Cistanches Herba mitme indeksi põhjalik kvaliteedihindamine kriitilise kaalumeetodi põhjal

WEI Wei, QI Yuning, CHEN Weiying, ZHU Shunjuan, HOU Jianzhong
(Jiuquani kvaliteedikontrolli- ja testimiskeskus Gansu provintsis, Jiuquan, Gansu 735000, Hiina)

Abstraktne:Eesmärk oli luua mitmeindeksiline terviklik hindamismeetod Cistanche deserticola kvaliteedi hindamiseks ning teaduslikult hinnata eri allikatest (Cistanche deserticola ja Cistanche tubulosa) ja erinevatest tootmispiirkondadest pärit Cistanches Herba kvaliteedierinevusi. Viie fenüületanoidglükosiidi (ehhinakosiid, verbaskosiid, tubulosiid A, isoakteosiid ja 2'-atsetüüllakteosiid) sisaldus määrati kõrgsurvevedelikkromatograafia (HPLC) abil. Iga komponendi massi arvutamiseks kasutati kaalumismeetodit CRITIC ja proovide põhjalik hinded arvutati. Proovide kvaliteedierinevuste mustrite analüüsimiseks kasutati klasteranalüüsi. Tulemused näitasid, et Cistanche deserticola ja Cistanche tubulosa vahel täheldati kvaliteedierinevusi. Cistanche tubulosa hindamisskoorid olid üldiselt kõrgemad kui Cistanche deserticola. Klastrianalüüs rühmitas Cistanche deserticola ja Cistanche tubulosa erinevatesse kategooriatesse. Cistanche deserticola kvaliteet varieerus minimaalselt, samas kui Cistanche tubulosa kvaliteet oli eri tootmispiirkondades erinev. Selles uuringus loodud mudel suudab objektiivselt kvantifitseerida erineva päritoluga ja tootmispiirkondadest pärit Cistanches Herba kvaliteedierinevusi, luues teadusliku aluse Cistanche kvaliteedi hindamiseks.

Märksõnad: Cistanches Herba;KRIITILINE kaalumeetod; klastrianalüüs;kvaliteedi hindamine

Müüa Cistanche ürdi ekstrakt

 

 

 

 

 

Cistanches Herba koosneb Cistanche deserticola YC Ma või Cistanche tubulosa (Schenk) Wighti, endise üldtuntud kui kõrbistanche, kuivatatud ketendunud mahlatest vartest. Cistanches Herba on olemuselt soe ning maitselt magus ja soolane. See toniseerib neeru yangi, annab kasu essentsile ja verd ning niisutab soolestikku, et leevendada kõhukinnisust. Seda kasutatakse neeru-yangi puudulikkuse, essentsi ja vere puuduse, impotentsuse ja viljatuse, talje ja põlvede valulikkuse ja nõrkuse, lihaste ja luude nõrkuse ning kõhukinnisusega soolekuivuse korral. Selle farmakoloogiliselt aktiivsetel komponentidel, nagu fenüületanoidglükosiidid, polüsahhariidid ja iridoidid, on antioksüdantne, vananemisvastane, immunomoduleeriv ja neuroprotektiivne toime. Tuntud traditsioonilise hiina meditsiinilise materjalina on see Shennongi klassikalises Materia Medicas loetletud tipptasemel ravimtaimena ja seda tuntakse kui "kõrbe ženšenni". Seda levitatakse peamiselt Sise-Mongoolia, Gansu, Xinjiangi ja Ningxia loodepiirkondades.

Seoses kasvava turunõudlusega on looduslikud ressursid ammendumas ja kunstlik kasvatamine on muutunud peavooluks. Hiina Rahvavabariigi farmakopöa 2005. aasta väljaanne laiendas Cistanche tubulosa't kui Cistanches Herba legaalset botaanilist allikat. Kahel allikal on eraldi katsepiirangud, kuid ainult ekstraktiivainete ning ehhinakosiidi ja verbaskosiidi sisalduse jaoks, mis ei suuda igakülgselt kajastada traditsioonilise hiina meditsiini mitmekomponendilisi ja mitme sihtmärgiga omadusi. Cistanches Herba keemiline koostis varieerub sõltuvalt tootmispiirkonnast, koristusajast ja töötlemismeetoditest. Seetõttu on teadusliku ja süstemaatilise kvaliteedihindamise süsteemi loomine meditsiiniliste materjalide ohutuse ja efektiivsuse tagamisel ning säästva tööstuse arengu edendamisel väga oluline. Selles uuringus analüüsiti 20 Cistanches Herba partiid Jiuquani erinevatest tootmispiirkondadest. HPLC-d kasutati viie fenüületanoidglükosiidi - ehhinakosiidi, tubulosiidi A, verbaskosiidi, isoakteosiidi ja 2'-atsetüüllakteosiidi samaaegseks määramiseks. Kahe botaanilise allika igakülgse kvaliteedi hindamiseks kasutati igale indikaatorile kaalu määramiseks kaalumeetodit CRITIC ning botaanilise päritolu ja tootmispiirkonna erinevuste tõlgendamiseks kasutati klasteranalüüsi (CA), mille eesmärk oli luua teaduslik alus Cistanches Herba kvaliteedi hindamiseks.

1 Tsüstanši instrumendid ja materjalid

1.1 Instrumendid ja seadmed

Agilent 1260 Infinity HPLC süsteem [sealhulgas kvaternaarne pump, automaatne proovivõttur, kolonnahju ja DAD-detektor; Agilent Technologies (China) Co., Ltd.]; XP205DR elektrooniline analüütiline kaal (Mettler-Toledo Instruments Co., Ltd.); KQ-500DE ultrahelipuhasti (Kunshan Ultrasonic Instruments Co., Ltd.).

 

1.2 Reaktiivid

Võrdlusstandardid: verbaskosiid (partii nr . 111530-201914, puhtus 95,2%) ja ehhinakosiid (partii nr . 111670-201706, puhtus 89,7%) osteti riiklikust toidu- ja ravimikontrolli instituutist; tubulosiid A (partii nr B20471, puhtus suurem või võrdne 98%), isoakteosiid (partii nr B21535, puhtus suurem või võrdne 98%) ja 2′-atsetüüllakteosiid (partii nr B21779, puhtus suurem kui või võrdne 98%) osteti ettevõttest BioYTechnology, Shanghai, Yu-8%). Ltd. Metanool oli HPLC puhtusastmega (Merck). Ülipuhas vesi valmistati ise. Teised reaktiivid olid analüütiliselt puhtad.

 

1.3 Näidised

Kümme partiid Cistanche deserticola ja kümme partiid Cistanche tubulosa koguti Jiuquani piirkonna Cistanches Herba kultiveerimisbaasidest ja apteekidest, märgistusega R1–R20 (vt tabel 1). Jiuquani kvaliteedikontrolli- ja testimiskeskuse asedirektor ja TCM-i proviisor Hou Jianzhong tuvastas, et need on Cistanche deserticola YC Ma või Cistanche tubulosa (Schenk) Wighti kuivatatud ketendavad mahlakad varred. Vautšeri näidised deponeeritakse Jiuquani kvaliteedikontrolli- ja testimiskeskuse ravimite ja kosmeetikatoodete testimise instituuti.

Tabel 1 Cistanches Herba proovide allikateave

R1|Cistanche deserticola|Dazhuangzi linn, Jinta maakond, Jiuquani linn

R2|Cistanche deserticola|Jiashani uuslinn, Suzhou piirkond, Jiuquani linn

R3|Cistanche deserticola|Xiqu linn, Jinta maakond, Jiuquani linn

R4|Cistanche deserticola|Zhonghe linn, Jinta maakond, Jiuquani linn

R5|Cistanche deserticola|Shuanglongi linn, Suzhou piirkond, Jiuquani linn

R6|Cistanche deserticola|Hongliu linn, Guazhou maakond, Jiuquani linn

R7|Cistanche deserticola|Hongshagangi linn, Dunhuangi linn, Jiuquan

R8|Cistanche deserticola|Yumeni linn, Jiuquan

R9|Cistanche deserticola|Tashi linn, Guazhou maakond, Jiuquani linn

R10|Cistanche deserticola|Zongtai linn, Yumen, Jiuquan

R11|Cistanche tubulosa|Dazhuangzi linn, Jinta maakond, Jiuquani linn

R12|Cistanche tubulosa|Suzhou piirkond, Jiuquani linn

R13|Cistanche tubulosa|Suzhou piirkond, Jiuquani linn

R14|Cistanche tubulosa|Suzhou piirkond, Jiuquani linn

R15|Cistanche tubulosa|Suzhou piirkond, Jiuquani linn

R16|Cistanche tubulosa|Hongshagangi linn, Dunhuangi linn, Jiuquan

R17|Cistanche tubulosa|Hongshagangi linn, Dunhuangi linn, Jiuquan

R18|Cistanche tubulosa|Hongshagangi linn, Dunhuangi linn, Jiuquan

R19|Cistanche tubulosa|Liangzhongi linn, Yumen, Jiuquan

R20|Cistanche tubulosa|Liugou alevik, Anxi maakond, Jiuquan

 

2 Meetodid ja tulemused

2.1. Segatud võrdluslahuse valmistamine

Täpselt kaaluge verbaskosiidi 10,45 mg, ehhinakosiidi 11,56 mg, tubulosiidi A 10,59 mg, isoakteosiidi 19,63 mg ja 2'-atsetüüllakteosiidi 9,03 mg eraldi 50 ml mõõtekolbidesse, lahustage 50% metanooliga ja lisage maht. Põhivõrdluslahuste saamiseks segage hästi. Seejärel pipeteerige 1,00 ml iga põhilahust täpselt 10 ml mõõtekolbi, lahjendage 50% metanooliga mahuni ja segage segatud võrdluslahuse saamiseks.

Wecistanche'i tugiteenus – koostöö kohta lisateabe saamiseks
E-post:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel:+86 15292862950

 

2.2 Katselahuste valmistamine

Laske proovipulbrid läbi No. 3 sõela; kaaluge umbes 1 g täpselt 100 ml pruuni mõõtekolbi. Lisage 80 ml 50% metanooli, sulgege korgiga, loksutage, kaaluge, leotage 30 minutit ja töödelge ultraheliga 40 minutit (250 W, 35 kHz). Jahutage toatemperatuurini, kaaluge uuesti, lisage kaalukaotuse kompenseerimiseks 50% metanooli, loksutage korralikult, laske seista, dekanteerige supernatant ja filtreerige. Järgnev filtraat kogutakse uuritava lahusena.

 

2.3 Kromatograafilised tingimused

Kasutage InertSustain C18 kolonni (4,6 mm × 250,0 mm, 5 μm). Liikuv faas: metanool (A) ja 0,1% fosforhappe lahus (B). A-faasi gradient: 0–6 min, 20%; 6–18 min, 20%→30%; 18–35 min, 30%→45%. Voolukiirus: 1,0 ml/min; kolonni temperatuur: 35 kraadi; tuvastamise lainepikkus: 330 nm; süstimismaht: 10 μL. Iga komponendi teoreetilised plaadid olid vähemalt 5000. Segatud võrdluslahuse ja uuritavate lahuste kromatogrammid on näidatud joonisel 1.

 

2.4 Sisu määramise metoodika valideerimine

2.4.1 Täpsuskatse

Süstige punktis 2.1 kirjeldatud segatud võrdluslahust kuus korda järjest punktis 2.3 kirjeldatud tingimustel. Kõigi analüütide piikide alade RSD-d olid 0,86% või väiksemad, mis näitab instrumendi head täpsust.

 

2.4.2 Korratavuse test

Kaalutakse täpselt kuus proovi R2 portsjonit (igaüks umbes 1,0 g) ja valmistatakse kuus katselahust punkti 2.2 kohta. Analüüsige punktis 2.3 toodud tingimustel. Tipppiirkondade RSD-d olid 1, 12% või väiksemad, mis näitab meetodi head korratavust.

 

2.4.3 Stabiilsuskatse

Proovist R1 valmistatakse uuritav lahus vastavalt punktile 2.2. Süstige 0, 2, 4, 8, 12 ja 24 tunni pärast lõigus 2.3 kirjeldatud tingimustel. Tipppiirkondade RSD-d olid 1, 20% või väiksemad, mis näitab lahuse head stabiilsust 24 tunni jooksul.

 

2.4.4 Lineaarsus

Valmistage ette rida segatud võrdluslahuseid, pipeteerides täpselt 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, 1,0 ja 2,0 ml igat põhilahust 10 ml mõõtekolbidesse ja lahjendades 50% metanooliga. Süstige lõigus 2.3 kirjeldatud tingimustel. Kalibreerimisvõrrandite ja lineaarsete vahemike saamiseks joonistage kontsentratsioon piigi pindala suhtes (tabel 2). Tulemused näitasid ehhinakosiidi, tubulosiidi A, verbaskosiidi, isoakteosiidi ja 2'-atsetüüllakteosiidi head lineaarsust nende vastavates vahemikes.

Tabel 2 Lineaarsusuuringu tulemused

ehhinakosiid|y=2397.4x − 15,363|r=0.9987|lineaarne vahemik: 0,0046–0,0462 mg·L−1

Tubulosiid A|y=9428.7x − 7,104|r=0.9984|lineaarne vahemik: 0,0024–0,0242 mg·L−1

Verbascoside|y=12609.5x − 8,507|r=0.9986|lineaarne vahemik: 0,0024–0,0418 mg·L−1

Isoakteosiid|y=11600.3x − 11,359|r=0.9985|lineaarne vahemik: 0,0079–0,0786 mg·L−1

2′-atsetüüllakteosiid|y=10901.8x − 5,216|r=0.9985|lineaarne vahemik: 0,0036–0,0362 mg·L−1

2.4.5 Taastamine
Valmistage üheksa portsjonit teadaoleva sisaldusega proovist (R1), igaüks umbes 0,5 g. Suurendage 50%, 100% ja 150% nimisisaldusest sobivate koguste verbaskosiidi, ehhinakosiidi, tubulosiidi A, isoakteosiidi ja 2'-atsetüüllakteosiidiga. Valmistage katselahused vastavalt punktile 2.2 ja analüüsige vastavalt punktile 2.3. Keskmised taastumised olid 99,58%, 99,24%, 100,26%, 99,84% ja 100,46%, kusjuures RSD-d olid vastavalt 1,26%, 1,67%, 1,03%, 1,39% ja 1,71%, mis näitab head täpsust.

 

2.4.6 Sisu määramine

Kaaluge täpselt umbes 1 g Cistanche deserticola ja Cistanche tubulosa pulbrit, valmistage katselahused vastavalt punktile 2.2, analüüsige vastavalt punktile 2.3 ja arvutage verbaskosiidi, ehhinakosiidi, tubulosiidi A, isoakteosiidi ja 2'-atsetüülakteosiidi sisaldus. Tulemused on näidatud tabelis 3.

Tabel 3 Viie komponendi sisalduse määramise tulemused Cistanches Herbas (mg·g−1)

R1: ehhinakosiid 4,81|Tubulosiid A 0,16|Verbaskosiid 0,58|Isoakteosiid 0,26|2'-atsetüüllakteosiid 0,49

R2: 5.02 | 0.13 | 0.70 | 0.30 | 0.61

R3: 6.62 | 0.24 | 0.67 | 0.21 | 0.43

R4: 5.25 | 0.18 | 0.82 | 0.34 | 0.67

R5: 5.63 | 0.17 | 0.75 | 0.21 | 0.39

R6: 6.85 | 0.24 | 0.91 | 0.29 | 0.44

R7: 6.08 | 0.23 | 0.63 | 0.20 | 0.54

R8: 5.17 | - | 0.49 | 0.18 | 0.24

R9: 6.78 | 0.28 | 0.73 | 0.27 | 0.37

R10: 5.44 | 0.19 | 0.68 | 0.24 | 0.26

R11: 16.77 | 0.97 | 1.20 | 1.19 | -

R12: 13.80 | 1.22 | 2.07 | 1.98 | 0.08

R13: 17.06 | 2.09 | 4.82 | 2.08 | 0.14

R14: 18.56 | 2.86 | 4.76 | 2.89 | 0.16

R15: 20.47 | 3.62 | 5.17 | 1.84 | 0.21

R16: 15.38 | 3.16 | 3.86 | 1.09 | 0.18

R17: 16.23 | 2.97 | 4.43 | 1.44 | 0.17

R18: 15.02 | 2.40 | 3.59 | 1.38 | 0.18

R19: 17.56 | 3.06 | 4.91 | 1.52 | 0.19

R20: 14.87 | 2.64 | 4.05 | 1.26 | 0.20

 

2.5 Kvaliteedi hindamine CRITIC kaalumismeetodil

2.5.1 Andmete standardimine

Kuna indikaatorite mõõdetud sisu varieerus oluliselt, käsitleti iga näitajat kasutüüpi näitajana ja standardiseeriti valemiga (1) vahemikku [0, 1].

 

2.5.2 Kaalude määramine

20 partii standardiseeritud tulemused imporditi SPSSPRO veebipõhisesse andmetöötlusplatvormi ja kaalude arvutamiseks kasutati meetodit CRITIC (tabel 4). Nagu on näha tabelist 4, oli 2′-atsetüüllakteosiidi teabesisaldus (1,936) oluliselt kõrgem kui teistel näitajatel (0,683–0,758), peamiselt selle väga kõrge konfliktimõõdu (6,786) tõttu, mis viitab väga madalale korrelatsioonile teiste näitajatega. Seega andis see hindamissüsteemis ainulaadset teavet ja moodustas 40,112% kogukaalust, muutudes domineerivaks näitajaks. Ülejäänud nelja näitaja (ehhinakosiid, tubulosiid A, verbaskosiid ja isoakteosiid) kaalud olid suhteliselt tasakaalus.

Tabel 4 Kaalutegurite arvutamise tulemused

Näitaja: ehhinakosiid|Muutus 0,367|Konflikt 2,064|Teave 0,758|kaal 15,705%

Indikaator: Tubulosiid A|0,352|1,940|0,683|14,150%

Näitaja: Verbascoside|0,392|1,881|0,737|15,275%

Näitaja: Isoakteosiid|0,330|2,157|0,713|14,759%

Indikaator: 2′-atsetüüllakteosiid|0,285|6,786|1,936|40,112%

 

2.5.3 Terviklik hindamine

Määratud kaalude põhjal arvutati valemi (2) abil 20 partii terviklikud hindamisskoorid. Tulemused on toodud tabelis 5. Kahe botaanilise allika vahel leiti märgatavaid skooride erinevusi. Cistanche tubulosa'l oli üldiselt suurem ehhinakosiidi ja verbaskosiidi sisaldus, mis tõi kaasa kõrgemad üldised hinded kui Cistanche deserticola.

Tabel 5 CRITIC kõikehõlmavad hindamisskoorid Cistanches Herba kohta

R1: 0,307 (14. koht)

R2: 0,386 (10. koht)

R3: 0,292 (15. koht)

R4: 0,432 (8. koht)

R5: 0,258 (17. koht)

R6: 0,313 (13. koht)

R7: 0,351 (12. koht)

R8: 0,147 (20. koht)

R9: 0,265 (16. koht)

R10: 0,179 (19. koht)

R11: 0,236 (18. koht)

R12: 0,335 (12. koht)

R13: 0,533 (4. koht)

R14: 0,632 (2. koht)

R15: 0,667 (1. koht)

R16: 0,497 (6. koht)

R17: 0,530 (5. asetus)

R18: 0,469 (7. koht)

R19: 0,565 (3. koht)

R20: 0,425 (9. koht)
 

 

2.6 Klasteranalüüs

20 partii mõõdetud sisu imporditi SPSS 20.0-sse. Mõõdikutena kasutati kaugeima naabri meetodit ja ruudus Eukleidilist kaugust ning rühmitamiseks kasutati rühmadevahelist seost (vt joonis 2). Tulemused näitasid kvaliteedierinevusi kahe botaanilise allika vahel: Cistanche deserticola ja Cistanche tubulosa, mis olid koondunud eraldi rühmadesse. Cistanche deserticola varieeruvus oli väike, samas kui Cistanche tubulosa kvaliteedierinevused tootmispiirkondade vahel olid jaotatud kolmeks alarühmaks, mis oli üldiselt kooskõlas CRITIC-põhise põhjaliku hinnanguga.