eeKeel
Kodu / Teadmised / Sisu

Teadmised

Sigade platsenta ekstrakt suurendab raku NAD taset inimese epidermises keratinotsüütides Ⅱ

Jun 25, 2023

Arutelu

Paljud uuringud on näidanud, etNAD väheneminevananemise tõttu on korrelatsiooniskudede funktsionaalne langusjavanusega seotud haiguste ja vähi areng11,22. Epidermises põhjustab UV-kiirgus, naha vananemise kõige olulisem väline tegur, NAD ammendumist jakronoloogiline vananemine23. Kuna nahk puutub igapäevaelus pidevalt kokku UV-kiirgusega, näib NAD-i võimendavate ainete paikne manustamine olevat mõistlik lähenemine NAD-i vähenemise ärahoidmiseks ja naha kaitsmiseks UV-kahjustuste eest. Tõepoolest, on näidatud, et NAD-i suurendamine nahas hoiab ära UV-indutseeritud nahavähki ja immuunsupressiooni hiirtel24. Jacobson et al. teatas, et paiksed nikotiinhappe derivaadid suurendasid naha NAD-i sisaldust ja parandasid barjäärifunktsiooni25.

KSL12

Klõpsake siin, et hankida Cistanche – parimad vananemisvastased ürdid

Buy Cistanche

Lisaks on mitmed kliinilised uuringud näidanud, et NAD prekursori NAM paikne manustamine vähendabnaha vananemise märke26,27. Need in vivo ja kliinilised andmed toetavad võimalust, et kõrgenenud NAD tase takistabnahakahjustused ja aeglustada vananemist. Oleme ka varem teatanud, et piisava NAD taseme säilitamine on oluline inimese epidermise rakkude kaitsmiseks UV-stressi eest21. Selles uuringus näitasime, et PPE suurendab intratsellulaarset NAD taset keratinotsüütides. Samuti leidsime, et selle toimeainete LMW on alla 3 kDa, mis on efektiivne nii ühekihilise kui ka 3-dimensioonilise epidermise kultuuri mudelite puhul. Need leiud viitavad sellele, et PPE toimeained võivad imenduda transdermaalselt ja tõstavad seetõttu esile selle potentsiaalse kasutamise paikse ainena naha NAD taseme tõstmiseks.

cistanche anti-aging herbs

Joonis 3. LMW-PPE aktiivne fraktsioon sisaldab mitmeid NAD prekursoreid. (A) LMW-PPE (1 mg) eraldati ja seda jälgiti mitme lainepikkusega (200–600 nm), kasutades HPLC-d. (B) Eluendid koguti2 minuti kohta ja testiti NAD taastumisaktiivsust igas fraktsioonis. (C) Fraktsiooni 3 analüüsiti kasutades LC-MS/PRL. Kõik ühendid tuvastati positiivsete ioonide režiimis.


image


Tabel 1. NAD prekursori sisaldus isikukaitsevahendites.

Nahas vähendab NAD puudulikkus peamiste energia ainevahetusradade, nagu glükolüüs ja oksüdatiivne fosforüülimine, funktsiooni. Glükolüüs on keratinotsüütide proliferatsiooni ja diferentseerumise vahelise tasakaalu säilitamiseks hädavajalik28. UV-kiirgus vähendab NAD taset ja võib seetõttu seda tasakaalustamatust kiirendada. Täheldati, et diferentseerumise ja proliferatsiooni suhe on päikese käes kaitstud nahal oluliselt suurenenud, võrreldes päikese eest kaitstud nahaga29. Tan et al. leidis, et FK866-ravi kiirendas diferentseerumist ja vähendas metaboolset aktiivsust NHEK-des ning et NAM muutis need FK866-indutseeritud sündmused ümber, taastades raku NAD taseme28.

cistanche anti-aging herbs


Joonis 4. Paikne PPE näitab NAD taastumisaktiivsust, kuid ei mõjuta rakkude metaboolset aktiivsust RHE-s. (A) RHE mudeli skemaatiline illustratsioon. (B) PPE (2 mg/ml) kanti RHE sarvkihi küljele ja inkubeeriti 48 tundi FK866 (5 nM) juuresolekul või puudumisel. Kudede NAD üldtasemed määrati NAD plus/NADH analüüsikomplekti abil. (C) RHE sarvkihi küljele kanti isikukaitsevahend (0, 1, 2 või 10 mg/mL) või 1% TX-100 (positiivse kontrollina) ja inkubeeriti 48 tundi. . Rakkude metaboolne aktiivsus määrati MTT testiga. **lk<0.01, the comparison to the control.

Käesolevas uuringus leidsime, et PPE taastas FK{0}}indutseeritud NAD ammendumise. Seetõttu võib parema tulemuse teha kindlaks, kas PPE suudab säilitada diferentseerumist ja proliferatsiooni NAD-vaese epidermises.selle mõistminevananemisvastane mehhanism.

cistanche anti-aging herbs

Hiljuti Aioi et al. näitas, et isikukaitsevahendite paikne kasutamine vähendas oluliselt näo kortse ja parandas naha hüdratsiooni17. Meie eelmine kliiniline test näitas, et PPE kreemi paikne kasutamine parandas oluliseltnaha vananemisvastased parameetrid, nagu näitekskortsud,naha niisutamine, longusja silmakotid (avaldamata andmed). Selle uuringu tulemused võivad aidata mõista mehhanismi, mille abil isikukaitsevahendid vähendavad kortse ja parandavad naha niisutamist. Eelmine aruanne näitas, et rakusisene kogu NAD tase on positiivses korrelatsioonis ekstratsellulaarse maatriksi komponentide, nagu prokollageeni ja elastiini, ekspressiooniga inimese naha fbroblastides30. Fibroblastide ravi PPE-ga suurendab I tüüpi kollageeni tootmist17. Nende faktidega kombineerituna võib PPE soodustada kollageeni tootmist, suurendades NAD sisaldust fibroblastides, mis võib viia kliinilistes uuringutes täheldatud nahakortsude leevendamiseni. Naha niisutamine on tihedalt seotud epidermise kihi barjäärifunktsiooniga. Mitmed uuringud on näidanud, et NAD on naha barjäärifunktsiooni säilitamise oluline kaasfaktor. Ming et al. näitas, et NAD-sõltuv deatsetülaas SIRT1 reguleerib filaggriini ekspressiooni, mis mängib naha barjääri terviklikkuses kriitilist rolli looduslike niisutavate tegurite prekursorvalguna31. Lisaks näitas kliiniline uuring, et NAD-i võimendava aine paikne manustamine vähendas märkimisväärselt transepidermaalset veekadu koos sarvkihi paksuse suurenemisega fotokahjustatud nahal25. Need aruanded viitavad sellele, et PPE võib parandada naha barjääri funktsiooni, suurendades raku NAD taset epidermises, mis tõenäoliselt viib kliinilistes uuringutes täheldatud naha hüdratatsiooni paranemiseni.


Viimastel aastatel on NAD-i võimendajad osutunud kasulikuks antioksüdantse ja põletikuvastase toime tugevdamisel. Diabeetiliste ja septiliste hiirte mudelites vähendas NR-i manustamine märkimisväärselt rasvasisaldusega dieedist põhjustatud ajupõletikku ja hoidis ära lipopolüsahhariididest põhjustatud endoteeli oksüdatiivse stressi, vastavalt 32, 33. Sarnaselt NR-ga on näidatud, et NMN-i lisamine eakatel hiirtel muudab põletikueelse mRNA ekspressiooniprofiili neurovaskulaarses üksuses ja parandab kardiovaskulaarset funktsiooni, vähendades oksüdatiivset stressi34, 35. Lisaks näitas eakate meestega läbi viidud kliiniline uuring, et suukaudne NR vähendas ringlevate põletikuliste tsütokiinide taset36. Kokkuvõttes toetavad need in vivo ja kliinilised uuringud ideed, et NAD-i võimendavate ainete kasutamine annab antioksüdantse ja põletikuvastase toime. Tõhustatud SIRT-i aktiivsust on pakutud üheks usutavaks mehhanismiks, mille abil need NAD-võimendid avaldavad põletikuvastast ja antioksüdantset toimet. IKV-l on teadaolevalt antioksüdantne ja põletikuvastane toime15; seni on siiski tehtud suhteliselt piiratud mehhaanilisi uuringuid. Käesolev uuring annab vähemalt osalise selgituse isikukaitsevahendite mõju kohta.


On teada, et PPE sisaldab ohtralt rakkude kasvu soodustavaid valke, nagu laminiin, tsütokiinid ja kasvufaktorid. Hiljutised uuringud, sealhulgas meie uuringud, on seostanud raku NAD tasemeid epidermise keratinotsüütide rakkude kasvuga 21, 28. Seetõttu oletasime, et mõned neist valkudest võivad kaasa aidata NAD-i sisalduse suurenemisele. Kuid vastupidiselt meie ootustele leidsime, et osa, mis sisaldas madala molekulmassiga molekule alla 3 kDa, soodustas NAD tootmist keratinotsüütides. Huvitaval kombel näitas PPE osa fraktsioneerimine HPLC abil, et NAD tootmist täheldati ainult fraktsioonis 3. Samuti leidsime, et selles fraktsioonis esinesid NAD prekursorid, nagu NMN, NR ja NAM, mis viitab sellele, et need võivad mõju selgitada. NAD-i tootmisel, vähemalt osaliselt. Kuna aga iga PPE-s sisalduv koostisosa tuvastati väga madalates kontsentratsioonides, näib olevat raske seletada, et need koostisosad üksi vastutavad PPE võime eest edendada NAD-i sisaldust keratinotsüütides. Hiljutised aruanded on näidanud, et nende NAD prekursorite redutseeritud vormidel NRH ja NMNH on suurem võime NAD toota kui NR ja NMN37–40. Kuigi on vaja täiendavaid analüüse, et teha kindlaks, kas PPE sisaldab NRH-d ja NMNH-d, võib selles uuringus täheldatud PPE NAD-i võimendavat võimet seostada mitme NAD-võimendajaga, sealhulgas NMN, NR, NMNH, NRH ja muude tundmatute NAD-i eelkäijatega.

cistanche best anti-aging herbs

Kokkuvõtteks võib öelda, et meie leiud avavad võimaluse kasutada PPE-d erinevate haiguste ja sümptomite parandamiseks, suurendades NAD-i rakusisest taset, mis on oluline kaasfaktor, mis osaleb erinevates rakulistes biokeemilistes reaktsioonides.



materjalid ja meetodid

IKV ettevalmistamine. PE eraldati külmutatud sea platsentast. Pärast kõigi vere ja nabanööri jälgede eemaldamist pesti sea platsentat, homogeniseeriti ja viidi läbi kolm külmutamis-sulatustsüklit. Kudede homogenaati tsentrifuugiti kiirusel 120 x g 1 minut ja supernatant koguti ja kasutati PPE-na. Kuivaine sisalduse arvutamiseks PPE kontsentreeriti ja kuivatati 105 kraadi juures 5 tundi. Pärast ruumi jahutamist

temperatuuri eksikaatoris, mõõdeti kaal täppiskaaluga. PPE kuivaine sisaldus oli 10,98 mg/ml.

best anti-aging herbs

Rakukultuurid.

NHEK-e (vastsündinud/isane, Termo Fisher Scientifc, Waltham, MA, USA) kultiveeriti EpiLife™ söötmes, mis sisaldas 60 µM kaltsiumi, millele oli lisatud inimese keratinotsüütide kasvulisandit (mõlemad firmalt Termo Fisher Scientifc) 37 kraadi juures niisutatud atmosfääris 5% CO2-ga. . Söödet vahetati igal teisel päeval, kuni kultuur saavutas ligikaudu 50% konfluentsuse, seejärel vahetati seda iga päev. Rakud passeeriti, kui nad saavutasid 80–90% konfluentsuse. NHEK-e ei kasutatud pärast lõiku 5.



NAD kvantifitseerimise ja taastumise analüüs.

NAD kogust mõõdeti NAD plus /NADH Assay Kit-WST (Dojindo Laboratories, Kumamoto, Jaapan) abil vastavalt tootja juhistele. Lühidalt, 1.0× 105 NHEK-i külvati 12-süvendiga plaatidele. 24 tunni pärast töödeldi rakke PPE-ga erinevatel kontsentraadivalikutel (0, 0,25, 0,5 ja 1 mg/mL) ja kultiveeriti 1–24 tundi 5 raku juuresolekul või puudumisel. nM FK866 (AdooQ Bioscience, Irvine, CA, USA). Rakud lüüsiti kaasasoleva NAD plus/NADH ekstraheerimispuhvriga ja ultrafiltriti Ultracel-10 K tsentrifugaalfiltriseadmega (Merck, Darmstadt, Saksamaa). NADH kontsentratsiooni arvutamiseks inkubeeriti pooli filtraate 60 kraadi juures 60 minutit, et lagundada NAD plus. Kõik filtraadid allutati ensümaatilisele reaktsioonile 37 kraadi juures 1 tund. Seejärel mõõdeti proovide neeldumist lainepikkusel 450 nm, kasutades Infinite 200 Pro plaadilugejat (Tecan, Männedorf, Šveits). NAD pluss sisaldus arvutati, lahutades NADH sisalduse NAD kogusisaldusest. NAD pluss/NADH tasemed normaliseeriti vastavatele valgukontsentratsioonidele, mis määrati Pierce BCA valguanalüüsi abil (Thermo Fisher Scientific).


MTT analüüs. NHEK-d külvati {{0}}süvendiga plaadile tihedusega 0,5 × 105 rakku süvendi kohta ja inkubeeriti 24 tundi. Seejärel töödeldi rakke 24 tundi PPE-ga (0,5, 1, 2 ja 5 mg/ml) või 0,2% TX-100-ga. Rakke inkubeeriti

300 μL 1 mg/ml MTT (Thermo Fisher Scientific) lahusega 37 kraadi juures ja 5% CO2 sisaldusega 3 tundi. Pärast kolm korda PBS-ga pesemist ekstraheeriti NHEK-desse infiltreeritud formazaan toatemperatuuril 2 tundi 200 μL dimetüülsulfoksiidiga. Optiline neeldumine 560 nm juures määrati Infnite 200 Pro plaadilugeja (Tecan) abil.


IKV ultrafiltreerimine. PPE (500 μL) kanti Ultracel-3K tsentrifugaalfiltriseadmele (Merck Millipore) ja tsentrifuugiti 16 100 × g juures 4 kraadi juures 60 minutit. Filtraate kasutati PPE LMW fraktsioonina. Filtril olevate jääkide kogumiseks asetati filtriseadmed tagurpidi uude tsentrifuugitorusse ja tsentrifuugiti 1000 × g juures 4 kraadi juures 5 minutit. Te jäägid taastati 500 µl fosfaatpuhverdatud soolalahusega (PBS) ja kasutati PPE HMW fraktsioonina.


HPLC fraktsioneerimine. LMW-PPE fraktsioneerimiseks kasutasime HPLC gradiendisüsteemi, mis oli varustatud süstalt laadiva proovipihusti, kahe pumba, MD-2010 multi-UV-detektoriga (Jasco, Tokyo, Jaapan) ja
C 18 pöördfaasiline kolonn (Inertsil ODS-3, 5 μm, 4,6 × 250 mm, GL Science, Tokyo, Jaapan). Suure reprodutseeritavuse tagamiseks kasutati fraktsioneerimiseks pigem analüütilist kolonni kui preparatiivset. Te HPLC lahustid
olid 0,05 protsenti trifluoroäädikhapet vees (A) ja HPLC puhtusastmega atsetonitriili (B). HPLC kolonni kanti sada mikroliitrit LMW-PPE-d ja eraldati järgmise gradiendi abil voolukiirusel 1 ml/

min: hoidke 100 protsenti lahustit A vahemikus 0 kuni 10 minutit, seejärel lineaarne gradient 0 protsendist B 10 minutiga 95 protsendini B 30 minutiga. Eluendid koguti proovituubidesse iga 2 minuti järel ja kuivatati tsentrifugaalaurustiga CVE-3100 (EYELA, Tokyo, Jaapan). Jäägid lahustati 100 µl PBS-ga ja filtreeriti läbi 0,22 µm membraani enne NAD-i taastamise testi kasutamist.


NAD prekursorite analüüsid.

NMN, NR ja NAM tuvastati ja kvantifitseeriti isotoopide lahjendusega LC-MS/MS. Analüüsid viidi läbi ACQUITY UPLC H-klassi süsteemiga, mis oli ühendatud TQS-mikro-kolmekordse kvadrupoolse massispektromeetriga (Waters, Milford, MA, USA) elektropihustusionisatsiooniga, mis töötati positiivsete ioonide režiimis. Iga proovi eraldamiseks kasutati kolonni Capcell Pak ADME HR (2 μm, 2,1 × 100 mm, Osaka Soda, Osaka, Jaapan). Liikuvad faasid A–B olid vesi-metanool (sisaldas {{10}},1 protsenti sipelghapet ja 10 mM ammooniumformiaati). Gradiendi tingimus oli järgmine: 0–0,5 min (99 protsenti A), 0,5–3 min (99–60 protsenti A), 3–5 min (60–2 protsenti A) ja 5–7 minutit (2 protsenti A). Voolukiirus oli 0,2 ml/min. Kapillaarpinge oli 0,75 kV, lähtetemperatuur 150 kraadi ja desolvatatsioonitemperatuur 500 kraadi. Koonuse gaasi vool oli 50 l/h ja desolvatatsioonigaasi vool 1100 l/h. Iga NAD prekursori kvantifitseerimiseks lisati proovidele sisestandardina NAM-13C6 kontsentratsioonis 78 nM. Ioonide jälgimiseks kasutati mitme reaktsiooni jälgimist (MRM) järgmiste üleminekutega: NMN m/z 335 → 123, NR m/z 255 → 123, NAM m/z 123 → 80 ja m/z 129 → 85 NAM-13C6 jaoks. NMN osteti Oriental Yeast'ist (Tokyo, Jaapan). NR ja NAM{46}}C6 saadi firmalt Merck (Darmstadt, Saksamaa). NAM osteti ettevõttelt Wako Pure Chemical Industries (Osaka, Jaapan).



RHE. In vitro RHE mudel EpiDerm™ (EPI-200) osteti firmalt MatTek (Ashland, MA, USA) ja seda kultiveeriti EPI-100-ASY söötmes (MatTek) temperatuuril 37 kraadi ja 5% CO2-sisaldusega. RHE sarvkihi küljele kanti sada mikroliitrit PPE-d (1, 2 ja 10 mg/ml) või 1% TX-100. RHE-d inkubeeriti 48 tundi EPI{11}}ASY söötmes FK866 (5 nM) juuresolekul või puudumisel. Pärast inkubeerimist pesti RHE-d kolm korda PBS-ga. NAD taastumistesti jaoks kvantifitseeriti NAD kogutase RHE-s, kasutades NAD plus /NADH Assay Kit-WST. Rakkude metaboolse aktiivsuse testi jaoks kanti RHE 24-süvendiga plaadile ja inkubeeriti 300 μL 1 mg/ml MTT (Thermo Fisher Scientific) lahusega 37 kraadi juures ja 5% CO2 juures 3 tundi. Pärast kolm korda PBS-ga pesemist ekstraheeriti RHE-sse infiltreeritud formazaan toatemperatuuril 2 tundi 2 ml dimetüülsulfoksiidiga. Optiline neeldumine 560 nm juures määrati Infnite 200 Pro plaadilugeja (Tecan) abil. Rakkude metaboolse aktiivsuse testi positiivse kontrollina kasutati neeldumist 1% TX-100-ga töödeldud RHE-ga.

Statistiline analüüs. Andmed on esitatud vähemalt kolme sõltumatu katse keskmise ± standardveana. Kõik statistilised analüüsid viidi läbi tarkvara EZR versiooniga 1.55 (Saitama Medical

keskus, Jichi meditsiiniülikool, Saitama, Jaapan). Enne andmete võrdlemist kinnitati jaotuse normaalsus Shapiro-Wilki testiga. Dispersioonide homogeensust hinnati F-testiga (kaks rühma) ja
Bartletti test (mitu rühma). Erinevused mitme rühma vahel määrati ühesuunalise ANOVA abil, millele järgnes Tukey post hoc test. Nende kahe oluliste erinevuste kontrollimiseks kasutati Studenti t-testi
rühmad. Statistiline olulisus määrati p<0.05 and p<0.01. Asterisks and daggers indicate statistical significance compared to the control (*p<0.05, **p<0.01) and indicated (†p<0.05 and ††p<0.01) groups, respectively.
Eetiline heakskiit. Ei kohaldata. Sigade platsentad, mis võeti ja külmutati koheselt 3 tunni jooksul pärast loote spontaanset sünnitamist, osteti omaniku nõusolekul ühest Jaapanist Hokkaidos asuvast farmist. Sellesse uuringusse ei ole kaasatud ühtegi eluslooma


Viited

1. Imai, Si. & Guarente, L. NAD plus ja sirtuiinid vananemises ja haigustes. Trends Cell Biol. 24, 464–471 (2014).
2. Chaleckis, R., Murakami, I., Takada, J., Kondoh, H. & Yanagida, M. Individual variability in human blood Metabolites tuvastab vanusega seotud erinevused. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 113, 4252–4259 (2016).
3. Massudi, H. et al. Vanusega seotud muutused oksüdatiivses stressis ja NAD pluss ainevahetus inimese kudedes. PLoS ONE 7, e42357 (2012).
4. Camacho-Pereira, J. et al. CD38 dikteerib vanusega seotud NAD langust ja mitokondriaalset düsfunktsiooni SIRT3-sõltuva mehhanismi kaudu. Lahtri metab. 23, 1127–1139 (2016).
5. Braidy, N. et al. Vanusega seotud muutused NAD-s pluss metabolismi oksüdatiivne stress ja sirt1 aktiivsus Wistari rottidel. PLoS ONE 6, e19194 (2011).
6. Guest, J., Grant, R., Mori, TA & Croft, KD Muutused oksüdatiivse kahjustuse, põletiku ja [NAD(H)] vanusega tserebrospinaalvedelikus. PLoS ONE 9, e85335 (2014).
7. Rajman, L., Chwalek, K. & Sinclair, DA. NAD-i võimendavate molekulide terapeutiline potentsiaal: Te in vivo tõendid. Lahtri metab. 27, 529–547 (2018).
8. Yaku, K., Okabe, K. & Nakagawa, T. NAD metabolism: mõju vananemisele ja pikaealisusele. Aging Res. Rev. 47, 1–17 (2018).
9. Revollo, JR, Grimm, AA & Imai, SI Nikotiinamiidfosforibosüültransferaasi vahendatud NAD-i biosünteesi rada reguleerib Sir2 aktiivsust imetajarakkudes. J. Biol. Chem. 279, 50754–50763 (2004).
10. Yoshino, J., Baur, JA & Imai, SI NAD pluss vahesaadused: NMN ja NR bioloogia ja terapeutiline potentsiaal. Lahtri metab. 27 513–528 (2018).
11. Garrido, A. & Djouder, N. NAD pluss puudujääk vanusega seotud haiguste ja vähi korral. Trends Cancer 3, 593–610 (2017).
12. Pogozhykh, O., Prokopyuk, V., Figueiredo, C. & Pogozhykh, D. Platsenta ja platsenta derivaadid regeneratiivsetes teraapiates: Eksperimentaalsed uuringud, ajalugu ja väljavaated. Stem Cells Int. 2018, 4837930 (2018).
13. Kong, MH et al. Inimese platsentaekstrakti mõju menopausi sümptomitele, väsimusele ja südame-veresoonkonna haiguste riskiteguritele keskealistel Korea naistel. Menopause 15, 296–303 (2008).
14. Yoshikawa, C. Sea platsenta ekstrakti mõju kollageeni tootmisele inimese naha fibroblastides in vitro. Gynecol. Obstet. 03, 0–4 (2013).
15. Heo, JH, Heo, Y., Lee, HJ, Kim, M. & Shin, HY Sigade platsenta ekstraktide paiksed põletikuvastased ja antioksüdatiivsed toimed 2,4-dinitroklorobenseenist põhjustatud kontaktdermatiidi korral. BMC täiendus. Altern. Med. 18, 331 (2018).
16. Tiwary, SK et al. Platsentaekstrakti geeli ja kreemi mõju mitteparanevatele haavadele. J. Haavahooldus, 15, 325–328 (2006).
17. Aioi, A. et al. Sea platsenta ekstrakt vähendas kortsude teket, võimendades epidermise hüdratsiooni. J. Cosmet. Dermatol. Sci.

Rakendus 11, 101–109 (2021).

Küsi lisa:


E-post:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel: pluss 86 15292862950













Ju gjithashtu mund të pëlqeni