Cistanche Deserticola päritolu polüsahhariidide lümfotsüütide proliferatsiooni soodustava toime ja mehhanismi esialgne uurimine

meetodid

MTT testi kasutati põrna lümfotsüütide proliferatsiooni tuvastamiseks hiirtel. Tsüklofosfamiidi (Cy) kasutati immuunpuudulikkusega loomade loommudelite kordamiseks ning mõõdeti normaalsete ja immuunpuudulikkusega loomade põrna ja harknääre indekseid. Interleukiin-2 (IL-2) aktiivsust mõõdeti tümotsüütide proliferatsiooni testiga. Tulemused: Cistanche deserticola polüsahhariid soodustas märkimisväärselt mitogeeniga (ConA ja LPS) aktiveeritud lümfotsüütide ja mitteaktiveeritud normaalsete rakkude proliferatsiooni ning IL-2 sekretsiooni lümfotsüütides. Intraperitoneaalne manustamine näitas, et Cistanche deserticola polüsahhariid suurendas märkimisväärselt normaalsete ja immuunpuudulikkusega hiirte põrnaindeksit ning avaldas ka olulist antagonistlikku mõju Cy põhjustatud tüümuse indeksi vähenemisele. Järeldus: Cistanche deserticola polüsahhariid võib märkimisväärselt soodustada põrna lümfotsüütide proliferatsiooni hiirtel, mis võib olla seotud selle IL-2 sekretsiooni soodustamisega.

Kõrbes elav cistanche

[Märksõnad]Cistanche deserticola polüsahhariid; Põrna indeks; Harknääre indeks; Lümfotsüütide proliferatsioon; Interleukiin-2

Taimsed polüsahhariidid on äratanud laialdast tähelepanu nende laialdase immunomoduleeriva toime ja suhteliselt madala toksilisuse tõttu [1]. Cistanche deserticola ma, tuntud kui "Desert Ginseng", on laialdaste farmakoloogiliste toimetega orobaceae taime Cistanche deserticola kestendav, kuiv ja lihav vars. Selle veekeetmine võib oluliselt suurendada makrofaagide fagotsüüti protsenti ja fagotsüütindeksit. Edasised uuringud on näidanud, et selle materiaalne alus on Cistanche deserticola [3] polüsahhariid. Zeng Qunli et al. [4] on leidnud, et Cistanche deserticola polüsahhariidi ühel komponendil on märkimisväärne proliferatiivne toime hiire tüümuse lümfotsüütidele in vitro. Cistanche deserticola polüsahhariidi mõju lümfotsüütide proliferatsioonile täheldati in vivo ja in vitro.

Cistanche deserticola molekulaarne valem

1 Materjalid ja meetodid

1.1 Ravimid ja reaktiivid

Cistanche deserticola polüsahhariidi annab Meditsiinikolledži meditsiini- ja istutusinstituudi taime- ja keemiaosakond. See ekstraheeritakse Cistanche ekstrakti pulbrist ja polüsahhariidide sisaldus on 87%.

Cistanche ekstrakti pulber

Enne in vivo katsete kasutamist lahustage ja lahjendage füsioloogilise soolalahusega vajaliku kontsentratsioonini ning keetke steriliseerimiseks. Enne in vitro katsete kasutamist lahustati ja lahjendati sööde RPMI-1640 ning viidi läbi kõrgsurve steriliseerimine. Lipopolüsahhariid (LPS), konkanavaliin (ConA), deksametasoon (DEX) ja MTT on kõik Sigma Corporationi tooted. Tsüklofosfamiid, Shanxi Taisheng Pharmaceutical Co., Ltd. Hiina-Ameerika ühisettevõte, veise loote seerum, RPMI1640 sööde ja trüpsiin on kõik Gibco tooted. Teised reaktiivid on kodumaised analüütilised reaktiivid.

1.2 Loomad

BALB c noori hiiri (SPF tase) pakub Viton Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd. [SCXK (Peking) 2002-2003]. SPF-klassi loomi kasvatatakse toas ning neid toidetakse ja juuakse vabalt.

1.3 Seade

Multikan Ascent ensüümi marker, Thermo Electron Company, USA toode. Leici PHS-3B Precision pH Meter, Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd., NAPCOo 5410 süsinikdioksiidi inkubaator, NAPCO, USA. BCN-1360 Ultra Clean Workbench, Beijing Donglianhar Instrument Manufacturing Co., Ltd. XDS-1B Pöördmikroskoop, Chongqing Optoelectronic Instrument Co., Ltd.

1.4 Meetod

1.4.1 Mõju lümfotsüütide proliferatsioonile [5]:

Põrna lümfotsüütide rutiinne valmistamine BALB/c hiirtelt, kasutades RPMI-1640 rakukontsentratsiooni reguleerimiseks 1 × 107 ml-ni, inokuleeriti 96-süvendilisele kultuuriplaadile, igasse süvendisse μL-50 lisades 100 rakususpensiooni. Seda kultiveeriti koos erinevate kontsentratsioonidega Cistanche deserticola polüsahhariidiga (Cistanche deserticola polüsahhariidi lõppkontsentratsioon aktiveerimata lümfotsüütide proliferatsiooniks oli järjekorras 6,25, 12,5, 25, 50 ja 100 mg/l; aktiveeritud polüsahhariidi polüsahhariidi lõppkontsentratsioon A-kõrbestiku aktiveerimiseks lümfotsüüdid olid järjekorras 3,9, 7,8, 15,6, 31,2 ja 62,5 mg/l ning Cistanche deserticola polüsahhariidi lõppkontsentratsioon LPS-iga aktiveeritud B-lümfotsüütide proliferatsiooniks oli 1,56, 3,13, 6,25, l, 125 mg/l ja 125 mg/l. Kontrollina kasutati meediumit RPMI-1640. Iga augu kogumaht on 200 μL. Mitogeeni ConA ja LPS lisamisel (kontroll on RPMI-1640, mis sisaldab vastavaid ConA või LPS kontsentratsioone), on mõlema lõppkontsentratsioonid vastavalt 2,5 mg/L ja 10 mg/L. Erinevate raviprotseduuride jaoks tehti kolm paralleelset auku. Asetage kultiveerimisplaat 68 tunniks 37-kraadisesse 5% CO2 küllastunud niiskusega inkubaatorisse, lisage MTT ja jätkake kultiveerimist 4 tundi. Mõõtke A540 nm väärtust ensüümi markeriga, kasutades proliferatsiooni tuvastamiseks MTT meetodit. Iga rühma võrdlemisel teisendage A540nm väärtus lümfotsüütide proliferatsiooni kiiruseks vastavalt järgmisele valemile:lümfotsüütide proliferatsiooni määr =AA proovi A kontroll × 100 %.

Cistanche mõju - parandab immuunsust

1.4.2 Mõju immuunorganite kaalule normaalsetel hiirtel [6,7]:

Noored BALB c hiired (isased, 4-nädalased, kehamassiga 10–15 g) jagati juhuslikult tühja kontrollrühma (soolalahus) ja erinevatesse annustamisrühmadesse (125 mg (kg · bw) ja 250 mg (kg · bw)), igas rühmas oli 11 rotti. Ravimit manustati intraperitoneaalselt üks kord päevas 7 järjestikuse päeva jooksul. Hiired tapeti pärast emakakaela dislokatsiooni. Võeti põrn ja harknääre, eemaldati rasv- ja fastsiakude ning pindmine vedelik kuivatati filterpaberiga. Pärast kaalumist põrna indeks =100 × põrna kaal (mg) kehamass (mg); Htümusiindeks=100 × tüümuse kaal (mg) kehakaal (mg). Arvutage põrna indeks ja harknääre indeks vastavalt iga 100 mg kehamassi kohta.

1.4.3 Mõju immuunorganite massile immuunpuudulikkusega hiirtel [7,8]:

Noored BALB c rotid (isased, 6 nädala vanused, kehakaaluga 15-20 g) jagati juhuslikult 12 rühma vastavalt kehakaalule. Välja arvatud normaalsele kontrollrühmale (ekvivalentse koguse füsioloogilise soolalahuse intraperitoneaalne süstimine) süstiti teistele rühmadele Cy 50 mg (kg · bw) päevas intraperitoneaalselt ja uuritava ravimi lahust manustati intraperitoneaalselt [125 ja 250 Mg (kg · kehamassi)], normaalsele kontrollrühmale ja füsioloogilise lahuse mudelrühmale manustati sama kogus 13 päeva. päeval. Loomade massi muutusi täheldati katse ajal . 24 tundi pärast viimast manustamist, põrna ja harknääre indeksid mõõdeti ja arvutati sama meetodiga nagu punktis 1.4.2.

1.4.4 Mõju IL-2 tegevusele:

① IL-2 [9] esilekutsumine: lisage 96-süvendilise rakuplaadi igasse süvendisse 50 ui Cistanche deserticola polüsahhariidi erinevad kontsentratsioonid (lõplikud kontsentratsioonid järjekorras: 3,91, 7,82, 15,63, 31,25, 62,5 mg/l, 1 lisage kontrollaugusse 25 mg/l, 1). L söödet) ja 50 µl ConA-d (lõppkontsentratsioon 5 mg/l), lisage veel 1 süvend × 106 põrnarakku. Inkubeerige 37-kraadises 5% CO2 küllastunud niiskusega inkubaatoris 24 tundi, tsentrifuugige 20 minutit kiirusel 2500 p/min, võtke raku supernatant ja hoidke seda ooterežiimis - 20 kraadi juures. ② IL-2 aktiivsuse tuvastamine [9,10]: põhimeetod põhineb kirjandusel [9] ja vastavad kohandused tehakse vastavalt kirjandusele [10]. Tavapärane BALB c hiire tümotsüütide suspensiooni valmistamine, 96 süvendiga rakukultuuri plaat, 1 inokulatsioon süvendi kohta × 106 tümotsüüdi, lisades 50 rakku süvendi kohta μL ConA (lõppkontsentratsioon 2,5 mg/L) ja seejärel lisage ettevalmistatud IL-2 supernatant 50 μl kontrolllahusele, 50 μl kultuurile (lisage tühjaks). inkubeerige koos 54 tundi, lisage MTT, jätkake inkubeerimist 4 tundi, tsentrifuugige 10–15 minutit kiirusel 1000 p/min, visake supernatant ära ja lisage DMSO 100 süvendi kohta μL, loksutage mikroostsillaatoriga 8 minutit ja mõõtke ensüümi markeri väärtus A540 nm.

1.5 Statistiline analüüs

Andmed väljendati keskmise ja standardhälbena (x ± s). Andmete võrdlemiseks kasutati Microsoft Exceli tarkvara ja viidi läbi t-test. P<0.05 and P<0.01 were significant differences, both of which were statistically significant.

2. Tulemused

2.1 Mõju lümfotsüütide proliferatsioonile

Nagu tabelist 1 näha, võib Cistanche deserticola polüsahhariidi lisamine hiire põrna lümfotsüütide in vitro kultiveerimissöötmele kontsentratsioonis üle 25 mg/l märkimisväärselt stimuleerida lümfotsüütide proliferatsiooni, mis näitab, et Cistanche deserticola polüsahhariidil endal on mitootiline toime. Samal ajaltabelist 2 ja 3 on näha, et CDPS-il on märkimisväärne soodustav toime ConA-indutseeritud T-lümfotsüütide või LPS-indutseeritud B-lümfotsüütide proliferatsioonile..

Tab.1 Cistanche deserticola polüsahhariidi mõju aktiveerimata lümfotsüütide proliferatsioonile (x ±s, n =3)

Mitte: võrreldes kontrollrühmaga *P<0.05.

Tab.2 Cistanche deserticola polüsahhariidi mõju ConA poolt indutseeritud T-lümfotsüütide proliferatsioonile (x ±s, n =3)

 

Märkus: võrreldes ConA rühmaga *P<0.05, ＊＊P <0.01.

Tab.3 Cistanche deserticola polüsahhariidi mõju LPS-i poolt indutseeritud B-lümfotsüütide proliferatsioonile (x ±s, n =3)

Märkus: võrreldes LPS-rühmaga *P<0.05, ＊＊P <0.01.

2.2 Mõju immuunorganite kaalule normaalsetel hiirtel

Nagu tabelist 4 näha,Cistanche deserticola polüsahhariid võib märkimisväärselt tõsta normaalsete BALB/cc noorte rottide põrnaindeksit, kuid ei mõjuta harknääret.

2.3 Mõju immuunorganite massile immuunpuudulikkusega hiirtel

Tabelist 5on näha, et Cy immunosupressiivse rühma hiirte põrna ja harknääre organite indeksid on madalamad kui kontrollrühmal ning Cistanche deserticola polüsahhariid (125, 250 mg/kg) võib oluliselt parandada põrna ja harknääre indekseid.

2.4 Mõju IL-2 tegevusele

Nagu tabelist 6 näha,kui Cistanche deserticola polüsahhariidi annus jõuab 7,82 mg/l, võib see märkimisväärselt suurendada IL-2 vabanemist hiire põrnarakkudest.

Tab.4 Cistanche deserticola polüsahhariidi mõju immuunorganite massile normaalsetel hiirtel (x ±s, n =11)

Märkus: võrreldes kontrollrühmaga ＊＊P<0.01.

Tab.5 Cistanche deserticola polüsahhariidi mõju immuunpuudulikkusega hiirte immuunorganite massile (x ±s, n =12)

Märkus: võrreldes kontrollrühmaga ## P < 0,01; võrreldes mudelirühmaga *P<0.01.

Tab.6 Cistanche deserticola polüsahhariidi mõju IL-2 produktsioonile põrna lümfotsüütide poolt hiirtel (x ±s, n =3)

Märkus: võrreldes kontrollrühmaga ＊＊P<0.01.

3. Arutelu

ConA ja LPS-i poolt indutseeritud põrna lümfotsüütide proliferatsioon hiirtel on in vitro katse T- ja B-lümfotsüütide funktsiooni tuvastamiseks ning on spetsiifilise immuunvõime oluliseks näitajaks. Uuringud on näidanud, et kui Cistanche deserticola polüsahhariidi lõppkontsentratsioon on üle 25 mg/l, võib see märkimisväärselt soodustada lümfotsüütide proliferatsiooni, mis näitab, et sellel on teatav mitootiline toime. Mitogeeni (ConA või LPS) juuresolekul võib Cistanche deserticola polüsahhariidi väiksem annus parandada, kui kehal on märkimisväärne proliferatiivne aktiivsus. Teame, et ConA ja LPS indutseerivad peamiselt vastavalt T-lümfotsüütide või B-lümfotsüütide proliferatsiooni. Uuringud on näidanudTistanche pulbri kasu tervisele: Cistanche deserticola polüsahhariid võib soodustada nii T-lümfotsüütide kui ka B-lümfotsüütide proliferatsiooni, kuid selle proliferatiivne toime B-lümfotsüütidele on oluliselt tugevam kui T-lümfotsüütidel.

Cistanche pulbri kasu tervisele - Improve puutumatus

Cistanche Improve Immunity toodete vaatamiseks klõpsake siin

【Küsi lisa】 E-post: xue122522@foxmail.com / WhatsApp 0086 18599088692 / WeWeChat18599088692

Harknääre ja põrn on loomade peamised immuunorganid. Põrna immuunrakud on peamiselt küpsed B-lümfotsüüdid, harknääre aga peamiselt ebaküpsed T-lümfotsüüdid. Harknääre ja põrna indeksid võivad kajastada immuunorganite arengut ja immuunrakkude funktsionaalset seisundit. Cistanche deserticola polüsahhariidi intraperitoneaalne süstimine võib märkimisväärselt suurendada normaalsete ja immuunsupresseeritud hiirte põrna indeksit ning sellel on märkimisväärne antagonistlik toime Cy poolt indutseeritud tüümuse atroofiale hiirtel.

Cistanche deserticola polüsahhariidil ei ole normaalsete loomade tüümuse indeksile olulist mõju, mis on kooskõlas in vitro katsete tulemustega, milles Cistanche deserticola polüsahhariid soodustab pigem B-lümfotsüütide kui T-lümfotsüütide proliferatsiooni.

Cistanche toidulisand minu lähedal-Improvepuutumatus

IL-2 on tsütokiin, mida toodavad T-lümfotsüüdid rakutsükli G1 faasist S-faasi. See on peamine T-rakkude kasvufaktor, mis toimib autokriinse kasvufaktorina. Lisaks võib IL-2 soodustada B-rakkude proliferatsiooni ja antikehade sünteesi [11,12]. Cistanche deserticola polüsahhariid soodustab IL-2 vabanemist lümfotsüütidest, mis on ilmselgelt seotud Cistanche deserticola polüsahhariidiga, mis soodustab põrna lümfotsüütide proliferatsiooni.

Meditsiinilised uuringud näitavad, et Cistanche sisaldab polüsahhariide, ehhinakosiide ja akteosiidi, mis võivad aktiveerida lümfotsüüte ja parandada keha seisundit; Tistanche funktsionaalsed komponendid Fenüületanoidglükosiidid mõjutavad oluliselt rakkude taastumist pärast 60 Co gammakiirguse kahjustust ja võivad samuti parandada immuunfunktsiooni kiirguskahjustuste vastu. Cistanche deserticola toidulisandite igapäevane võtmine võib saavutada immuunsust parandava efekti.