Panduratiin A kaitsev toime inimese neerude proksimaalsete tubulaarrakkude tsisplatiinist põhjustatud apoptoosile ja hiirte ägedale neerukahjustusele
Mar 18, 2022
Taust:Tsisplatiin on tõhus keemiaravi, kuid selle peamine kõrvalmõju on ägeneerukahjustus, piirab selle kasutamist. Boesenbergia rotundast ekstraheeritud bioaktiivne ühend Pandurate A omab mitmeid bioloogilisi toimeid, nagu antioksüdatiivne toime. Käesolevas uuringus uuriti panduraat A nefroprotektiivset toimet tsisplatiini poolt indutseeritudneerukahjustus.Meetodid: Uurisime panduraat A mõju tsisplatiini toksilisusele nii hiirtel kui ka inimese neerurakkude kultuurides, kasutades RPTEC/TERT1 rakke. Tulemused: tulemused näitasid, et panduraat A leevendab tsisplatiinist põhjustatud neerutoksilisust nii hiirtel kui ka RPTEC/TERT1 rakkudel, vähendades apoptoosi. Hiirtel, keda raviti ühekordse intraperitoneaalse (ip) tsisplatiini süstiga (20 mg/kg kehamassi kohta (BW)), ilmnesneeru-torukeste vigastus ja kahjustusneerufunktsioonnagu näitab histoloogiline uuring ja suurenenud seerumi kreatiniinisisaldus. Panduraat A (50 mg/kg kehamassi) koosmanustamine suukaudselt paranesneerufunktsioonja paranenudneeru-tsisplatiini tuubulite kahjustus, inhibeerides rakuvälise signaaliga reguleeritud kinaasi (ERK)1/2 ja kaspaas 3 aktivatsiooni. Inimese neeru proksimaalsetes tubulaarrakkudes põhjustas tsisplatiini poolt esile kutsutud raku apoptoosi, aktiveerides proapoptootilisi valke (ERK1/2 ja kaspaas 3), ja apoptootilise valgu (Bcl{10}}) vähendamine. Neid toimeid leevendas oluliselt kaasravi panduraat A-ga. Huvitaval kombel ei muutnud panduraat A tsisplatiini rakusisest akumulatsiooni. See ei muutnud tsisplatiini vähivastast efektiivsust ei inimese käärsoole ega mitteväikerakk-kopsuvähi rakuliinides. Järeldused: käesolev uuring rõhutab, et panduraadil A on tsisplatiini nefrotoksilisuse suhtes potentsiaalne kaitsev toime.
Märksõnad:keemiaravi; äge neerukahjustus; panduratiin A; inimese neeru proksimaalne tuubul; apoptoosivastane toime; neerud; neerud
CISTANCHE PARANDAB neeru-/NEEREDIALÜÜSI
SISSEJUHATUS
Ravimitest põhjustatud nefrotoksilisus on kliinilises keskkonnas suur probleem, kuna nefrotoksiliste ravimite kasutamine on sageli vältimatu. Nefrotoksilisust saab määratleda neerukahjustuste, sealhulgas glomerulaarkahjustuste ja tubulaarsete vigastuste järgi, mis põhjustavad neerufunktsiooni kahjustust.1) Levinud ravimid, mis on seotudneerukahjustuson põletikuvastased, antibiootikumid ja kemoterapeutilised ained, nagu tsisplatiin.2–4) Tsisplatiin on laia toimespektriga ja tugevatoimeline kemoterapeutiline ravim.5) Siiski kannatab ligikaudu üks kolmest tsisplatiinravi saavatest patsiendist nefrotoksilisuse all6,7) ja elektrolüütide tasakaaluhäired.8,9) Tsisplatiini poolt indutseeritud nefrotoksilisust iseloomustavad proksimaalsete tuubulite vigastus, vaskulaarne vigastus ja põletik.4) Tsisplatiini akumuleerumine neerurakkudes kutsub esile mitmeid rakusurma soodustavaid radu. Reaktiivsed hapniku liigid (ROS) on tuvastatud tsisplatiini nefrotoksilisuse peamise vahendajana.10,11) Lisaks indutseerib ROS nefrotoksilisust mitogeen-aktiveeritud proteiinkinaaside (MAPK-de) aktiveerimise kaudu.10,12,13) Mitmed uuringud on teatanud, et tsisplatiin ise võib otseselt stimuleerida rakuvälist signaaliga reguleeritud kinaasi (ERK)1/2 (MAPK liige) nii in vitro kui ka in vivo. 14,15)
Teatud fütokemikaalid leevendavad tsisplatiinist põhjustatud nefrotoksilisust, inhibeerides ROS-i akumulatsiooni ja apoptoosi.16–18) Kuigi prekliinilistes uuringutes on teatatud nende fütokemikaalide nefroprotektiivsest toimest, ei ole tsisplatiini fütokemikaalide poolt endiselt heaks kiidetud ravimeid1 (vt nefrotoksilisuse kohta19). ) Praegune kliiniline praktika pakub ainult toetavat ravi neerufunktsiooni taastamiseks.20) Seetõttu on endiselt oluline otsida tõhusaid aineid, et vältida või ravida tsisplatiinist põhjustatud nefrotoksilisust. Panduraat A on huvitav fütokemikaal. See on tsükloheksanoolkalkoon, mis on isoleeritud traditsioonilises meditsiinis ja toidus kasutatavast taimest Boesenbergia rotundast.21) Panduratiin A ennetab või ravib oksüdatiivset stressi, põletikku ja ainevahetushaigusi.22,23) Neeru proksimaalsete tuubulite kahjustus, mis on põhjustatud tsisplatiin on vähemalt osaliselt vahendatud suurenenud oksüdatiivse stressi ja põletiku kaudu.11) Seetõttu uurisime panduraat A mõju tsisplatiini toksilisusele nii loomadel kui ka rakukultuurides, kasutades RPTEC/TERT1 rakke. Samuti testisime, kas kaasravi panduraat A-ga mõjutab tsisplatiini vähivastast toimet inimese vähirakuliinides.
MATERJALID JA MEETODID
Kemikaalid Thiazolyl blue tetrazolium bromide (MTT), 2′,7′-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA), cisplatin, and compound C (AMP-activated protein kinase (AMPK) inhibitor) were purchased from Sigma-Aldrich (MO, U.S.A.). 3 H-1-Methyl-4-phenylpyridinium (3 H-MPP+) was purchased from PerkinElmer, Inc. (Bangkok, Thailand). Annexin V- fluorescein isothiocyanate (FITC) apoptosis detection kit was purchased from BD Biosciences (CA, U.S.A.). Primary antibodies for p-ERK1/2 (Cat. No. 9102S), ERK1/2 (Cat. No. 9101S), Bcl-2 (Cat. No. 2872T), caspase-3 (Cat. No. 9662S), glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) (Cat. No. 2118S), p-AMPKα (Cat. No.2531S), AMPKα (Cat. No. 5832S), Bax (Cat. No. 5023) and β-actin (Cat. No. 4970T) antibodies were obtained from Cell Signaling (MA, U.S.A.) and anti-neutrophil gelatinase-associated lipocalin (NGAL) antibody (Cat. No. STCSC-515876) was purchased from Santa Cruz Biotechnology (CA, U.S.A.). Pandurate A >HPLC-ga määratud 98-protsendiline puhtus eraldati Boesenbergia rotundast, nagu meie rühm on eelnevalt kirjeldanud.24) Boesenbergia rotunda risoomid koguti Kanchanaburist Taist. Taime tuvastas Tuanta Sematong. Vautšeri näidis (nr BKF 68909) on hoiule antud Bangkoki kuningliku metsanduse osakonda Forest Herbarium.
CISTANCHE PARANDAB NEERU/NEERU FUNKTSIOONI
LoomadIsased C57BL/6 hiired (8-nädalased) osteti ettevõttelt Nomura Siam International Co., Ltd. (Bangkok, Tai). Loomade hooldamise ja kasutamise protokolli nr MUSC61-063-464 on heaks kiitnud institutsionaalne loomade hooldamise ja kasutamise komitee, MUSC–IACUC. Hiirtel lasti toidule ja veele vabalt juurde pääseda. Pärast ühenädalast aklimatiseerumist jagati hiired juhuslikult ja neile manustati ravi järgmiselt: tavaline soolalahus ühe intraperitoneaalse (ip) süstiga 4. päeval (kontrollrühm); panduraat A (50 mg/kg kehamassi kohta (BW)) suukaudse sondiga 7 päeva jooksul (panduraat A rühm); tsisplatiini (20 mg/kg kehamassi kohta) ühe ip süstina 4. päeval (tsisplatiini rühm); panduraat A (50 mg/kg kehamassi/päevas) suukaudse sondiga 7 päeva jooksul ja tsisplatiini (20 mg/kg kehamassi kohta) ühe ip süstiga 4. päeval (kaasravi rühm). 7. päeval tuimastati hiired sügavalt tiopentaalnaatriumiga. Võeti veri ja tsentrifuugiti 10 minutit 3000 pm juures. Kogutud supernatante hoiti kuni -80 kraadi juuresneerufunktsioonmõõdeti.Neerudkoguti valgu ekspressioonide mõõtmiseks ja histopatoloogilisteks uuringuteks.
Neerufunktsiooni määramine ja histoloogiline uurimineNeerufunktsiooni määramiseks mõõdeti seerumi kreatiniini, kasutades Stanbio Creatinine Liquicolori (NY, USA) ja verekeemia analüsaatorit Licenza (Rooma, Itaalia). Tsisplatiinist põhjustatud neerutuubulite kahjustuse uurimiseks hiirneerudfikseeriti 4-protsendilises paraformaldehüüdis. Theneerudviilud värviti hematoksüliini ja eosiiniga (H&E), pildistati valgusmikroskoobiga. Neerutorukahjustuse hindamiseks kasutati torukujulise vigastuse protsenti: 0=torukujuline vigastus puudub 1=<10%; 2="10–25%;" 3="26–50%;" 4="51–75%;" 5="">75 protsenti. Slaidid hindas pimesi patoloog. Iga loomarühma keskmine skoor arvutati slaidi 10 erineva välja loendamisega.
RakuliinidRPTEC/TERT1 rakud, käärsoolevähi rakud (HCT116) ja mitteväikerakk-kopsuvähi rakud (A549) osteti ettevõttest American Type Culture Collection (VA, USA). Lühidalt, RPTEC/TERT1 rakke kultiveeriti täielikus Dulbecco modifitseeritud Eagle'i söötmes/F-12 söötmes (DMEM/F12), nagu eelnevalt kirjeldatud.25) HCT116 ja A549 rakke kasvatati vastavalt DMEM/F12 ja RPMI1640 söötmes, millele oli lisatud lisandit. penitsilliini-streptomütsiini antibiootikumidega ja 10-protsendilise veiseloote seerumiga (FBS). Rakke kultiveeriti 37 kraadi juures niisutatud atmosfääris, mis sisaldas 5 protsenti CO2 ja 95 protsenti O2.
Rakkude elujõulisuse test ja rakkude apoptoosi analüüsRakkude elujõulisuse määramiseks eksponeeriti RPTEC/TERT1 rakke 0,5 mg/mL MTT reagendiga 1 tunniks temperatuuril 37 °C. Reaktiivid eemaldati, moodustunud formazaani sool lahustati dimetüülsulfoksiidis (DMSO) ja tuvastati EnVision mikroplaadi lugeja neeldumissagedusel 570nm. Rakkude elujõulisust teatati protsendina kontrollist. Anneksiin V ja propiidiumjodiid (Raku apoptoosi määramiseks kasutati PI värvimisanalüüsi. Lühidalt, RPTEC/TERT1 rakud eraldati 0,25% trüpsiin-etüleendiamiintetraäädikhappega (EDTA). Rakususpensioone inkubeeriti anneksiin V-FITC ja PI-ga pimedas kl. 4 kraadi juures 15 minutit, millele järgnes kaks korda pesemine sidumispuhvriga Apoptootilised rakud loendati voolutsütomeetriga ja väljendati protsentides rakkude koguarvust.
Intratsellulaarse ROS-i akumulatsiooni hindamineROS tasemed määrati DCFH-DA testiga. RPTEC/TERT1 rakke inkubeeriti 10 uM DCFH-DA-ga ja inkubeeriti 30 minutit 37 kraadi juures. Järgmisena eemaldati DCFH-DA värv ja rakke pesti fosfaatpuhverdatud soolalahusega (PBS). Intratsellulaarset ROS-i taset mõõdeti ergastuse ja emissiooni jaoks vastavalt lainepikkustel 485 ja 530 nm. Intratsellulaarne ROS-i akumulatsioon on esitatud fluorestsentsi intensiivsuse protsendina kontrollrakkude suhtes.
CISTANCHE PARANDAB NEERU-/NEERUHAIGUST
Plaatina akumulatsiooni analüüsKogunenud plaatinat mõõdeti nii seeditud RPTEC / TERT1 rakkudes kui ka hiiresneerudUNICAM 989 QZ AA spektromeetriga (Geleen, Holland). Igale 100 µl proovile lisati kümme mikroliitrit 1% Triton X-100 ja 400 uL 1% lämmastikhapet. Seejärel inkubeeriti proove vähemalt 1 tund. Enne plaatina tuvastamist lahjendati iga proovi 10:1 1% lämmastikhappega. Plaatina kontsentratsioon arvutati plaatina standardkõvera lineaarse regressiooni abil, mis valmistati 2,5 mg/ml tsisplatiiniga, mis oli lahjendatud 1% lämmastikhappega. Plaatina arvutati kui ng/rakkude arv või ng/neerudkaal.
3H-MMP* sissevõtuanalüüs3H-MPP pluss omastamine RPTEC/TERT1 rakkudesse määrati meie eelmise meetodiga.25) Lühidalt, rakke pesti sooja transpordipuhvriga ja inkubeeriti veel 20 minutit. Rakkude monokihte inkubeeriti H-MPP plussiga (10 nM), millele järgnes pesemine jääkülma transpordipuhvriga. Proovid koguti ja H-MPP plusi radioaktiivne aktiivsus mõõdeti vedelikstsintillatsiooniloenduriga.
Western blot analüüsValgu ekspressioone töödeldi vastavalt meie eelmisele uuringule.26) Ekstraheeriti hiirest valgudneerudja RPTEC/TERT1 rakke tsentrifuugiti kiirusel 12000 p/min 20 minutit 4 kraadi juures. Võrdsed kogused rakkudest ja kudedest eraldatud valke denatureeriti ja eraldati 10-12% naatriumdodetsüülsulfaat-polüakrüülamiidi geelelektroforeesiga (SDS-PAGE). Proovid kanti nitrotselluloosmembraanidele, millele järgnes 1-tunnine mittespetsiifiline valgu blokeerimine, kasutades rasvavaba kuiva piima (5 protsenti). Membraane inkubeeriti primaarse antikehaga 24 tundi ja seejärel inkubeeriti sekundaarse antikehaga 1 tund. Valgu ekspressiooni intensiivsus tuvastati kemoluminestsents-HRP substraadi abil ja kvantifitseeriti ImageJ tarkvara abil.
Statistiline analüüsAndmed on väljendatud keskmisena ± standardhälbe (SD). Andmeid analüüsiti ühesuunalise ANOVA abil, kasutades Tukey posthoc teste (GraphPad Prism 8.0). Olulisus loetakse, kui p-väärtus on väiksem kui 0.05.
TULEMUSED Panduratiin A leevendab tsisplatiinist põhjustatud ägedat neeruhaigustVigastus Uurisime panduraadi A mõjuneerukahjustustsisplatiin põhjustatud hiirtel. Esmalt täheldasime üldist toksilisust, mõõtes hiirte kehakaalu muutust pärast ravi tavalise soolalahuse, panduraat A (50 mg / kg kehamassi kohta), tsisplatiini (20 mg / kg kehamassi kohta) ja nii tsisplatiini (20 mg / kg kehamassi kohta) kui ka panduraadiga. A (50 mg/kg kehamassi kohta). Leiti, et tsisplatiiniga ravitud hiirtel vähenes kehakaal. Kehakaalu langust leevendas kaasravi panduraat A-ga (joonis 1A). Võrreldes kontrolliga,neerufunktsioonmis mõõdeti seerumi kreatiniini taseme järgi, näitas, et hiirtel ravitud panduraat A üksi ei muutnud seerumi kreatiniini taset; arvestades, et tsisplatiiniga ravitud hiirtel oli seerumi kreatiniini tase märkimisväärselt tõusnud, mis viitab neerufunktsiooni kahjustusele. Seerumi kreatiniini tase panduraat A samaaegsel manustamisel langes oluliselt võrreldes tsisplatiiniga ravitud hiirtega (joonis 1B). Lisaks plaatina kogunemine sisseneerudkude ei erinenud märkimisväärselt ainult tsisplatiiniga ravitud hiirtel võrreldes hiirtega, keda raviti koos tsisplatiini ja panduraadiga A (joonis 1C). Need andmed näitavad, et panduraat A ei mõjutanud tsisplatiini sisaldust neerukoes. Theneerudmis saadi ainult vehiikuliga või panduraat A-ga ravitud hiirtelt, ei ilmnenud märkimisväärseid patoloogilisi muutusi. Kuid tsisplatiiniga töödeldud hiirtel esines rohkem tubulaarseid kahjustusi võrreldes kandjaga töödeldud hiirtega, mida näitavad degeneratsiooni ja deskvamatsiooni suurenemine, luminaalkihtide moodustumine, mononukleaarsete rakkude infiltratsioon, karüomegaalia, torudevaheline hemorraagia ja laienemine. Neid patoloogilisi muutusi nõrgendas oluliselt panduraat A samaaegne manustamine (joonis 2A, tabel 1). Määrati NGAL (nefrotoksilisuse biomarker) ja ERK1/2 ja lõhustatud kaspaas 3 (pro-apoptootilised valgud) ekspressioonitasemed. Meie uuring näitas, et tsisplatiiniga ravitud hiired suurendasid oluliselt NGAL, p-ERK1/2 ja lõhustatud kaspaas 3 ekspressiooni võrreldes kandjaga töödeldud hiirtega. Kaastöötlemine panduraat A-ga vähendas oluliselt neid tsisplatiinraviga indutseeritud valke (joonis 2B).
Panduraat A hoiab ära tsisplatiini poolt indutseeritud tsütotoksilisuse inimese neerude proksimaalsetes tubulaarrakkudes, inhibeerides apoptootilisi signaaliraduTsisplatiin (50 uM) tähendab RPTEC/TERT1 rakkude elujõulisuse vähenemist pärast 72-tunnist inkubeerimist. Huvitav on see, et kaastöötlemine panduraat A-ga (1 ja 5 µM) suurendas oluliselt rakkude elujõulisust (joonis 1).
3A). Panduratiin A kaitsev toime tsisplatiini tsütotoksilisuse vastu kinnitati raku apoptoosi mõõtmisega. Nagu oodatud, suurendas rakkude kokkupuude 50 uM tsisplatiiniga 48 tunni jooksul oluliselt RPTEC/TERT1 rakkude apoptoosi. Seda efekti nõrgendas panduraat A (joonis 3B). Uurisime, kas panduraat A mõju tsisplatiini toksilisusele eeldas AMPK aktiveerimist. Nagu on näidatud joonisel 3C, suurendas p-AMPK, AMPK aktiivse vormi, valgu ekspressiooni panduraat A, samas kui tsisplatiin seda vähendas. Lisaks määrati panduraat A kaitsev toime AMPK inhibeerimisel. Huvitav on see, et rakkude inkubeerimine 10 uM ühendiga C, AMPK inhibiitor, ei nõrgendanud panduraadi A kaitsvat toimet rakkude elujõulisusele (joonis 3D). Need tulemused näitavad, et panduraat A kaitsvat toimet võivad vahendada AMPK-st sõltumatud mehhanismid. Järgmisena uurisime panduraat A mõju teatud valkudele, mis osalevad tsisplatiini poolt indutseeritud raku apoptoosis. Nagu on näidatud joonisel fig 4, suurendas tsisplatiin märkimisväärselt pro-apoptootilisi valke p-ERK1/2 ja lõhustas kaspaasi 3. Tsisplatiin vähendas anti-apoptootilise valgu Bcl-2 ekspressiooni. Kaastöötlemine panduraat A-ga muutis nende valkude ekspressiooni. Kuna ROS on tsisplatiini poolt indutseeritud neerurakkude apoptoosiga seotud peamine tegur, 11, 27), määrasime panduratiin A mõju tsisplatiinist tingitud ROS-i akumulatsioonile. Tsisplatiin suurendas oluliselt ROS-i rakusisest taset. Huvitaval kombel vähendas panduratiin A oluliselt tsisplatiini poolt indutseeritud ROS-i akumulatsiooni.
Panduratiin A ei mõjuta tsisplatiini OCT2 akumulatsiooni rakusvahendab tsisplatiini transporti inimese neeru proksimaalsetesse tubulaarrakkudesse.289 Uurimaks võimalust, et panduratiin A vähendab tsisplatiini akumulatsiooni, mõõdeti OCT2 transpordifunktsiooni. Tulemused näitasid, et rakkude inkubeerimine 5 uM panduratiin A-ga 10 minutit ja 24 tundi ei mõjutanud OCT2 substraadi H-1-metüül-4-fenüülpüridiiniumi (H-MPP pluss) akumulatsiooni rakus. Järgmisena kinnitati panduratiin A mõju tsisplatiini rakkude akumulatsioonile. Panduratiin A-l ei olnud olulist mõju plaatina akumulatsioonile inimese neerurakkudes (joonis 5).
Panduratiin A kaitsev toime ei mõjuta tsisplatiini vähivastast toimetMäärati panduratiin A mõju tsisplatiini toksilisusele vähirakuliinides. HCT116 ja A549 rakkude, mis on vastavalt käärsoole- ja kopsuvähi rakuliinid, elujõulisus vähenes oluliselt 72 tundi pärast töötlemist tsisplatiiniga (50 μuM). Samaaegne ravi panduratiin A-ga (5 μM) ei vähendanud tsisplatiini tsütotoksilisust. Huvitaval kombel vähendas ka panduratiin A iseenesest
ARUTELU
Käesolev uuring näitab, et panduratiin A vähendab cis-platiini nefrotoksilisust, kahjustamata tsisplatiini vähivastast toimet käärsoole- ja mitteväikerakk-kopsuvähi rakuliinides. Näitasime, et kaasravi panduratiin A-ga nõrgendab ägedatneerukahjustustsisplatiini poolt põhjustatud hiirtel. Kuigi käesolev uuring näitab kaitsvat toimet tsisplatiini poolt indutseeritudneerukahjustus,panduratiin A esmane sihtmärk ei ole kindlaks tehtud. Panduratiin A võib aktiveerida AMPK neerude proksimaalsetes tubulaarrakkudes (joonis 3) ja teistes rakutüüpides.30-2) Näib ebatõenäoline, et panduratiin A kaitsev toime nõuab AMPK aktiveerimist, kuna tõendid näitasid, et AMPK inhibeerimine keemiliste inhibiitorite abil ei muutnud Pandu-reitingu A kaitsvat toimet. Panduratiin A parandas neerufunktsiooni, mida näitab seerumi kreatiniinisisalduse vähenemine. Tsisplatiini kahjustusega neerufunktsioon on korrelatsioonis neerutuubulite vigastustega, nagu degeneratsioon, luminaalkipsi moodustumine, hemorraagia ja laienemine. Neerutuubulite vigastuse tulemused korreleerusid hästi meie andmetega, mis näitavad NGAL-i ekspressiooni indutseerimistneerudtsisplatiiniga ravitud hiirte kude. Lisaks toetab neid tõendeid eelmine uuring, mis näitas, et NGAL ekspresseerub märkimisväärselt neerutuubulites pärast ägedatneerukahjustus3) Huvitaval kombel nõrgendas hiirte samaaegne ravi panduratiin A-ga tsisplatiinist põhjustatud neerutuubulite kahjustust. Histoloogiline analüüs näitas, et tsisplatiin suurendas mononukleaarsete rakkude infiltratsiooni ja panduratiin A kaotas selle toime. Need tulemused viitavad sellele, et panduratiin A, millel on varem näidatud põletikuvastane toime,24.3435) võib nõrgendada tsisplatiini põletikulist toimet neerukoes. MAPK aktiveerimine võib indutseerida rakusurma.2415)Meie tulemused näitasid, et tsisplatiin stimuleeris ERK1/2 ja kaspaas 3 aktivatsiooni. Panduratiin A nõrgestas nende valkude ekspressiooni.
Teatatud on mitmest tsisplatiini poolt indutseeritud nefrotoksilisusest (sealhulgas apoptoosist, oksüdatiivsest stressist ja põletikust) tingitud radadest.4 Kasutasime RPTEC/TERT1 rakuliini, et tuvastada panduratiin A mehhanismid, mis leevendavad tsisplatiini poolt põhjustatud toksilisust inimese neerude proksimaalsetes tubulaarrakkudes. RPTEC/TERT1 rakke on soovitatud kasutada ksenobiootikumide põhjustatud toksilisuse neerurakkude mudelina.36 Panduratiin A omab kaitsvat toimet tsisplatiini tsütotoksilisuse suhtes, mida näitab RPTEC/TERT1 raku apoptoosi vähenemine. Tsisplatiini toksilisuse mehhanismid neerude proksimaalsetes tubulaarrakkudes on keerulised. ERK1/2 ja kaspaas 3 aktiveerimine ja Bcl{10}} vähenemine on seotud tsisplatiinist tingitud neerurakkude apoptoosiga.373) Kooskõlas varasemate uuringutega näitas käesolev uuring, et tsisplatiin suurendab p-ERK1/2 ja lõhustatud kaspaasi ekspressiooni. 3 ja vähendab Bcl-2 avaldist. Meie tulemused näitavad, et panduratiin A pärsib tsisplatiini poolt indutseeritud apoptootilisi signaalvalke, p-ERK1/2 ja lõhustatud kaspaas 3, ning säilitab apoptootilise valgu. Bcl-2. Lisaks ERK1/2 ja kaspaas 3 aktiveerimisele on tsisplatiinist tingitud neerurakkude apoptoosi võtmetegur suurenenud rakusisene ROS-i akumulatsioon.139Eelmises uuringus teatati, et panduratiin A kaitseb hepatotsüütides oksüdatiivsete kahjustuste eest, vähendades reaktiivsetest põhjustatud rakusisest ROS-i moodustumist. vaheühendid.4 ROS-i akumulatsiooni vähenemist pärast ravi panduratiin A-ga võib vahendada kas ROS-i tootmise pärssimine või ROS-i eemaldamise reaktsiooni suurenemine. Me teatasime, et panduratiin A suurendas glutatiooni taset, ROS-i eemaldavat molekuli, mis võib vähendada ROS-i akumuleerumist neerukoes (vt lisamaterjale). Kuid me ei välista, et ROS-i vähendamisega on seotud ka muud mehhanismid. Meie tulemused näitasid, et panduratiin A vähendab rakusisest ROS-i akumulatsiooni, mis aitab kaasa panduratiin A kaitsvale toimele. Tsisplatiini rakusisene tase on peamine tegur, mis mõjutab tsisplatiini põhjustatud toksilisuse raskust. On teatatud, et neerutransporterid, nagu OCT2, vase transporterid ning mitme ravimi ja toksiini väljapressimise transporter-1 (MATE1), aitavad kaasa tsisplatiini transpordile.4) Tsisplatiini transporti neerude proksimaalsetesse tubulaarrakkudesse vahendab aga peamiselt OCT2. On näidatud, et ÜMTde pärssimine nõrgendab tsisplatiini poolt põhjustatud neerutoksilisust nii kultiveeritud neerurakkudes kui ka loomades. 发 9,42） Siiski näib tõenäoline, et panduratiin A ei mõjuta OCT2 transpordifunktsiooni ega tsisplatiini kuhjumist, mis viitab panduratiin A kaitsvale toimele. tsisplatiini toksilisust ei vahenda tsisplatiini transpordi või akumulatsiooni vähenemine.
CISTANCHE PARANDAB NEERU/NEERU VALU
Panduratiin A-l on neerurakkude apoptoosi pärssimise kaudu renoprotektiivne toime. Kui panduratiin A pärssis ka vähirakkude apoptoosi, vähendaks see keemiaravi efektiivsust. Seetõttu testisime, kas panduratiin A vähendab tsisplatiini vähivastast toimet. Oluline on see, et samaaegne ravi Pandu-reitinguga A ei muuda tsisplatiini vähivastast toimet ei käärsoole ega mitteväike kopsurakulise vähirakkude puhul. Pealegi on panduratiin A ise toksiline mõlemale vähirakuliinile. Tulemused näitavad, et panduratiin A toime on selektiivne, mõjutades normaalseid neerurakke ja vähirakke erinevalt. Ehkki pan-kestvus A võib olla hea vahend tsisplatiinist põhjustatud nefrotoksilisuse ennetamiseks, tuleks tulevikus uurida teavet panduratiin A farmakoloogiliste toimete kohta ksenotransplantaadi mudelis kliiniliselt olulisena.
KOKKUVÕTE
Meie käesolev uuring näitas, et panduratiin A annab märkimisväärse kaitsva toime tsisplatiini nefrotoksilisusele, vähendades oksüdatiivset stressi ja inhibeerides ERK1/2 ja kaspaas 3 aktivatsioone. Panduratiin A kaitsev toime ei muutnud tsisplatiini vähivastast toimet vähirakkudes. Kuigi mõne kahjustava sündmuse blokeerimisel võib olla ainult osaline renoprotektiivne toime, võib panduratiin A olla hea kandidaataine tsisplatiini nefrotoksilisuse leevendamiseks, kuna see vähendab tsisplatiini toksilisust mitme mehhanismi kaudu.
