2. OSA ehhinakosiid pärsib glutamaadi vabanemist, pärssides pingest sõltuvat Ca2 pluss sisenemist ja proteiinkinaas C roti tserebrokortikaalsetes närvilõpmedes

Lisateabe saamiseks võtke ühendust:Joanna.jia@wecistanche.com

KLIKI SIIA, ET 1. OSA

3. Arutelu

Selles uuringus kasutati ehhinakosiid, aktiivset ühenditHerba Cistanche, inhibeeris 4-aminopüridiini poolt esile kutsutud glutamaadi vabanemist roti ajukoore närvilõpmedes. Siin uuritakse ja arutatakse täiendavalt ehhinakosiidi poolt vahendatud glutamaadi vabanemise pärssimise võimalikke alusmehhanisme.

Cistanche deserticolal on palju mõjusid, lisateabe saamiseks klõpsake siin

3.1. Ehhinakosiidide poolt vahendatud glutamaadi vabanemise pärssimise aluseks olevad mehhanismid

4-aminopüridiini poolt esile kutsutud, koosneb kahest komponendist: füsioloogiliselt oluline Ca2 pluss-sõltuv komponent, mis tekib glutamaati sisaldavate sünaptiliste vesiikulite eksotsütoosi teel; ja Ca2 pluss-sõltumatu komponent, mis pärineb pikaajalisest depolarisatsioonist, mis põhjustab membraanipotentsiaali vahendatud glutamaadi transporteri püsiseisundi nihkumist väljapoole, mõjutades seega tsütosoolse glutamaadi väljavoolu [31]. Siin me täheldasime sedaehhinakosiidei inhibeerinud oluliselt 4-aminopüridiini poolt esile kutsutud glutamaadi vabanemist Ca2 pluss-vaba söötme juuresolekul (Ca2 plussist sõltumatu vabanemine). Lisaks täheldatiehhinakosiid-4-aminopüridiini poolt esile kutsutud glutamaadi vabanemise vahendatud inhibeerimist takistas tõhusalt bafilomütsiin A1 (mis kahandab sünaptiliste vesiikulite glutamaadisisaldust), kuid mitte DL-TBOA (mis inhibeerib mitteselektiivselt kõiki ergastavate aminohapete transporteri alatüüpe). Need tulemused viitavad selleleehhinakosiidmõjutab Ca2 pluss-sõltuvat glutamaadi vabanemise eksotsütoosi, mõjutamata glutamaadi Ca2 pluss-sõltumatut tsütosoolset väljavoolu närviterminali plasmamembraani glutamaadi transporteri ümberpööramise kaudu. Sünaptilistes otstes stabiliseerib Na pluss kanali inhibeerimine või K pluss kanali aktiveerimine membraani erutatavust ja vähendab sellest tulenevalt esilekutsutud Ca2 pluss sisenemist ja neurotransmitteri vabanemist [32, 33]. Seetõttu potentsiaalne mehhanism aluseksehhinakosiid-vahendatud glutamaadi vabanemise pärssimine hõlmab sünaptosomaalse erutuvuse vähenemist. See võimalus on aga kahe tähelepaneku põhjal vastuvõetamatu: (1) 4-aminopüridiini poolt esile kutsutud membraanipotentsiaali depolarisatsioon, mõõdetuna membraanipotentsiaalitundliku värvainega DiSC3(5), ei mõjutanudehhinakosiid; ja (2) ehhinakosiid ei mõjutanud 4-aminopüridiini poolt esile kutsutud Ca2 pluss-sõltumatut glutamaadi vabanemist – vabanemise komponenti, mis sõltub ainult membraanipotentsiaalist [31]. Kui efekti ei põhjusta sünaptosomaalse erutuvuse pärssimine, võib see väljenduda Cav2.2 (N-tüüpi) ja Cav2.1 (P/Q-tüüpi) Ca2 pluss kanalite aktiivsuse vähenemises koos glutamaadi eksotsütoosiga närvilõpmed [34–36]. Fura-2 kasutamisega demonstreerime sedaehhinakosiidvähendab oluliselt 4-aminopüridiini poolt esile kutsutud Ca2 pluss kontsentratsiooni suurenemist. Lisaks näitavad meie andmed, et pärssiv toimeehhinakosiid4-aminopüridiini poolt esile kutsutud glutamaadi vabanemine vähenes 42,4 protsendilt ˘ 2,3 protsendilt 12,1 protsendile ˘ 3,9 protsendile pärast kokkupuudet Cav2.2 (N-tüüpi) ja Cav2.1 (P/Q-tüüpi) Ca2 blokaatoriga pluss kanalid. Lisaks täheldasime sedaehhinakosiidjätkas märkimisväärselt 4-aminopüridiini poolt esile kutsutud glutamaadi vabanemise pärssimist intratsellulaarsete Ca2 pluss vabanemise inhibiitorite juuresolekul. Need tulemused näitavad, et Cav2.2 (N-tüüpi) ja Cav2.1 (P/Q-tüüpi) Ca2 pluss kanali aktiivsuse samaaegne allasurumine on potentsiaalne mehhanism, mille aluseks onehhinakosiid-vahendatud glutamaadi vabanemise pärssimine. Cav2.2 (N-tüüpi) ja Cav2.1 (P/Q-tüüpi) Ca2 pluss kanali aktiivsuse kombineeritud aktiveerimine ei suutnud siiski blokeeridaehhinakosiidtäielikult. Seega võivad inhibeerimises osaleda muud tuvastamata tüüpi Ca2 pluss kanalid või muud presünaptilised rajad. Näiteks GABAA retseptorid esinevad presünaptilisel tasemel ja on näidatud, et nende aktiveerimine pärsib Ca2 pluss sissevoolu ja glutamaadi vabanemist [37]. Käesolevas uuringus ei blokeerinud GABAA retseptori antagonistid SR95531 ja bikukuliin ehhinakosiidi poolt vahendatud glutamaadi vabanemise pärssimist, mis viitab sellele, et GABAA retseptorid ei osale pingest sõltuva Ca2 pluss kanali aktiivsuse vähendamises ja sellele järgnevas glutamaadi vabanemise pärssimises.

Ca2 pluss sisenemine pingest sõltuvate Ca2 pluss kanalite kaudu aktiveerib mitmeid proteiinkinaase, mis on seotud glutamaadi vabanemisega närvilõpmetes, sealhulgas mitogeen-aktiveeritud proteiinkinaas, proteiinkinaas C ja proteiinkinaas A. Siin demonstreerime, et proteiinkinaas C inhibiitorid antagoniseerisid tõhusaltehhinakosiid-vahendatud glutamaadi vabanemise pärssimine; sellest hoolimata oli mitogeen-aktiveeritud proteiinkinaasi inhibiitor PD98059 või proteiinkinaasi A inhibiitor H89 ebaefektiivne. Lisaks sellele. J. Mol. Sci. 2016, 17, 1006 8 13 4-aminopüridiinist põhjustatud proteiinkinaas C fosforüülimine vähenes sünaptosoomides pärast eeltöötlustehhinakosiidkontsentratsioonil, mis on efektiivne glutamaadi vabanemise pärssimiseks. Seetõttu on signalisatsiooniradaehhinakosiid-vahendatud glutamaadi vabanemise inhibeerimine võib hõlmata proteiinkinaas C. Proteiini kinaas C on oluline rakusisene signaalisüsteem, mis esineb presünaptilisel tasemel ja millel on ülioluline roll neurotransmitterite eksotsütoosis. Näiteks mitmed sünaptilised valgud, mis on seotud sünaptiliste vesiikulite kaubitsemise või värbamise ja eksotsütoosiga, nagu müristoüülitud alaniinirikas C kinaasi substraat, fosforüülitakse proteiinkinaasi C poolt [38, 39]. Seda fosforüülimise protsessi saab suurendada depolarisatsiooniga stimuleeritud Ca2 pluss sisenemisega, mis hõlbustab glutamaadi vabanemist [40]. Seega võime põhjendatult oletada, et pärssiv toimeehhinakosiidSiin täheldatud Ca2 pluss sisenemine võib vähendada proteiinkinaasi C aktiivsust ja sellest tulenevalt glutamaadi vabanemist.

3.2. Terapeutilised tagajärjed

Eksitotoksilisus, patoloogiline protsess, mis on põhjustatud liigsest glutamaadi vabanemisest ja glutamaadi retseptori aktiveerimisest, on neuronite surma peamine põhjus ägedate ja krooniliste ajuhäirete, nagu insult, traumaatiline ajukahjustus, Parkinsoni ja Alzheimeri tõbi [13,41] ja ravistrateegiate korral. glutamaadi vabanemise inhibeerimine võib olla paljulubav neuroprotektiivne strateegia selliste haiguste raviks.ehhinakosiidon kinnitatud, et see tungib läbi hematoentsefaalbarjääri (BBB) ​​ja avaldab neuroprotektiivset toimet erinevates neurotoksilisuse in vivo mudelites [8, 10–12, 42]. Kuigi nende neuroprotektiivsete toimete mehhanism pole täielikult mõistetav, on teatatud mitmest võimalikust mehhanismist, sealhulgas põletikulise vastuse inhibeerimine, mitokondriaalse funktsiooni stabiliseerimine, antioksüdatsioon, vabade radikaalide eemaldamine ja neurotroofse funktsiooni jäljendamine [5, 9, 12, 42]. Käesolevas uuringus võib ehhinakosiidi võime vähendada glutamaadi vabanemist närvilõpmetest osaliselt seletada ka selle neuroprotektiivset mehhanismi. Kuid kas see toime aitab kaasa ehhinakosiidi näilisele terapeutilisele potentsiaalile glutamaadi eksitotoksilisusega seotud ajuhäirete korral, nõuab täiendavaid uuringuid.

4. Materjalid ja meetodid

4.1. Kemikaalid

Fura-2-atsetoksümetüülester (Fura-2-AM) ja 3',3',3'-dipropüültiadikarbotsüaniinjodiid [DiSC3(5)] osteti ettevõttest Invitrogen (Carlsbad, CA, USA). ω-konotoksiin MVIIC, rottleriin, 2-[1-(3-dimetüülaminopropüül)indool-3-üül]-3-(indool-3-üül)maleimiid ( GF109203X), 5,6,7,13-tetrahüdro-13-metüül-5-okso-12H-indolo[2,3-a]pürrolo[3,{ {27}}c]karbasool-12-propaannitriil (Go6976) ja N-[2-(p-bromotsinnamüülamino)etüül]-5-isokinoliinsulfoonamiid (H89) osteti ettevõttelt TocrisBioscience (Bristol, Ühendkuningriik). ehhinakosiid, dantroleen, DL-treo-beeta-bensüüloksüaspartaat (DL-TBOA), 7-kloro-5-(2-klorofenüül)-1, 5-dihüdro -4,1-bensotiasepiin-2(3H)-oon (CGP37157), 2-(2-amino-3-metoksüfenüül)-4 Osteti H-1-bensopüraan-4-oon (PD98059), etüleenglükoolbis(-aminoetüüleeter)-N,N,N1,N1-tetraäädikhape (EGTA) ja kõik muud reagendid firmalt Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA).

4.2. Loomad

Kasutati kahe kuu vanuseid isaseid Sprague-Dawley rotte. Loomi hoiti standardsetes keskkonnatingimustes (22 ˘ 1 ˝C; 50% suhteline õhuniiskus; 12 h valguse/pimeduse tsükkel) ning neile võimaldati piiramatu juurdepääs toidule ja veele. Loomad tapeti dekapitatsiooniga ja ajukoor eemaldati kiiresti temperatuuril 4 ˝C. Katseprotseduurid kiitis heaks Fu Jeni institutsionaalne loomade hooldamise ja kasutamise komitee (A10259) kooskõlas riiklike tervishoiuinstituutide laboriloomade hooldamise ja kasutamise juhendiga. Tehti kõik jõupingutused, et minimeerida loomade kannatusi ja kasutada usaldusväärsete tulemuste saamiseks minimaalset arvu loomi.

4.3. Sünaptosomaalsed preparaadid

Sünaptosoomid puhastati rottide ajukoorest katkendlike Percolli gradientidega, nagu eelnevalt kirjeldatud [43, 44]. Lühidalt, kude homogeniseeriti söötmes, mis sisaldas 0,32 M sahharoosi (pH 7,4), homogenaati tsentrifuugiti 10 min 3000ˆ g (5{{25). }}00 pööret minutis JA 25.5 rootoris; Beckman Coulter, Inc., Miami, FL, USA) ja 4 ˝C ning supernatanti tsentrifuugiti uuesti 12 minutit 14 500 ˆ g juures ( 11,000 p/min JA 25.5 rootoris). Pellet resuspendeeriti ettevaatlikult 0,32 M sahharoosis (pH 7,4) ja selle sünaptosomaalse suspensiooni alikvoot (2 ml) asetati 3 ml Percolli katkendlikule gradiendile, mis sisaldas 0,32 M sahharoosi, 1 mM EDTA-d, 0,25 milliliitrit ja 0,25 milliliitrit. 3 protsenti, 10 protsenti ja 23 protsenti Percolli (pH 7,4). Pärast tsentrifuugimist kiirusel 32 500 ˆ g (16 500 p/min JA 20.5 rootoris) 7 minutit temperatuuril 4 ˝C saadi sünaptosoomid 10–23 protsendi Percolli ribadest ja need lahjendati lõppmahuks 30 ml. HEPES puhverkeskkonda (140 mM NaCl, 5 mM KCl, 5 mM NaHC03, 1 mM MgCl2¨ 6H2O, 1,2 mM Na2HPO4, 10 mM glükoosi ja 10 mM HEPES (pH 7,4)). Pärast edasist tsentrifuugimist 27, 000ˆ g (15 000 p/min JA 25.5-s) 10 minutit, sünaptosoomi pellet resuspendeeriti 3 ml HEPES puhverkeskkonnas ja valgusisaldus määrati Bradfordi analüüsi abil. Lõpuks lahjendati 0,5 mg sünaptosoomide suspensiooni 10 ml HEPES puhverkeskkonnas ja tsentrifuugiti 10 minutit kiirusel 3000 ˆ g (5000 p/min JA 20.1 rootoris). Supernatant visati ära ja sünaptosoome sisaldavad graanulid hoiti jääl ja kasutati 4–6 tunni jooksul.

4.4. Glutamaadi vabanemine

Glutamaadi vabanemist testiti online-fluorimeetria abil, nagu eelnevalt kirjeldatud [45, 46]. Sünaptosoomi graanulid resuspendeeriti HEPES-i puhverkeskkonnas (0,5 mg/mL) ja eelinkubeeriti 37 ˝C juures 10 minutit 16 µM veise seerumi albumiini juuresolekul, et siduda kõik eelinkubatsiooni käigus sünaptosoomidest vabanenud vabad rasvhapped. 2- ml sünaptosoomide alikvoot kanti üle segatavasse küvetti, mis sisaldas 2 mM NADP pluss, 50 ühikut glutamaatdehüdrogenaasi ja 1,2 mM CaCl2, ning NADPH FL fluorestsentsi mõõdeti Perkin-Elmer LS{{ 14}} spektrofluorimeeter (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, USA) ergastuse ja emissiooni lainepikkustel vastavalt 340 ja 460 nm. Kuna sünaptosoomid ei allu elektrilisele stimulatsioonile, kasutati glutamaadi vabanemise stimuleerimiseks kaaliumikanali blokaatorit 4-aminopüridiini. 4-aminopüridiin destabiliseerib membraani potentsiaali ja arvatakse, et see põhjustab korduvat spontaanset Na pluss kanalist sõltuvat depolarisatsiooni, mis sarnaneb sünaptilise terminali in vivo depolarisatsiooniga, mis viib pingest sõltuvate Ca2 pluss kanalite aktiveerumiseni ja neurotransmitteri vabanemiseni [47 ]. Andmed saadi 2-sekundiliste intervallidega. Eksogeense glutamaadi standard (5 nmol) lisati iga katse lõpus. Standardse lisamisega tekitatud FL fluorestsentsi muutuse väärtust kasutati vabanenud glutamaadi arvutamiseks glutamaadi nanomoolidena sünaptosomaalse valgu milligrammi kohta (nmol/mg). Tekstis tsiteeritud vabanemisväärtused on tasemed, mis saavutati püsiseisundis pärast 5-minutilist depolarisatsiooni (nmol/mg/5 min). Kumulatiivseid andmeid analüüsiti, kasutades Lotus 1-2-3 arvutustabeleid (IBM, White Plains, NY, USA) ja MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA).

4.5. Plasmamembraani potentsiaal

Plasmamembraani potentsiaal määrati membraanipotentsiaalitundliku värvainega DiSC3(5) [48]. Sünaptosoomid resuspendeeriti HEPES-i puhverkeskkonnas ja 2 ml alikvoodid viidi Perkin-Elmer LS{10}} spektrofluoromeetris (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, 37 ˝C) segatavasse küvetti, mis sisaldas 5 µM DiSC3(5). MA, USA). Pärast segu 3-minutilist tasakaalustamist määrati FL fluorestsents ergastuse ja emissiooni lainepikkustel vastavalt 646 ja 674 nm. Andmeid koguti 2-sekundiliste intervallidega. Kumulatiivseid andmeid analüüsiti kasutades MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA) ja väljendati FL fluorestsentsühikutes.

4.6. Tsütosoolne Ca2 pluss kontsentratsioon ([Ca2 pluss ]C)

[Ca2 pluss ]C mõõdeti Ca2 pluss indikaatori fura-2 abil. Sünaptosoome (0,5 mg/ml) eelinkubeeriti segamiskatses HEPES-puhverkeskkonnas, mis sisaldas 5 µM fura-2 ja 0,1 mM CaCl2, 30 minutit temperatuuril 37 ˝C. toru. Pärast fura-2 laadimist tsentrifuugiti sünaptosoome mikrotsentrifuugis 30 sekundit kiirusel 3000 ˆ g (5000 p/min). Sünaptosomaalsed pelletid resuspendeeriti HEPES-puhverkeskkonnas ja sünaptosoomi suspensiooni segati termostaadiga küvetis Perkin-Elmer LS-55 spektrofluoromeetris (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, USA). CaCl2 (1 mM) lisati 3 minuti pärast ja täiendavad lisamised tehti veel 10 minuti pärast. Fluorestsentsandmed koguti ergastuslainepikkustel 340 ja 380 nm (emissiooni lainepikkus 505 nm) 2-sekundiliste intervallidega. [Ca2 pluss]C (nM) arvutati kalibreerimisprotseduuride [49] ja eelnevalt kirjeldatud võrrandite [50] abil. Kumulatiivseid andmeid analüüsiti kasutades MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA).

4.7. Western Blotting

Sünaptosoomid homogeniseeriti lüüsipuhvris (10 mM HEPES puhver, pH 7,4), 1% Triton X-100 ja proteaasi inhibiitori segus. Lüsaadid selgitati tsentrifuugimisega ja valgu kontsentratsioon määrati valguanalüüsi komplekti (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA) abil. Võrdsed kogused valke eraldati naatriumdodetsüülsulfaat-polüakrüülamiidi geelelektroforeesiga (SDS-PAGE) ja kanti üle nitrotselluloosmembraanile. Membraanid blokeeriti Tris-puhverdatud soolalahusega, mis sisaldas 5% madala rasvasisaldusega piima, ja inkubeeriti sobiva primaarse antikehaga (fosfoproteiini kinaas C (pann), 1:3000, NOVUS Biologicals Inc., Beverly, MA, USA) üleöö kl. 4˝C. Pärast kolme pesu Tris-puhverdatud soolalahuses töödeldi membraani sekundaarse mädarõika peroksidaasiga konjugeeritud antikehaga (1:3000) 1 tund toatemperatuuril. Seejärel pesti membraane vähemalt kolm korda Tris-puhverdatud soolalahusega ja visualiseeriti täiustatud kemoluminestsentssüsteemi abil (Amersham, Buckinghamshire, UK). Proovide alikvoot laaditi ja sondeeriti PKC-vastase antikehaga, et tuvastada PKC laadimiskontrollina. Ekspressiooni või fosforüülimise taset hinnati ribatiheduse järgi, mis kvantifitseeriti densitomeetria abil. Ribade densitomeetrilist kvantifitseerimist analüüsiti Syngene tarkvara (Synoptics, Cambridge, UK) abil.

4.8. Statistiline analüüs

Andmed saadi ühest sünaptosomaalsest preparaadist ja need ei olnud üksteisest sõltumatud. Et testida ravimi ja kontrolli mõju olulisust, kasutati kahepoolset Studenti t-testi. Kui oli vaja täiendavat võrdlust (nt kas teine ​​​​ravi mõjutas ehhinakosiidi toimet), kasutati ühesuunalist ANOVA-d, millele järgnes Tukey testi. Analüüs viidi lõpule tarkvara SPSS (17.0; SPSS Inc., Chicago, IL, USA) kaudu. Andmed on väljendatud keskmisena ˘ SEM; olulisust hinnati p < 0,05="" kõigi="" statistiliste="" mõõtmiste="">

5. Kokkuvõtted

See on esimene uuring, mis seda tõestabehhinakosiidpärsib glutamaadi vabanemist roti tserebrokortikaalsetest sünaptosoomidest, vähendades Ca2 pluss sissevoolu läbi Cav2.2 ja Cav2.1 kanalite ning see vabanemise pärssimine sõltub tõenäoliselt vähemalt osaliselt proteiinkinaasi C raja supressioonist. Käesolev leid on väärtuslik, kuna see annab uudse ülevaate ehhinakosiidi toimemehhanismidest ajus.

Tänuavaldused:Seda tööd toetas teadus- ja tehnoloogiaministeeriumi toetus (MOST 103-2320-B-030-001 MY3).

Autori kaastööd:Tzu Yu Lin ja Su Jane Wang mõtlesid välja ja kavandasid katsed; Cheng Wei Lu tegi katsed; Cheng Wei Lu ja Shu Kuei Huang analüüsisid andmeid; Su Jane Wang kirjutas paberi.

Huvide konfliktid:Autorid ei deklareeri huvide konflikti.

Huvide konflikt: autorid ei deklareeri huvide konflikti.

Viited

1. Tu, PF; Wang, B.; Deyama, T.; Zhang, ZG; Lou, ZC Fenüületanoidglükosiidide analüüsHerba cistancheRP-HPLC poolt. Acta Pharm. Patt. 1997, 32, 294-300.

2. Dalby-Brown, L.; Barrett, H.; Landbo, AK; Meyer, AS; Molgaard, P. Echinacea purpurea alkamiidide, kofeiinhappe derivaatide ja polüsahhariidide fraktsioonide sünergistlik antioksüdatiivne toime inimese madala tihedusega lipoproteiinide in vitro oksüdatsioonile. J. Agric. Food Chem. 2005, 53, 9413-9423. [CrossRef] [PubMed]

3. Dapas, B.; Dall'Acqua, S.; Bulla, R.; Agostinis, C.; Perissutti, B.; Invernizzi, S.; Grassi, G.; Voinovich, D. Standardiseeritud ehhiaatsia juureekstrakti sisaldava taimesiirupi poolt vahendatud immunomodulatsioon: tsütokiini geeniekspressiooni katseuuring tervetel inimestel. Fütomeditsiin 2014, 21, 1406-1410. [CrossRef] [PubMed]

4. Tema, WJ; Fang, TH; Tu, PF Ehhinakosiidi farmakoloogilise toime uurimise edusammud. Hiina J. Chin. Mater. Med. 2009, 34, 476-479.

5. Deng, M.; Zhao, JY; Tu, PF.; Jiang, Y; Li, ZB; Wang, YH ehhinakosiid päästab SHSY5Y neuronaalsed rakud TNFalpha-indutseeritud apoptoosist. Eur. J. Pharmacol. 2004, 505, 11-18. [CrossRef] [PubMed]

6. Koo, KA; Sung, SH; Park, JH; Kim, SH; Lee, KY; Kim, YC Callicarpa dichotoomi fenüületanoidglükosiidide in vitro neuroprotektiivne toime. Planta Med. 2005, 71, 778-780. [CrossRef] [PubMed]

7. Wang, YH; Xuan, ZH; Tian, ​​S.; Du, GH ehhinakosiid kaitseb 6-hüdroksüdopamiinist põhjustatud mitokondriaalse düsfunktsiooni ja põletikuliste reaktsioonide eest PC12 rakkudes, vähendades ROS-i tootmist. Evid. Põhinev komplement. Altern. Med. 2015, 2015, 189239. [CrossRef] [PubMed]

8. Zhu, M.; Lu, C.; Li, W. Mööduv kokkupuude ehhinakosiidiga on piisav, et aktiveerida Trk signaalimine ja kaitsta neuronaalseid rakke rotenooni eest. J. Neurochem. 2013, 124, 571-580. [CrossRef] [PubMed]

9. Geng, X.; Tian, ​​X.; Tu, P.; Pu, X. Ehhinakosiidi neuroprotektiivne toime Parkinsoni tõve hiire MPTP mudelis. Eur. J. Pharmacol. 2007, 564, 66-74. [CrossRef] [PubMed]

10. Wei, LL; Chen, H.; Jiang, Y; Tu, PF.; Zhong, M.; Du, J.; Liu, F.; Wang, L.; Liu, CY Ehhinakosiidi mõju aktiivse massi histiotsentraalsele tasemele keskmise ajuarteri oklusiooni rottidel. Biomed. Keskkond. Sci. 2012, 25, 238-244. [PubMed]

11. Wu, CR; Lin, HC; Su, MH Pööramine vesiekstraktidegaCistanche tubulosaAlzheimeri tõvega sarnase roti mudeli käitumishäiretest: olulisus amüloidi ladestumise ja tsentraalse neurotransmitteri funktsiooni jaoks. BMC täiendus. Altern. Med. 2014, 14, 202. [CrossRef] [PubMed]

12. Zhao, Q.; Gao, J.; Li, W.; Cai, D. Ehhinakosiidi neurotroofsed ja neurorescue-efektid Parkinsoni tõve alaägedas MPTP hiiremudelis. Brain Res. 2010, 1346, 224-236. [CrossRef] [PubMed]

13. Meldrum, BS Glutamaat kui neurotransmitter ajus: füsioloogia ja patoloogia ülevaade. J. Nutr. 2000, 130, 1007S-1015S. [PubMed]

14. Lee, D.; Shim, MS; Kim, KY; Ei, YH; Kim, H.; Kim, SY; Weinreb, RN; Ju, WK koensüüm Q10 inhibeerib glutamaadi eksitotoksilisust ja oksüdatiivse stressi poolt vahendatud mitokondriaalseid muutusi glaukoomi hiiremudelis. Uurige. Oftalmool. Vis. Sci. 2014, 55, 993-1005. [CrossRef] [PubMed]

15. Choi, DW Kaltsium ja eksitotoksilised neuronikahjustused. Ann. NY Acad. Sci. 1994, 747, 162-171. [CrossRef] [PubMed]

16. Lau, A.; Tymianski, M. Glutamaadi retseptorid, neurotoksilisus ja neurodegeneratsioon. Pflugers. Arch. 2010, 460, 525-542. [CrossRef] [PubMed]

17. Sattler, R.; Tymianski, M. Glutamaadi retseptori vahendatud eksitotoksilise neuronaalse rakusurma molekulaarsed mehhanismid. Mol. Neurobiol. 2001, 24, 107-129. [CrossRef]

18. Schauwecker, PE Neuroprotektsioon glutamaadi retseptori antagonistide poolt krambihoogudest põhjustatud eksitotoksilise rakusurma vastu vananevas ajus. Exp. Neurol. 2010, 224, 207-218. [CrossRef] [PubMed]

19. Yeganeh, F.; Nikbakht, F.; Bahmanpoui; S.; Rastegar, K.; Namavar, R. NMDA ja I rühma metabotroopsete glutamaadi retseptori antagonistide neuroprotektiivne toime homotsüsteiini poolt indutseeritud neurodegeneratsiooni vastu roti hipokampuses: In vivo uuring. J. Mol. Neurosci. 2013, 50, 551-557. [CrossRef] [PubMed]

20. Doble, A. Eksitotoksilisuse roll neurodegeneratiivses haiguses: mõju ravile. Pharmacol. Seal. 1999, 81, 163-221. [CrossRef]

21. Muir, KW Glutamaadipõhised ravimeetodid: kliinilised uuringud NMDA antagonistidega. Curr. Arvamus. Pharmacol. 2006, 6, 53-60. [CrossRef] [PubMed]

22. Gonzalez, JC; Egea, J.; del Carmen Godino, M.; Fernandez-Gomez, FJ; Sanchez-Prieto, J.; Gandia, L.; Garcia, AG; Jordan, J.; Hernandez-Guijo, JM Neuroprotektant minotsükliin pärsib glutamatergilist neurotransmissiooni ja Ca2 pluss signaaliülekannet hipokampuse neuronites. Eur. J. Neurosci. 2007, 26, 2481-2495. [CrossRef] [PubMed]

23. Lu, CW; Lin, TY; Wang, SJ Memantiin pärsib glutamaadi vabanemist, inhibeerides pingest sõltuvat Ca2 pluss sisenemist ja proteiinkinaasi C roti ajukoore närvilõpmetes: NMDA retseptorist sõltumatu mehhanism. Neurochem. Int. 2010, 57,168-176. [CrossRef] [PubMed]

24. Wang, SJ; Sihra, TS Mittekonkureeriv metabotroopne glutamaat 5 retseptori antagonist (E)-2-metüül-6- stürüülpüridiin (SIB1893) pärsib glutamaadi vabanemist, inhibeerides pingest sõltuvat Ca2 pluss sisenemist roti tserebrokortikaalsetesse närvilõpmetesse (sünaptosoomidesse). J. Pharmacol. Exp. Seal. 2004, 309, 951-958. [CrossRef] [PubMed]

25. Dunkley, PR; Jarvie, PE; Heath, JW; Kidd, GJ; Rostas, JA Kiire meetod sünaptosoomide eraldamiseks Percolli gradientidel. Brain Res. 1986, 372, 115-129. [CrossRef]

26. Araque, A.; Li, N.; Doyle, RT; Haydon, PG SNARE valgust sõltuv glutamaadi vabanemine astrotsüütidest. J. Neurosci. 2000, 20, 666-673. [PubMed]

27. Dunlop, J. Glutamaadipõhised terapeutilised lähenemisviisid: glutamaadi transpordisüsteemi sihtimine. Curr. Arvamus. Pharmacol. 2006, 6, 103-107. [CrossRef] [PubMed]

28. Zucchi, R.; Ronca-Testoni, S. Sarkoplasmaatiline retikulum Ca2 pluss kanal/rüanodiini retseptor: endogeensete efektorite, ravimite ja haigusseisundite modulatsioon. Pharmacol. Rev. 1997, 49, 1-51. [PubMed]

29. Fan, Y.; Li, J.; Zhang, YQ; Jiang, LH; Zhang, YN; Yan, CQ Proteiini kinaasi C delta vahendatud 6-hüdroksüdopamiini tsütotoksilisus püsiva rakuvälise signaaliga reguleeritud kinaasi 1/2 aktivatsiooni kaudu PC12 rakkudes. Neurol. Res. 2014, 36, 53-64. [CrossRef] [PubMed]

30. Gschwendt, M.; Muller, HJ; Kielbassa, K.; Zang, R.; Kittstein, W.; Rinkke, G.; Marks, F. Rottlerin, uudne proteiinkinaasi inhibiitor. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1994, 199, 93-98. [CrossRef] [PubMed]

31. Nicholls, peadirektoraat; Sihra, TS; Sanchez-Prieto, J. Kaltsiumist sõltuv ja sõltumatu glutamaadi vabanemine sünaptosoomidest, mida jälgitakse pideva fluoromeetriaga. J. Neurochem. 1987, 49, 50-57. [CrossRef] [PubMed]

32. Nicoll, RA Neurotransmitterite retseptorite sidumine aju ioonikanalitega. Science 1988, 241, 545-551. [CrossRef] [PubMed]

33. Wu, LG; Saggau, P. esilekutsutud neurotransmitteri vabanemise presünaptiline pärssimine. Trends Neurosci. 1997, 20, 204-212. [CrossRef]

34. Turner, TJ; Dunlap, K. Presünaptiliste kaltsiumikanalite farmakoloogiline iseloomustus sünaptosomaalse neurosekretsiooni subsekundiliste biokeemiliste mõõtmiste abil. Neuropharmacology 1995, 34, 1469-1478. [CrossRef]

35. Millan, C.; Sanchez-Prieto, J. N- ja P/Q-tüüpi kaltsiumikanalite diferentsiaalne sidumine glutamaadi eksotsütoosiga roti ajukoores. Neurosci. Lett. 2002, 330, 29-32. [CrossRef]

36. Vazquez, E.; Sanchez-Prieto, J. Glutamaadi vabanemise presünaptiline modulatsioon on suunatud erinevatele kaltsiumikanalitele roti tserebrokortikaalsetes närvilõpmetes. Eur. J. Neurosci. 1997, 9, 2009-2018. [CrossRef] [PubMed]

37. Pikk, P; Mercer, A.; Begum, R.; Stephens, GJ; Sihra, TS; Jovanovic, JN närviterminali GABAA retseptorid aktiveerivad Ca2 pluss/kalmoduliinist sõltuva signaalimise, et pärssida pingega seotud Ca2 pluss sissevoolu ja glutamaadi vabanemist. J. Biol. Chem. 2009, 284, 8726-8737. [CrossRef] [PubMed]

38. Turner, JR; Nurk, JM; Must, ED; Joyal, JL; Sacks, DB; Madara, JL PKC-sõltuv transepiteliaalse resistentsuse regulatsioon: MLC ja MLC kinaasi rollid. Olen. J. Physiol. 1999, 277, C554-C562. [PubMed]

39. Vaughan, PF; Walker, JH; Peters, C. Neurotransmitteri sekretsiooni reguleerimine proteiinkinaasi poolt C. Mol. Neurobiol. 1998, 18, 125-155. [CrossRef] [PubMed]

40. Coffey, ET; Sihra, TS; Nicholls, peadirektoraat; Pocock, JM Sünapsiin I ja MARCKSi fosforüülimist närvilõpmetes vahendab Ca2 pluss sisenemine Aga-GI tundliku Ca2 pluss kanali kaudu, mis on seotud glutamaadi eksotsütoosiga. FEBS Lett. 1994, 353, 264-268. [CrossRef]

41. Obrenovitš, TP; Urenjak, J. Muutunud glutamatergiline ülekanne neuroloogilistes häiretes: kõrgest ekstratsellulaarsest glutamaadist kuni liigse sünaptilise efektiivsuseni. Prog. Neurobiol. 1997, 51, 39-87. [CrossRef]

42. Zhang, D.; Li, H.; Wang, JB ehhinakosiid inhibeerib HEWL-i amüloidfibrillatsiooni ja kaitseb Ap-indutseeritud neurotoksilisuse eest. Int. J. Biol. Macromol. 2015, 72, 243-253. [CrossRef] [PubMed]

43. Lin, TY; Lu, CW; Wang, CC; Lu, JF; Wang, SJ Hispiduliin inhibeerib glutamaadi vabanemist roti tserebrokortikaalsetes närvilõpmedes. Toksikool. Rakendus Pharmacol. 2012, 263, 233-243. [CrossRef] [PubMed]

44. Chang, CY; Lin, TY; Lu, CW; Huang, SK; Wang, YC; Chou, SS; Wang, SJ Hesperidiin pärsib glutamaadi vabanemist ja avaldab neuroprotektsiooni kaiinhappe poolt põhjustatud eksitotoksilisuse vastu rottide hipokampuses. Neurotoksikoloogia 2015, 2015,157-169. [CrossRef] [PubMed]

45. Nicholls, peadirektoraat; Sihra, TS Synaptosoomidel on glutamaadi eksotsütootiline kogum. Nature 1986, 321, 772-773. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Wang, CC; Kuo, JR; Wang, SJ Dimebon, antihistamiinravim, inhibeerib glutamaadi vabanemist roti tserebrokortikaalsetes närvilõpmetes. Eur. J. Pharmacol. 2014, 734, 67-76. [CrossRef] [PubMed]

47. Tibbs, GR; Barrie, AP; van Mieghem, FJ; Mc-Mahon, HT; Nicholls, DG Korduvad toimepotentsiaalid isoleeritud närvilõpmetes 4-aminopüridiini juuresolekul: mõju tsütosoolse vaba Ca2 pluss ja glutamaadi vabanemisele. J. Neurochem. 1989, 53, 1693-1699. [CrossRef] [PubMed]

48. Akerman, KE; Scott, LG; Heikkila, JE; Heinonen, E. Membraanipotentsiaali ja glutamaadi retseptoriga seotud reaktsioonide iooniline sõltuvus sünaptoneurosoomides, mõõdetuna tsüaniinvärviga DiSC2(5). J. Neurochem. 1987, 48, 552-559. [CrossRef] [PubMed]

49. Sihra, TS; Bogonez, E.; Nicholls, DG Lokaliseeritud Ca2 pluss sisenemine mõjutab eelistatavalt valkude defosforüülimist, fosforüülimist ja glutamaadi vabanemist. J. Biol. Chem. 1992, 267, 1983-1989. [PubMed]

50. Grynkiewicz, G.; Poenie, M.; Tsien, RY Uue põlvkonna Ca2 pluss indikaatorid, millel on oluliselt paranenud fluorestsentsomadused. J. Biol. Chem. 1985, 260, 3440-3450. [PubMed]