1. osa:6-Bromo-indirubiini-3 antifibrootiline toime ′ -oksiim (6-BIO) aktivaatori valgu-1 (AP-1) ja spetsiifilisuse valgu-1 (SP-1) transkriptsioonifaktorite reguleerimise kaudu neerurakkudes

6-Bromo-indirubiini-3 ′ -oksüme (6-BIO) antifibrootiline toime aktivaatori valgu-1 (AP-1) ja spetsiifilisuse valgu-1 (SP-1) transkriptsioonifaktorite reguleerimise kaudu neerurakkudes

Rohkem information:ali.ma@wecistanche.com

Märksõnad:neer,FibroosiSMAD,Antifibrootiline

ABSTRAKTNE

PAI-1 ja CTGF on üle väljendatudneerHaigusteja põhjusFibroosikopsud, maks jaNeerud. Me kasutasime roti mudelit ühepoolsest kusiti obstruktsioonist (UUO), et uurida, kas6-BIO, glükogeeni süntaasi kinaasi-3β inhibiitor, nõrgestatudFibroosiinhibeerides PAI-1 ja CTGF in vivo. Lisaks TGFβ indutseeritud rakuFibroositäheldati in vitrot inimese abilneerproksimaalsed torukujulised epiteelirakud (HK-2) ja roti interstitsiaalsed fibroblastid (NRK49F). VäljendamineFibroosi-seotud valgud ja signaalmolekulid nagu PAI-1, CTGF, TGFβ, α SMA,SMADja MAPK määrati HK-2 ja NRK49F rakkudes immunoblottingu abil. PAI-1 ja CTGF-i ekspressiooni reguleerivate transkriptsioonifaktorite tuvastamiseks analüüsiti AP-1 ja SP-1 promootori tegevust lutsiferaasi analüüside abil. Konfokaalset mikroskoopiat kasutati AP-1 ja SP-1 koospaiknemise jälgimiseks PAI-1-le ja CTGF-ile. PAI-1, CTGF, TGFβ ja α -SMA ekspressioon suurenes nii UUO mudelis kui ka TGFβ-töödeldud HK-2 ja NRK49F rakkudes. Lisaks põhjustasid UUO ja TGFβ ravi P- jaSMAD2/3,SMAD4, P-ERK 1/2, P-P38 ja P-JNK MAPK signalisatsioonirajad. PAI-1, CTGF, AP-1 ja SP-1 promootori aktiivsus suurenes vastusena TGFβ ravile. Kuid ravi koos6-BIOvähendada valkude ekspressiooni ja signaalradasid, mis on seotudFibroosinii UUO mudelis kui ka TGFβ töödeldud HK-2 ja NRK49F rakkudes. Lisaks vähendas 6-BIO töötlemine PAI-1 ja CTGF-i ekspressiooni ning AP-1 ja SP-1 edendaja tegevust, reguleerides seeläbiSMADja MAPK signaalimisradasid ning seejärelantifibrootilinemõjuneerLahtrid.

Klõpsake Cistanche herba neeruhaiguse korral

1. Sissejuhatus

Neerfibroosi põhjustavad erinevad tegurid, sealhulgas diabeet, kõrge vererõhk, glomerulonefriit ja vanusega seotud kroonilineneerhaigus [1–3]. Glomeruli skleroos ja tubulointerstitsiaalneFibroosion lõplikud patoloogilised tunnusedneerhaigused [4,5]. Rakuväliste maatriksi (ECM) valkude liigne tootmine ja sadestumine põhjustab struktuurseid ja funktsionaalseid kahjustusiNeerud, mille tulemuseks on oma funktsiooni järkjärguline kaotamine, mis kulmineerub lõppfaasisneerhaigus [5]. Neerudneil on keeruline struktuur, mis on jagatud glomeruli, tubulointerstitsiaalseks ja veresoonteks; igal sektsioonil on erinevat tüüpi rakuväline maatriks ja seda võib mõjutadaFibroosi[6,7]. Interstitsiaalsete torukujuliste rakkude ECM sisaldab erinevaid komponente, sealhulgas kollageeni, glükoosaminoglükaani, elastiini, laminiini ja glükoproteiine. Aktiveeritud proksimaalsed torukujulised rakud võivad aktiveerida tubulointerstitsiaalse [6–10]. Glükogeeni süntaasi kinaasi (GSK3) soodustabneerFibroosiaktiveerides TGF-β signaali proksimaalsetes torukujulistes ja tubulointerstitiaalsetes rakkudes [11]. Selles uuringus püüdsime kindlaks teha GSK3 inhibiitori mõju,6-BIO, proksimaalsetel torukujulistel ja interstitsiaalsete fibroblastirakkudel, suunates plasminogeeni aktivaatori inhibiitori-1 (PAI-1) ja sidekoe kasvufaktori (CTGF), millel on progressiivne rollneerkahjustused ja tubulointerstitialFibroosi.

6-BIOon indirubiini analoogist 6-bro-indirubiini raku läbilaskev derivaat, mis on isoleeritud mere molluskitest ja millel on GSK-3 jaoks suur spetsiifilisus ja selektiivsus [12,13].6-BIOon ATP konkurentsivõimeline inhibiitor ja sellel on sarnasus tsükliinist sõltuva proteiinkinaasi (CDK) ATP seondumisdomeeniga, mis reguleerib kasvajavastast aktiivsust [14–16]. Ebanormaalne GSK3 aktiivsus on seotud mitme inimese haigusega, sealhulgas diabeedi, põletiku, neurodegeneratiivsete haiguste ja psühhoosiga [17,18]. Varasemates uuringutes on näidatud, et GSK3 inhibiitorid võivad parandada kahjustatud tubuleid ja vähendada põletikulisi reaktsioone, TGFβ1 signalisatsiooniga seotud epiteeli-mesenhümaalset üleminekut (EMT) ja fibronektiini kogunemist kultiveeritud glomerulaarsetesse vaherakkudesse [11,19–21]. Lisaks6-BIOvõib avaldada potentsiaalset terapeutilist toimet mitmetes haigustes, sealhulgas diabeedis, neurodegeneratiivsetes häiretes ja vähis, reguleerides põletikku, oksüdatiivset stressi, rakkude ellujäämist ja vohamist ning rakkude surma [22–24]. Siiski on võimalik terapeutiline toime6-BIOonneerFibroosiseotud proksimaalsete torukujuliste ja torukujuliste interstitsiaalsete kahjustustega ei ole veel teada.

PAI-1, multifunktsionaalne glükoproteiinNeerud, on seriini proteaasi inhibiitor, mis inhibeerib urokinaasiplasminogeeni aktivaatorit (uPA) ja koeplasminogeeni aktivaatorit (tPA), mis lagundab plasminogeeni plasmiiniks [25,26]. PAI-1 üleekspressioon pärsib fibrinolüüsi ja ECM-i lagunemist, suurendades seeläbi ECM-i kogunemist [27]. Lisaks reguleerib PAI-1 MAPK-d (mitogeeniga aktiveeritud proteiinkinaasid),SMAD, ja RhoA/ROCK (Rho-ga seotud proteiinkinaasi) signaalteed diabeedi ja krooniliseneerhaigus [28–30]. Transkriptsioonifaktorid, nagu AP-1, SP-1,SMAD3/4, USF2 (ülesvoolu transkriptsioonifaktor 2) ja CTF/NF (kohaspetsiifilise DNA sidumise perekond)

valke), aktiveerib ka MAPK jaSMADsignaalimine [30,31]. Nende signaaliradade ja transkriptsioonifaktorite kombineeritud aktiveerimine suurendab PAI-1 ekspressiooni ja viib ECM-i kogunemiseni. CTGF on EKM-iga seotud hepariini siduv valk, mis sisaldab selliseid domeene nagu insuliinisarnane kasvufaktorit siduv valk (IGFBP), von Willebrandi C-tüüpi kordused (VWC), trombospondiini 1. tüüpi kordus (TSR) ja Tsüsteiinisõlme motiiviga C-terminaalne domeen (CT). Nendest neljast domeenist suhtleb CT-domeen TGFβ superperekonna, fibronektiini ja perlecaniga [32–34]. Sellest tulenevalt suurendab CTGF MAPK-d,SMAD, PI3K ja YAP signaalid, kutsudes esile TGFβ, ja need signaalirajad aktiveerivad transkriptsioonitegureid, nagu AP-1, SP-1, NF-kB jaSMAD2/3. Seega põhjustab CTGF-i upregulatsioon rakkude rännet, vohamist ja põletikku, põhjustades seeläbi ECM-i kogunemist [35–37].

Varasemate uuringute tulemuste põhjal spekuleerisime, et MAPK jaSMADsignaalimine, samuti AP-1 ja SP-1 transkriptsioonifaktorid, võib-olla ühised seosed PAI-1 ja CTGF-i indutseeritud ECM-i kogunemise vahel progressiivsesneerhaigus ja tubulointerstitiaalneFibroosi. Seega uurisime, kas6-BIOvõib ära hoida kroonilist progresseeruvatneerreguleerivad PAI-1 ja CTGF.

2. Materjal ja meetodid

2.1. Antikehad ja reaktiivid

Peamised kasutatavad antikehad olid küülikuvastased antikehad PAI-1 (11907), TGFβ (3711), fosforüleeritudSMAD2/3 (8828),SMAD4 (38454), fosforüleeritud ERK (P-ERK) (9101), fosforüleeritud P38 (P-P38) (4631), fosforüleeritud JNK (P-JNK) (9251), fosforüleeritud C-JUN (P-C-JUN) (3270), fosforüleeritud C-FOS (P-C-FOS) (5348) ja histoon H3 (9715), mis kõik saadi raku signalisatsioonitehnoloogiast. CTGF (ks-365970), SP-1 (ks-17824),SMAD6 (sc-25321) saadi Santa Cruz Biotehnoloogiast. Hiire β-aktiini antikehad (a5316) ja (2'Z,3'E)-6-Bromo indirubiin-3-oksüim (6-BIO) (B1686) saadi Sigma-Aldrichilt.

2.2. Loomkatsed

Kõik loomkatsed viidi läbi vastavalt asjakohastele suunistele ja määrustele. Katseprotokolli kiitis heaks Chonnami riikliku ülikooli meditsiinikooli loomahoolduseeskirjade (ACR) komitee (CNUH IACUC-18010, 19. aprill 2019). Katsed viidi läbi isaste Sprague-Dawley rottidega (180–200 g, Samtako, Korea) [38]. Rotte hoiti kontrollitud temperatuuri all (21 ± 2 ◦ C) 12 h hele-pimedas tsüklis. Rotid jagati kolme rühma: kontroll (n = 6), ühepoolne kusiti obstruktsioon (UUO, n = 6) ja UUO koos6-BIOravi (n = 6).6-BIO(0,2 mg/kg päevas) süstiti intraperitoneaalselt (st p.) 6 päeva jooksul. Obstruktiivse nefropaatia roti mudeli väljatöötamiseks viidi operatsioon läbi järgmiselt: UUO indutseeriti vasaku kusejuha ligeerimisega seitse päeva. Kõhuõõne avati ja vasakule proksimaalsele kusejuhale asetati 2–0 siidist ligatuuri. Kontrollrühm sai sama ravi seitse päeva, välja arvatud ligatuur. Rottidel oli vaba juurdepääs standardsele roti söödale ja kraaniveele ning nad ohverdati 7. päeval pärast operatsiooni. Neerudeemaldati kiiresti ja töödeldi immunohistochemistry ja lääne blottide jaoks.

2.3. Histoloogia

Neerkuded fikseeriti 4% paraformaldehüüdiga, mis olid manustatud parafiini ja lõigati 5 μm paksuseks osaks. Histoloogilise morfoloogia hindamiseks viidi läbi hematoksüliin ja eosiin (H&E), perioodiline happe-schiff (PAS), Sirius red ja Masssoni kolmevärvilised (MT) värvimisprotseduurid. H&E, PAS, Sirius punane värvimine viidi läbi vastavalt tootja juhistele. MT värvimiseks töödeldi pärast ksüleeniga halvustamist sektsioone Bouini lahusega 56 ◦ C juures 30 minutit ja pesti voolava kraanivee all, kuni sektsioonid olid selged. Seejärel värviti lõigud Weigerti hematoksüliiniga (A: B = 1:1), millele järgnes värvimine Biebrich Scarlet/Acid Fuchsin lahusega 10 minutit ja pesemine destilleeritud veega. Sektsioone inkubeeriti fosfotungshappe/fosfomolübiinhappe lahusega 10 minutit ja töödeldi aniliinsinise lahusega 15 minutit. Seejärel inkubeeriti sektsioonid äädikhappega 1 minut ja dehüdreeriti etanooli ja ksüleeniga. Kollageeni ladestused, tuumad ja lihaskiud olid värvitud vastavalt siniseks, mustaks ja punaseks. Värvitud sektsiooni kvantitatiivne analüüs viidi läbi ImageJ tarkvara abil.

2.4. Lääne blot analüüs

Rakud koristati, pesti kaks korda jääkülma fosfaadipuhvriga soolalahusega (PBS), taaselustati lüüsipuhvris ja ultraheliga töödeldi lühidalt. Valgu ekstraheerimise puhver koosnes 50 mM Tris-HCl(pH 7,2), 5 mM EDTA, 150 mM NaCl, 1% Nonidet P-40, 0,1% SDS, proteaasi inhibiitori kokteilist (GenDEPOT, P3100–001) ja fosfataasi inhibiitori kokteilist

(GenDEPOT, P3200–001). Pärast tsentrifuugimist koguti valguekstrakte sisaldavaid supernataate ja mõõdeti valgu kontsentratsioone Pierce® BCA valgu analüüsikomplektiga (Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL, USA) abil. Valgud eraldati 12% naatriumdi dodetsüülsulfaadi-polüakrülamiidi geelidel ja kanti nitrotselluloosi membraanidele. Blotid blokeeriti toatemperatuuril 1 h, kusjuures PBS-is oli 5% kooritud piim, mis sisaldas 0,1% Tween-20 (PBST). Seejärel inkubeeriti blot üleöö primaarse antikehaga (1;2000) temperatuuril 4 ◦ C, millele järgnes inkubatsioon sekundaarse antikehaga (1:2500) ja lõpuks küülikuvastase mädarõigase peroksüdaasi konjugeeritud antikehadega, nagu eespool kirjeldatud [39]. Spetsiifilisi valguribasid visualiseeriti täiustatud kemiluminestsentssüsteemi abil. Kvantitatiivne analüüs

bändi intensiivsus viidi läbi ImageJ tarkvara abil (National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA).

2.5. siRNA nokaut

SP-1, SP-1 siRNA (Santa Cruz Biotechnology, Inc., sc-29487) ja kontroll-siRNA (Santa Cruz, sc-37007) koputamiseks nakatuti 24 h HK-2 ja NRK49F rakkudesse 60% juures, kasutades Dhar-maFECT 1 transfektsiooni reaktiivi (Dharmacon, T-2001–02) lõplikus kontsentratsioonis 30 nM. Rakud inkubeeriti seerumivabas keskkonnas ühe päeva jooksul 37-st^◦C-inkubaator niisutatud 5% CO 2 atmosfääri all, eeltöödeldud 6-BIO-ga 1 h ja stimuleeritud TGF-β 24 h. Knockdowni efektiivsuse määras lääne bloti analüüs.

2.6. Plasmiidi ja reporteri konstruktsiooni mööduv transfektsioon

Rakke kasvatati kuni 60–70% kokkulangemiseni, pesti DMEM-F-12 (HK-2 rakud) või DMEM (NRK49F rakud) andmekandjatega ning inkubeeriti seejärel 24 tundi vastavas keskkonnas ilma seerumi ja antibiootikumideta. Seejärel nakatati rakud domineeriva-negatiivse C-JUN-konstruktsiooniga, samuti PAI-1, CTGF, AP-1 ja SP-1 reporteriga, kes kandsid pGL3 vektorit FuGene HD reaktiivi abil. Mööduvas transfektsioonis kasutatava reporteriplasmiidi kontsentratsioon oli 2 μ g (1 μ g/ μ L). Reporteriga nakatunud rakke raviti eelnevalt 6-BIO-ga 1 h ja inkubeeriti 10 ng/ml TGFβ-ga 16 h jooksul.

2.7. Promotori reporteri analüüs

PAI-1 ja CTGF reporterikonstruktsioonid on toodetud BIO FACT (Yuseong-gu, Daejeon, Korea Vabariik) poolt. PGL3-AP-1 ja pGL3-SP-1 reporterikonstruktsioonid pakkus lahkelt professor Young Do Jung (Chonnam National University). PAI-1, CTGF, AP-1 ja SP-1 transkriptsioonilist regulatsiooni uuriti nende pGL3 promootori-lutsiferaasi reporterikonstruktsioonide mööduva transfektsiooniga. HK-2 ja NRK49F rakud (5 × 10 5) külvati ja kasvatati kuni 60–70% ühinemiseni. Seejärel nakatati promootori konstruktsioonid ja pGL3-tühjad vektorid fuGene HD abil rakkudesse vastavalt tootja protokollile. Renilla lutsiferaasi kodeeriv pRL-nullplasmiid sisaldas kõiki proove, et jälgida transfektsiooni efektiivsust. 24 tunni pärast transfektsiooni mõõdeti firefly ja Renilla luciferase aktiivsuse taset järjestikku ühest proovist, kasutades Dual-Glo Luciferase analüüsisüsteemi (Promega). Firefly lutsiferaasi aktiivsus normaliseerus Renilla aktiivsusele ja lutsiferaasi aktiivsuse suhtelisele kogusele ravimata rakkudes.

2.8. Konfokaallaseermikroskoopia

Rottneerproovid fikseeriti 4% paraformaldehüüdis, mis olid manustatud parafiini ja lõigati 3-μ m paksusteks osadeks.Neerlõigud olid halvustatud ja rehüdreeritud, blokeeritud, pestud PBS-iga ja inkubeeritud ANTI-PAI-1, anti-CTGF, anti-P-C-JUN, anti-P-C-FOS, anti-SP-1 ja anti-AQP1 antikehad lahjendatud blokeerimispuhvris, 24 tundi kell

4^◦C. Pärast pesemist inkubeeriti sektsioonid Alexa Fluor 488 (roheline fluorestsents) kitsevastane küülik (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA), Cy3 (punane fluorestsents) kitsevastane hiir või kitsede küülikuvastane (Invitrogen, Oregon) antikehad 2 h. HK-2 ja NRK49F rakud (3 ×10 5 ) külvati 4-kaevu kambritesse ja inkubeeriti 24 h juures 37 ◦ C. Rakud olid eelnevalt töödeldud 5 μ M 6-BIO 1 h ja seejärel kokku puutunud 10 ng/ ml TGFβ 16 h. Pärast pesemist 1X PBS-iga fikseeriti rakud 4% paraformaldehüüdiga toatemperatuuril 15 minutit ja blokeeriti toatemperatuuril 2 tundi 1X PBS-iga, mis sisaldas 1% BSA-d ja 0,2% Triton X-100. Seejärel inkubeeriti rakud küüliku või hiire monoklonaalsete antikehadega PAI-1, CTGF, P-C-JUN, P-C-FOS ja SP-1 (lahjendatud 1:200 blokeerimispuhvris) 4 °C juures 24 tunni jooksul. Pärast pesemist inkubeeriti rakud vastavate sekundaarsete antikehadega (Cy3 kitsede küüliku- ja hiirevastased antikehad, Alexa Fluor 488 kitse küüliku- ja hiirevastased antikehad, lahjendatud 1:200) 2 h toatemperatuuril. Pärast pesemist paigaldati kaaneliigud mikroslaididele, kasutades ProLong Gold Antifade Reagenti koos DAPI-ga (Life Technologies Corporation). Pilte analüüsiti konfokaalse laserskaneerimise mikroskoobi Leica TCS SP8 (Leica Microsystems, Mannheim, Saksamaa) all.

2.9. Statistiline analüüs

Tulemused väljendati keskmise ± SEM. Mitu võrdlust rühmade vahel viidi läbi ühesuunalise ANOVA ja Tukey ausalt olulise erinevusega (HSD) post hoc testiga. Tulemused p-ga< 0.05="" were="" considered="" statistically="">

3. Tulemused

3.1. 6-BIO soodustab morfoloogilisi muutusi ja fibroosiga seotud markerite ekspressiooni UUO rotimudelis

Hindasime 6-BIO mõjuFibroosiNeerudUUO roti mudelist. Nagu on näidatud joonisel 1A, oli UUO mudel märgatavalt suurenenudneertubulointerstitsiaalne kahjustus, glomerulaarne skleroos, mononukleaarsete rakkude interstitsiaalne infiltratsioon, interstitsiaalse kollageeni ladestumine jaFibroosivõrreldes juhtelementidega, mille määravad H&E, PAS, Sirius Red ja MT värvimine. Lisaks emt-ga seotud valgud, mis indutseerivadneerFibroosisamuti kollageeni I ja -IV, mis suurendavad ECM-i kogunemist, suurenesid UUO-s võrreldes kontrollidega (joonis. S1A ja C). Kuid neid muutusi vähendas 6-BIO töötlemine. Joonis 1B näitab, et pärast 7-päevast obstruktsiooni suurenes UUO mudelrottide neerudes PAI-1, CTGF, α -SMA ja TGFβ valkude ekspressioon võrreldes kontrollidega ja seda suurenemist vähendas ravi 6-BIO-ga. Väljendaminefibrootilinemarkerid suurenesid UUO-s märgatavalt võrreldes juhtelementidega, millele vastukaaluks oli6-BIOravi (joonis 1C). Immunofluorestsentsvärvimine (joonis 1D) näitas, et PAI-1 ja CTGF (punane fluorestsents) ekspressioon suurenes takistatudNeerud7. päeval võrreldes kontrollidega. Pai-1 ja CTGF ekspressioon vähenes siiski 6-BIO töötlemisel (joonis 1D). Kollektiivselt viitavad need leiud sellele, et 6-BIO tugevdab tubulointerstitsiaalset kahju, pärssides PAI-1 ja CTGF ekspressiooni.

3.2. 6-BIO võimendab P-C-JUN, P-C-FOS, SP-1 ekspressiooni ja pärsib fibroosiga seotud signaalradasid UUO rotimudelis

Järgmisena otsustasime, kas6-BIOmõjutab signaalimisradasid, mis on seotudneerFibroosi. Esiteks kinnitasime, et6-BIO, mis on tuntud GSK3β inhibiitor, pärsib GSK3β fosforüülimist. Fig. S1A ja B näitavad GSK3β vähendamist 6-BIO-ga. Joonis 2A näitab TGFβ/SMADsignaalrada. Lääne blot analüüs näitas, et fosforüleeritud ekspressioonSMAD2/3 jaSMADUUO-s suurenes 4 valkuNeerud, mida vähendas 6-BIO töötlemine (joonis 2A). KuidSMAD6, mis pärsib SMAD 2 fosforüülimist jaSMAD4 [40] oli vastupidine tulemusi. Lisaks mängib MAPK-signaalimine võtmerollineerfibroos [41,42]. Tegime lääne blot analüüsi, et teha kindlaks, kas 6-BIO mõjutab MAPK signaalimist. Fosforüleeritud ERK, JNK ja P38 tase suurenes UUOsNeerudvõrreldes nendega, kes on kontrolli allNeerud(Joonis 2B). Fosforüleeritud ERK ja JNK ekspressioon vähenes oluliselt 6-BIO töötlemisega, samas kui fosforüleeritud p38 taseme langus oli tühine (joonis 2B).SMADja MAPK signaalimisrajad olid UUO rühmas ülesreguleeritud, mille pööras ümber6-BIOravi (joonis 2C). Paljud transkriptsioonifaktorid on seotudneerFibroosija mängivad võtmerolli järgmise etapi geeniekspressiooni reguleerimisel. Joonisel 2D on näidatud, et pärast 7-päevast obstruktsiooni suurenes P-C-JUN, P-C-FOS ja SP-1 valkude ekspressioonNeerudUUO-ga rottidel võrreldes kontrollkatsetega ja seda kasvu vähendas 6-BIO-ravi. Samamoodi on AP-1 ja SP-1 ekspressioon, olulised transkriptsioonifaktorid, mis reguleerivadneerfibroosiga seotud geenid suurenesid märgatavaltNeerudrottidel, kellel on UUO, kuid mida vähendati ravimisel 6-BIO-ga (joonis 2E). Joonis 2F näitab P-C-JUN, P-C-FOS immunofluorestsentsvärvimist. JA SP-1. P-C-JUN, P-C-FOS ja SP-1 värvimise punane fluorestsents suurenes oluliselt takistatudNeerud, võrreldes kontrollidega ja vähenes 6-BIO-raviga. Need tulemused kinnitavad, et AP-1 ja SP-1 on olulised transkriptsioonifaktorid, mis on seotudneerfibroos ja6-BIOvõib vähenedaneerfibroos, vähendades nende transkriptsioonilist aktiivsust.

Klõpsake 2. osa puhul nuppuSiin.