Askorbiinhape reguleerib Abalone Haliotis Discus Hannai Ino immuunsust, oksüdatsioonivastast toimet ja apoptoosi, 2. osa

3.5. Immuunsüsteemiga seotud geenide ja valkude väljendus abalone seedenäärmes ja lõpus

Tistanche glükosiid võib samuti suurendada SOD aktiivsust südame- ja maksakudedes ning oluliselt vähendada lipofustsiini ja MDA sisaldust igas koes, eemaldades tõhusalt erinevaid reaktiivseid hapnikuradikaale (OH-, H2O₂ jne) ja kaitstes tekitatud DNA kahjustuste eest. OH-radikaalide poolt. Tsistanche fenüületanoidglükosiididel on tugev vabade radikaalide eemaldamisvõime, suurem redutseerimisvõime kui C-vitamiinil, nad parandavad SOD aktiivsust sperma suspensioonis, vähendavad MDA sisaldust ja omavad teatud kaitset sperma membraani funktsioonile. Tsistanche polüsahhariidid võivad suurendada SOD ja GSH-Px aktiivsust D-galaktoosi poolt põhjustatud eksperimentaalselt vananevate hiirte erütrotsüütides ja kopsukudedes, samuti vähendada MDA ja kollageeni sisaldust kopsudes ja plasmas ning suurendada elastiini sisaldust. hea puhastav toime DPPH-le, pikendab hüpoksia aega vananevatel hiirtel, parandab SOD aktiivsust seerumis ja aeglustab eksperimentaalselt vananevatel hiirtel kopsude füsioloogilist degeneratsiooni Raku morfoloogilise degeneratsiooniga on katsed näidanud, et Cistanche'il on hea antioksüdantne võime ja sellel on potentsiaal olla ravim naha vananemishaiguste ennetamiseks ja raviks. Samal ajal on Cistanche ehhinakosiidil märkimisväärne võime eemaldada DPPH vabu radikaale ja see suudab eemaldada reaktiivseid hapniku liike ja takistada vabade radikaalide poolt indutseeritud kollageeni lagunemist, samuti on sellel hea parandav toime tümiini vabade radikaalide anioonide kahjustustele.

Vananemisvastaseks kasutamiseks klõpsake valikul Cistanche Reddit

【Lisateabe saamiseks:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】

Tabelites 6 ja 7 on toodud pöördeliste geenide mRNA tasemed toll-like retseptori (TLR) signaaliülekande rajal abalone seedenäärmes. Tlr2 ja tlr4 ekspressioonitasemed seedenäärmes olid oluliselt langenud (p < { {5}}.05) ja nende madalaim tase oli AA1000 ja AA500{{43 vastavalt }} rühma (tabel 6). The-a mRNA tase oli oluliselt ülesreguleeritud (p < 0.05) ja toidu AA astmeline tase ei mõjutanud the-b-d (p > 0,05). ). Myd88, reisiga seotud adaptermolekuli (tram), interleukiin 1 retseptoriga seotud kinaasi 4 (irak4) ja tuumori nekroosifaktori retseptoriga seotud faktori 6 (traf6) ekspressioon vähenes oluliselt pärast AA toidulisandit (p < 0,05). Traf4 ei mõjutanud AA lisamise tase (p > 0,05). Toidu AA (p > 0,05) ei mõjutanud iκb kinaasi (ikk ) ja nf-κb inhibiitori (iκb ) mRNA taset abalone seedenäärmes (tabel 7). Kuid p38 mitogeeniga aktiveeritud proteiinkinaasi (p38 märk) ja rämpsu ekspressioon vähenes märkimisväärselt vähenenud toidu AA suurenemisega (p < 0, 05). Toidu AA võib oluliselt vähendada nf-κb, aktivaatorvalgu 1 (ap-1) ja tuumori nekroosifaktori (tnf-) ekspressioonitaset (p < 0,05) ning interleukiin 16 (il 16) taset ei olnud toidu AA suhtes (p > 0,05). MyD88, JNK, küpse IL-1 ja tuuma NF-κB p65 valgu ekspressioonid on näidatud joonisel 2. MyD88, küpse IL-1 ja tuuma NF-κB p65 valgu tase seedetraktis Abalone'i nääre reguleeris toidu AA oluliselt alla (p < 0,05). Seevastu AA ei mõjutanud JNK valgu taset (p > 0, 05).

tlr2, tlr4 ja the-b mRNA tasemed leplikese lõpus ei erinenud oluliselt (p > 0.05) ning tar-a tase vähenes oluliselt pärast astmeliste tasemete määramist. toidu AA (p < 0.05) (tabel 8). Lisaks olid myd88, irak4 ja traf6 ekspressioonitasemed abalooni lõpustes märkimisväärselt alla reguleeritud toidu AA taseme tõusuga (p < 0.{{20}}5). Selle asemel ei täheldatud olulisi erinevusi trammi ja traf4 avaldistes (p > {{30}}.05). Toiduga saadud AA vähendas oluliselt ikk mRNA taset (p < 0,05) ning AA ei mõjutanud iκb , p38 märgi ja rämpsu ekspressiooni lõpustes (p > 0,05) (tabel 9). Ühesuunaline ANOVA näitas, et nf-κb, ap-1 ja tnf- ekspressioonitasemed vähenesid märkimisväärselt toidu AA tõttu (p < 0,05) ning olulist erinevust il 16 tasemetes ei täheldatud (p > 0,05). MyD88 ja tuuma NF-κB p65 valgu taset vähendasid oluliselt toidu AA tasemed (p < 0, 05) (joonis 3). Toidu AA ei mõjutanud aga JNK ja küpse IL-1 valgu ekspressiooni abalooni lõpustes (p > 0,05).

Defensiini, müüdiloome 6 ja arginaas-I ekspressioonid abalooni seedenäärmes ja lõpus on toodud tabelis 10. Defensiini ja arginaas-I tase seedenäärmes tõusis oluliselt pärast AA-d toiduga (p < 0.05), samas kui toidu AA müüdiloome 6 väljendust ei mõjutanud (p > 0,05). Seevastu -defensiini ja arginaas-I mRNA tasemed lõpustes ei erinenud oluliselt ning müüdiloome 6 ekspressioon oli toidu AA poolt oluliselt ülesreguleeritud (p < 0,05).

3.6. Immuunsüsteemiga seotud geenide ekspressioon seedenäärmes vastusena Vibrio Parahaemolyticusele

Mitmete kriitiliste geenide ekspressioonitasemed TLR signaalirajas, mis sisaldavad tlr4, myd88, tram, nf-κb, ap-1 ja tnf- abalone seedenäärmes pärast V. parahaemolyticus'e infektsiooni, on esitatud joonisel 4. tlr4, myd88, tram, nf-κb, ap-1 ja tnf- mRNA ekspressioonid olid pärast V. parahaemolyticus'e manustamist oluliselt ülesreguleeritud (p < 0.05). Tlr4 kordne muutus oli suurim AA0 rühmas (10.24-} korda) 24 tundi pärast nakatumist ja seejärel langes kõrgeim tase 3-ni.{{ 20}}kordne AA5000 rühmas kell 6 h. Myd88 mRNA tase oli oluliselt ülesreguleeritud 12–72 tundi AA0 rühmas (6{28}} korda) ja 6–12 tundi AA5000 rühmas (3{33}} korda) pärast V. parahaemolyticus'e infektsioon. Trammi ekspressioon abalone seedenäärmes pärast V. parahaemolyticus'e nakatumist suurenes oluliselt 12 tunnilt 72 tunnini AA0 rühmas ja 12 tunnilt 24 tunnini AA5000 rühmas. Nf-κb kordne muutus saavutas kõrgeima taseme 48 tunni pärast AA0 rühmas (10.55- korda), millele järgnes kõrgeima taseme langus 12 tunni pärast AA5000 rühmas (3.{48). }}voldi muutus). Ap-1 ekspressioonitase oli AA0 ja AA50 rühmas oluliselt ülesreguleeritud 6 tunnilt 72 tunnini, enne kui taastus normaalsele tasemele 72 tunni pärast pärast pidevat AA lisamist. TNF-i korduv muutus saavutas haripunkti 24 tundi pärast V parahaemolyticus'e nakatumist AA0, AA50, AA100, AA200 ja AA500 rühmades ning oli kõrgeim 12 tunni pärast AA1000 ja AA5000 rühmades.

-defensiini ja müüdiloome 6 taseme tulemused seedenäärmes pärast V. parahaemolyticus'e nakatumist on näidatud joonisel 5. -defensiini ja müüdiloome 6 ekspressioonitasemed abalone seedenäärmes suurenesid oluliselt pärast V. parahaemolyticus'e nakatumist ( p < 0.05). Defensiini mRNA tase tõusis märkimisväärselt rühmades AA0, AA50, AA100 ja AA200 12 ja 24 tunni pärast ning saavutas tipu 12 tunni pärast AA200, AA500, AA1000 ja AA5000 rühmades 4 inimesega. .51-fold, 4.74-fold, 5.20-fold ja 5.{26}}fold. Müüdiloome 6 kordamine abalooni seedenäärmes oli rühmades AA0, AA50, AA100, AA200 ja AA500 oluliselt ülesreguleeritud 12 tunnilt 24 tunnini ning AA1000 ja AA5000 rühmades 6 tunnilt 72 tunnini. Müüdiloome 6 kõrgeimat ekspressioonitaset täheldati 12 tunni pärast AA5000 rühmas, 582- korda.

3.7. Oksüdatsioonivastaste ja apoptoosiga seotud geenide ja valkude ekspressioon seedenäärmetes ja lõpus

Nf-e2-seotud faktori-2 (nrf2), gpx, cat ja cuznsod mRNA tasemed abalooni seedenäärmes tõusid oluliselt toidu AA astmelise tasemega (p < {{4). }}.{8}}5) (tabel 11). Seevastu Keap1 mRNA ja valgu tase vähenes oluliselt pärast AA-d toiduga (p < 0.05) ja AA ei mõjutanud glutatioon-s-transferaasi (GST) (joonis). 6, tabel 11) (p > 0.05). Lõpuses suurendas nrf2 ja gpx mRNA taset märkimisväärselt toidu AA (p < 0,05) (tabel 11). Kuid keap1, cat, GST ja cuznsod väljendused lõpustes ei allunud AA astmelistele tasemetele (p> 0,05). Dieedi AA olulist mõju Keap1 valgu ekspressioonile abalone lõpus ei täheldatud (p > 0,05) (joonis 6).

Tabelis 12 paistab silma see, et Baxi ja kaspaas3 ekspressioonitasemed abalooni seedenäärmes vähenesid oluliselt pärast AA astmelist taset toidus (p < 0.05). Vahepeal oli bcl-2 mRNA tase oluliselt ülesreguleeritud (p < 0.05). Toidu AA ei mõjutanud aga kaspaas7 ekspressiooni (p > 0.{{20}}5). Lõhustatud kaspaas3 valk seedenäärmes vähenes oluliselt pärast AA lisamist (p < 0,05) (joonis 6). Lõpuses vähenesid kaspaas7 ja bcl-2 mRNA tasemed oluliselt ja suurenesid vastavalt pärast AA-d toiduga (p < 0,05) (tabel 12). Sellegipoolest ei erinenud Baxi ja kaspaas3 ekspressioonid kõigi raviviiside vahel oluliselt (p > 0, 05). Lisaks ei mõjutanud lõhustatud kaspaas3 valgu ekspressiooni abalooni lõpustes toidu AA astmeline tase (p > 0,05) (joonis 6).

4. Arutelu

4.1. Askorbiinhappe sisaldus erinevates kudedes

Käesolevas uuringus suurenes AA sisaldus lihastes, lõpustes ja seedenäärmetes koos toidu AA taseme tõusuga. Sarnane tulemus leiti ka Vundu (Heterobranchus logfiles), jaapani angerja ja Chu krooksu (Nibea värv) puhul [27,56,57]. AA sisaldus oli kõrgeim lõpuses, järgnes leplika seedenäärmes. Siiski ei saavutanud AA sisaldus abalooni lõpustes, seedenäärmetes ja lihastes pärast 4821,17 mg/kg toidu AA-d küllastumist. Hiina iminikul (Myxocyprinus asiaticus) suurendas AA sisaldust maksas märkimisväärselt toidu AA tõttu [58]. Suurenenud AA sisaldus hiina imeja maksas pärast toidu AA-d oli korrelatsioonis maksa tervisega. Rohukarbi puhul suurenes AA sisaldus pea neerus, põrnas ja nahas märkimisväärselt suurenenud AA toidulisandiga [35]. Peaneer, põrn ja nahk on veeloomade olulised immuunorganid [59–61]. Need tulemused näitavad, et abalooni suurenenud AA sisaldus seedenäärmes ja lõpus oli tihedalt seotud abalooni tervisega pärast toidu AA-d ja et AA akumuleerumine peegeldab toidu AA kokkupuute taset.

4.2. Askorbiinhappe roll abalone immuunsuse reguleerimisel

Hemotsüüdid kui molluskite hemolümfi mitmekülgsed rakulised komponendid vastutavad molluskite elu paljude aspektide eest, nagu immuunvastus, biomineralisatsioon, raku-raku side ja regeneratsioon [62,63]. Seetõttu võivad hemolümfi THC, RB ja PA otseselt peegeldada organismi immuunsust. AA oli tihedalt seotud hemotsüütide THC, RB ja PA-ga, mille tulemuseks oli adaptiivse immuunsüsteemi aktiveerimine [64, 65].

Käesolevas uuringus suurendas toidu AA oluliselt THC, RB ja PA sisaldust abalooni hemolümfis. On näidatud, et AA astmeline tase toidus parandas abalooni immuunfunktsiooni. Sarnaseid tulemusi täheldati Niiluse tilapia ja kõrreliste krevettide (Penaeus monodon) puhul [64,66]. Punase soovähi (Procambarus clarkii) seerumis vähenes RB ja hübriidsorubim säga (Pseudoplatystoma reticulatum × P. corpuscles) seerumis oluliselt pärast AA kõrget taset (321,38 mg/kg ja 850 mg/kg). kg) [67,68]. Siiski ei täheldatud abalooni hemolümfis THC, RB ja PA olulist langust ravimisel kõrge AA-sisaldusega toidulisandiga (4821,17 mg/kg).

Lüsosüüm, C3 ja C4 mängivad kaasasündinud immuunsuses keskset rolli ja kaitsevad loomi patoloogilise infektsiooni eest [69–71]. Käesolevas uuringus suurenes abalooni CFH LZM märkimisväärselt pärast toidu AA tasemete määramist. See sarnanes varasemate uuringute tulemustega koobia (Rachycentron canadum), korea kivikala (Sebastes schlegelii) ja kaljukala (Epinephelus malabaricus) kohta [29,72,73]. AA defitsiit vähendas rohukarpide C3 ja C4 sisaldust ning toidu AA võib oluliselt suurendada immuunparameetreid, nagu C3 ja C4 suursuuahvena puhul [35,74]. Käesolevas uuringus ei mõjutanud aga AA tase toidus sisalduva abalone C4 sisaldust CFH-s. Abalone CFH-s oli C3 sisalduse suurenemise trend, kuigi toidu AA C3 sisaldust oluliselt ei parandanud. Need tulemused näitasid, et AA toidulisand võib suurendada abalooni immuunbarjääride parandamiseks võimet kõrvaldada patogeenide nakatumine LZM-i ja C3-ga, mitte C4-ga.

Kaasasündinud immuunsus on abalonide jaoks ülioluline, kuna selgrootutel puudub adaptiivne immuunsus [43, 49]. TLR-id mängivad olulist rolli kaasasündinud immuunsüsteemis erinevate mikroobide vastu [75]. PAMP-aktiveeritud TLR-id värbavad spetsiifilisi adaptermolekule, et aktiveerida transkriptsioonifaktoreid, nagu NF-κB ja AP-1, mis määravad kaasa kaasasündinud immuunvastuse tulemuse [76]. TLR-i signaaliülekanne jaguneb kaheks erinevaks rajaks: MyD88--sõltuv ja MyD88-sõltumatu, mis indutseerivad imetajatel ja muudel veeloomadel erinevaid tsütokiine, nagu TNF- ja IL{10}} [77,78 ]. MyD{13}}sõltuval rajal suhtleb MyD88 IRAK4-ga ja seejärel TRAF6-ga [79]. TRAF6 võib aktiveerida TGF{19}}aktiveeritud kinaasi 1 (TAK1) ja TAK{22}}seonduvaid valke (TAB) [80]. TAK1 aktiveerib IKK kompleksi, mis võib fosforüülida IKB, mis seondub NF-κB subühikutega (koosneb p50 ja p65) ning fosforüülib MAPK-sid ja JNK-d, mis soodustab AP-1 translokatsiooni tuuma [81]. IκB hävitamine hõlbustab NF-κB tuuma translokatsiooni [82]. Tuuma NF-κB ja AP-1 on suunatud tsütokiinide, nagu TNF- ja IL-1, transkriptsioonile, mis on hästi tuntud kui põletikueelsed vahendajad, mis soodustasid põletikku [76,77,83] . Sõltumatu MyD{41}}raja puhul on TRAM vajalik ja sellel on sellel teel keskne roll [84]. TLR-i signaaliülekande rajast allavoolu asuvad rakusisesed komponendid on selgroogsete ja selgrootute vahel tavaliselt ja väga konserveerunud [60, 85]. TLR4 intrahepaatiline ekspressioon oli AA-manustatud hiirtel (Mus musculus) [86] allareguleeritud. AA avaldas NF-KB signaaliraja pärssimise kaudu kasulikku hepatokaitset koncanavaliin A-indutseeritud immunoloogilise maksakahjustuse vastu hiirtel [87, 88]. Seega võib nendest tulemustest järeldada, et AA võib mõjutada TLR-i signaalirada. Siiski jääb teadmata, kuidas AA reguleerib TLR-i signaalirada veeloomadel, eriti molluskitel.

Käesolevas uuringus vähenesid tlr2 ja tlr4 mRNA tasemed seedetraktis märkimisväärselt toidu AA tasemete tõttu. Arvatakse, et TLR-i signaaliraja käivitas AA lepliku seedenäärmes (joonis 7). Terminitel-a ja tlr-b oli laiem mustrituvastusvõime ning need olid seotud abalone antibakteriaalse ja viirusevastase immuunsusega [89]; the-a/b aluseks olev mehhanism on siiski teadmata. Siiski ei mõjutanud toidu AA tlr-b taset ja käesolevas uuringus reguleeris AA tlr-a oluliselt. Vaja on täiendavaid uuringuid. Myd88, irak4 ja traf6 ekspressioon ning MyD88 valgu ekspressioon abalone seedenäärmes vähenes AA lisamisega ja traf4 taset ei mõjutanud toidu AA. TRAF4 toimib TLR-vahendatud signaalimises summutina, surudes maha TRAF6 [90]. On näidatud, et TLR-raja pärssimine toidu AA-ga ei olnud vahendatud abalooni seedenäärmes oleva traf4 kaudu. AA ei mõjutanud iκb mRNA taset seedenäärmes. NF-κB saab aga tuuma üle kanda alles pärast IκB fosfaadi lagunemist [91]. Nf-κb mRNA ekspressioonid ja tuuma NF-KB p65 valgu ekspressioon seedenäärmes olid dieedi AA-ga oluliselt alla reguleeritud. Need tulemused näitasid, et AA võib tuuma NF-κB vähendamiseks pärssida IKB valgu fosforüülimist. IKK võib aktiveerida NF-κB p65, et käivitada NF-κB kanooniline rada, ja IKK saab aktiveerida NF-κB p52, et käivitada NF-κB mittekanooniline rada [92]. On näidatud, et toiduga saadav AA võib aktiveerida NF-κB kanoonilise raja abalooni seedenäärmes. Lisaks vähendas toidu AA oluliselt trammi, p38 märgi, rämpsu, ap-1 ja tnf- mRNA ekspressiooni ning küpse IL-1 valgu taset. Need tulemused viitavad sellele, et toidu AA võib pärssida TLR-i signaaliülekande rada läbi Myd88-sõltuva raja kaudu NF-κB, p38 mark/ap-1 ja JNK/ap-1 ning Myd{{ 43}}sõltumatud viisid leplika seedenäärme põletiku leevendamiseks. Lõpuses mõjutas AA ka TLR-i signaalirada (joonis 7). Kuid küpse IL-1 trammi, p38 märgi ja rämpsu ning valgu ekspressiooni mRNA tasemed ei erinenud oluliselt. Need tulemused näitasid, et toidu AA võib pärssida TLR-i signaaliülekanderada läbi Myd{47}}sõltuva raja, mitte MyD{48}}sõltumatu. Inhibeeritud TLR-rada leevendas põletikku abalooni lõpustes NF-κB ja p38 mark/ap{51}}, mitte JNK/ap{52}} raja kaudu. Dieedi AA-l oli tugevam mõju TLR-i rajale seedenäärmetes kui leplikese lõpus.

【Lisateabe saamiseks:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】