2. osa: Dopamiinergiliste neuronite tuvastamine, mis võivad luua assotsiatiivse mälu ja järsult lõpetada selle käitumusliku väljenduse
Mar 19, 2022
Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Dendrogrammi analüüs. Neuronide dendrogrammid on Eichleri jt 3D-neuronite rekonstruktsioonide 2D visandid. (2017). Morfoloogiliselt keeruliste neuronite "lineariseeritud", lamestatud versioonidena on dendrogrammid kompaktsed visualiseeringud, mis näitavad sünapside ruumilist jaotust. Dendrogrammi joonistamise algoritmi üksikasju kirjeldasid Strauch et al. (2018). Lühidalt öeldes on dendrogrammid topoloogiliselt õiged neuronite visandid, mille domineeriv primaarne haru on tõmmatud sirgjoonena ja lühemad külgharud on stereotüüpsete nurkade all painutatud ja suunatud kattumise vältimiseks vaheldumisi üles ja alla. Need on joonistatud nii, et kaabli pikkuse kaugused ja sünapsi asukohad on ligikaudu õiged. Kerged muudatused loetavuse parandamiseks hõlmavad sünapsi sümbolite automaatset ümberkorraldamist, et lahendada segadused ja kattumised (Strauch et al., 2018).
Sünaptilise organisatsiooni analüüsimiseks arvutasime (sünapsi) kaugusmaatriksi, mis sisaldab geodeetilisi vahemaid (st kaugust "kaabli pikkusena" piki neuronit) kõigi neuroni sünapside asukohtade vahel. Geodeetilised kaugused arvutati eukleidiliste vahemaadena rekonstrueeritud neuroni 3D-koordinaatides, liikudes mööda neuroni harusid. Me rühmitasime sünapsi asukohad jagava analüüsi klastriga (DIANA) (Kaufman, 2005), mis toimis geodeetilisel kaugusmaatriksil. Silueti skoori analüüsi põhjal määrasime klastrite arvuks neuroni kohta 10. Klastrid, mis ei sisaldanud kõiki nelja huvipakkuvat sünapsiklassi (KC!DAN-i1, DAN-i1!KC, DAN- i1!MBON-i1 vasakul, DAN-i1!MBON-i1 paremal) eemaldati analüüsist. Iga klastri jaoks määratleti keskpunkt kui klastri kõige kesksem sünaps, mis määrati klastri geodeetilise sünapsi kauguse alusel jaotusega medoidide klastrite ümber (PAM koos k=1 klastriga) (Kaufman, 2005). Lõpuks määrasime geodeetilised kaugused kõigi sünapside ja klastri keskpunkti vahel.
Katse kavandamine ja statistiline analüüs. Kasutati kahepoolseid mitteparameetrilisi teste ja nende testide statistilised eeldused olid kogu aeg täidetud. Kui ühe analüüsi jooksul viidi läbi mitu võrdlust, rakendati Bonferroni-Holmi korrektsiooni, et hoida kogu katse veamäär 5 protsendi juures (Holm, 1979). Kõik läbiviidud statistilised testid ja nende tulemused on koos lähteandmetega esitatud laiendatud andmetel joonisel 1-1.
Kõigi käitumuslike katsete puhul võrreldi väärtusi mitme rühma vahel Kruskal-Wallise testidega. Olulisuse korral kasutati järgnevates paaride võrdlustes Mann-Whitney U teste. Et testida, kas antud rühma väärtused erinesid nullist, kasutati ühe valimi märgi teste.
Joonistel 1, 6C–F ja 8 kujutatud katsed järgisid kahe rühma ülesehitust, võrreldes eksperimentaalse genotüübi kahte katsetingimust. Mõlemat rühma võrreldi Mann-Whitney U testiga ja nende olulisust nullist testiti ühe valimi märgitestidega.
Joonistel fig 6A ja B kujutatud katsed järgisid kuue rühma ülesehitust kolme genotüübiga (eksperimentaalne genotüüp, mis ekspresseerib ChR2-XXL, draiver ja efektorkontroll) ja kahe katsetingimusega. Esiteks viidi kõigis rühmades läbi Kruskal-Wallise test. Olulisuse korral teostasime paarikaupa Mann-Whitney U-testid eksperimentaalse genotüübi ja sama testimistingimuste iga geneetilise kontrolli vahel, samuti eksperimentaalse genotüübi testitingimuste vahel (kokku viis Mann-Whitney U-testi) . Iga rühma olulisust testiti nullist ühe valimi märgitestidega.
Joonisel 7 näidatud katsed järgisid kolme rühma ülesehitust eksperimentaalse genotüübi loomadega, mis ekspresseerisid ChR2-XXL. Pärast esialgset Kruskal-Wallise testi kõigis rühmades teostasime rühmas Mann – Whitney U testid paarikaupa ilma sinise valguseta pärast treeningut ja mõlemas teises rühmas. Iga rühma puhul testiti olulisust nullist (ühe valimi märgi testid).
Joonistel 9 ja 10 näidatud katsed järgisid nelja rühma ülesehitust eksperimentaalse genotüübi loomadega, mis ekspresseerisid ChR2-XXL. Pärast esialgset Kruskal-Wallise testi kõigis rühmades viisime läbi paarikaupa Mann-Whitney U testid rühmade vahel, kes olid saanud paaris ja paarita koolituse samas testitingimustes, ning teatud tüüpi treeningu katsetingimuste vahel (kokku neli Mann-Whitneyt U-testid). Ühe valimi märgiteste ei tehtud.
Esitame käitumisandmed kastigraafikutena, mille keskmine on keskmine joon ja 25 protsenti /75 protsenti ja 10 protsenti /90 protsenti kasti piiride ja vurrudena. Kõrvalväärtusi ei kuvata. Eksperimentaatorid olid pimedad genotüübi ja suhkrutasu puudumise või olemasolu suhtes tagasikutsumise testi ajal, kui see oli asjakohane. Proovide suurused (bioloogilised replikatsioonid) valiti varasemate uuringute põhjal, mis näitasid mõõdukat kuni kerget mõju (Paisios et al., 2017; Saumweber et al., 2018) ja need kuvatakse jooniste legendides. Valimi suurus oli n =1; 20 looma mõlemast soost kõigi kaasasündinud eelistuste katsete jaoks ja 2 20 looma (20 iga vastastikku treenitud rühma kohta) kõigis õppekatsetes.
Et võrrelda sünapside arvu MBON-i1 neuronite ipsilateraalsete ja kontralateraalsete külgede vahel (vt joonis 3A), testisime nende jaotust x2 testiga, eraldi KC!MBON-i1 sünapside ja DAN-i1!MBON-i1 sünapside jaoks. Sünapside kauguste võrdlemiseks DAN-i1 neuronil asuva vastava keskse ümbritseva struktuuri keskpunktiga (vt joonised 4C, D) teostasime Kruskal-Wallise testid kõigi sünapsitüüpide ja paarikaupa Mann-Whitney U-ga. testid kõigi sünapsitüüpide vahel (kokku 6 Mann-Whitney U-testi), eraldi vasaku ja parema DAN-i1 neuroni jaoks.
Tulemused
Sünapside ruumiline paigutus DAN-KC-MBON maatriksis
Hiljutine täieliku vastsete seente kehaahela elektronmikroskoobi rekonstrueerimine on pakkunud DAN-ide, KC-de ja MBON-ide ühenduse, mis põhineb nendevaheliste keemiliste sünapside arvul (Eichler et al., 2017). Aksonite oksad
Joonis 3. MBON-i1 neuroni sünaptiliste sisendite korraldus. Igasse MBON-i1 neuronisse poolkeraga eraldatud arv KC!MBON-i1 ja DAN-i1!MBON-i1 sünapse. Mõlemal MBON-i1 neuronil on nende KC-dega rohkem sünapse ja et DAN-i1 asub nende rakukehaga vastassuunalisel poolkeral. *Olulised x2 testid (p, 0.05, korrigeeritud Bonferroni-Holmi järgi). Andmed pärinevad Eichlerilt jt. (2017). B, poolskemaatiline ülevaade sünapside jaotumisest ipsilateraalsest ja kontralateraalsest poolkerast MBON-i1-le. KC-d ja mõlemad DAN-i1 neuronid moodustavad MBON-i1 kontralateraalse osaga rohkem sünapse kui selle ipsilateraalse osaga. C, vasaku või parema MBON-i1 neuroniga näidatud arvu sünapside moodustavate küpsete KC-de arvu jaotus. Vasaku poolkera KC-d moodustavad vasakuga vähem sünapse kui parem MBON-i1 neuron (vasakul). Parema poolkera KC-d, vastupidi, moodustavad vasakuga rohkem sünapse kui parema MBON-i1 (paremal). Arvestades, et KC-d ei ületa keskjoont, paiknevad kõik sünapsid, mis nt parempoolne MBON-i1, mis on moodustunud vasakust poolkerast pärit KC-dega, MBON-i1 rakukehaga kontralateraalses osas. D, Hoolimata asjaolust, et MBON-i1 neuronid saavad vähem sisendit poolkera KC-delt oma rakukehadele ipsilateraalselt kui kontralateraalsest poolkerast, saavad mõlemad MBON-i1 neuronid teavet KC sisendite kogu ruumi kohta kummalgi poolkeral. MBON-i1 ja KC-dele projitseeritud sensoorse sisendi vahelise seose kindlaksmääramiseks on kogusisend, mille MBON-i1 saab KC-delt, mis omakorda saavad oma sisendi uniglomerulaarsetelt haistmisprojektsiooni neuronitelt (PN) (valged ja tumehallid), multiglomerulaarselt haistmissüsteemilt. Vastavate PN!KC ja KC!MBON-i1 sünapside maatrikskorrutise arvutamiseks võeti arvesse PN-sid (helehall) ja mittelõhnatavaid PN-e (must). Seda tehti eraldi vasakpoolse MBON-i1 ja selle ühenduste jaoks parempoolsete (st kontralateraalsete) KC-dega (üleval vasakul) ja vasakpoolsete (st ipsilateraalsete) KC-dega (paremal üleval) ja vastavalt MBON-i1 paremale ( alumine). Andmed põhinevad Eichleri jt. (2017). Kõik statistilised testid ja nende tulemused on koos lähteandmetega esitatud laiendatud andmete joonisel 1-1.
üksikud DAN-id ja üksikute MBON-ide dendriitharud piirduvad ja kattuvad konkreetsete sektsioonidega koos KC aksonikimpudega (vastsed: Pauls et al., 2010;
Eichler jt, 2017; Saumweber jt, 2018; Eschbach jt, 2020; täiskasvanud: Aso jt, 2014a; Takemura et al., 2017). DAN-i1 innerveerib seenekeha kesksagara i-kambrit (mõnikord nimetatakse seda ka mediaalse sagara ülemiseks varbaks). Rekonstrueerimine näitas, et see mitte ainult ei anna signaali KC-dele, vaid sellel on tegelikult kaks peamist sihtmärki: KC-d ja MBON-i1 (joonis 2A, B) (Eichler et al., 2017). Vastavalt on MBON-i1-l kaks peamist ülesvoolupartnerit: KC-d ja DAN-i1. Sarnast DAN-ide ja MBON-ide korraldust leidub kõigis seente kehaosades (vastsed: Eichler et al., 2017; täiskasvanud: Takemura et al., 2017). Täpsemalt, DAN-i1 puhul ühendub 75 protsenti ja 21 protsenti selle seenekehas olevatest väljundsünapsidest vastavalt KC-de ja MBON-i1-ga ning MBON-i1 võtab vastu; 74 protsenti ja 14 protsenti oma seenekeha sisendsünapsidest KCs ja DAN-i1 vastavalt (Eichler et al., 2017; Saumweber et al., 2018). Kuigi sellised analüüsid on mitmel viisil informatiivsed, ei arvesta nad sünapside ruumilist paigutust piki neuroneid. Selle paigutuse valgustamiseks i-kambris kasutame dendrogramme, mis võimaldavad meil kuvada neuroni kompleksset 3D-gestalt 2D-visandina, mis jäädvustab selle hargneva struktuuri, säilitab haru pikkused ja tuvastab sünapsi asukoha piki oksi ( Strauch jt, 2018). Sellised üksikasjalikud analüüsid ületavad resolutsiooni, mille abil saab vabalt käituvate loomade neuroneid praegu manipuleerida (Aso ja Rubin, 2020). Siiski annavad need ülevaate uuritavate neuronite tegelikust keerukusest ja nende vooluringi motiivide arvutuslikest mõjudest (vt ka Bilz et al., 2020). Analüüsidest tõstame esile järgmised punktid (kõrge eraldusvõimega kujutised DAN-i1 ja MBON-i1 neuronitest mõlemast poolkerast ning kõigist küpsetest KC-dest, mis on saadaval laiendatud andmete joonistel. 2-1, 2-2 ja vastavalt 2-3):
• Nii DAN-i1 kui ka MBON-i1 sisaldavad massiivseid poolkeradevahelisi ühendusi. See on tähelepanuväärne, arvestades, kui vähe on muidu täheldatud tõusuteedel, sealhulgas KC-del, poolkeradevahelist läbirääkimist (joonis 2A) (Berck et al., 2016; Eichler jt, 2017; Saumweber et al., 2018; Thum ja Gerber, 2019). ). Täpsemalt, mõlemad DAN-i1 neuronid on mõlemas poolkeras vastastikku seotud enamiku küpsete KC-dega. Lisaks pakuvad DAN-i1 neuronid väljundit mõlemale MBON-i1 neuronile, nii ipsilateraalselt kui ka kontralateraalselt (joonis 2E; mõlema DAN-i1 neuroni kõrge eraldusvõimega kujutiste kohta vt laiendatud andmed joonist 2-1). See tähendab, et iga MBON-i1 neuron saab omakorda sisendi mõlemalt DAN-i1 neuronilt, nii ipsilateraalselt kui ka kontralateraalselt (joonis 2F; mõlema MBON-i1 neuroni kõrge eraldusvõimega kujutiste kohta vaata laiendatud andmeid, joonis {{28). }}). Samuti saavad MBON-i1 neuronid sisendit enamikust küpsetest KC-dest mõlemal poolkeral (Eichler et al., 2017) ja annavad väljundit väljaspool seene keha, ka mõlemas poolkeras. Täpsemalt näitavad dendrogrammid, et DAN-i1 väljundid ipsilateraalse ja kontralateraalse poolkera MBON-i1 neuronile on segunenud, nagu ka ipsilateraalse ja kontralateraalse poolkera DAN-i1 neuroni MBON-i1 sisendid (joonis 1). 2E, F). Märkimisväärne on see, et MBON-i1 ei ole seenekehas vastuvõetavate sünapside arvu poolest poolkerasümmeetriline: mõlemad MBON-i1 neuronid saavad poolkeral rohkem sünapse oma rakukehadele vastassuunas (joonised 2F, 3A, B); sellest hoolimata saavad mõlemad MBON-i1 neuronid teavet kummagi poolkera täieliku sensoorse sisendruumi kohta (joonis 3C, D).
cistanche pharma eriline
• Nii DAN-i1 kui ka MBON-i1 hargnemismustrid on struktureeritud mõneks suuremaks piirkonnaks. DAN-i1 puhul saab tuvastada kolm sellist peamist piirkonda. Alates raku kehast saab DAN-i1 esimeses piirkonnas sisendit oma partneritelt väljastpoolt seenekeha (joonistel 2C–E tähistatud 1-ga) (Eschbach et al., 2020), samas kui teises ja kolmandas piirkonnas langevad kokku vastavalt ipsilateraalse ja kontralateraalse seenekeha i-kambriga (joonistel 2C–F tähistatud 2 ja 3-ga). Seene korpuses on DAN-i1 vastastikku ühendatud KC-dega ja annab väljundi MBON-i1 suunas. MBON-i1 primaarne neuriit ületab keskjoone ja seejärel innerveerib neuron seenekeha i-sektsiooni, mis on selle rakukehaga vastassuunas (joonis 2C–F tähistatud 3-ga piirkond); siin saab see sisendi peamiselt KC-delt ja DAN-i1-lt. Seejärel ületab MBON-i1 tagasi üle keskjoone ja innerveerib samuti seenekeha rakukehaga ipsilateraalselt (joonistel 2C–F tähistatud piirkond 2-ga). Lisaks on MBON-i1 mõlemal poolkeral mitu väikest haru, mis ühenduvad partneritega, mis on seene keha lähedal, kuid vahetult sellest väljaspool.
• Nendes piirkondades ei ole võimalik tuvastada mõlema poolkera DAN-i1 ja MBON-i1 neuronites äratuntavaid sektsioonitaolisi jaotusi (joonis 2E, F; laiendatud andmed, joonised 2-1, {{7). }}). Kuid DAN-i1 neuronite puhul ilmnevad mitmed, külgmiselt "idiosünkraatsed" sünapsirikkad kesk-ümbrusstruktuurid (joonis 4). Nende keskpunkti poole leitakse kõik ülalnimetatud DAN-KC-MBON maatriksi sünapsi tüübid, samas kui nende ruumis on peaaegu eranditult KC!DAN sünapsid (joonis 4). Märkimisväärne on see, et iga konkreetne KC loob tavaliselt kõik oma sünapsid ainult ühes või kahes keskmist ümbritsevas struktuuris (laiendatud andmed, joonis 1-1).
• Mis puutub küpsetesse KC-desse, siis 86 protsenti ja 88 protsenti neist loovad sünapsid vastavalt vasaku ja parema DAN-i1 neuroniga ning 78 protsenti ja 74 protsenti vasaku ja parema MBON-i1 neuroniga. Üksikute KC-de mediaanid on 4 KC!DAN-i1, 4 DAN-i1!KC ja 5 KC!MBON-i1 sünapsi (Eichler et al., 2017; DAN-i1 kohta lisateabe saamiseks vaadake Saumweber et al., 2018 ). Kõigi üksikute KC-de dendrogrammide järgi on KC!DAN-i1, DAN-i1!KC ja KC! MBON-i1 sünapsid näivad olevat segunenud ilma nähtavate jagunemisteta KC-de massiivi vahel, nagu ka sünapsid vasaku ja parempoolse DAN-i1neuroniga ning vasak- ja parempoolse MBON-i1neuroniga (ExtendedDataFig.2-3).
Need analüüsid koos näitavad i-kambri DAN-KC-MBON maatriksi üksikasjalikku ruumilist korraldust. Tähelepanuväärne on see, et DAN-i1 sünapsid koos selle kahe peamise sihtmärgiga, KC-ga ja MBON-i1-ga, on lokaalselt segunenud mitmete sünapsirikaste struktuuridega piki DAN-i1 aksonaalseid harusid, selle asemel, et neid üksteisest eraldada ( joonised 2E, 4; laiendatud andmed, joonis 2-1). Selline arhitektuur võib tähendada, et DAN-i1 edastab nendes sünapsirikastes struktuurides KC-dele ja MBON-i1-le pigem korreleeritud kui sõltumatult moduleeritud signaale.
Samade neuronite aktiveerimine võib luuamäluja lõpetada selle tagasikutsumine
Meid huvitas tõsiasi, et DAN-i1-l on kaks peamist sihtmärki, nimelt KC-d ja MBON-i1; et selle sünapsid nende kahe sihtmärgiga on nii tihedalt segunenud; ja et loomulikel hüvedel on kaks ülesannet, nimelt kehtestaminemälukoolitusel ja teravalt lõpetada selle käitumuslik väljendusmälutagasikutsumise testi ajal (joonis 1A) (Gerber ja
Joonis 4. Sünapside korraldus DAN-i1 neuronil. Klastrite analüüs näitas, et piirkondades 2 ja 3 (vt joonis 2) olevad sünapsid vasakult DAN-i1 neuronilt ja sellesse on paigutatud kuue klastrisse (märgistatud kui 29 299 jne). Nendel klastritel näib olevat kesk-surround-organisatsioon: nende keskpunkti poole leitakse DAN!KC, KC!DAN ja DAN!MBON sünapsid, samas kui nende ruumilised funktsioonid on peaaegu eranditult KC!DAN sünapsid. B, sama mis A-s, kuid parempoolse DAN-i1 neuroni jaoks. Eristada saab seitse keskmist ümbritsevat struktuuri. C, Sünapside korralduse kvantifitseerimiseks määrasime erinevat tüüpi sünapside kauguse (kaabli pikkuses piki neuronit) nende vastava klastri keskpunktini ja leidsime, et KC!DAN-i sünapsid asuvad keskusest kaugemal kui kõik muud tüüpi sünapsid. sünapsidest. See kinnitab klastrite organiseerimist kesk-ümbruse struktuuridena. D, sama mis C-s, kuid parempoolse DAN-i1 neuroni jaoks. E, skemaatiline visand keskosa ümbritsevast struktuurist (ülemine) ja ühenduste suurendus keskel (all). Erinevad kirjad kastigraafikute kohal näitavad paarilist olulisust (Mann–Whitney U test, p, 0.05, parandatud Bonferroni-Holmi järgi). Kõik statistilised testid ja nende tulemused on koos lähteandmetega esitatud laiendatud andmete joonisel 1-1.
cistanche pharma eriline
Hendel, 2006; Schleyer jt, 2011, 2013, 2015a,b, 2018; Paisios jt, 2017). Seetõttu mõtlesime, kas DAN-ide optogeneetiline aktiveerimine treeningul ja testi ajal võib anda need kaks funktsiooni. Alustuseks kasutasime draiveritüve 58E02- Gal4, mis katab DAN-i1 pluss kaks DAN-i, mis innerveerivad teisi mediaalsagara sektsioone (joonis 5A, B) (Rohwedder et al., 2016), ja UAS-ChR{ {14}}XXL efektortüvena (Dawydow et al., 2014). 58E02-DAN-id aktiveeriti treeningu ajal lõhnaga paaris või paarita ning lõhnaeelistuse erinevust järgnevas tagasikutsumistestis kasutati assotsiatsiooni kvantifitseerimiseks.mäluPI kaudu. Me täheldasime positiivseid PI skoori, mis viitavad isuäratavale assotsiatiivsuselemälueksperimentaalses genotüübis, samas kui ainult transgeense efektori või draiveri konstruktsiooni suhtes heterosügootsed geneetilised kontrollid ei näidanudmälu(Joon. 6A, ülemine, mustaga täidetud kastitükid) (Rohwedder et al., 2016). Seega võib 58E02-DAN-i aktiveerimine treeningu ajal anda tasu signaali assotsiatiivsetelemälumoodustamine.
Järgmisena kordasime katset, kuid aktiveerisime ka 58E02-DAN-i tagasikutsumise testi ajal. See vähendas PI väärtusi (st vähendasmälu-põhine otsing) ligikaudu pooleni (joonis 6A, ülemine, sinisega täidetud kastigraafikud; selle tulemuse replikatsiooni vt joonis 6C). Kriitiliselt, nagu ka loomulike hüvede puhul (joonis 1B) (Schleyer et al., 2011, 2015a,b), ei mõjutanud 58E02-DAN-i aktiveerimine kaasasündinud haistmiskäitumist (joonis 6A, alumine). Seega võib 58E02- DAN-i aktiveerimine anda tagasikutsumise testi ajal ka ägeda otsingu lõpetamise signaali.
Eelmised katsed näitavad, et kolm 58E02- DAN-i võivad loomuliku tasuna anda samad kaks signaali (st
Joonis 5. 58E02-DAN ja 864-DAN draiveritüvede transgeeni ekspressioonimuster. A, B, Eelmine 58E02-DAN-draiveri tüve väljapööramisel põhinev analüüs tuvastas neuronid DAN-h1, DAN-i1 ja DAN-j1 (nimetatakse ka pPAM1, pPAM3 ja pPAM4). samuti üks täiendav neuron väljaspool seenekeha (Rohwedder et al., 2016). See muster leidis kinnitust: juhi tüvi ristati kas (A1-A5) pJFRC-10xUAS-IVS-mCD8::GFP või (B1-B4) UAS-ChR{{ 27}}XXL. A1, B1, vastavalt a-GFP või a-ChR antikeha signaal. A2, B2, taustavärvimise signaal vastavalt a-FASII või a-HRP antikeha kaudu. A3, B3, vastavate signaalide liitmine. A4, B4, Osaline z-projektsioon näitab seenekeha mediaalse sagara tugevat innervatsiooni. A5, külgmise pimesoole innervatsiooni ei tuvastata (nool). C, D, 864-DAN-draiveri tüvi avaldub DAN-i1-s tugevalt (Saumweber et al., 2018). Siin ületasime selle kas (C1-C5) pJFRC-10xUAS-IVS-mCD8::GFP või (D1-D4) UAS-ChR2-XXL-ga. C1, D1, vastavalt a-GFP või a-ChR antikeha signaal. C2, D2, taustavärvimise signaal vastavalt a-FASII või a-HRP antikeha kaudu. C3, D3, vastavate signaalide liitmine. C4, D4, Osaline z-projektsioon näitab i-kambri tugevat innervatsiooni mõlemas poolkeras (nooled), mis kinnitab ekspressiooni DAN-i1-s. C5, Nagu varem teatatud (Saumweber et al., 2018), ekspresseerub juhttüvi aeg-ajalt täiendavates neuronites, kuid kui jah, siis tavaliselt ainult ühes ajupoolkeras ja neuronites, mille identsus on preparaatide vahel erinev. Suhteliselt kõige sagedamini täheldasime MBON-d1 neuronit, mis innerveerib külgmist pimesoolt ühes poolkeras (nool). Meie rühmapõhises testis kasutatud paljude loomade puhul ei põhjusta selline stohhastiline lisaekspressioon tõenäoliselt süstemaatilisi mõjusid.
premeerimissignaal treeningu ajal ja otsingu lõpetamise signaal tagasikutsumise testi ajal). Siiski jääb ebaselgeks, kas igaüks kolmest DAN-ist edastab mõlemat signaali või toimub tööjaotus, kusjuures preemiasignaali ja otsingu lõpetamise signaali eest vastutavad erinevad DAN-id. Seetõttu valisime split-Gal4 draiveritüve 864, mis toetab tugevat ja usaldusväärset transgeeni ekspressiooni ainult ühes DAN-is, mis on kaetud 58E02-DANiga, DAN-i1 neuroniga mõlemal poolkeral ( Joon. 5C, D) (Saumweber et al., 2018). Assotsiatiivne 864-DAN-i aktiveerimine treeningul lõi positiivsed tulemusnäitajad (stmälu-põhine otsing; Joon. 6B, ülemine, mustaga täidetud kastitükid) (Saumweber et al., 2018). 864-DAN-i aktiveerimine ka tagasikutsumise testi ajal lõpetas sellemälu-põhine otsing (joonis 6B, ülemine, sinisega täidetud kastigraafikud). Kolm sõltumatut andmekogumit kinnitavad, et otsing on maha häälestatud (joonis 6D–F). Kaasasündinud haistmiskäitumist864-DAN-aktiveerimine ei mõjutanud (joonis 6B, alumine).
Varem on leitud, et DAN-ide aktiivsus treeningu ja tagasikutsumise testi vahelisel ajal (st säilitusperioodi jooksul) soodustab täiskasvanud D. melanogaster'i puhul unustamist (Berry et al., 2012, 2015; Shuai et al., 2015; Aso ja Rubin, 2016). Seetõttu mõtlesime, kas meie paradigma kohaselt soodustaks 864-DAN-i tegevus unustamist, mitte aga mälupõhise otsingu ägedat lõpetamist ja lahkumist.mäluterved. Selle võimaluse testimiseks treeniti vastseid nagu varem, kuid enne tagasikutsumist
Joonis 6. Samade neuronite aktiveerimine võib tuvastadamäluja lõpetada selle tagasikutsumine. A Top, Vastseid treeniti paaris või paaritu lõhnaga, 58E02-DAN aktiveerimisega sinise valgusega. Meenutustestis näitavad positiivsed PI väärtused eksperimentaalses genotüübis, kuid mitte geneetilistes kontrollides, õpitud otsingukäitumist, mis põhineb lõhna assotsiatiivsel mälul (vasakpoolseim kastigraafik). Seega võib 58E02-DAN-i aktiveerimine treeningu ajal vahendada preemiasignaali. ThemäluEksperimentaalse genotüübi otsingut vähendati, kui 58E02-DAN aktiveeriti ka tagasikutsumise testi ajal sinise valgusega (vasakpoolseim sinisega täidetud kast). Seega võib 58E02 aktiveerimine anda ka otsingu lõpetamise signaali. Proovide suurused: 16, 15, 17, 18, 15, 18. Altpoolt, Vastseid testiti kaasasündinud lõhnaeelistuse suhtes, kas sinise valguse puudumisel või olemasolul. Kõik genotüübid eelistasid lõhna mõlemas olukorras võrdselt tugevalt, mis viitab sellele, et 58E02-DAN aktiveerimine ei mõjutanud kaasasündinud lõhnaeelistust. Näidiste suurused: 24 tk. B, sama mis punktis A, kuid 864-DAN-i aktiveerimine sinise valgusega. Üles, positiivne PI ja seegamälu-põhine otsing, täheldati ainult eksperimentaalses genotüübis ja ainult siis, kui tagasikutsumise test viidi läbi pimedas. Proovide suurused: 19, 19, 19, 19, 19, 20. Alumine, 864-DAN-i aktiveerimine ei mõjutanud kaasasündinud lõhnaeelistust. Näidiste suurused: 16 tükki. C, A-s (üleval) näidatud katse replikatsioonis eksperimentaalse genotüübi jaoks näitasid vastsedmälu-põhine otsing pimeduses. Kui 58E02-DAN aktiveeriti tagasikutsumise testi ajal sinise valgusega, timmiti see otsing. Proovide suurused: 15, 16. D. Katse replikatsioonis, mis on näidatud punktis B (ülemine) eksperimentaalse genotüübi jaoks, ilmnesid vastsedmälu-põhine otsing pimeduses. Kui 864-DAN aktiveeriti tagasikutsumise testi ajal, siis see otsing lõpetati. Proovide suurused: 28, 28. E, D edasises kordamises viidi test läbi Petri tassil, mille siseläbimõõt oli 15 cm asemel 9 cm.Mälu-põhist otsingut jälgiti tagasikutsumise testi ajal pimedas ja sel juhul häälestati see osaliselt 864-DAN-i aktiveerimise kaudu. Proovide suurused: 22, 22. F, Vastseid treeniti katse diferentsiaalses, kahelõhnalises versioonis, kasutades 1:50 lahjendatud n-amüülatsetaati ja lahjendamata 1-oktanooli. Tagasikutsumise test viidi läbi 9 cm siseläbimõõduga Petri tassil. Themälu-põhist otsingut täheldati pimeduses ja seda vähendati 864-DAN-i aktiveerimise kaudu. Valimi suurused: 26, 26. Erinevad kirjad kastigraafikute kohal näitavad paarilist olulisust (Mann–Whitney U test, p,0.05, parandatud Bonferroni-Holmi järgi). *Olulisus nullist (ühe valimi märgi test, p, 0.05, korrigeeritud Bonferroni-Holmi järgi). ns: ebaolulisus kõigis katsetingimustes (Kruskal-Wallis-test, p 0,05). Kõik statistilised testid ja nende tulemused on koos lähteandmetega esitatud laiendatud andmete joonisel 1-1.
Joonis 7. 864-DAN-i aktiveerimine treeningu ja meeldetuletustesti vahel ei soodusta unustamist ega väljasuremist. Vastsete rühma treeniti nagu joonisel 6. Seejärel hoiti vastseid 3 minutit pimedas või sinises valguses (oodake) ja seejärel testiti. Kui see meenutamiskatse viidi läbi pimedas, amälu-põhist otsingut täheldati ootefaasis valgustingimustest sõltumatult ja seega sõltumatult 864-DAN-i aktiivsusest (vasakpoolse ja keskmise kasti graafik). Kinnitasime, et ka pärast sellist ooteaega 864- DAN-i aktiveerimine tagasikutsumise testi ajal lõpebmälu-põhine otsing (parempoolse kasti graafik). Proovide suurused: 25, 24, 19. B, sama, mis A-s, kuid seekord ooteperioodil esineva lõhnaga. Näidiste suurused: 28 tükki. Erinevad tähed kastigraafikute kohal näitavad paaripõhist olulisust (Mann-Whitney U test, p, 0.05, parandatud vastavalt Bonferroni-Holmile). *Olulisus nullist (ühe valimi märgi test, p, 0,05, korrigeeritud Bonferroni-Holmi järgi). Kõik statistilised testid ja nende tulemused on koos lähteandmetega esitatud laiendatud andmete joonisel 1-1.
cistanche pharma eriline
