Oenothera Biennise propageeriv toime vananevatele naha fibroblastidele, 2. osa

3. Arutelu

Selles uuringus uurisime hüdrofiilse Oenothera biennis rakuekstrakti (ObHEx) mõju rakkude vananemisele, kuna see näitas in vitro ja ex vivo mudelites testimisel naha vananemisvastaseid omadusi [18]. Kasutasime H2O2-ga töötlemiseks sarnast NHDF-i vananevat mudelit, mis allutati SIPS-ile [21, 22].

Tistanche glükosiid võib samuti suurendada SOD aktiivsust südame- ja maksakudedes ning oluliselt vähendada lipofustsiini ja MDA sisaldust igas koes, eemaldades tõhusalt erinevaid reaktiivseid hapnikuradikaale (OH-, H2O₂ jne) ja kaitstes tekitatud DNA kahjustuste eest. OH-radikaalide poolt. Tsistanche fenüületanoidglükosiididel on tugev vabade radikaalide eemaldamisvõime, suurem redutseerimisvõime kui C-vitamiinil, nad parandavad SOD aktiivsust sperma suspensioonis, vähendavad MDA sisaldust ja omavad teatud kaitset sperma membraani funktsioonile. Tsistanche polüsahhariidid võivad suurendada SOD ja GSH-Px aktiivsust D-galaktoosi poolt põhjustatud eksperimentaalselt vananevate hiirte erütrotsüütides ja kopsukudedes, samuti vähendada MDA ja kollageeni sisaldust kopsudes ja plasmas ning suurendada elastiini sisaldust. hea puhastav toime DPPH-le, pikendab hüpoksia aega vananevatel hiirtel, parandab SOD aktiivsust seerumis ja aeglustab eksperimentaalselt vananevatel hiirtel kopsude füsioloogilist degeneratsiooni Raku morfoloogilise degeneratsiooniga on katsed näidanud, et Cistanche'il on hea antioksüdantne võime ja sellel on potentsiaal olla ravim naha vananemishaiguste ennetamiseks ja raviks. Samal ajal on Cistanche ehhinakosiidil märkimisväärne võime eemaldada DPPH vabu radikaale ja reaktiivseid hapniku liike ning takistada vabade radikaalide teket.

indutseerib kollageeni lagunemist ja sellel on ka hea parandav toime tümiini vabade radikaalide anioonide kahjustustele.

Klõpsake valikul Kust Cistanche'i osta saab

【Lisateabe saamiseks:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

ObHExi toimemehhanismi mõistmiseks vananevatel inimese naha fibroblastidel, avalikustades ekstrakti poolt muudetud bioloogilised radad, teostasime andmetest sõltumatu massispektromeetria ülisügava proteoomilise lähenemisviisi. See võimaldas meil saada seni kõige täielikumat vananevate rakkude proteoomianalüüsi ja esimest korda arvukate vananemismarkerite samaaegset kvantifitseerimist.

Esiteks, selleks, et hinnata vananemise esilekutsumist H2O2-ga töötlemisega NHFD rakkudel, kvantifitseerisime teadaolevad vananemismarkerid. Meie proteoomikaandmed kinnitasid vananemise indutseerimist oksüdatiivse stressi poolt: tõepoolest, me täheldasime juba teadaolevate vananemismarkerite muutunud tasemeid, mis olid seotud suurenenud lüsosomaalse sisalduse (GLB1 ja FUCA1), DNA kahjustuste (ATR, ATM, MACROH2A1 ja MACRO2A2) ja G2 faasi rakutsükliga. arreteerimine (CDK1NA ja MKI67). Veelgi enam, H2O2-ga töödeldud ja kontrollrakkude kõige allareguleeritud valkude raja rikastamise analüüs viitab mitoosile, mis peegeldab vananevat proliferatsiooni peatamist.

Võrreldes ObHExiga töödeldud SIPS NHDF rakkude proteoomi ja töötlemata rakkude proteoomi, leidsime, et ekstraktiga töötlemine suutis osaliselt taastada valkude ja komplekside tasemed, mis mängivad mitoosi mitmes etapis olulist rolli. ObHExi inkubeerimine suurendas CDK1 taset, mis on peamine mitootiline valk, mis käivitab mitoosi sisenemise, moodustades kompleksi tsükliin B-ga [34]. Lisaks olid kondensiini I kompleksi kõik viis subühikut ülesreguleeritud. See kompleks koosneb kahest kromosoomide (SMC) allüksusest, SMC2 ja SMC4, ning kolmest mitte-SMC subühikust, NCAPD2, NCAPH ja NCAPG. Prometafaasis on kondensiini I kompleksi ülesanne soodustada kromosoomide kondenseerumist, viies DNA-sse ATP-sõltuval viisil positiivsed superspiraalid [35]. Lisaks sellele reguleeris ekstrakt üles KNTC1, NUF2 ja TRIP13, mis on kolm valku, mis on seotud kinetokooriga, mis on suur kompleks, mis prometafaasi ajal ühendab tsentromeerse kromatiini spindli vastaspooluste mikrotuubulitega, et soodustada õdekromatiidide eraldamist. 36,37]. Samuti on tuvastatud MCM-valkude taseme osaline taastumine. Need valgud on replikatsioonihelikaasi kompleksi keskmes, mis kerib lahti kaheahelalise DNA, et saada üheahelalisi DNA polümeraasi malle. MCM-kompleks muundatakse S-faasi ajal aktiivseks helikaasiks, kuid telofaasi ajal laetakse see juba kromatiini [38, 39]. Ekstrakt suurendas ka IQGAP3, PBK ja DHFR taset. Esimene, IQGAP3, on mitootilise progresseerumise oluline regulaator, kuna see soodustab cdk7 aktiivsust, mis on oluline Cdc2 aktiveerimiseks [40,41]; PBK on kinaas, mis on aktiivne ainult mitoosi korral; fosforüülituna interakteerub see p53-ga, destabiliseerides seda ja nõrgestades DNA kahjustuste rada [42]; ja DHFR on DNA biosünteesi võtmeensüüm, mille tase on inimese vananevates fibroblastides märgatavalt nõrgenenud [43].

Bio-ortogonaalsed testid näitasid ka ObHExi võimet osaliselt taastada vananemise tunnuseid, nimelt lüsosomaalset aktiivsust ja rakutsükli peatamist. Tõepoolest, et kontrollida, kas mitootilise valgu ekspressiooni taastamine ObHExi poolt tähendab rakutsükli taasaktiveerimist, teostasime FACS-i (fluorestsents aktiveeritud rakusorteerimine) katsed SIPS NHDF rakkudega, mida oli töödeldud ekstraktiga või mitte. Nad näitasid, et ObHEx suutis vähendada G2 faasis blokeeritud rakkude osa ja soodustada nende taassisenemist vananevate rakkude rakutsüklisse.

4. Materjalid ja meetodid

4.1. Rakukultuur

Normaalseid inimese dermaalseid fibroblaste (NHDF; Promocell) kasvatati Dulbecco modifitseeritud kotkasöötmes (DMEM; Gibco), millele oli lisatud 10 protsenti veise loote seerumit (FBS; Gibco) ja 500 U/ml penitsilliini-streptomütsiini (Gibco õhk) 95 protsenti. , 5 protsenti CO2 ja niisutatud atmosfäär 37 ◦C juures.

4.2. Stress-indutseeritud enneaegse vananemise esilekutsumine (SIPS)

Igasse 60 mm rakukultuuri tassi külvati kokku 10 1200 000 NHDF-rakud, üks päev enne nende inkubeerimist 100 µM H2O2-ga temperatuuril 37 ◦C 2 tundi [21,22]. Seejärel pesti H202 töötlemise lõpetamiseks fosfaatpuhverdatud soolalahusega (PBS; Gibco) ja rakke kasvatati normaalses söötmes 4 päeva. Kontrollina kasutatud mittevananevate rakkude jaoks külvati 2240 000 NHDF rakud igasse 60 mm rakukultuuri tassi. Katse viidi läbi 5 bioloogilises korduses.

4.3. Oenothera Biennis hüdrofiilse ekstrakti (ObHEx) preparaat

Ekstrakt valmistati Arterra Bioscience SpA laborites [18]. Rakukultuurid saadi Oenothera biennis taimede lehtedest (pakkuja GEEL Floricultura ss), indutseerides meristemaatiliste rakkude proliferatsiooni tahketel agarplaatidel kuni saadud kalluseni. Rakud viidi üle vedelasse kasvusöötmesse (Gamborg B5, millele oli lisatud 2,4-diklorofenoksüäädikhapet (1 mg/L), adeniini (1 mg/L) ja kinetiini (0,01 mg/L). )) ja kasvatatud suspensioonkultuuridena orbitaalsel loksutamisel. Kui saadi umbes 150 g/l kultuurid, koguti rakud ja lüüsiti PBS-is pH väärtusel 7,4, et valmistada vees lahustuv ekstrakt. Pärast lüofiliseerimist lahustati saadud pulber vees või rakukultuurisöötmes testimiseks sobivates kontsentratsioonides.

4.4. Oenothera Biennis hüdrofiilse ekstrakti (ObHEx) ravi

NHDF rakke inkubeeriti 24 tundi 0.01% (p/v) ObHEx-ga täielikus söötmes. Seejärel pesti rakke kolm korda PBS-ga ja töödeldi veel 24 tundi 0,01% (p/v) ObHEx-ga seerumivabas söötmes. Seejärel eraldati need trüpsiiniga, tsentrifuugiti 500 g juures 10 minutit temperatuuril 4 °C ja pesti kaks korda PBS-ga. Töötlemata kontrollrakud läbisid samad inkubatsioonid ilma ObHExita.

4.5. Proovi ettevalmistamine proteoomiliseks analüüsiks

Pelletid resuspendeeriti 60µl radioimmunosadestamise testi (RIPA) puhvris ja lüüsiti ultraheliga töötlemisega. Rakulüsaatide valgu kontsentratsioon kvantifitseeriti, kasutades DC™ valguanalüüsi komplekti (Biorad; #5000112). S-TrapTM mikrotsentrifuugimiskolonnis (Protifi, Huntington, CA, USA) seedimine viidi läbi 50 µg rakulüsaatidega vastavalt tootja juhistele. Lühidalt öeldes redutseeriti proove 20 mM tris(2- karboksüetüül)fosfiiniga (TCEP) ja alküüliti 50 mM tioatseetamiidiga (CAA) 15 minutit toatemperatuuril. Seejärel lisati fosforhappe vesilahus lõppkontsentratsioonini 2,5%, millele järgnes S-Trap sidumispuhver (90% metanooli vesilahus, 100 mM TEAB, pH 7,1). Seejärel laaditi segud S-Trap kolonnidele. SDS-i põhjalikuks eemaldamiseks viidi läbi viis täiendavat pesemisetappi. Seejärel seediti rakulüsaate 2,5 µg trüpsiiniga (Promega) temperatuuril 47 °C 1 tund. Pärast elueerimist peptiidid kuivatati vaakumis, resuspendeeriti 2% ACN-s, 0,1% FA-s ja kvantifitseeriti Nanodropi abil.

4.6. nanoLC-MS/MS valgu identifitseerimine ja kvantifitseerimine

Kokku 400 ng igast proovist süstiti nanoplaadile (Bruker Daltonics, Bremen, Saksamaa) kõrgsurvevedelikkromatograafia (HPLC) süsteemile, mis oli ühendatud timsTOF Pro-ga (Bruker Daltonics, Bremen). , Saksamaa) massispektromeeter. HPLC eraldamine (lahusti A: {{30}},1 protsenti sipelghapet vees; lahusti B: 0,1 protsenti sipelghapet atsetonitriilis) viidi läbi kiirusel 250 l/min, kasutades täidetud emitterkolonni (C18, 25 cm × 75 µm 1,6 µm) (Ion Optics, Fitzroy, Austraalia), kasutades gradientelueerimist (2–13 protsenti lahustit B 41 minuti jooksul; 13–20 protsenti 23 minuti jooksul; 20–30 protsenti 5 minuti jooksul; 30 protsenti kuni 85 protsenti 5 minutiks ja lõpuks 85 protsenti 5 minutiks kolonni pesemiseks). Massispektromeetrilised andmed saadi andmetest sõltumatu analüüsi paralleelse akumulatsiooni jada killustamise (diaPASEF) hankimise meetodil. Mähkmete seaded olid järgmised: massivahemik 400–1200 Da, liikuvus vahemikus 0,60–1.43 1/k0, liikuvusakna arv 1, tsükliaja hinnanguline pikkus 1,79 s, massisammud tsükli kohta 32.

4.7. MS andmetöötluse ja bioinformaatika analüüs

Andmete analüüs viidi läbi DIA-NN tarkvara abil (versioon 1.8) [44]. Inimese UniProtKB/Swiss-Prot Homo sapiens andmebaasi (väljalase veebruar 2021, 20 408 kirjet) otsing viidi läbi teegivaba töövoo abil. Sel eesmärgil kontrolliti eelkäijaioonide genereerimiseks valikuid "FASTA kokkuvõte raamatukogu tasuta otsinguks/teegi genereerimiseks" ja "Sügava õppimise spektrid, RT-d ja IM-ide prognoosimine". Lubatud oli maksimaalselt 2 vahelejäänud trüpsiini lõhustamist ja maksimaalseks muutuvaks modifikatsiooniks määrati 5. Karbamidometüülimine (Cys) määrati fikseeritud modifikatsiooniks, samas kui valgu N-otsa metioniini ekstsisioon, metioniini oksüdatsioon ja N-terminaalne atsetüülimine määrati muutuvaks. modifikatsioonid. Peptiidi pikkusvahemikuks määrati 7–30 aminohapet, prekursori laenguvahemik 2–4, prekursori m/z vahemik 300–1800 ja fragmendi iooni m/z vahemik 200–1800. Algmassi ja fragmendi ioonide otsimiseks järeldas DIA-NN automaatselt täpsust ja määrati iga analüüsi jaoks umbes 13 ppm. Valkude ja peptiidide tasemete valede avastamise määrad (FDR-id) määrati 1 protsendile. Lubatud oli matš jooksude vahel. Kvantifitseerimisstrateegia jaoks kasutati Robust LC (kõrge täpsusega), nagu on nõutud tarkvara dokumentatsioonis, samas kui muude algoritmi parameetrite jaoks säilitati vaikesätted.

Statistiline ja bioinformaatiline analüüs viidi läbi Perseuse tarkvaraga (versioon 1.6.15), mis on veebisaidil vabalt saadaval (kasutatud 22. juunil 2021) [45] ning R/R Studio ja RStudio versiooniga 20 21.09.1 30 (vaadatud 12. novembril 2021). Kogu R statistiline analüüs viidi läbi R statistika paketi abil. Kasutati DIA-NN pg aruande maatriksi väljundit ja statistilise analüüsi jaoks teisendati intensiivsused log2. Statistilise võrdluse jaoks määrasime neli rühma, millest igaüks sisaldab 5 bioloogilist kordust. Seejärel filtreerisime andmed, et hoida vähemalt ühes rühmas ainult vähemalt 3 kehtiva väärtusega valke. Järgmisena imputeeriti andmed puuduvate andmepunktide täitmiseks, luues juhuslike arvude Gaussi jaotuse standardhälbega 33 protsenti mõõdetud väärtuste standardhälbest ja 1,8 standardhälbega keskmise nihkega, et simuleerida madalate arvude jaotust. signaali väärtused. Studenti t-test viidi läbi vahemikus SEN ja CTRL FDR < 0,05, S0=0.1, et kinnitada vananemisele spetsiifiliste markerite olemasolu. Seejärel uuriti, kas efekti suuruse erinevus ravi puudumise või olemasolu vahel on sama rakkude puhul, kus vananemine indutseeriti või mitte, uuriti mõlema teguri (st induktsiooni ja ravi) vahelist koostoimet kahesuunalise ANOVA abil. aastal R. Seejärel kohandati mõlema teguri koostoime kohta saadud p-väärtusi mitmekordseks testimiseks, kasutades Benjamini-Hochbergi [46] meetodit valetuvastussageduse (FDR) kontrollimiseks. Lõpuks viidi läbi Tukey HSD post hoc analüüs valkudega, mille q-väärtus oli < 0, 05. Massispektromeetria proteoomika andmed on talletatud ProteomeXchange konsortsiumi PRIDE [47] partnerhoidla kaudu andmestiku identifikaatoriga PXD034222.

4.8. Vananemisega seotud ß-galaktosidaasi värvimine

Vananemisega seotud ß-galaktosidaasi (SA-ß-gal) aktiivsust hinnati Cell Signaling Technology värvimiskomplekti (#9860) abil. Kokku 1250 000 NHDF rakud süvendi kohta külvati 6-süvendi plaadile üks päev enne SIPS-i; samas kui kontrollina 250 000 lahtrit süvendi kohta. Pärast 4 päeva normaalses söötmes inkubeeriti rakke 48 tundi 0,01% (p/v) ObHEx-ga või mitte. Seejärel pesti neid PBS-ga ja töödeldi fikseeriva lahusega 15 minutit. Pärast kahte pesemist PBS-iga inkubeeriti rakke ß-gal värvimislahusega (lõplik pH 6,0), mis sisaldas 5-bromo-4-kloro-3-indolüül- -D-galakto. -püranosiid (X-Gal) temperatuuril 37 ◦C kuivas inkubaatoris 20 tundi. Positiivsed rakud on sinised. Värvus on tingitud X-Gal lõhustumisest galaktoosis ja 5-bromo-4-kloro-3-indoksüülis (X) SA-ß-gal poolt. Indoksüül oksüdeeritakse 5,50 -dibromo-4,40 -dikloro-indigoks, mis moodustab intensiivse sinise sademe. Positiivsete rakkude protsenti rakkude koguarvust hinnati, loendades 100–150 rakku 5 juhuslikult valitud pildil, mis jäädvustati mikroskoobiga iga seisundi kohta. Rakud loendati ImageJ tarkvara abil. Katse viidi läbi kolmes eksemplaris.

4.9. Fluorestsents-aktiveeritud rakkude sorteerimise analüüs

Kokku {{0}} NHDF rakku süvendi kohta külvati 6-süvendiga plaadile üks päev enne SIPS-i; samas kui kontrollelemendina 50 000 lahtrit süvendi kohta. Pärast 4 päeva normaalses söötmes töödeldi kontroll- ja vananevaid rakke 72 tundi 0,01% (p/v) ObHEx-ga või mitte. Seejärel inkubeeriti rakke 5 µg/ml Hoechst 33342 juuresolekul 30 minutit temperatuuril 37 °C. Pärast trüpsiinimist ja 2-minutilist 500 g juures tsentrifuugimist resuspendeeriti need 200 µl PBS-is. Lõpuks mõõdeti rakkude fluorestsentsi BD LSRFortessa rakuanalüsaatoriga. Andmeid analüüsiti FlowJo tarkvara v10.8.1 abil. Katse viidi läbi kolmes eksemplaris.

5. Kokkuvõtted

Siin saadud sügava vananemisega seotud globaalne proteoomiprofiil pakub sadu SIPS-i poolt dereguleeritud valke, mida teadusringkond saab kasutada vananemise edasiseks mõistmiseks ja uute potentsiaalsete modulaatorite mõju hindamiseks. Veelgi enam, meie töö tõestab ObHExi pro-mitootilist toimemehhanismi vananevatele inimese naha fibroblastidele: mitootilise valgu ekspressiooni suurenemise kaudu soodustab see vananevate rakkude proliferatsiooni taastamist. Seega pakume nende tulemuste põhjal ObHExi kui võimsat abiainet naha vananemisega seotud vananemise vastu.

Autori kaastööd:Kontseptualiseerimine, SC, MCM ja ICG; metoodika, SC, KR, IM, CC (Cerina Chhuon) ja ICG; tarkvara, KR; uurimine, SC, IM, CC (Cerina Chhuon), KT, SF, ADL, IP ja CC (Corinne Cordier); ressursid, MCM ja ICG; kirjutamine – algse mustandi ettevalmistamine, SC ja ICG; kirjutamine – ülevaatamine ja toimetamine, SC, MCM ja ICG Kõik autorid on käsikirja avaldatud versiooni läbi lugenud ja sellega nõustunud.

Andmete kättesaadavuse avaldus:Massispektromeetria proteoomika andmed on PRIDE [47] partnerihoidla kaudu deponeeritud ProteomeXchange Consortium andmestiku identifikaatoriga PXD034222 (ülevaataja konto üksikasjad: kasutajanimi: arvustaja_pxd034222@ebi.ac.uk; parool: fK9Pjv .

Tänuavaldused: Seda uuringut toetas Programma Operativo Complementare Ricerca e Innovazione 2014–2020, Asse I "Capitale Umano", Azione I.1 "Dottorati Innovativi con caratterizzazione Industriale". Täname teisi Proteomics platvormi liikmeid Necker Vincent Jungi ja Joanna Lipeckat nende hindamatu teadusliku toetuse ja viljakate ettepanekute eest.

Viited

1. Di Micco, R.; Križanovski, V.; Baker, D.; d'Adda di Fagagna, F. Cellular Senescence in Ageing: From Mechanisms to Therapeutic Opportunities. Nat. Rev Mol. Cell Biol. 2021, 22, 75–95. [CrossRef] [PubMed]

2. González-Gualda, E.; Baker, AG; Fruk, L.; Muñoz-Espín, D. Juhend raku vananemise hindamiseks in vitro ja in vivo. FEBS J. 2021, 288, 56–80. [CrossRef] [PubMed]

3. Sikora, E.; Bielak- ˙Zmijewska, A.; Mosieniak, G. Mis on ja mis ei ole rakkude vananemine. Postepy Biochem. 2018, 64, 110–118. [CrossRef] [PubMed]

4. Choi, E.-J.; Kil, IS; Cho, E.-G. Vananevatest fibroblastidest saadud ekstratsellulaarsed vesiikulid nõrgendavad naha mõju keratinotsüütide diferentseerumisele. Int. J. Mol. Sci. 2020, 21, 1022. [CrossRef] [PubMed]

5. Krtolica, A.; Parrinello, S.; Lockett, S.; Desprez, PY; Campisi, J. Vananevad fibroblastid soodustavad epiteelirakkude kasvu ja kasvaja teket: seos vähi ja vananemise vahel. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2001, 98, 12072–12077. [CrossRef]

6. Wlaschek, M.; Maity, P.; Makrantonaki, E.; Scharffetter-Kochanek, K. Sidekoe ja fibroblastide vananemine naha vananemises. J. Invest. Dermatol. 2021, 141, 985–992. [CrossRef]

7. Paez-Ribes, M.; González-Gualda, E.; Doherty, GJ; Muñoz-Espín, D. Targeting Senescent Cells in Translational Medicine. EMBO Mol. Med. 2019, 11, e10234. [CrossRef]

8. Soto-Gamez, A.; Demaria, M. Terapeutilised sekkumised vananemise vastu: raku vananemise juhtum. Drug Discov. Täna 2017, 22, 786–795. [CrossRef]

9. Latorre, E.; Birar, VC; Sheerin, AN; Jeynes, JCC; Hooper, A.; Dawe, HR; Melzer, D.; Cox, LS; Faragher, RGA; Ostler, EL; et al. Splaissimisfaktori ekspressiooni väikemolekulaarne modulatsioon on seotud raku vananemisest päästmisega. BMC Cell Biol. 2017, 18, 31. [CrossRef]

10. Munir, R.; Semmar, N.; Farman, M.; Ahmad, NS Ajakohastatud ülevaade õhtuse priimula (perekond Oenothera) farmakoloogilisest tegevusest ja fütokeemilistest koostisosadest. Aasia Pac. J. Trop. Biomed. 2017, 7, 1046–1054. [CrossRef]

11. Timoszuk, M.; Bielawska, K.; Skrzydlewska, E. Õhtune priimula (Oenothera biennis) keemilisest koostisest sõltuv bioloogiline aktiivsus. Antioksüdandid 2018, 7, 108. [CrossRef]

12. Lee, SY; Kim, CH; Hwang, BS; Choi, K.-M.; Yang, I.-J.; Kim, G.-Y.; Choi, YH; Park, C.; Jeong, J.-W. Oenothera Biennise kaitsev toime vesinikperoksiidist põhjustatud oksüdatiivse stressi ja rakusurma vastu naha keratinotsüütides. Elu 2020, 10, 255. [CrossRef]

13. Granica, S.; Czerwi ´nska, ME; Piwowarski, JP; Ziaja, M.; Kiss, AK Pärast seemnete kasvatamist saadud Oenothera Biennis L. ja Oenothera Paradoxa Hudzioki õhust osadest valmistatud ekstraktide keemiline koostis, antioksüdatiivne ja põletikuvastane toime. J. Agric. Food Chem. 2013, 61, 801–810. [CrossRef]

14. Fecker, R.; Buda, V.; Alexa, E.; Avram, S.; Pavel, IZ; Muntean, D.; Cocan, I.; Watz, C.; Minda, D.; Dehelean, CA; et al. Oenothera Biennis L. hüdroalkohoolse ekstrakti fütokeemiline ja bioloogiline sõelumine. Biomolecules 2020, 10, 818. [CrossRef]

15. Schäfer, L.; Kragballe, K. Lisandid õhtuse priimulaõliga atoopilise dermatiidi korral: mõju rasvhapetele neutrofiilides ja epidermises. Lipids 1991, 26, 557–560. [CrossRef]

16. Barbulova, A.; Apone, F.; Colucci, G. Taimerakukultuurid kui kosmeetikatoodete toimeainete allikas. Kosmeetika 2014, 1, 94–104. [CrossRef]

17. Caesar, LK; Cech, NB Sünergia ja antagonism looduslikes tooteekstraktides: kui 1 pluss 1 ei võrdu 2. Nat. Prod. Vabariik 2019, 36, 869–888. [CrossRef]

18. Cecccacci, S.; De Lucia, A.; Tito, A.; Tortora, A.; Falanga, D.; Arciello, S.; Ausanio, G.; Di Cicco, C.; Monti, MC; Apone, F. An Oenothera Biennis rakukultuuride ekstrakt, millel on naha vananemisvastane toime, parandab raku mehaanilisi omadusi. Metaboliidid 2021, 11, 527. [CrossRef]

19. Farwick, M.; Köhler, T.; Schild, J.; Mentel, M.; Maczkiewitz, U.; Pagani, V.; Bonfigli, A.; Rigano, L.; Bureik, D.; Gauglitz, GG Pentatsüklilised triterpeenid firmast Terminalia Arjuna näitavad mitmeid eeliseid vananenud ja kuivale nahale. Skin Pharmacol. Physiol. 2014, 27, 71–81. [CrossRef]

20. Bonte, F.; Dumas, M.; Chaudagne, C.; Meybeck, A. Asiatic Acid, Madecassic Acid ja Asiaticoside mõju inimese kollageeni I sünteesile. Planta Med. 1994, 60, 133–135. [CrossRef]

21. Chowdhary, S. Oksüdatiivse stressi mõju inimese fibroblastide vananemise esilekutsumisele. J. Lõuna-Carol. Acad. Sci. 2018, 16, 2.

22. Wang, Z.; Wei, D.; Xiao, H. Rakulise vananemise induktsiooni meetodid oksüdatiivse stressi abil. Meetodid Mol. Biol. 2013, 1048, 135–144. [PubMed]

23. Hildebrand, peadirektoraat; Lehle, S.; Borst, A.; Haferkamp, ​​S.; Essmann, F.; Schulze-Osthoff, K. - Fukosidaas kui uudne mugav biomarker raku vananemise jaoks. Lahtritsükkel 2013, 12, 1922–1927. [CrossRef] [PubMed]

24. Lee, BY; Han, JA; ma, JS; Morrone, A.; Johung, K.; Goodwin, EC; Kleijer, WJ; DiMaio, D.; Hwang, ES vananemisega seotud beeta-galaktosidaas on lüsosomaalne beeta-galaktosidaas. Aging Cell 2006, 5, 187–195. [CrossRef] [PubMed]

25. Gorgoulis, V.; Adams, PD; Alimonti, A.; Bennett, DC; Bischof, O.; piiskop, C.; Campisi, J.; Collado, M.; Evangelou, K.; Ferbeyre, G.; et al. Raku vananemine: edasisuunamise tee määratlemine. Cell 2019, 179, 813–827. [CrossRef]

26. Matsuoka, S.; Ballif, BA; Smogorzewska, A.; McDonald, ER; Hurov, KE; Luo, J.; Bakalarski, CE; Zhao, Z.; Solimini, N.; Lerenthal, Y.; et al. ATM ja ATR substraadi analüüs paljastab ulatuslikud valguvõrgud, mis reageerivad DNA kahjustustele. Teadus 2007, 316, 1160–1166. [CrossRef]

27. Zhang, R.; Chen, W.; Adams, PD Molecular Dissection of Formation of Senescence-Associated Heterokromatin Foci. Mol. Cell Biol. 2007, 27, 2343–2358. [CrossRef]

28. LaBaer, ​​J.; Garrett, MD; Stevenson, LF; Slingerland, JM; Sandhu, C.; Chou, HS; Fattaey, A.; Harlow, E. CDK inhibiitorite P21 perekonna uued funktsionaalsed tegevused. Genes Dev. 1997, 11, 847–862. [CrossRef]

29. Scholzen, T.; Gerdes, J. Ki-67 valk: tuntud ja tundmatust. J. Cell Physiol. 2000, 182, 311–322. [CrossRef]

30. Passos, JF; von Zglinicki, T. Methods for Cell Sorting of Young and Senescent Cells. Meetodid Mol. Biol. 2007, 371, 33–44.

31. Dai, Y.; Tang, H.; Pang, S. Fosfolipiidide otsustav roll vananemises ja eluea reguleerimises. Esiosa. Physiol. 2021, 12, 1998. [CrossRef]

32. Dashty, M. Hedgehog Signaling Pathway on seotud vanusega seotud haigustega. J. Diabetes Metab. 2014, 5, 2. [CrossRef]

33. Wang, D.; Lu, P.; Liu, Y.; Chen, L.; Zhang, R.; Sui, W.; Dumitru, AG; Chen, X.; Wen, F.; Ouyang, H.-W.; et al. Elusate enneaegsete vananevate rakkude eraldamine FUCCI tehnoloogia abil. Sci. Vabariik 2016, 6, 30705. [CrossRef]

34. Qian, J.; Beullens, M.; Huang, J.; De Munter, S.; Lesage, B.; Bollen, M. Cdk1 määrab mitootilised sündmused kromosoomiga seotud fosfataasi lüliti koordineerimise kaudu. Nat. Commun. 2015, 6, 10215. [CrossRef]

35. Kong, M.; Cutts, EE; Pan, D.; Beuron, F.; Kaliyappan, T.; Xue, C.; Morris, EP; Musacchio, A.; Vannini, A.; Greene, EC Human Condensin I ja II juhivad nukleosoomiga seotud DNA ulatuslikku ATP-st sõltuvat tihendamist. Mol. Cell 2020, 79, 99–114.e9. [CrossRef]

36. Kops, GJPL; Gassmann, R. Kinetokoori kroonimine: kromosoomide segregatsiooni kiuline kroon. Trends Cell Biol. 2020, 30, 653–667. [CrossRef]

37. Ma, HT; Poon, RYC TRIP13 Funktsioonid spindli koostu kontrollpunkti loomisel O-MAD2 täiendamise kaudu. Cell Rep. 2018, 22, 1439–1450. [CrossRef]

38. Kuipers, MA; Stasevitš, TJ; Sasaki, T.; Wilson, KA; Sarapuu, KL; McNally, JG; Davidson, MW; Gilbert, DM Väga stabiilne Mcm-valkude laadimine elusrakkude kromatiinile nõuab mahalaadimiseks replikatsiooni. J. Cell Biol. 2011, 192, 29–41. [CrossRef]

39. Meng, Q.; Gao, J.; Zhu, H.; Tema, H.; Lu, Z.; Hong, M.; Zhou, H. Seeriaviisiliselt läbitud inimese naha fibroblastirakkude proteoomiline uuring paljastab replikatiivses vananemises osalevate kromosoomikondensiini kompleksvalkude vähenemise. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2018, 505, 1112–1120. [CrossRef]

40. Larocelle, S.; Pandur, J.; Fisher, RP; Salz, HK; Suter, B. Cdk7 on mitoosi ja in vivo Cdk-d aktiveeriva kinaasi aktiivsuse jaoks hädavajalik. Genes Dev. 1998, 12, 370–381. [CrossRef]

41. Leone, M.; Cazorla-Vázquez, S.; Ferrazzi, F.; Wiederstein, JL; Gründl, M.; Weinstock, G.; Vergarajauregui, S.; Eckstein, M.; Krüger, M.; Gaubatz, S.; et al. IQGAP3, YAP-i sihtmärk, on vajalik rakutsükli õigeks progresseerumiseks ja genoomi stabiilsuseks. Mol. Cancer Res. 2021, 19, 1712–1726. [CrossRef] [PubMed]

42. Nandi, AK; Ford, T.; Fleksher, D.; Neuman, B.; Rapoport, AP DNA kahjustuse kontrollpunkti nõrgenemine PBK poolt, uudne mitootiline kinaas, hõlmab valgu-valgu interaktsiooni kasvaja supressoriga P53. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2007, 358, 181–188. [CrossRef] [PubMed]

43. Tubli, L.; Dimri, perearst; Campisi, J.; Chen, KY Dihüdrofolaadi reduktaasi geeni ekspressiooni ja E2F komponentide regulatsioon inimese diplomiidsetes fibroblastides kasvu ja vananemise ajal. J. Cell Physiol. 1996, 168, 580–588. [CrossRef]

44. Demitšev, V.; Messner, CB; Vernardis, SI; Lilley, KS; Ralser, M. DIA-NN: Neuraalvõrgud ja häirete korrigeerimine võimaldavad suure läbilaskevõimega sügavat proteoomikatet. Nat. Meetodid 2020, 17, 41–44. [CrossRef]

45. Tjanova, S.; Temu, T.; Sinitcyn, P.; Carlson, A.; Hein, MINU; Geiger, T.; Mann, M.; Cox, J. Perseuse arvutusplatvorm (prote)omika andmete põhjalikuks analüüsiks. Nat. Meetodid 2016, 13, 731–740. [CrossRef]

46. ​​Benjamini, Y.; Hochberg, Y. Vale avastamise määra kontrollimine: praktiline ja võimas lähenemisviis mitmekordsele testimisele. JR Stat. Soc. Ser. B (Methodol.) 1995, 57, 289–300. [CrossRef]

47. Perez-Riverol, Y.; Bai, J.; Bandla, C.; García-Seisdedos, D.; Hewapathirana, S.; Kamatchinathan, S.; Kundu, DJ; Prakash, A.; Frericks-Zipper, A.; Eisenacher, M.; et al. PRIDE andmebaasi ressursid 2022. aastal: massispektromeetriapõhiste proteoomika tõendite keskus. Nucleic Acids Res. 2021, 50, D543–D552. [CrossRef]

【Lisateabe saamiseks:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】