Maksa kinaasi B1 (LKB1) prognostiline väärtus maovähiga seotud kasvajaga seotud mikrokeskkonna immuunsuse korral

Abstraktne:

Maksa kinaas B1 (LKB1) on kasvaja supressorgeen, mille inaktiveerimine toimub sageli erinevate kasvajatüüpide korral. Siiski pole teada, kas LKB1 on seotud maovähi (GC) kliiniliste tunnustega ja kasvaja immuunsuse reguleerimisega. Selles uuringus näitasime, et LKB1 ekspresseerub tugevalt tervete inimeste seerumis (n = 176) võrreldes GC patsientidega (n = 416) ning seda seostatakse ka kliiniliste tulemuste ja hea elulemuse määraga GC-ga patsientidel. Lisaks on immuunsüsteemi kontrollpunktide ja T-rakkude aktiveerimisega seotud geenid, näiteks PD−1, PD−Näidati, et L1, CD8A, CD8B, CD28 ja GZMM on kõrge LKB1 ekspressiooniga GC alarühmades tugevalt ekspresseeritud. Võrreldes värskete maovähi kudedega ekspresseeriti LKB1 tugevalt CD3+CD8+ ja CD3+CD8+CD28+ T-rakkudes värsketes külgnevates mitte- vähkkasvajad. CD3+CD8+ T-rakud tootsid IFN-i−anti−vähi immuunvastus. Lisaks oli LKB-d ekspresseerivate CD{0}}CD8+ T-rakkude osakaal positiivne korrelatsioon IFN-iga−väljendus. Veelgi enam, madala LKB1 ekspressiooniga GC patsientidel oli pembrolizumabiga ravimisel halb objektiivne ravivastuse määr ning halvem progresseerumisvaba elulemus ja üldine elulemus. Kokkuvõtteks võib öelda, et LKB1 võib olla potentsiaalne immuunsüsteemi kontrollpunkt GC patsientidel.

Cistanche tubulosa-Antitumor eelised

Märksõnad:

LKB1; maovähk; kliinilised tulemused; immuunsuse kontrollpunkt; CD3+CD8+ T-rakud

1. Sissejuhatus

Maovähk (GC) on kogu maailmas rahvatervise probleem ja see on viies kõige sagedamini diagnoositud pahaloomuline kasvaja [1, 2]. Kuigi kliinilises praktikas kasutatakse laialdaselt GC levinud ravimeetodeid, nagu mao resektsioon, keemiaravi, kiiritus ja sihtravi [3],−kaugelearenenud GC aastane elulemus on < 20%. GC-ravi edusammude tulemusena [4,5] peetakse immunoteraapiat uuenduslikuks lähenemisviisiks [6], mis on selgitanud selle haiguse ravi [7]. Immunoteraapia ajastul programmeeritud rakusurm 1 (PD−1)/PD−ligand 1 (PD−L1) on osutunud biomarkeriks vähi diagnoosimisel ja immunoteraapia vastuse ennustamisel, kuid see ei ole piisavalt tundlik. Seetõttu on GC immunoteraapias oluline tuvastada uued ennustavad biomarkerid.

Maksa kinaas B1 (LKB1), tuntud ka kui STK11, on seriini/treoniini kinaas, mis esineb laialdaselt paljudes kudedes [8]. Üha rohkem tõendeid on näidanud, et LKB1 on võtmetähtsusega kasvaja supressor mitut tüüpi vähkkasvajate puhul, nagu näiteks kõhunäärmevähk [9], melanoom [10,11], mitte.−väikerakk-kopsuvähk [12,13] ja emakakaelavähk [14]. Lisaks on teada, et LKB1 osaleb immuunrakkude funktsioonide reguleerimises [10]. LKB1 puudulikkus T-rakkudes soodustab seedetrakti polüpoosi teket [15] ja hõlmab ka IL-i−11−JAK / STAT3 rada, mis viib seedetrakti tuumorigeneesi [16]. Lisaks mängib LKB1 olulist rolli makrofaagide funktsioonis, osaledes sellistes protsessides nagu rakkude kasv, metabolism ja polarisatsioon [17]. Hiljutised uuringud on näidanud, et LKB1 kadumine võib olla seotud kasvaja immuunse mikrokeskkonna moduleerimisega [18]. Täpsemalt, LKB1 puudulikkus pärsib T−raku aktiivsust, soodustades põletikueelset tsütokiini tootmist ja neutrofiilide värbamist kopsuvähiga patsientide kasvaja mikrokeskkonnas [19]. Piiratud arv uuringuid on selgitanud seost LKB1 ekspressiooni, kliiniliste tulemuste, immuunkonteksti ja terapeutilise reageerimise vahel GC-s. Selles uuringus näitasime seost LKB1 ekspressiooni ja kliiniliste tulemuste vahel GC patsientidel. Lisaks näitasime, et madal LKB1 ekspressioon soodustab immunosupressiivset mikrokeskkonda ja võib põhjustada GC patsientide halva prognoosi. Veelgi enam, kõrge LKB1 ekspressiooniga GC patsiendid said pembrolizumabravist suuremat kasu. Siin arutatakse LKB1 prognostilist väärtust ja potentsiaalset rolli kasvaja immunoloogias ning see võib aidata mõista GC aluseks olevat võimalikku mehhanismi.

cistanche tubulosa - parandab immuunsüsteemi

2. Materjalid ja meetodid

2.1. Patsiendid ja vereproovid

Selle retrospektiivse uuringu kiitis heaks Zhejiangi vähihaigla kohalik eetikakomitee (IRB−2021−154). Ajavahemikus 2015. aasta jaanuarist kuni 2022. aasta augustini kogusime vereproove 176 tervelt täiskasvanult ja 416 GC-ga patsiendilt ning kogusime 26 GC-ga patsiendilt 26 paari värskeid vähikudesid ja külgnevaid mitte-vähikudesid. Välja jäeti patsiendid, kellel oli anamneesis muid pahaloomulisi kasvajaid.

2.2. CEA, CA19-9, AFP ja LKB1 ekspressioon

LKB1 ekspressioonitaseme hindamiseks plasmaproovides vastavalt standardiseeritud protokollile kasutati kaubanduslikku ELISA testikomplekti (RX106671H; Ruixinbio, Quanzhou, Fujian, Hiina). Lühidalt, vastavad plasmaproovid (50 µL) ja standardsed mudelvalgud (50 µL) lisati 96-augulistele plaatidele. Järgmisena lisati 100 µl HRP-märgistatud antikeha ja 96 süvendiga plaate inkubeeriti 1 tund temperatuuril 37 °C. Seejärel pesti plaate kolm korda pesupuhvriga. Lisati substraadisegu (100 µL) ja plaate analüüsiti mikroplaadilugejas OD 450 juures. CEA (CFDA 20163402679, Siemens Healthcare Diagnostic Products., Shanghai, Hiina), CA19-9 (CFDA 20173,4017) määramiseks kasutati kemiluminestsentsi. Siemens Healthcare Diagnostic Products., Shanghai, Hiina) ja AFP väljend (CFDA 20173400053, Siemens Healthcare Diagnostic Products., Shanghai, Hiina). SPSS 19.0 tarkvara (IBM, Armonk, NY, USA) kasutati CEA, CA19-9, AFP ja LKB1 vastuvõtja töökarakteristiku (ROC) kõverate alune pindala määramiseks. TNM patoloogilise staadiumi, FIGO staadiumi ja HER2 ekspressiooni põhjal jaotati 416 GC patsienti erinevatesse alarühmadesse. LKB1 ekspressiooni analüüsimiseks GC patsientide erinevates alarühmades kasutati paaris t-testi.

2.3. LKB1 ekspressiooni analüüs immuunrakkudes ja seos immuunsüsteemi kontrollpunktidega

Comprehensive Analysis on Multi−Omics of Immunotherapy in Pan−cancer [CAMOIP] (http://www.camoip.net/) (kasutatud 1. jaanuaril 2{{10}}23) on analüüsitööriist. Vähi genoomi analüüsi (TCGA) ja immuunkontrollpunkti inhibiitoriga (ICI) töödeldud projektide ekspressiooni- ja mutatsiooniandmed. GC patsientide immunogeensuse ja raja rikastamise analüüsimiseks kasutati standardset töötlemistoru. CAMOIP-i kasutati ka erinevate immuunrakkude ekspressioonide analüüsimiseks vastavalt LKB1 ekspressioonile GC patsientidel. UCSC Xena andmebaas (https://xena.ucsc.edu/public) (juurdepääs 1. jaanuaril 2023) on vähi genoomika andmete analüüsiplatvorm, mis toetab mitme vähiproovi histoloogiliste andmete visualiseerimist ja analüüsi. UCSC Xena andmebaas pakub LKB1, T-raku immuunkontrollpunkti geene, T-rakkude aktiveerimist ja mRNA ekspressiooni antigeeni esitlust. R-keele (4.2.1) abil tehti keeruline soojuskaart. LKB1 ekspressiooni analüüsimiseks kvartiilide põhjal kasutati tarkvara SPSS 19.0 (IBM, Armonk, NY, USA). Jagasime GC patsiendid LKB1 kõrge ja madala ekspressiooniga rühmadesse vastavalt LKB1 ekspressiooni vaheväärtusele. T-testi kasutati T-raku immuunkontrollpunkti geenide, T-rakkude aktivatsiooni ja mRNA ekspressiooni antigeeni esitluse analüüsimiseks GC patsientidel LKB1 kõrge ja madala ekspressiooniga GC patsientide alarühmadesse. p väärtused < 0,001 loeti statistiliselt oluliseks.

Cistanche tubulosa-Antitumor eelised

2.4. Voolutsütomeetria

Operatsiooni käigus saadud värsked vähkkasvajad (n {0}}) ja värsked külgnevad mittevähikoed (n=26) jahvatati 30 minuti jooksul koe jahvatamise lahuseks. Jahvatuslahus ja perifeerse vere mononukleaarsed rakud (PBMC-d) (1 × 106 rakku/ml) koguti fosfaatpuhverdatud soolalahusesse (PBS) (50 µL, CR20012; Zhejiang Crenry, Zhejiang, Hiina), millele oli lisatud 0,5% veise seerumi albumiini (BSA). (Thermo Fisher, Waltham, MA, USA) ja inkubeeriti inimese vastaste monoklonaalsete antikehadega 15 minutit. Kasutati inimesevastaseid monoklonaalseid antikehi, nagu on näidatud tabelis 1 ja täiendavas tabelis S1 ja täiendavas joonises S1: anti-LKB1 (PTG, Wuhan, Hubei, Hiina); anti-CD68 (Biolegend, San Diego, CA, USA); anti-CD209 (Biolegend, San Diego, CA, USA); anti-CD28 (Biolegend, San Diego, CA, USA); anti-CD45/CD56/CD19 (Beckman Coulter, St. Louis, MO, USA); anti-CD45/CD4/CD8/CD3 (Beckman Coulter, St. Louis, MO, USA); anti-CD4, CD3 (Beckman Coulter, St. Louis, MO, USA); anti-CD45RO (Beckman Coulter, St. Louis, MO, USA); anti-CD8 (Beckman Coulter, St. Louis, MO, USA); anti-CD38 (Beckman Coulter, St. Louis, MO, USA); ja anti-CD45RA (Beckman Coulter, St. Louis, MO, USA). CD3/CD4/CD8/CD28/PD−1 tuvastuskomplekt osteti ettevõttelt Raise Care (Hangzhou, Hiina). Tulemuste analüüsimiseks kasutati CXP analüüsitarkvara ja Beckman Coulter FC 500 voolutsütomeetrit [20,21]. GC patsientide plasmaproovides kasutati tsütokiinide tuvastamiseks tsütokiinide tuvastamise komplekti (Seager, Dalian, Hiina) vastavalt tootja juhistele.

Tabel 1. GC patsientide ja kliiniliste parameetritega tervete isikute võrdlus.

2.5. Immuunrakkude proportsioonid värskes koes

Immuunrakkude proportsioonide analüüsimiseks värsketes vähkkasvajates (n=26) ja värsketes külgnevates mittevähikoes (n=26) kasutati t-testi. LKB1+ ja PD1+LKB1+ immuunrakkude proportsioonide erinevust värsketes vähkkasvajates ja värsketes külgnevates mittevähikoes analüüsiti paaris-t-testi abil. SPSS 19.0 tarkvara (IBM, Armonk, NY, USA) kasutati immuunrakkude proportsioonide ja tsütokiinide vahelise seose määramiseks värsketes vähkkasvajates ja värsketes külgnevates mittevähikoes.

2.6. Kudede immunohistokeemia (IHC)

Zhejiangi vähihaigla biopank andis selles uuringus kasutatud värskeid vähkkasvajaid (n=26) ja värskeid külgnevaid mittevähikudesid (n=26). IHC-komplekti (Beijing Zhongshan Golden Bridge Biotechnology Co., Ltd., Peking, Hiina) kasutati IHC läbiviimiseks vastavalt tootja juhistele. Lühidalt, parafiini sektsioonid deparafineeriti järjest, rehüdreeriti ja keedeti antigeeni leidmiseks. Primaarne LKB1 antikeha (IPB0924 [lahjendussuhe, 1:100]; Baijia, Taizhou, Jiangsu, Hiina) ja gamma-interferooni (IFN−) antikeha (IPB0703 [lahjendussuhe, 1:100]); Baijia, Taizhou, Jiangsu, Hiina inkubeeriti 2 tundi toatemperatuuril. Sektsioone pesti kolm korda PBS-ga. Parafiiniosadele lisati 20 minutiks histokeemiline polümeeri võimendaja (400 µL), millele järgnes 3 pesemist PBS-ga. Järgmisena lisati parafiini sektsioonidele sekundaarsed antikehad ja inkubeeriti 20 minutit, millele järgnes pesemine, DAB värvimine, vastuvärvimine ja paigaldamine.

2.7. GC-patsientide ravivastus pembrolizumabile LKB1 ekspressiooni alusel

Eelmisest aruandest saadi pembrolizumabi ravivastus ja immuunkontrollpunkti blokaadi (ICB) läbinud GC patsientide kliinilised andmed [22]. LKB1 ekspressiooni analüüsimiseks kvartiilide põhjal kasutati SPSS 19.0 tarkvara (IBM, Armonk, NY, USA). Jagasime GC patsiendid LKB1 kõrge ja madala ekspressiooniga rühmadesse vastavalt LKB1 ekspressiooni vaheväärtusele. GC patsientide pembrolizumabi ravivastuse määramiseks vastavalt LKB1 ekspressioonile kasutati R keelt (4.2.1). PD−L1 ekspressiooni analüüsiti SPSS 19.{12}} tarkvaraga (IBM, Armonk, NY, USA) kvartiilide põhjal. GC patsiendid jagati vastavalt vaheväärtusele PD−L1 kõrge ja madala ekspressiooniga rühmadesse. LKB1 ja PD−L1 ekspressiooni põhjal jaotati GC patsiendid kõrge ja madala LKB1 kõrge ja madala ekspressiooniga alarühmadesse ning Pythonit kasutati pembrolizumabi ravivastuse kajastamiseks alarühmades. Pembrolizumabiga ravitud GC patsientide üldist elulemust ja progressioonivaba elulemust analüüsiti Kaplan-Meieri meetodil log-rank testiga.

2.8. Statistiline analüüs

Statistilised analüüsid viidi läbi tarkvara SPSS 19.{1}} abil (IBM, Armonk, NY, USA). Patsiendi ellujäämist kinnitati telefoni teel ja analüüsiti Kaplan-Meieri meetodil log-rank testiga. p väärtused < 0,05 loeti statistiliselt oluliseks. Lisaks kasutati Kaplan−Meier Plotterit (http://www.kmplot.com) (kasutatud 1. jaanuaril 2023), et kinnitada LKB1 (kõrge vs. madal ekspressioon) mõju GC patsientide ellujäämisele. Pythonit kasutati GC patsientide kliiniliste tunnuste ja parameetrite kajastamiseks.

3. Tulemused

3.1. Seos LKB1 ekspressiooni ja kliiniku funktsioonide vahel GC-patsientidel

Selles uuringus osales 416 GC patsienti (268 meest ja 148 naist) ja 176 tervet isikut (87 meest ja 89 naist). Tervete isikute ja GC patsientide omadused on kokku võetud joonisel 1A ja tabelis 1. GC patsientide kliinilised tulemused on kokku võetud, sealhulgas CEA, CA19-9, AFP ja HER2 ekspressioon, patoloogiline aste, Rahvusvahelise Vähikontrolli Liit (UICC) ) kasvaja staadium, lümfisõlmede haaratus ja kauged metastaasid (joonis 1B, tabelid 1 ja 2). Nagu on näidatud joonisel 1C, ekspresseerusid CEA, CA19-9 ja AFP GC patsientide seerumis kõrgelt, samas kui LKB1 ekspresseeriti tugevalt tervetel inimestel. Võrreldes CEA, CA19-9 ja AFP-ga oli LKB1-l parim spetsiifilisus ja tundlikkus (AUC=0.727; joonis 1D). Kliinilistest parameetritest oli LKB1 staadiumi T3–4, N2–3, M1 ja III–IV staadiumis UICC staadiumis kriteeriumide järgi märkimisväärselt madalam (p < {{30}}.0 5, p < 0,05, p < 0,001 ja p < 0,01; joonis 1E ja tabel 2). Lisaks oli LKB1 arvuliselt kõrge HER2-negatiivse GC-ga patsientidel (joonis 1F). Seega näitasid need tulemused, et LKB1 on potentsiaalselt seotud GC progresseerumisega.

Joonis 1. LKB1 ekspressiooni ja kliiniliste tunnuste vahelised seosed. (A, B), Tervete inimeste (n=176) ja GC patsientide (n=416) kliinilised tunnused kaardistati Pythoni abil. (C), CEA, CA19-9 ja AFP ekspressiooni mõõdeti GC patsientide ja tervete inimeste seerumis. (D), võrreldes CEA, CA19-9 ja AFP-ga, oli LKB1 suurem tundlikkus ja spetsiifilisus. (E), LKB1 ekspressioon oli madalam staadiumis N2-3, M1 ja III-IV staadiumis GC patsientidel. (F), oli LKB1 arvuliselt kõrgelt ekspresseeritud HER2-negatiivsetel GC patsientidel. HER2-~+: HER2-negatiivsed GC patsiendid. HER2++~+++: välja arvatud HER2-negatiivsed GC patsiendid. Paaritu t-test, * p < 0.05, ** p < 0,01, *** p < 0,001.

Tabel 2. GC patsientide algnäitajad.

3.2. LKB1 soodustab immunosupressiivset mikrokeskkonda GC-patsientidel

TCGA andmebaaside kohaselt oli T-raku retseptori kompleks kõrge ja madala LKB1 ekspressiooniga GC patsientide vahel oluliselt erinev (joonis 2A). Lisaks näitasime, et T-rakkude ekspressioon erines GC-ga patsientidel kõrge ja madala LKB1 ekspressiooni alarühmades, sealhulgas CD8+ T-rakud, regulatoorsed T-rakud, neutrofiilid ja eosinofiilid (joonis 2B). Lisaks täheldati tugevaid korrelatsioonimustreid LKB1 ekspressiooni ja T-raku immuunkontrollpunktides osalevate geenide ülesreguleerimise, T-rakkude aktiveerimise ja antigeeni esitlemise vahel (joonis 2C). Lisaks kihistasime GC patsiendid PD-1, PD-L1, CD8A, CD8B, CD28 ja GZMM mRNA ekspressiooni alusel LKB1 kõrge ja madala ekspressiooni alarühmades. Huvitav on see, et kõik geenid ekspresseerusid kõrgelt LKB1-kõrge ekspressiooni alarühmas (joonis 2D). LKB1, PD-1 ja PD-L1 ekspressioon näitas piiratud erinevusi limaskestade ja difuusse tüübi osas (täiendav joonis S2). Need andmed viitavad sellele, et LKB1 võib olla seotud T-rakkude aktiveerimise fenotüübi ja T-raku immuunsuse kontrollpunktiga GC patsientidel.

3.3. LKB1 ekspresseeritakse selektiivselt T (CD3+CD8+) rakkude infiltratsioonides GC-s

LKB1 ekspressiooni määramiseks immuunmikrokeskkonnas mõõdeti kuue immuunsüsteemi infiltreeruva raku ekspressiooni perifeerses veres (B), värsketes vähkkasvajates (T) ja külgnevates mittevähikoes (N) ning 12 tüüpi tsütokiini ekspressiooni GC patsientidel. Joonis 3A). Samuti demonstreerisime LKB1 ekspressiooni kõigi kuue immuunsüsteemi infiltratsiooniraku, sealhulgas B-rakkude, T-rakkude, neutrofiilide, makrofaagide ja dendriitrakkude arvukuse põhjal (joonis 3A ja täiendav joonis S3). Leidsime, et T-rakkude (CD3+CD8+) osakaal oli suurem külgnevates mittevähikoes (N), samas kui T-rakkude (CD3+CD{{ 9}}) oli kõrgem värsketes vähkkasvajate kudedes (T) ja teistes T-rakkudes ilmnesid piiratud erinevused värskete vähkkasvajate (T) ja külgnevate mittevähikoe vahel (N; joonis 3B). Lisaks T-rakud (CD3+CD8+LKB1+, CD3+CD8+CD28+LKB1+, CD 3+CD8+CD28+PD−1+LKB1+) suhe oli oluliselt suurem värsketes külgnevates mittevähikoes (N; joonis 3C). LKB1 ekspressioon teistes immuunrakkudes oli värske vähi (T) ja külgnevate mittevähikoe (N) vahel sarnane, välja arvatud neutrofiilid (täiendav joonis S3). Need tulemused koos näitasid, et LKB1 võib olla spetsiifiliselt seotud T (CD3+CD8+, CD3+CD8+CD28+) rakkude infiltratsiooni mikrokeskkonnaga GC patsientidel.

Joonis 2. LKB1 on seotud T-rakkude aktivatsioonigeeni ja immuunsüsteemi kontrollpunktidega. (A) T-raku retseptori kompleks näitas suurimat erinevust LKB1 kõrge ja madala ekspressiooni alarühmades. (B) CAMOIP andmebaasi analüüs immuunrakkude erineva ekspressiooni kohta LKB1 kõrge ja madala ekspressiooniga alarühmade vahel. (C) Soojuskaart näitab LKB1 ekspressioonil põhinevate immuungeenide komplektide z-skoori normaliseeritud log-cpm väärtusi (n=407). (D) PD-1, PD-L1, CD8A, CD8B, CD28 ja GZMM ekspresseerusid kõrgelt LKB1-kõrge GC-ga patsientide alarühmas. Paarimata t-test, ns: olulist erinevust pole, * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0,001 , **** p < 0,0001.

Joonis 3. LKB1 on seotud T-rakkude infiltratsiooniga GC patsientidel. (A) Soojuskaart näitab immuunrakkude osakaalu perifeerses veres (B), värsketes vähirakkudes (T) ja külgnevates mittevähikoes (N) ning tsütokiinide ekspressioonis. (B) Erinevat tüüpi T-rakkude suhted värsketes vähkkasvajates (T) ja külgnevates mittevähikoes (N). (C) LKB1 ekspresseerivate T-rakkude proportsioonid värsketes vähkkasvajates (T) ja külgnevates mittevähikoes (N). Paaritud t-test, * p < 0.05, ** p < 0,01, *** p < 0,001.

3.4. LKB1 on potentsiaalselt korrelatsioonis IFN-avaldisega

Eeldasime, et immuunrakkudes ekspresseeritud LKB1 korreleerub immuunrakkude funktsiooniga. Tulemuste põhjal analüüsisime seost immuuninfiltratsioonirakkude (LKB1+) osakaalu ja tsütokiini ekspressiooni vahel (joonis 4A). Eelmine uuring näitas, et T-rakkude poolt toodetud IFN- (CD3+CD8+) on tõhus näitaja kliinilise efektiivsuse ja ellujäämise ennustamiseks anti-PD-1 blokaadi korral GC-ga patsientidel [23,24] . Leidsime, et ainult T-rakkude (CD3+LKB1+) ja (CD3+CD8+LKB1+) proportsioonidel oli kerge positiivne korrelatsioon IFN−ga. ekspressioon värsketes vähkkasvajates (T) ja külgnevates mittevähikoes (N; joonis 4B). Järgmisena määrasime LKB1 ja IFN- ekspressiooni ülalnimetatud värsketes vähkkasvajates (T) ja külgnevates mitte-vähi kudedes (N) ning leidsime, et LKB1 ekspressioon oli vähikudedes oluliselt madalam, mitte IFN-ekspressioonil (joonis 4C). Need leiud viitasid sellele, et LKB1-l võib olla positiivne seos kasvajavastase IFN- ekspressiooniga, mida sekreteerivad T-rakud (CD3+CD8+, CD3+CD8+CD{{ 23}}).

Joonis 4. LKB1 korreleerus positiivselt IFN- ekspressiooniga. (A) Immuunrakkude infiltraadi (LKB1+) proportsiooni ja tsütokiini ekspressiooni vahelise seose analüüs. (B) T-rakkude (CD3+LKB1+) ja (CD3+CD8+LKB1+) proportsioonide korrelatsioon IFN-ekspressiooniga värske vähi korral (T) ja külgnevad mittevähikoed (N). (C) LKB1 ja IFN-ekspressiooni immunohistokeemilised analüüsid värsketes vähkkasvajates (T) ja külgnevates mittevähikudedes (N).

3.5. LKB1 ennustab head reageerimist pembrolizumabile GC-s

Tulemuste põhjal võib LKB1 olla potentsiaalne immuunsüsteemi kontrollpunkt. Nagu on näidatud joonisel 5A, oli madal LKB1 ekspressioon seotud oluliselt lühema üldise elulemusega, mis põhines GC patsientide ellujäämisel aastatel 2015–2019. Kooskõlas selle leiuga on Kaplan-Meieri andmebaas (http://kmplot.com/) juurdepääs 1. jaanuaril 2023) näitas ka, et LKB1 ekspressioon mõjutas märkimisväärselt GC patsientide prognoosi ning madala LKB1 ekspressiooniga patsientide üldine elulemus oli oluliselt madalam (joonis 5B). Järgmisena analüüsiti LKB1 ennustusväärtuse hindamiseks immunoteraapias ICB kohorti, mis koosnes pembrolizumabiga ravitud GC patsientidest (tabel 3). Võrreldes kõrge LKB1 ekspressiooniga GC patsientidega, oli madala LKB1 ekspressiooni alarühmal objektiivse ravivastuse määr vähenenud (ORR; joonis 5C). Lisaks näitasid madala LKB1 ekspressiooniga GC patsiendid halvemat PFS-i ja OS-i (joonis 5D). Eelmine uuring näitas, et PD−L1 mRNA ekspressioon oli seotud pembrolizumabravi efektiivsusega [6]. Lisaks jaotati LKB1 ja PD-L1 ekspressiooni põhjal GC-ga patsiendid kõrge ja madala LKB1-ga PD-L1 kõrge ja madala ekspressiooni alarühmades. Nagu on näidatud joonisel fig 5E, oli nii LKB1 kui ka PD−L1 kõrge ekspressiooniga GC patsientidel kõrgeim ORR. Korrelatsioon PD−L1/LKB1 ekspressiooni ja molekulaarsete parameetrite vahel GC-ga patsientidel on kokku võetud tabelis 4. Kokkuvõttes võib LKB1 olla potentsiaalne immuunsüsteemi kontrollpunkt, et ennustada reageerimist pembrolizumabile GC-ga patsientidel.

Tabel 3. Maovähiga patsiendi objektiivne reaktsioon pembrolizumabile.

Tabel 4. Seos LKB1/PD−L1 ekspressiooni ja molekulaarsete parameetrite vahel.

joonis 5. LKB1 ekspressioon ennustab reageerimist pembrolizumabile GC patsientidel. (A) LKB1 ekspressiooni kõrget taset seostati GC patsientide elulemuse pikenemisega aastatel 2015–2019. (B) Kaplan-Meier Plotter näitas, et LKB1 kõrge tase pikendas GC patsientide elulemust. (C) Virnastatud riba ja juga graafikud näitavad LKB1 ekspressiooni alusel reageerimist pembrolizumabile ICB kohordis (n=43). (Pearsoni χ2 test). (D) Kaplan-Meieri kõverad progresseerumisvaba elulemuse (PFS) ja üldise elulemuse (OS) kohta ICB kohordis (n=43), mis põhinevad LKB1 ekspressioonil. (E) Tuginedes LKB1 mRNA ekspressioonile kõrge ja madala PD−L1 ekspressiooniga GC patsientide alarühmades, näitas soojuskaart ICB kohordis (n=43) reageerimist pembrolizumabile ja molekulaarsetele parameetritele. GS, genoomiliselt stabiilne; MSI-H, mikrosatelliidi ebastabiilsus-kõrge; EBV, EBV positiivne; märgirõngasrakk: mao märgirõngasrakuline kartsinoom; ORR, objektiivne reageerimismäär; SD, stabiilne haigus; PR, osaline vastus; PD, progresseeruv haigus; CR, täielik vastus; M/D adeno, mõõdukalt diferentseeritud adenokartsinoom; P/D adeno, halvasti diferentseeritud adenokartsinoom; W/D adeno, hästi diferentseerunud adenokartsinoom; Segatud (W / D ja P / D), hästi diferentseeritud adenokartsinoom ja halvasti diferentseeritud adenokartsinoom.

4. Arutelu

GC on levinud pahaloomuline haigus ja on maailmas kolmas peamine vähisurmade põhjus [17,18]. Viimastel aastakümnetel on GC terapeutilised ja diagnostilised strateegiad märkimisväärselt paranenud [19]. Tõhusate diagnostiliste markerite puudumise tõttu diagnoositakse patsiente sageli algstaadiumis kaugelearenenud staadiumis, mille elulemus on 5 aastat.<20% [25,26]. Therefore, there is an urgent need to explore tumor markers with favorable specificity and sensitivity for GC diagnosis. In this study, we first showed that LKB1 expression was decreased in GC serum. Compared with GC diagnostic biomarkers mainly used in clinical practice, including CEA, CA19−9, and a−1−fetoprotein (AFP), LKB1 showed the best specificity and sensitivity. Furthermore, LKB1 was associated with clinical features of GC patients, such as grade, invasion depth, TNM stage, UICC stage, and vital status. These results suggested that LKB1 serves as a tumor suppressor gene and suppresses GC progression.

cistanche taime suurendav immuunsüsteem

Cistanche Enhance Immunity toodete vaatamiseks klõpsake siin

【Küsi lisa】 E-post:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

LKB1 tuvastati algselt 1997. aastal ja seda tuntakse ka kui STK11 [27]. LKB1 on oluline inimese kasvaja supressorgeen ja mitteväikerakk-kopsuvähiga (NSCLC) patsientidel esinevad LKB1 mutatsioonid või genoomikadu sageli koos KRAS-i muutustega. Selle kombinatsiooni tulemuseks on väga agressiivne fenotüüp ja vähenenud elulemus [28–30]. Enamik LKB1-ga seotud aruandeid on keskendunud peamiselt kopsuvähile, piiratud aruannetega LKB1 rolli kohta GC-s. Eelmine uuring näitas, et LKB1 ekspressioon võib olla seotud GC patsientide halva prognoosiga [31]; Siiski ei ole kindlaks tehtud, kas LKB1 toimib potentsiaalse diagnostilise markerina ja immunoterapeutilise sihtmärgina. Meie uuring näitas esimest korda, et LKB1 madal ekspressioon põhjustas GC-ga patsientidel pembrolizumabi halvemat terapeutilist reaktsiooni, mis viitab sellele, et LKB1 võib olla potentsiaalne immunoterapeutiline sihtmärk.

cistanche tubulosa - parandab immuunsüsteemi

Hiljuti on immunoteraapia näidanud suuri eeliseid GC kliinilises ravis [32, 33]. PD−1/PD−L1 blokaad on kujunenud uudseks ja paljutõotavaks terapeutiliseks strateegiaks [34], mis rõhutab kasvajavastase immuunsuse tähtsust ja normaliseerib tsütotoksiliste T-lümfotsüütide (CTL, CD8+) düsfunktsiooni vähi korral [35]. . Paljude vähivormide korral reguleerib CTL-i infiltratsioon kasvaja regressiooni ja seda peetakse positiivseks prognostiliseks indikaatoriks [36]. Siiski on uuringud näidanud, et CTL-i düsfunktsioon infiltratsioonis põhjustab immuunsüsteemi vältimist ja lõpuks vähirakkude ründamise ebaõnnestumist [37]. Näidati, et PD-1/PD-L1 blokaad kõrvaldab väljakujunenud kasvajad düsfunktsionaalse CTL-i kaudu, mis taaselustab kasvajavastast immuunsust [38]. Näitasime, et PD-1 / PD-L1 ekspresseeriti tugevalt GC patsientide LKB1 kõrge ekspressiooniga alarühmades, mis viitab sellele, et LKB1 võib olla seotud T-raku immuunkontrollpunktidega. Lisaks on IFN− tsütokiin, mis inhibeerib viiruse replikatsiooni ja suurendab CD8+T-rakkude poolt vabastatud spetsiifiliste antigeenide esitlust [39]. Lisaks avastasime, et T-rakkude aktiveerimise ja antigeeni esitlemise geenid ekspresseerusid kõrgelt ka GC-patsientide alarühmades, mille LKB1 ekspressioon oli kõrge, ja T (CD3+CD{21}}LKB1+, CD3+CD8+CD28+LKB1+) rakkudel oli positiivne korrelatsioon IFN- ekspressiooniga GC patsientide värsketes kudedes. Seega järeldasime, et LKB1 võib takistada T-rakkude (CD3+CD8+, CD3+CD8+CD28+) sekretsiooni ja on positiivselt seotud −kasvaja IFN− ekspressioon. Alusmehhanism, mille abil LKB1 on seotud tsütotoksilise T-rakkude aktiveerimisega, nõuab edasist uurimist.

Viited

1. Lübeck, EG; Curtius, K.; Jeon, J.; Hazelton, WD Kasvaja progresseerumise mõju vähi esinemissageduse kõveratele. Cancer Res. 2013, 73, 1086–1096. [CrossRef] [PubMed]

2. Li, Y.; Tema, X.; Fan, L.; Zhang, X.; Xu, Y.; Xu, X. Uudse immuunprognostilise mudeli tuvastamine maovähi korral. Clin. Tõlk. Oncol. 2021, 23, 846–855. [CrossRef] [PubMed]

3. Lutz, parlamendiliige; Zalcberg, JR; Ducreux, M.; Ajani, JA; Allum, W.; Aust, D.; Bang, YJ; Cascinu, S.; Holscher, A.; Jankowski, J.; et al. EORTC St. Galleni rahvusvahelise ekspertide konsensuse esiletõstmised mao-, gastroösofageaalse ja söögitoruvähi esmase ravi kohta – varajase gastroösofageaalse vähi alatüüpide diferentseeritud ravistrateegiad. Eur. J. Cancer 2012, 48, 2941–2953. [CrossRef] [PubMed]

4. Thomassen, I.; van Gestel, YR; van Ramshorst, B.; Luyer, MD; Bosscha, K.; Nienhuijs, SW; Lemmens, VE; de Hingh, IH Mao päritolu peritoneaalne kartsinomatoos: populatsioonipõhine uuring esinemissageduse, ellujäämise ja riskitegurite kohta. Int. J. Cancer 2014, 134, 622–628. [CrossRef]

5. Kahraman, S.; Yalcin, S. Hiljutised edusammud HER-2 positiivse kaugelearenenud maovähi süsteemse ravi vallas. OncoTargets Ther. 2021, 14, 4149–4162. [CrossRef]

6. Kono, K.; Nakajima, S.; Mimura, K. Maovähi immuunkontrollpunkti inhibiitorite praegune seisund. Maovähk 2020, 23, 565–578. [CrossRef]

7. Lordick, F.; Shitara, K.; Janjigian, YY Maovähi silmapiiril on uued ained. Ann. Oncol. 2017, 28, 1767–1775. [CrossRef]

8. Zhang, Y.; Meng, Q.; Sun, Q.; Xu, ZX; Zhou, H.; Wang, Y. LKB1 puudulikkusest põhjustatud metaboolne ümberprogrammeerimine tuumorigeneesi ja mitteneoplastiliste haiguste korral. Mol. Metab. 2021, 44, 101131. [CrossRef]

9. Kottakis, F.; Nicolay, BN; Romane, A.; Karnik, R.; Gu, H.; Nagle, JM; Boukhali, M.; Hayward, MC; Li, YY; Chen, T.; et al. LKB1 kadu seob seriini metabolismi DNA metüülimise ja tuumorigeneesiga. Loodus 2016, 539, 390–395. [CrossRef]

10. Su, KH; Dai, S.; Tang, Z.; Xu, M.; Dai, C. Kuumašoki faktor 1 on AMP-aktiveeritud proteiinkinaasi otsene antagonist. Mol. Cell 2019, 76, 546–561.e8. [CrossRef]

11. Olvedy, M.; Tisserand, JC; Luciani, F.; Boeckx, B.; Wouters, J.; Lopez, S.; Rambow, F.; Aibar, S.; Thienpont, B.; Barra, J.; et al. Võrdlev onkogenoomika tuvastab türosiinkinaasi FES kui kasvaja supressor melanoomi korral. J. Clin. Uurige. 2017, 127, 2310–2325. [CrossRef]

12. Hollstein, PE; Eichner, LJ; Brun, SN; Kamireddy, A.; Svensson, RU; Vera, LI; Ross, DS; Rymoff, TJ; Hutchins, A.; Galvez, HM; et al. AMPK-ga seotud kinaasid SIK1 ja SIK3 vahendavad LKB1 võtmekasvajat supresseerivat toimet NSCLC-s. Cancer Discov. 2019, 9, 1606–1627. [CrossRef]

13. Svensson, RU; Parker, SJ; Eichner, LJ; Kolar, MJ; Wallace, M.; Brun, SN; Lombardo, PS; Van Nostrand, JL; Hutchins, A.; Vera, L.; et al. Atsetüül-CoA karboksülaasi inhibeerimine pärsib mitteväikerakk-kopsuvähi rasvhapete sünteesi ja kasvaja kasvu prekliinilistes mudelites. Nat. Med. 2016, 22, 1108–1119. [CrossRef]

14. Zeng, Q.; Chen, J.; Li, Y.; Werle, KD; Zhao, RX; Quan, CS; Wang, YS; Zhai, YX; Wang, JW; Youssef, M.; et al. LKB1 pärsib HPV-ga seotud vähi progresseerumist, suunates rakkude metabolismi. Onkogeen 2017, 36, 1245–1255. [CrossRef]

15. Poffenberger, MC; Metcalfe-Roach, A.; Aguilar, E.; Chen, J.; Hsu, BE; Wong, AH; Johnson, RM; Flynn, B.; Samborska, B.; Ma, EH; et al. LKB1 puudulikkus T-rakkudes soodustab seedetrakti polüpoosi teket. Teadus 2018, 361, 406–411. [CrossRef]

16. Ollila, S.; Domenech-Moreno, E.; Laajanen, K.; Wong, IP; Tripathi, S.; Pentinmikko, N.; Gao, Y.; Yan, Y.; Niemela, EH; Wang, TC; et al. Stromaalne Lkb1 puudulikkus põhjustab seedetrakti tuumorigeneesi, mis hõlmab IL-11-JAK/STAT3 rada. J. Clin. Uurige. 2018, 128, 402–414. [CrossRef]

17. Sung, H.; Ferlay, J.; Siegel, RL; Laversanne, M.; Soerjomataram, I.; Jemal, A.; Bray, F. 2020. aasta ülemaailmne vähistatistika: GLOBOCANi hinnangud 36 vähi esinemissageduse ja suremuse kohta kogu maailmas 185 riigis. CA Cancer J. Clin. 2021, 71, 209–249. [CrossRef]

18. Pons-Tostivint, E.; Lugat, A.; Fontana, JF; Denis, MG; Bennouna, J. STK11/LKB1 Immuunvastuse modulatsioon kopsuvähi korral: bioloogiast terapeutilise mõjuni. Cells 2021, 10, 3129. [CrossRef]

19. Koyama, S.; Akbay, EA; Li, YY; Aref, AR; Skoulidis, F.; Herter-Sprie, GS; Buczkowski, KA; Liu, Y.; Awad, MM; Denning, WL; et al. STK11/LKB1 puudulikkus soodustab neutrofiilide värbamist ja põletikueelset tsütokiini tootmist, et pärssida T-rakkude aktiivsust kopsukasvaja mikrokeskkonnas. Cancer Res. 2016, 76, 999–1008. [CrossRef]

20. Janjigian, YY; Maron, SB; Chatila, WK; Millang, B.; Chavan, SS; Alterman, C.; Chou, JF; Segal, MF; Simmons, MZ; Momtaz, P.; et al. Esmavaliku pembrolizumab ja trastuzumab HER2-positiivse söögitoru-, mao- või gastroösofageaalse ristmikuvähi korral: avatud, üheharuline, 2. faasi uuring. Lancet Oncol. 2020, 21, 821–831. [CrossRef]

21. Picard, E.; Verschoor, CP; Ma, GW; Pawelec, G. Immuunmaastike, geneetiliste alatüüpide ja immunoteraapia vastuste seosed kolorektaalse vähi korral. Esiosa. Immunol. 2020, 11, 369. [CrossRef] [PubMed]

22. Kim, ST; Cristescu, R.; Bass, AJ; Kim, KM; Odegaard, JI; Kim, K.; Liu, XQ; Sher, X.; Jung, H.; Lee, M.; et al. Kliiniliste vastuste põhjalik molekulaarne iseloomustus metastaatilise maovähi PD-1 inhibeerimisele. Nat. Med. 2018, 24, 1449–1458. [CrossRef] [PubMed]

23. Savas, P.; Virassamy, B.; Jah, C.; Salim, A.; Mintoff, CP; Caramia, F.; Salgado, R.; Byrne, DJ; Teo, ZL; Dushyanthen, S.; et al. Rinnavähi T-rakkude üherakuline profileerimine näitab kudedes elavate mälu alamhulka, mis on seotud paranenud prognoosiga. Nat. Med. 2018, 24, 986–993. [CrossRef] [PubMed]

24. Brewitz, A.; Eickhoff, S.; Dahling, S.; Quast, T.; Bedoui, S.; Kroczek, RA; Kurts, C.; Garbi, N.; Barchet, W.; Iannakone, M.; et al. CD8(+) T-rakud korraldavad pDC-XCR1(+) dendriitrakkude ruumilise ja funktsionaalse koostöö, et optimeerida praimimist. Immunity 2017, 46, 205–219. [CrossRef]

25. Kinoshita, J.; Yamaguchi, T.; Moriyama, H.; Fushida, S. IV staadiumi maovähi konversioonioperatsiooni praegune seis. Surg. Täna 2021, 51, 1736–1754. [CrossRef]

26. Du, Y.; Wei, Y. Looduslike tapjarakkude terapeutiline potentsiaal maovähi korral. Esiosa. Immunol. 2018, 9, 3095. [CrossRef]

27. Zhao, RX; Xu, ZX LKB1 kasvaja supressori sihtimine. Curr. Drug Targets 2014, 15, 32–52. [CrossRef]

28. Skoulidis, F.; Goldberg, ME; Greenawalt, DM; Hellmann, MD; Awad, MM; Gainor, JF; Schrock, AB; Hartmaier, RJ; Trabucco, SE; Gay, L.; et al. STK11/LKB1 mutatsioonid ja PD-1 inhibiitori resistentsus KRAS-mutantse kopsu adenokartsinoomi korral. Cancer Discov. 2018, 8, 822–835. [CrossRef]

29. Kim, J.; Lee, HM; Cai, F.; Ko, B.; Yang, C.; Lie, EL; Muhammad, N.; Rhyne, S.; Li, K.; Haloul, M.; et al. Heksosamiini biosünteesi rada on KRAS / LKB1 mutantse kopsuvähi korral sihtmärk. Nat. Metab. 2020, 2, 1401–1412. [CrossRef]

30. Kitajima, S.; Tani, T.; Springer, BF; Campisi, M.; Osaki, T.; Haratani, K.; Chen, M.; Knelson, EH; Mahadevan, NR; Ritter, J.; et al. MPS1 inhibeerimine käivitab KRAS-LKB1 mutantse kopsuvähi immunogeensuse. Vähirakk 2022, 40, 1128–1144e1128. [CrossRef]

31. Hu, M.; Zhao, T.; Liu, J.; Zou, Z.; Xu, Q.; Gong, P.; Guo, H. LKB1 ekspressiooni vähenemine on seotud epiteeli-mesenhümaalse üleminekuga ja põhjustas maovähi ebasoodsa prognoosi. Humm. Pathol. 2019, 83, 133–139. [CrossRef]

32. Hogner, A.; Moehler, M. Immunoteraapia maovähi korral. Curr. Oncol. 2022, 29, 1559–1574. [CrossRef]

33. Kole, C.; Charalampakis, N.; Tsakatikas, S.; Kouris, NI; Papaxoinis, G.; Karamouzis, MV; Koumarianou, A.; Schizas, D. Maovähi immunoteraapia: 2021. aasta värskendus. Immunoteraapia 2022, 14, 41–64. [CrossRef]

34. Oliva, S.; Troia, R.; D'Agostino, M.; Boccadoro, M.; Gay, F. Lubadused ja lõksud PD-1/PD-L1 inhibiitorite kasutamisel hulgimüeloomi korral. Esiosa. Immunol. 2018, 9, 2749. [CrossRef]

35. Farhood, B.; Najafi, M.; Mortezaee, K. CD8 (+) tsütotoksilised T-lümfotsüüdid vähi immunoteraapias: ülevaade. J. Cell. Physiol. 2019, 234, 8509–8521. [CrossRef]

36. Kalathil, SG; Thanavala, Y. Looduslikud tapjarakud ja T-rakud hepatotsellulaarse kartsinoomi ja viirushepatiidi korral: praegune seisund ja tulevaste immunoterapeutiliste lähenemisviiside perspektiivid. Cells 2021, 10, 1332. [CrossRef]

37. Zhang, H.; Jiang, R.; Zhou, J.; Wang, J.; Xu, Y.; Zhang, H.; Kutt.; Fu, F.; Shen, Y.; Zhang, G.; et al. Vähktõvega seotud fibroblastide puhul reguleerib PS1 CTL-i nõrgenemist. Esiosa. Immunol. 2020, 11, 999. [CrossRef]

38. Xiao, M.; Xie, L.; Cao, G.; Lei, S.; Wang, P.; Wei, Z.; Luo, Y.; Fang, J.; Yang, X.; Huang, Q.; et al. CD4(+) T-raku epitoobipõhine heteroloogne esmane võimendusvaktsineerimine tugevdab kasvajavastast immuunsust ja PD-1/PD-L1 immunoteraapiat. J. Immunother. Vähk 2022, 10, e004022. [CrossRef]

39. Wang, W.; Green, M.; Choi, JE; Gijón, M.; Kennedy, PD; Johnson, JK; Liao, P.; Lang, X.; Kryczek, I.; Müü, A.; et al. CD8+ T-rakud reguleerivad kasvaja ferroptoosi vähi immunoteraapia ajal. Loodus 2019, 569, 270–274. [CrossRef]