Cistanche polüsahhariidid võivad märkimisväärselt aeglustada kopsufunktsiooni vananemist

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

Sun Yun Wang Dejun Liu Xiaomei Shi Le Zhang Hongquan

(Yangzhou ülikooli meditsiiniinstituut, Yangzhou 225001)

Vananemineon protsess, mille käigus organismi kudedes ja elundites toimub elu jooksul funktsionaalne ja morfoloogiline degeneratsioon ning isegi vananemine. Kops on otseselt seotud väliskeskkonnaga ja võtab vastu kogu keha vereringet. See on kõige haavatavam erinevate keskkonna ja keha kahjulike tegurite suhtes. See on üks varasemaid organeid kehas, kus toimub vananemine. Vabade radikaalide rolli vananemisprotsessis on kinnitanud paljude teadlaste uuringud. See katse kasutab osooni, et luua eksperimentaalne vananemismudel, mida jälgidaCistanche päritolu polüsahhariidide mõju hüpoksiataluvusele, antioksüdantsele funktsioonile ja vananevate hiirte kopsude ultrastruktuurile. Mõjutamine. Eeldatakse, et see paneb aluse uurimistööleCistanche'i polüsahhariididkopsude degeneratiivsete muutuste edasilükkamisel ja eakate hingamissüsteemi tervishoius.

Selle uuringu eesmärk on jälgida degeneratiivseid muutusi kopsukoe rakkude ultrastruktuuris eksperimentaalselt vananevatel hiirtel ja nende mõju.Cistanche'i polüsahhariididselle kallal. Osooni (Ozone, Ob) pidev sissehingamine 4 nädala jooksul kopsude vananemise mudelmeetodi esilekutsumiseks, Cistanche 50 ja 100 grammi polüsahhariidi kasutamine mudelhiirte manustamiseks 6 nädala jooksul hüpoksiataluvuse, kopsude ja seerumi superoksiidi tuvastamiseks vananevatel hiirtel. Dismutaas (SOD) ) aktiivsus ja malondialdehüüdi (MDA) sisaldus. Kopsukoe organellide ja ultrastruktuuri muutusi vaadeldi elektronmikroskoobi all. Tulemused Osooni poolt põhjustatud katselised vananevad hiired vähendasid oluliselt hüpoksiataluvust; kopsude ja seerumi SOD vähenes ja MDA suurenes. Võrreldes mudelirühmaga võib Cistanche'i polüsahhariid märkimisväärselt pikendada vananevate hiirte hüpoksia taluvusaega (P<0.01), improve="" the="" activity="" of="" sod="" in="" the="" serum,="" reduce="" the="" content="" of="" mda=""><0.01), and="" delay="" the="" degeneration="" of="" mitochondria="" and="" lamellar="" bodies="" in="" the="" lung="" cells="" of="" aging="" mice=""><0.01). conclusion="">Cistanche polüsahhariidid võivad oluliseltkatset edasi lükata Kopsude füsioloogiline degeneratsioon ja rakumorfoloogiaseksuaalselt vananevatest hiirtest.

1 materjal

1.1 Loomad

3 kuu vanust puhast ICR tüvega hiirt, kaaluga 18–22 g, kumbki pool ¥^, saadud Yangzhou ülikooli katseloomade keskusest, sertifikaadi number: Su Dongzhi 98002^

1.2 Ravimid ja reaktiivid

Cistanche polüsahhariidid: pakub Nanjing Wild Plant Research Institute, valmistatud destilleeritud veega kuni 2,5 g·LT, 5.0 gL-1; SOD, MDA testikomplekte pakub Nanjing Juli Biomedical Engineering Research Institute.

1.3 Instrument

UV755B ultraviolettkiirguse spektrofotomeeter, Shanghai analüütiliste instrumentide tehase toode; osoonigeneraator, Wuxi meditsiiniseadmete tehase toode; H-300 ülekandeelektronmikroskoop, Jaapani Hitachi toode.

2 Meetod

2 1 Lõhna pöördekahjustusega eksperimentaalse kopsu vananemismudeli ettevalmistamine ICR-hiired võeti päeva- ja katseplaanist ning mudelirühma ja ravirühma hiired rühmitati juhuslikult.

Eksperimentaalne vananemismudel loodi 4 nädalat pidevalt. Samal ajal anti kontrollrühmale (võtame samas partiis ostetud normaalsed hiired) ja mudelrühmale 20 ml-kg ^d'1 normaalse soolalahusega, polüsahhariidi Cistanche ravirühmast I ja polüsahhariidi Cistanche 50-st, 100 mg-kg -1-d-' manustati maosisese manustamise teel ja manustamisperiood oli 6 nädalat. Pärast viimast manustamist viidi läbi erinevad indeksi testid.

2.2 Hüpoksiataluvuse katsemeetod (2)

Iga hiirte rühm pandi 250 ml jahvatuspudelisse, mis sisaldas 20 g sooda lubi. Vaseliin suleti ja aeg hiirte pudelisse panemisest lämbumise ja surmani registreeriti normaalsel temperatuuril ja rõhul.

2.3 Kopsud ja veri

SOD^MDA sisalduse määramine igas hiirte rühmas 1 tund pärast viimast manustamist, eemaldage silmamunad ja koguge seerumi eraldamiseks veri; seejärel hiired surmati, kopsukoed võeti välja ja klaashomogenisaatorisse lisati soolalahust, et valmistada 100 g -f1 kopsukoe homogenaati, kopsu ja seerumi SOD aktiivsus määrati Huangsuyini oksüdaasi meetodil ja MDA sisaldus määrati. tiobarbituurhappe kondensatsioonimeetodil.

2.4 Elektronmikroskoopia proovide ettevalmistamise meetod (3)

Katse jaguneb kontrollrühmaks, mudelrühmaks ja suure annuse rühmaks. Modelleerimis- ja haldusmeetodid on samad, mis eespool. Pärast viimast manustamist valitakse igast rühmast juhuslikult 3 hiirt ja nad surmatakse kaela kaela ajamise teel ning võetakse vastavalt parempoolsed pooled. Kopsu tipu kude, 0,4 mmol, L-1 glutaaraldehüüd ja 0,04 mmol, topeltfiksatsioon L'1 OfeO4-ga, dehüdratsioon atsetooni gradiendiga, Epon 812 kinnitus, plii-uraan elektronide värvimine, Hitachi H-300 ülekandeelektronmikroskoop suurendusega 10,000 kuni 20,000 Jälgige peamiste organellide muutusi ja struktuurimuutusi korduste all.

2.5 Statistilise töötluse tulemused on väljendatud kümnete pinnase s-ina ja kahe valimi keskmiste võrdluses kasutatakse t-testi.

3 tulemust

3.1 Cistanche'i polüsahhariidi mõju hüpoksiataluvusele vananevatel hiirtel

Üks tund pärast viimast hiirte manustamist igas rühmas testiti hüpoksia taluvusaega. Tulemused näitasid, et aeg, mille jooksul vananevad hiired hüpoksiat talusid, oli oluliselt lühem kui tavalistel hiirtel. Aeg on mudelrühmaga võrreldes märkimisväärselt pikenenud, kuid kontrollrühmaga võrreldes pole olulist erinevust, mis näitab, et Cistanche'i polüsahhariid võib oluliselt parandada vananevate hiirte hüpoksiataluvust, vt tabel 1.

3.2 Cistanche polüsahhariidi mõju vananevate hiirte antioksüdantsele funktsioonile

Iga rühma hiirte veri (seerum) ja kopsukude (kopsuhomogenaat) koguti pärast viimast manustamist ning määrati SOD ja MDA. Tulemused Vananevate hiirte seerumi ja kopsude SOD aktiivsus vähenes ning MDA sisaldus suurenes. Võrreldes kontrollrühmaga oli erinevus märkimisväärne. Cistanche'i polüsahhariidid võivad vananevatel hiirtel suurendada seerumi ja kopsude SOD aktiivsust ning vähendada MDA sisaldust. Võrreldes kontrollrühmaga ei ole olulist erinevust ja erinevus vananemismudeli rühmaga on märkimisväärne, vt tabelid 2 ja 3.

3.3 Cistanche'i polüsahhariidi mõju alveolaarsete epiteelirakkude rakusisesele pimedusele⑷

Elektronmikroskoobi valmistamismeetod on sama, mis varem. Morfomeetriline analüüs: elektronmikroskoobi all vaadeldi iga proovi 10 vaateväljas organellide mõõtmiseks. Tulemused näitasid, et mudelrühma mitokondrid ja lamellkehad vähenesid, basaalmembraan paksenes ja polüsoomid suurenesid. Võrreldes kontrollrühmaga esines olulisi erinevusi. Cistanche suurte annuste rühma polüsahhariidid parandasid seda. Võrreldes mudelrühmaga oli erinevus märkimisväärne ja see oli põhimõtteliselt lähedane kontrollrühmale. Vaadake vahekaarti 4.

3.4 Muutused kopsuepiteelirakkude ultrastruktuuris eksperimentaalselt vananevatel hiirtel ja Cistanche polüsahhariidide mõju

Vananevaid mudelhiiri saab vaadelda elektronmikroskoobi all: I tüüpi alveolaarsed epiteelirakud on lamedat tüüpi ühekihilised paksusega umbes {{0}},2 pm. Tuum on väike ja tihe. Perinukleaarses tsütoplasmas on mõned mitokondrid, Golgi kompleks ja hajutatud endoplasmaatiline retikulum. Suhteliselt hõre, vähemate mikrofilamentide ja mikrotuubulitega. Vananevate hiirte kopsude histoloogilisi muutusi vaadeldi elektronmikroskoobi all. Peamised muutused olid II tüüpi alveolaarsed epiteelirakud. Rakkude vabal pinnal mikrovillid vähenesid või kadusid, lamellkehad nõrgenesid, lamellstruktuur hägusus, üksikutel rakkudel olid väikesed lamellrakud. Keha kaob ja see on õõnes või homogeenne madala elektrontihedusega amorfne ribataoline aine. Rakukehas vähenevad mitokondrid ja kare endoplasmaatiline retikulum. Alveolaarsete epiteelirakkude basaalmembraan on ilmselgelt paksenenud ning alveolaarses interstitiumis on näha diafragmarakkude ja fibroblastide vohamist (joonis 1, 2). Kuigi Cistanche polüsahhariidide rühmas oli näha sisemist tuumamembraani ja mitokondriaalset turset, oli see aste oluliselt vähenenud võrreldes mudelrühmaga (joonis 3.4). Ravimirühma elektronmikroskoobiga vaatlemine näitas, et tüüpi epiteelirakud olid lamedad, sileda pinnaga, ilma tuumata ja mõned neist olid umbes 0,1 paksused. Perinukleuses olid mõned organellid ja raadiumiosakesed olid nähtavad. II tüüpi rakkude pinnal on lühikesed villid, suur hulk mitokondreid, krobeline endoplasmaatiline retikulum ja tsütoplasmas Golgi kompleks (joonis 5,6)

Osoonikahjustuste vananemise mudel põhineb vabade radikaalide vananemise teoorial. Hapnikuvabade radikaalide kahjustused mängivad olulist rolli kopsude vananemise protsessis. Kopsud on ainus organ, mis suhtleb väliskeskkonnaga. Teatud aja jooksul hingatakse loomi pidevalt osooniga sisse. Kopsud puutuvad osooniga esimestena kokku ja on kahjustuste suhtes kõige haavatavamad. Pärast kehasse sisenemist tekitab osoon kiiresti üliaktiivseid superoksiidi aniooni vabu radikaale. Liigne vabade radikaalide hulk ületab keha eemaldamisvõime, hävitab ja tarbib kehas olevaid vabu radikaale püüdvaid ensüüme (nt SOD) ning põhjustab seejärel elundite ja isegi keha vananemist. Selles katses vähenes oluliselt osoonist põhjustatud vananevate hiirte hüpoksiavastane võime, antioksüdantse aine SOD aktiivsus seerumis ja kopsukoes ning lipiidide peroksüdatsiooni metaboliit MDA suurenes oluliselt. Kasutades Rongrong Duojing 50 100 mg-kg1 pidevat infusiooni katseliselt vananevatele hiirtele, on vananevatel hiirtel ilmne hüpoksiataluvus suurenenud, superoksiiddismutaasi aktiivsus vabade radikaalide eemaldamisel suureneb. Lipiidide peroksüdatsiooni metaboliitide sisaldus on vähenenud, mis näitab, et Cistanche polüsahhariidid võivad tugevdada vananevate hiirte antioksüdantset funktsiooni.

Alveolaarsete n-tüüpi epiteelirakkude tsütoplasmas olevaid lamellkehi kasutatakse sageli epiteelirakkude funktsiooni mõõtmiseks. Nälgivate lamellkehade sekreeti nimetatakse alveolaarseteks pindaktiivseteks aineteks, mis eksisteerivad alveoolide õhu-vedeliku piirpinnal ja võivad vähendada alveoolide pindpinevust. Lamellkehade vananemismuutused võivad viia alveolaarsete pindaktiivsete ainete vähenemiseni. Alveoolide pindpinevus on suhteliselt kõrge ja alveoolide tagasitõmbejõud on suurenenud, mille tulemuseks on alveoolide kokkutõmbumine. Elektronmikroskoopia vaatlused näitasid, et vananevate hiirte n-tüüpi alveolaarsed epiteelirakud on oluliselt muutunud. On näha, et lamellkehad on nõrgenenud, struktuur on hägune, mitokondrid on paistes ja vähenenud, väheneb ka krobeline endoplasmaatiline retikulum, basaalmembraan on oluliselt paksenenud. Kuigi sarnaseid struktuurseid muutusi võib näha pärast Cistanche polüsahhariidi kasutamist, on see määr oluliselt vähenenud, mis näitab, et Cistanche polüsahhariid võib märkimisväärselt parandada või edasi lükata morfoloogilisi degeneratiivseid muutusi kopsuepiteelirakkude lamellkehades ja mitokondriaalset degeneratsiooni vananevatel hiirtel. Suurem osa rakustruktuurist on põhimõtteliselt puutumata, lükates edasi kopsude ultrastruktuuri muutusi. Selle uuringu tulemused näitavad, et Cistanche'i polüsahhariidid võivad vähendada osoonist põhjustatud kopsude oksüdatiivsest kahjustusest põhjustatud struktuurseid ja funktsionaalseid muutusi, aeglustada kopsude vananemist ja pakkuda eksperimentaalseid tõendeid rakendusuuringute jaoks.