Cistanches Herba kvaliteedimarkerid, mis põhinevad antioksüdantide spektri-efekti suhetel Ⅱ

3 tulemust

3.1 Sõrmejälgede kaardi loomine

Valmistage 10 partiid uuritavaid lahuseid vastavalt punktis 2.1 toodud meetodile, kasutage tuvastamiseks punktis 2.2 kirjeldatud kromatograafilisi tingimusi, võtke iga proovipartii sõrmejäljed (joonis 1) ja valige piigi nr 11 (C11) võrdluspiigiks. sõrmejälg. Importige vedelfaasi andmed.Cistanche deserticola testtoote sõrmejälje AIA-fail tarkvara "Traditsioonilise hiina meditsiini kromatograafilise sõrmejälgede sarnasuse hindamise süsteem" (2012. aasta versioon). Seitseteist ühist kromatograafilist piiki kalibreeriti ühises režiimis ja võrreldes segatud võrdlusstandardi spektriga (joonis 2) tuvastati kokku 10 ühist piiki.

3.2 Cistanche deserticola antioksüdantse toime uurimine

3.2.1 Cistanche deserticola mõju HEK 293 rakkude elujõulisusele.

Võrreldes normaalse rühma rakkudega, ei tekitanud Cistanche deserticola tsütotoksilisust massikontsentratsioonil 50–100 ug·mL–1 ja rakkude ellujäämise määr oli suurem kui 90%. Kuna Cistanche deserticola kontsentratsioon suurenes, vähenes rakkude elujõulisus. Seetõttu valiti järgnevaks manustamiseks Cistanche deserticola massikontsentratsiooniga 100 µg·mL–1.

3.2.2 Cistanche deserticola mõju H2O2 poolt indutseeritud ROS-ile HEK 293 rakkudes

Cistanche deserticola ROS IC50 erinevatel kontsentratsioonidel arvutati GraphPad Prism 8 tarkvara abil. Tulemused on näidatud joonisel 3 ja tabelis 2.

Tsüstanche'i kohta lisateabe saamiseks vaadakem, kuidas eristada tsistanši kvaliteeti. Cistanche kvaliteet sõltub toimeainete ehhinakosiidi ja akteosiidi sisaldusest, suurem sisaldus tähendab tugevamat funktsiooni, täna võtame seletuse andmiseks näitena 30% ehhinakosiidi ja 12% akteosiidi tsitanche toidulisandeid, üldiselt nimetage selles artiklis cistanche.

KUI KAUA LÄBIB, ET CISTANCHE TÖÖTAB?

3.2.3 Cistanche deserticola mõju H2O2--indutseeritud HEK 293 rakkude SOD-le

Nagu on näidatud joonisel 4, vähenes SOD aktiivsus mudelrühma rakkudes võrreldes normaalse rühmaga oluliselt ja Cistanche deserticola manustamisrühma SOD aktiivsus suurenes erineval määral (P<0.001), indicating that Cistanche deserticola can increase the intracellular SOD enzyme activity.

3.2.4 Cistanche deserticola mõju H2O2-indutseeritud CAT-le HEK 293 rakkudes

Nagu on näidatud joonisel 5, võib H2O2 põhjustada intratsellulaarse CAT ensüümi aktiivsuse olulist langust (P<0.001), with the activity only reaching 30% of the normal group, indicating that H2O2 has seriously damaged the antioxidant system of cells. After Cistanche deserticola administration, intracellular CAT enzyme activity decreased significantly (P<0.001). The enzyme activity was significantly increased (P<0.001).

3.3 Cistanche deserticola Q-markeri sõelumine, mis põhineb spektraalse efektiivsuse korrelatsioonianalüüsil

3.3.1 PCA kasutab 4 põhikomponendi eraldamiseks standardina omaväärtust > 1 ja kumulatiivset dispersioonimäära > 85%. Esimese kolme põhikomponendi tasandusgraafik (joonis 6) on järsema kõveraga, mis tähendab, et selle panuse määr on suurem. suur. Nelja põhikomponendi kumulatiivse dispersiooni panuse määr on 87,640%, mis näitab, et need neli põhikomponenti võivad esindada 87,640% algsete muutujate teabest. Algsed omaväärtused ja dispersiooni panuse määrad on näidatud tabelis 3. Pööratud komponendi maatriks saadakse Kaiseri normaliseerimise maksimaalse dispersiooni meetodil, vt tabel 4. Vastavalt iga kromatograafilise piigi laadimisväärtusele neljal põhikomponendil peegeldub iga komponendi informatsioon. põhikomponendi saab ekstraheerida. See tähendab, et mida suurem on koormuse väärtus, seda suurem on kromatograafilise piigi mõju põhikomponendile. Põhikomponendis 1 on tippudel 1 kuni 3, 5, 7, 11 ja 13 kuni 15 suurimad absoluutkoormused; põhikomponendis 2 on tipud 6 ja 16 suurimad absoluutkoormused; tipp 17 selgitab põhikomponendi 3 teavet, piigil 8 on kõige suurem mõju põhikomponendile 4, mistõttu piikide 1-3, 5-8, 11, 13-17 13 keemilist komponenti valiti Cistanche'i põhiliseks materjaliks. deserticola järgnevaks spektraalse efektiivsuse analüüsiks.

3.3.2 PCC

ROS IC50 on ravimi efektiivsuse negatiivne näitaja, seega tähendab negatiivne korrelatsioonikordaja, et sõltuv muutuja on positiivses korrelatsioonis ravimi efektiivsusega. Cistanche deserticola 13 kromatograafilise piigi korrelatsioonikoefitsiendid on kõik negatiivsed, mis näitab, et need kõik on positiivselt seotud ROS IC50 eemaldamisega, mille hulgas piigid 14 ja 3, 7, 11, 1 ja 13 olid äärmiselt tugevas korrelatsioonis ROSIC50-ga. (P<0.01), and peaks 2, 5, and 15 were strongly correlated (P<0.05); the 13 chromatographic peaks were all positively correlated with SOD, among which peaks 13 and 3 , 15, 11, 2 were extremely strongly correlated with SOD (P<0.01), and peaks 1, 14, 7, 5, and 6 were strongly correlated (P<0.05); 11 peaks were positively correlated with CAT, and peak 5 was positively correlated with CAT. There was a strong correlation (P<0.05). The results are shown in Table 5.

Kombineerides ROS IC50, SOD ja CAT PCC tulemusi, valiti Cistanche deserticola toimeainete rühmaks piigid 1–3, 5, 7, 11 ja 13–15, et avaldada antioksüdantset toimet.

3.3.3 PLS

In PLS, the ROS IC50 regression coefficients of 13 chromatographic peaks are all negative and positively correlated with the pharmacodynamic activity. Among them, the chromatographic peaks with VIP>1 are: 14, 3, 11, 1, 7, 13, 2, 5, 15 (Figure 7A); in the study of SOD enzyme activity, the coefficients of all peaks are positive, that is, all peaks are positively correlated with drug efficacy. Among them, the chromatographic peaks with VIP>1 are: 13, 3, 15, 11, 2, 1 , 14, 7 (Figure 7B); in the study of CAT enzyme activity, except for peaks 6 and 16, the other chromatographic peaks are positively correlated with drug efficacy, among which the chromatographic peaks with VIP>1 on: 5, 13, 14, 11, 7 (joonis 7C). Piikidega 1-3, 5, 7, 11 ja 13-15 kujutatud ühendid sõeluti välja potentsiaalsete antioksüdantsete aktiivsete komponentidena PLS-i mudelis.

3.4 Cistanche deserticola Q-markeri aktiivsuse kontrollimine

3.4.1 Toimeainete mõju HEK 293 tsütotoksilisusele

Spektri-efekti korrelatsioonianalüüsi tulemuste põhjal valiti aktiivsuse kontrollimiseks 6 koostisainet, sealhulgas genipiinhape, 8-epistrühnoehape, ehhinatseosiid, verbaskosiid, antotsünosiid A ja isorbaskosiid. Cistanche deserticola kuus toimeainet ei näidanud tsütotoksilisust kontsentratsioonidel, mis jäid vahemikku 0,781 kuni 3,125 µmol·mL–1, ja rakkude ellujäämise määr oli kõik suurem kui 90%. Kui kontsentratsioon suureneb, inhibeeritakse rakkude elujõulisust. Seetõttu valiti järgnevateks annustamiskontsentratsioonideks 0,781, 1,563 ja 3,125 µmol·mL–1.

3.4.2 Toimeainete paarid

H2O2-indutseeritud HEK 293 rakkude antioksüdantset toimet kontrolliti, tuvastades iga toimeaine eemaldava toime rakusisesele ROS-ile ning võime reguleerida SOD ja CAT ensüümide aktiivsust, et kontrollida, kas sellel on antioksüdantne toime. ROS-i eemaldamise katses olid erinevused keskmise ja suure annuse genipiinhappe rühma ja mudelrühma vahel statistiliselt olulised (P<0.01, P<0.001, Figure 8A). Compared with the model group, there were statistically significant differences between the low, medium and high dose groups of inulin, anthoside A, verbascoside and isorbascoside (P<0.001, Figure 8B, Figure 8C), indicating that the six monomers All have a certain degree of ROS scavenging effect; in the SOD and CAT enzyme activity measurement test, the enzyme activities of the low, medium and high dose groups of active ingredients were all higher than the model group, indicating that all 6 monomers can increase SOD and CAT Enzyme activity.