 15- korda suurem kui 2L3 rakkudes (joonis 7F). Teoreetiliselt ei esinenud Lcn2-myc 2L3 rakkudes, mis viis madala ekspressioonitasemeni (taust) RT-QPCR abil. Selle tulemusena oli Lcn2-myc suhteline suhe pN + LS ja pN − LS rakkudes märgatavalt kõrgem (ligikaudu 8500 korda) kui 2L3 kontrollrühmas. mille tulemuseks on suur erinevus Lcn2 ja Lcn2-myc suhtelise suhte vahel. Lisaks oli Lcn2 ekspressioonisuhe pN + LS ja pN − LS rakkudes (pN + LS oli 0,{47}} korda suurem kui pN − LS) ekspressioonisuhe Lcn2-c-myc omaga. (pN + LS oli 1,{52}} korda suurem kui pN − LS) (joonis 7F, G). Intratsellulaarne NGAL valgu ekspressioon pN + LS ja pN - LS rakkudes oli suurenenud võrreldes kontrollrühma omaga (joonis 7I) ja pN + LS ja pN - LS rühmade vahel ei olnud olulist erinevust. Western blot tulemused kogu NGAL valgu ekspressiooni kohta pN + LS ja pN - LS rühmades (pN + LS oli 0,{60}} korda suurem kui pN - LS) (joonis 7I) olid kooskõlas RT-qPCR tulemustega. (pN + LS oli 0,{64}} korda suurem kui pN − LS) (joonis 7F). Nende tulemuste kohaselt olid NGAL-i (nii üld- kui ka eksogeensete) valkude tasemed pN + LS ja pN - LS rakkudes sarnased, mis näitas, et kahte rühma tuleks edasistes katsetes võrrelda.

Me ennustasime, et NGAL-i üleekspressioon ilma signaalpeptiidita ei suurenda NGAL-i sekretsiooni vaatamata rakusisese NGAL-i ekspressiooni kõrgele tasemele. Kuid ELISA tulemused, kasutades kultuuri supernatanti, näitasid, et nii pN + LS kui ka pN - LS rakkudes oli sekreteeritud NGAL tase oluliselt kõrgem kui 2L3 kontrollrakkudel (joonis 7J), samas kui pN - LS rakkude poolt sekreteeritud NGAL kogus. oli oluliselt madalam kui pN + LS rakkudel (joonis 7J). Need tulemused näitasid, et NGAL-i üleekspressioon ilma signaalpeptiidita (pN-LS) piiras NGAL-i sekretsiooni, kuigi rakkudes tuvastati kõrge rakusisese NGAL-i mRNA ja valgu tase (joonis 7F, I). BrdU inkorporeerimise tulemused näitasid pN-LS rakkude märkimisväärselt suuremat proliferatsiooni kui pN + LS rakud (joonis 7K).

NGAL-i rakusisene ja sekretsiooni kogus olid pN + LS-is vastavalt ligikaudu 16- ja 2{3}} korda suuremad kui 2L3 rakkudes (joonis 7I, J), mis võib viia pärssimiseni. pN + LS võrreldes 2L3 rakkude proliferatsiooniga (joonis 7K). NGAL-i intratsellulaarne ja sekreteeritud kogus 2L3 rakkudes oli aga vastavalt ligikaudu 4- ja 53- korda suurem kui M-1 rakkudes (joonis 1H, I), samas kui suurem. rakkude proliferatsiooni täheldati 2L3 rakkudes kui M-1 rakkudes (joonis 2C). Me kahtlustame, et suurenenud NGAL-i ekspressioon ja sekretsioon, mis mängivad 2L3 rakkudes kaitsvat rolli, ei ole piisavad, et pärssida Pkd1 knockoutist tulenevat rakkude proliferatsiooni, kuid suurenenud NGAL-i ekspressioon ja sekretsioon pN + LS-is pakub täiendavat NGAL-i proliferatsiooni pärssimise saavutamiseks. Meie eelmises uuringus oli Pkd1L3/L3 hiirtel oluliselt suurem NGAL-valgu ja prolifereeruva raku tuumaantigeeni (PCNA) tase neerudes kui Pkd1+/+ hiirtel [31]. Sellest hoolimata oli NGAL valgu tase Pkd1L3/L3 × NGALTg/Tg hiirtel ligikaudu 2- korda suurem kui Pkd1L3/L3 × NGAL+/+ hiirtel ja NGAL üleekspressioon viis PCNA märkimisväärselt madalamale tasemele Pkd1L3 hiirtel. /L3 × NGALTg/Tg kui Pkd1L3/L3 × NGAL+/+ hiirtel ning pärssis veelgi tsüstide kasvu ja pikendas ellujäämispäevi [31]. NGAL näib mängivat kaitsvat rolli suurenenud proliferatsiooni pärssimisel ADPKD mudelites, samas kui endogeenne NGAL ekspressioon on ebapiisav ja täiendav eksogeenne NGAL võib aidata.

3D-kultuuri tulemuste (joonis 10) kohaselt inhibeerisid nii pN + LS kui ka pN - LS rühmad tsüstide kasvu, vähendades läbimõõtu (joonis 10C), pindala (joonis 10D) ja suurte tsüstide protsenti (läbimõõt > 100 µm) (joonis 10F), kuid mitte numbreid (joonis 10E). See leid on vastuolus meie kahtlusega, et ainult pN + LS, kuid mitte pN - LS, inhibeerib tsüstide suurenemist, kuna rakkude proliferatsiooni pärssimiseks on vajalik mNGAL sekretsioon 2L3 rakkudest. Kuid tsüsti suurenemise inhibeerimine pN-LS-ga oli kehvem kui pN + LS (joonis 10B-D), mis näitas, et sekreteeritud mNGAL-i üleekspressioon oli 3D-kultuuris paremini võimeline pärssima 2L3-rakkude tsüstide suurenemist kui mittesekreteeritud mNGAL-i oma. . Kuigi me näeme 3D-kultuuris pN + LS rühmas tsüstide suurenemise tugevamat pärssimist võrreldes pN - LS rühmaga, on p-AKT/AKT puhul raske näha pN + LS paremat mõju kui pN - LS (joonis 8B). ), p-CREB/CREB (joonis 8C) ja p62 (joonis 9D). On näidatud, et NGAL ja NGAL-R sidestamine võib eraldada rakusisest rauda ja indutseerida veelgi apoptoosi [29], mis on seotud kaasasündinud immuunsüsteemi rauapuuduse strateegiaga bakteriaalse infektsiooni vastu [30]. Tegime ettepaneku, et sekreteeritud mNGAL indutseeris 2L3 rakkudes apoptoosi NGAL-R-iga interaktsiooni kaudu, samas kui sekreteerimata mNGAL ei saanud apoptoosi esilekutsumiseks NGAL-R-ga suhelda (joonis 9A, B). On näidatud, et Ras/B-Raf/MEK/ERK [10,11] ja AKT/mTOR [38] rajad on ADPKD rakkudes ülesreguleeritud, mis põhjustab rakkude suurenenud proliferatsiooni ja tsüstide suurenemist. Meie tulemused näitasid, et sekreteeritud mNGAL inhibeeris ERK (joonis 8A) ja AKT (joonis 8B) radu ning sekreteerimata mNGAL inaktiveeris ERK rada (joonis 8A). See viitab sellele, et ERK raja vaimne inaktiveerimine ei pruugi NGAL-R kaudu olla vajalik. Küsimuse uurimiseks tehakse NGAL-R väljatõrjumine 2L3 rakkudes

Lisaks pärssis mNGAL-i üleekspressioon 2L3 rakkudes raku tsüstide suurenemist (joonis 10) ja ilmnes suhteliselt madalama NGAL-i sekretsiooniga (2,27 ng/ml) (joonis 7J) võrreldes mNGAL-i kõrge kontsentratsiooniga (2 mg/l) ml), mida kasutati eelmistes 3D-kultuurikatsetes (joonis 6). See tulemus võib olla tingitud varasemates katsetes kasutatud E. coli mNGAL-i translatsioonijärgse modifikatsiooni puudumisest, mis nõudis tsüstide suurenemise pärssimiseks suurt annust mNGAL-i (joonis 6). Et täiendavalt uurida, kas mNGAL-i translatsioonijärgne modifikatsioon on tegur, mis vastutab E. coli rekombinantse mNGAL-i vajaduse eest, kasutatakse edasistes uuringutes konditsioneeritud söödet, mis sisaldab hiire rakuliinist sekreteeritud mNGAL-i.

Käesolevas uuringus saadi RT-qPCR, Western blot analüüsi, ELISA, BrdU lisamise ja 3D-kultuuri jaoks kasutatud pN + LS ja pN - LS rakud segatud polüklonaalsest kogumist, millel oli segapopulatsioonis erinev transgeeni ekspressioonitase. MNGAL-i mehhanismi tuvastamine ADPKD 2L3 rakkudes ülalkirjeldatud meetoditega, kasutades kloonrakke, peaks aitama leida strateegiaid ADPKD tulevaseks kliiniliseks raviks.

5. Järeldused

Selles uuringus uurisime immortaliseeritud ADPKD rakuliini abil NGAL-i juuresolekul vähenenud tsüsti progresseerumise aluseks olevat mehhanismi. Rekombinantse mNGAL-i lisamine inhibeeris rakkude proliferatsiooni ADPKD rakkudes. Patoloogiline analüüs näitas, et mNGAL vähendas proliferatsiooni ja indutseeris ADPKD rakkudes apoptoosi ja autofagia radu. Lisaks loodi 3D rakukultuuri platvorm tsüstide progresseerumise tuvastamiseks ja näitas, et rekombinantse mNGAL-i lisamine pärssis tsüstide suurenemist. Lisaks oli sekreteeritud mNGAL-i (pN + LS) üleekspressioonil tugevam toime ADPKD rakkude tsüstide suurenemise pärssimisel kui sekreteerimata mNGAL (pN - LS) omal, kuigi mõlemad vormid vähendasid tsüstide läbimõõtu, pindala ja suurte tsüstide protsenti. samuti nende mõju proliferatsioonile, apoptoosile ja autofagiale. Me järeldame, et sekreteeritud mNGAL-il on ADPKD rakkudes rohkem väljendunud ja järjekindlam võime tsüstide suurenemist pärssida kui mittesekreteeritud mNGAL-il. Meie töö võib aidata tuvastada ADPKD tulevase kliinilise ravi strateegiaid.

Täiendavad materjalid: selle artikli täiendavad videod leiate Internetist (1) Video S1: tsüsti konstrueerimine 3D-kultuuris: https://reurl.cc/Kjy8rq (juurdepääs 26. novembril 2021); (2) Video S2: tsüsti Z-virna lõigud 3D-kultuuris: https://reurl.cc/VXGY5y (juurdepääs 26. novembril 2021). Täiendav graafik: negatiivsed kontrollid joonise 1D jaoks (jättes välja LTL-i ja DBA-värvimise) leiate veebist aadressil https://reurl.cc/LpMmje (juurdepääs 26. novembril 2021). Autori kaastööd: Conceptualization, W.-YJ, HMH-L. ja Y.-YC; andmete kureerimine, H.-YC; formaalne analüüs, H.-YC; rahastamise omandamine, HMH-L. ja Y.-YC; metoodika, H.-YC, W.-YJ, EW, C.-MH, HMH-L. ja Y.-YC; projektihaldus, H.-YC ja HMH-L.; ressursid, W.-YJ, S.-TJ ja Y.-YC; järelevalve, HMH-L.; visualiseerimine, H.-YC; kirjutamine-originaal mustand, H.-YC ja HMH-L.; kirjutamine-retsenseerimine ja toimetamine, H.-YC ja HMH-L. Kõik autorid on käsikirja avaldatud versiooni läbi lugenud ja sellega nõustunud. Rahastamine: seda uurimistööd rahastati teadus- ja tehnoloogiaministeeriumi (MOST) toetustest 107-2622-B-006-005-CC2 ja 108-2622-B-006-002- CC2 ning University Advancementi peakorterist riiklikust Cheng Kungi ülikoolist, Tainan, Taiwan (Yuan-Yow Chiou). Institutsioonilise läbivaatamise nõukogu avaldus: Ei kohaldata. Teavitatud nõusoleku avaldus: Ei kohaldata. Andmete kättesaadavuse avaldus: uuringu käigus kogutud andmed on vastava autori nõudmisel kättesaadavad. Tänuavaldused: Autorid on tänulikud MOST-i egiidi all asuva Taiwani riikliku tavaülikooli molekulaarkujutise tuumarajatise abi eest. Täname Taiwani Academia Sinica riiklikku RNAi põhirajatist viiruseosakeste, plasmiidide ja nendega seotud teenuste pakkumise eest. Täname Shu-Wen Lo-d graafika redigeerimisel abistamise eest. Huvide konflikt: autorid ei deklareeri huvide konflikti.

Viited

1. Bergmann, C.; Guay-Woodford, LM; Harris, arvuti; Horie, S.; Peters, DJ; Torres, VE Polütsüstiline neeruhaigus. Nat. Rev. Dis. Primers 2018, 4, 50. [CrossRef] [PubMed]

2. Grantham, JJ Kliiniline praktika. Autosoomne domineeriv polütsüstiline neeruhaigus. N. Ingl. J. Med. 2008, 359, 1477–1485. [CrossRef] [PubMed]

3. Chapman, AB; Devuyst, O.; Eckardt, K.-U.; Gansevoort, RT; Harris, T.; Horie, S.; Kasiske, BL; Odland, D.; Pei, Y.; Perrone, RD; et al. Autosomaalselt domineeriv polütsüstiline neeruhaigus (ADPKD): kokkuvõte neeruhaiguse kohta: ülemaailmsete tulemuste parandamine (KDIGO) vastuolude konverentsist. Kidney Int. 2015, 88, 17–27. [CrossRef] [PubMed]

4. Grantham, JJ; Mulamalla, S.; Swenson-Fields, KI Miks neerud autosomaalse domineeriva polütsüstilise neeruhaiguse korral ebaõnnestuvad. Nat. Rev Nephrol. 2011, 7, 556–566. [CrossRef] [PubMed]

5. Harris, PC; Torres, VE Geneetilised mehhanismid ja signalisatsiooniteed autosomaalse domineeriva polütsüstilise neeruhaiguse korral. J. Clin. Uurige. 2014, 124, 2315–2324. [CrossRef] [PubMed]

6. Ong, AC; Harris, PC Polütsüstiinikeskne vaade tsüstide moodustumisele ja haigustele: polütsüstiinid vaadati uuesti. Kidney Int. 2015, 88, 699–710. [CrossRef]

7. Weimbs, T. Kolmanda tabamuse signaalimine neerutsüstide moodustumisel. J. Am. Soc. Nephrol. 2011, 22, 793–795. [CrossRef]

8. Hanaoka, K.; Guggino, WB cAMP reguleerib rakkude proliferatsiooni ja tsüstide moodustumist autosoomsete polütsüstiliste neeruhaiguste rakkudes. J. Am. Soc. Nephrol. 2000, 11, 1179–1187. [CrossRef]

9. Starremans, P.; Li, X.; Finnerty, P.; Guo, L.; Takakura, A.; Neilson, E.; Zhou, J. Polütsüstilise neeruhaiguse hiiremudel somaatilise kaadrisisese deletsiooni kaudu Pkd1 5'-otsas. Kidney Int. 2008, 73, 1394–1405. [CrossRef]

10. Yamaguchi, T.; Nagao, S.; Wallace, DP; Belibi, FA; Cowley, BD; Pelling, JC; Grantham, JJ Cyclic AMP aktiveerib B-Rafi ja ERK-d autosomaalselt domineerivate polütsüstiliste neerude tsüsti epiteelirakkudes. Kidney Int. 2003, 63, 1983–1994. [CrossRef]

11. YamaguchiJill, T.; Pelling, JC; Ramaswamy, NT; Eppler, JW; Wallace, DP; Nagao, S.; Rooma, LA; Sullivan, LP; Grantham, JJ cAMP stimuleerib neerutsüstide epiteelirakkude in vitro proliferatsiooni, aktiveerides rakuvälise signaaliga reguleeritud kinaasi rada. Kidney Int. 2000, 57, 1460–1471. [CrossRef] [PubMed]

12. Zhu, P.; Sieben, CJ; Xu, X.; Harris, arvuti; Lin, X. Autofagia aktivaatorid pärsivad tsüstogeneesi autosomaalse domineeriva polütsüstilise neeruhaiguse mudelis. Humm. Mol. Genet. 2016, 26, 158–172. [CrossRef] [PubMed]

13. Belibi, F.; Zafar, I.; Ravichandran, K.; Segvic, AB; Jani, A.; Ljubanovic, peadirektoraat; Edelstein, CL hüpoksiaga indutseeritav faktor-1 (HIF-1) ja autofagia polütsüstilise neeruhaiguse (PKD) korral. Am. J. Physiol.-Ren. Physiol. 2011, 300, F1235–F1243. [CrossRef] [PubMed]

14. Chun, Y.; Kim, J. Autofagia: oluline lagunemisprogramm raku homöostaasi ja elu jaoks. Cells 2018, 7, 278. [CrossRef]

15. Rubinszstein, DC; Shpilka, T.; Elazar, Z. Autofagosoomi biogeneesi mehhanismid. Curr. Biol. 2012, 22, R29–R34. [CrossRef]

16. Mukhopadhyay, S.; Panda, PK; Sinha, N.; Das, DN; Bhutia, SK Autofagia ja apoptoos: kus nad kohtuvad? Apoptosis 2014, 19, 555–566. [CrossRef]