Morin leevendab aflatoksiin B{0}}indutseeritud maksa- ja neeruvigastusi, inhibeerides tibudel heterofiilide ekstratsellulaarsete lõksude vabanemist, oksüdatiivset stressi ja põletikulisi reaktsioone

Lisateabe saamiseks võtke ühendusttina.xiang@wecistanche.com

ABSTRAKTNEAflatoksiin B1 (AFB1) on sekundaarne metaboliit, mida toodavad Aspergillus favus ja parasiit aspergillus, mis leidub peamiselt teraviljas, maapähklites, maisis ja muudes põllukultuurides, mis ohustavad tõsiselt kodulinde, inimeste tervist ja keskkonda. Morin, Moraceae taimedest ekstraheeritud flavonoidühend, omab antioksüdante, antibakteriaalseid japõletikuvastanemõjusid. Siiski, kas moriinil on kaitsev toime AFB{0}}indutseeritudmaksjaneerukahjustustibudel ei ole konkreetselt teatatud. Selles uuringus kinnitasime peamiselt moriini kaitsvat toimet AFB{0}}indutseeritud maksa- ja neerukahjustustele tibudel ning selgitasime selle mehhanismi. Leiti, et moriin võib märkimisväärselt vähendada maksa biokeemilisi alaniinaminotransferaasi (ALT), aspartaataminotransferaasi (AST) ja neerude kreatiniini (CRE) ja uurea lämmastiku (BUN) tasemeid. Samal ajal näitas histopatoloogiline uuring, et moriin leevendas tõhusalt maksakahjustusi, sealhulgas hepatotsüütide häireid, turset ja põletikuliste rakkude infiltratsiooni, ning leevendas tõhusalt neerukahjustusi, sealhulgas neerurakkude nekroosi, koorimist ja vakuolisatsiooni. Selle mehhanismi edasine uurimine näitas, et moriin pärssis oluliselt AFB1-indutseeritud heterofiilide ekstratsellulaarsete lõksude (HET) vabanemist ja vähendas malondialdehüüdi (MDA) taset, kuid suurendas superoksiiddismutaasi (SOD), glutatioonperoksidaasi (GSH-) taset. Px) ja katalaasi (CAT) in vivo. Lisaks näitas kvantitatiivne reaalajas PCR (qRT-PCR) analüüs, et moriin vähendas oluliselt ka tuumori nekroosifaktori (TNF-), interleukiini-6 (I{{10}) AFB1-indutseeritud mRNA ekspressiooni. }) ja interleukiin-1 (IL-1), indutseeritav lämmastikoksiidi süntaas (iNOS), tsüklooksügenaas-2 (COX-2), kaspaas-1, kaspaas{ {16}} ja kaspaas-11. Kokkuvõttes kinnitasid kõik tulemused, et moriin võib kaitsta AFB1-põhjustatud maksa- ja neerukahjustusi, pärssides HET-de vabanemist, reguleerides oksüdatiivset stressi ja pärssides põletikulist vastust, mis viitab sellele, et morini saab kasutada potentsiaalse ravimina aflatoksikoosi ennetamiseks ja raviks kodulinnukasvatuses.

Võtmesõnad:moriin, aflatoksiin B1, heterofiilide ekstratsellulaarsed püünised, põletikuline reaktsioon, oksüdatiivne stress

SISSEJUHATUS

Aflatoksiin on kõrge toksilisuse ja madala molekulmassiga sekundaarse metaboliidi tüüp, mida toodavad sellised seened nagu Aspergillus flavus, Parasitic aspergillus ja spetsiifiline aspergillus, millel on tugev toksilisus, mutageensus ja kantserogeensus, millest kõige tugevam on aflatoksiin B1 (AFB1). (Rawal et al, 2010). AFB1 reostus oli seotud söötmisohutuse, loomakasvatuse ja toiduohutusega ning ohustab isegi inimeste tervist. Seetõttu on oluline lahendada AFB1 saastumine söödas ning jääkprobleemid loomades ja loomakasvatussaadustes. Aflatoksiinidega kokkupuude raseduse ajal ohustab loote tervist, mis võib kanduda emalt lootele nabaväädivere ja rinnapiima kaudu (Denning et al., 1990). On teatatud, et AFB1 tase vastsündinute ikteruse seerumis koos 6-fosfoglükoosdehüdrogenaasi puudulikkusega ning leitud, et 58 protsenti vastsündinutest ja 75 protsenti emadest olid positiivsed (Raafat et al, 2021). AFB1 kui kõige olulisem hepatotsellulaarne kantserogeen, on hepatotsellulaarse kartsinoomi (HCC) peamine põhjus maailmas ning uuringud on leidnud, et AFB1 ja B-hepatiidi viirus (HBV) suurendavad koostoimes HCC esinemissagedust (Rushing ja Selim, 2019). ).AFB1-indutseeritudoksüdatiivne stresson üks olulisi viise, kuidas selle toksilisus avaldub (Abdel-Wahhab ja Aly, 2003). Kuid aflatoksikoosi aluseks olevaid sügavamaid mehhanisme ning tõhusamaid ennetus- ja raviravimeid tuleb veel uurida.

Morin (keemiline struktuur on näidatud joonisel 1) on Moraceae taimedest ekstraheeritud looduslik pigment, mis kuulub flavonoidide hulka ja millel on bioloogilised, sealhulgas põletikuvastased omadused (Wei jt), (Li et al, 2020), ja antioksüdant 2015), antibakteriaalne (Wei jt, 2015), ateroskleroosivastane (Zhou jt, 2017), madalam veresuhkru tase ja antistress ning seda on laialdaselt kasutatud südame isheemiatõve, diabeedi ja vähi kliinilises ravis. On teatatud, et moriin võib avaldada antibakteriaalset toimet Staphylococcus aureusele, Bacillusele ja Micrococcus flavusele, häirides bakteriaalse DNA sünteesi ja pärssides adenosiintrifosfaadi (ATPaasi) aktiivsust (Xu et al. 2001). Mõned uuringud näitavad, et moriin võib inhibeerida TLR4 / NF-xB ja aktiveerida Nrf2 ja HO-signaaliradasid, et kaitsta LPS-i indutseeritud ägedatmaksakahjustushiirtel (Tian et al, 2017). Morin võib ka tõhusalt parandada dietüülammooniumnitraadist põhjustatud maksafibroosi rottidel, vähendades Hippo/YAP ja TGF- 1/Smad signaaliülekannet (Perumal et al, 2017). Praegu on teatatud, et mitmesugused ühendid, nagu vitamiinid A, Cand E (Alpsoy ja Yalvac, 2011) ja eugenool, suudavad vastupanuvõimele.oksüdatiivne stressAFB1 vastus. Traditsioonilise antioksüdantravimina võiks aga moriin mängida kaitsvat rolli ka maksa- janeerukahjustusaflatoksikoosiga tibudel ei ole teatatud.

Neutrofiilide ekstratsellulaarsed püünised (NET) on organismi esimene kaitseliin viimastel aastatel leitud väliste patogeenide vastu. NET-id on võrgustruktuur, mille skeletiks on DNA ja mida modifitseerivad tsitrullineeritud histoon 3 (citH3) ja elastaas (Wei et al.,

2019b), millel on antibakteriaalne (Brinkmann et al., 2004), viirusevastane (Saitoh jt, 2012) ja antiparasiitne (Wei jt, 2016). Heterofiilide ekstratsellulaarsetel püünistel (HET) on sarnane funktsioon NET-idega, välja arvatud see, et HET-idel ei ole müeloperoksidaasi (MPO) ekspressiooni (Chuammitri et al., 2009). On näidatud, et N. canine võib in vitro indutseerida koerte NET-ide vabanemist, et nakkusele vastu seista (Wei et al, 2016). Samuti on kinnitust leidnud uuring, mis võib vähendada abamektiini (AVM) karpkala hingamispurskeid, pärssides PI3K-ERK signaaliraja aktiveerimist, pärssides seega NET-ide vabanemist karpkalal (Zheng et al, 2020). Sarnaselt abamektiiniga on moriin tunnustatud terapeutiline ravim. Kas selle terapeutiline toime on seotud NET-ide vabanemisega, nõuab see täiendavat uurimist.

Seetõttu uuriti meie uuringus moriini mehhanismi AFB{0}}indutseeritud maksa- ja neerukahjustuse korral tibudel ning uuriti selle kaitsvat toimet. Eeldatakse, et see loob eksperimentaalse aluse moriini veterinaar-kliiniliseks rakendamiseks ning pakub katseandmeid ja viiteid mükotoksiinimürgistuse ennetamiseks ja tõrjeks.

MATERJALID JA MEETODID Reaktiivid ja materjalid

AFB1 (A6636, puhtus 98 protsenti või suurem, Sigma-Aldrich [Shang-hail Trading Co., Ltd., Shanghai, Hiina). Morin (puhtus 98 protsenti või suurem) osteti ettevõttest Chengdu Pusi Biological Co., Ltd. (Chengdu, Hiina). Pico Green dsDNA analüüsikomplekt (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA). AST, ALT, BUN ja CRE komplekt saadi Nanjing Jianchengi bioloogilise tehnika instituudist (Nanjing, Hiina). GSH-Px SOD, CAT ja MDA komplekt saadi Nanjing Jianchengi bioloogilise tehnika instituudist (Nanjing, Hiina). RevertAid First Strand cDNA sünteesikomplekt saadi firmast Thermo.qPCR põhisegu saadi ettevõttest Roche (Mannheim, Saksamaa).

Loomamudelite loomine

25 ühepäevast tibu osteti Foshani aretusfarmist (Foshan, Guangdong) ja tibusid toideti ühe päeva jooksul adaptiivselt. Nakatunud tibu mudeli loomist alustati teisel päeval. Katsetibud jagati juhuslikult 5 rühma: kontrollrühm, AFB1 rühm (5 mg/kg), moriiniga ravirühm (20 mg/kg, 40 mg/kg, 80 mg/kg). Modelleerimise esimesel päeval tehti ravi. rühmale süstiti ennetamiseks intraperitoneaalselt moriini ja süstiti uuesti 16 tundi hiljem. Veri koguti 24 tundi hiljem, tibud tapeti ning võeti maksa- ja neerukoed. Kogu katse rakendamine viidi läbi vastavalt Foshani ülikooli loomauuringute eetikakomitee juhistele (FSUeae2019112501).

HET-ide tuvastamine seerumis

Kogutud veri seisis, tsentrifuugiti kiirusel 12, 000 pööret minutis 10 minutit ja ülemine seerum ekstraheeriti, lahjendati 5- korda TE-värviga ja seejärel lisati sama kogus Pico Greeni. Lõpuks jälgiti katsetulemusi fluorestsents-mikroplaadi lugejaga.

ALT ja AST tuvastamine seerumis

ALT ja AST taseme mõõtmine seerumis komplektiga ja katsetulemused tuvastati mikroplaadilugejaga lainepikkusel 510 nm.

BUN ja CRE tuvastamine seerumis

CRE ja BUN tasemeid seerumis uuriti vastavate komplektidega ja katsetulemused tuvastati mikroplaadilugejaga lainepikkusel 510 nm.

Maksa ja neerukoe histopatoloogiline hindamine

Kogutud maksa- ja neerukoeproovid fikseeriti 10-protsendilises formaliinis. Seejärel kude dehüdreeriti, sisestati ja värviti hematoksüliini ja eosiiniga (Wet al, 2021). Lõpuks kasutati patoloogiliste muutuste jälgimiseks pöördelise hübriidmikroskoopi.

Oksüdaasi aktiivsuse ja antioksüdantsete ensüümide aktiivsuse tuvastamine

Oksüdaasi MDA ja antioksüdandi oksüdaasi GSH-Px, SOD ja CAT tasemeid tuvastati uurides vastavate komplektidega (Guo et al, 2021). SOD ja CAT mõõdeti seerumiga ning MDA ja GSH-Px mõõdeti maksakoega. Lisaks peame proovide valgu kontsentratsiooni kvantitatiivseks analüüsiks kasutama TBD reagente (Cao et al., 2020).

Kvantitatiivne reaalajas PCR analüüs

mRNA ekspressiooni tuvastamiseks kasutati QRT-PCR-ipõletikulinetegurid TNF-a, IL-1, IL-6, põletikumediaator COX-2, iNOS ja kaspaasi signaaliraja võtmetegurid kaspaas-1, kaspaas{{6} } ja kaspaas-11. Reaalajas PCR fluorestsentsi kvantifitseerimiseks kasutati CFX Connect Real-Time System instrumenti. Sihtgeeni praimerid on tabelis 1. qRT-PCR tuvastamine kasutab Roche 25 μL süsteemi, seisund oli 50 kraadi , 2 min; 95 kraadi , 10 min; 95 kraadi , 15 s; 60 kraadi , 60 s, kokku 40 tsüklit. GAPDH sisemise viitena ja oli meetod andmete töötlemiseks, kasutades 2-AACT-d (Qianru et al., 2021).

Statistiline analüüs

Kõik andmed arvutati tarkvara GraphPad Prism 5.{1}} abil, kasutades ühesuunalist dispersioonanalüüsi (ANOVA) Tukey mitmekordse võrdlustestiga. Erinevusi rühmade vahel peeti statistiliselt olulisteks P tasemetel<>

TULEMUSED

Tibude kehamassi ja maksakoefitsiendi muutus

Iga tibu kehamass registreeriti ja arvutati maksakoefitsient (maksakoefitsient =maksa kaal/kehakaal] × 100). Tulemused näitasid, et kehakaalu kasvutempo moriiniga ravitud rühmas (20 mg/kg, 80 mg/kg) oli oluliselt suurenenud võrreldes AFB1 rühmaga (joonis 2A), mis kinnitab, et moriinil on teatav mõju kehamassile. tibud. Kuid iga tibude rühma maksakoefitsient ei muutunud oluliselt (joonis 2B).

Morin vähendab märkimisväärselt ALT ja AST taset seerumis

ALT ja AST on maksakahjustuse näitajad. Andmed näitasid, et AFB1 tõstab oluliselt ALT ja AST taset, samas kui moriin näitas AFB1-ga võrreldes täiesti vastupidist suundumust (joonis 3A ja B), mis viitab esialgselt sellele, et moriinil on kasulik mõju AFB1-indutseeritud maksakahjustusele tibudel. .

Morin leevendab märkimisväärselt AFB{0}}tekitatud maksakahjustusi tibudel

Moriini mõju täiendavaks kinnitamiseks AFB{0}}põhjustatud maksakahjustusele viidi läbi histopatoloogiline uuring. Nagu on näidatud joonisel 4, põhjustas AFB1 ravi indutseeritud hepatotsüütide turse, killustumist ja põletikuliste rakkude infiltratsiooni maksas, kuid moriin (20, 40, 80 mg/kg) leevendas tõhusalt maksakoe kahjustusi, mis kinnitas veelgi, et moriinil on leevendav toime AFB1-indutseeritud maksakahjustusele tibudel.

Morin vähendab märkimisväärselt BUN ja CRE taset seerumis

BUN ja CRE kui olulised neerukahjustuse näitajad, leidsime, et AFB1 suurendas oluliselt BUN ja CRE taset võrreldes kontrollrühmaga, samas kui moriin näitas AFB1-ga võrreldes täiesti vastupidist suundumust (joonis 5A ja B), mis samuti viitab esialgselt sellele, et moriinil on kasulik mõju AFB1-põhjustanud neerukahjustusi tibudel.

Morin leevendab märkimisväärselt AFB{0}}indutseeritud neerukahjustust tibudel

Morini mõju täiendavaks kinnitamiseks AFB{0}}põhjustatud neerukahjustusele viidi läbi histopatoloogiline uuring. AFB1 ravirühma neerus ilmnes neerurakkude nekroos, koorimine ja vakuolisatsioon, samas kui moriiniga ravitud rühm leevendas koos moriini kontsentratsiooni suurenemisega (20, 40, 80 mg/kg) tõhusalt neerukoe kahjustust (joonis 6). ), mis kinnitas veelgi, et moriinil on leevendav toime AFB1-põhjustatud neerukahjustusele tibudel.

MorinVähendas märkimisväärselt AFB{0}}indutseeritud HET-ide taset seerumis

Moriini kaitsmise mehhanismi uurimiseks AFB{0}}indutseeritud koekahjustuse korral tuvastas Pico Green seerumis vabanenud HET-id. HET-i taseme tuvastamiseks koguti vereproovidseerum. Katsetulemus näitas, et AFB1 indutseeris märkimisväärselt HET-de teket seerumis, samas kui moriin inhibeeris oluliselt HET-de teket võrreldes AFB1 rühmaga (joonis 7). Seega kinnitasime esmalt, et moriin leevendas AFB1-põhjuses maksa- ja neerukahjustusi, pärssides HET-de vabanemist.

Morin leevendab märkimisväärselt AFB{0}}põhjustatud oksüdatiivset stressi tibudel

On teatatud, et oksüdatiivne stress on AFB1 toksiliste mõjude oluline mehhanism, tuvastati moriini funktsioon AFB1-põhjustatud oksüdatiivse stressi suhtes. Tulemus näitas, et AFB1 lisas märkimisväärselt tasetoksüdaasi MDA, vähendades samal ajal märkimisväärselt antioksüdantse ensüümi GSH-Px, SOD ja CAT taset. Kuid võrreldes AFB1-ga leevendas moriin tõhusalt oksüdaasi ja antioksüdantsete ensüümide vahelist tasakaalustamatust (joonis 8).

Moriini kaitsmise mehhanismi uurimiseks AFB{0}}indutseeritud koekahjustuse korral tuvastas Pico Green seerumis vabanenud HET-id. HET-i taseme tuvastamiseks koguti vereproovid

Morin inhibeeris märkimisväärselt AFB{0}}indutseeritud põletikuliste vahendajate ja põletikuliste faktorite mRNA taset maksas

Thepõletikulinereaktsioon on AFB1 toksiliste mõjude oluline mehhanism; uuriti moriini mõju AFB1-põhjustatud põletikulistele reaktsioonidele. Põletikuliste vahendajate COX-2 ja iNOS ning põletikuliste faktorite TNF- ekspressiooni tuvastamiseks kasutati qRT-PCR analüüsi. IL-1 . IL-6. Katsetulemused näitasid, et AFB1 parandas märkimisväärselt nende tsütokiinide ekspressioonitasemeid, samas kui moriin inhibeeris märkimisväärselt nende tsütokiinide ekspressiooni (joonis 9).

Morin inhibeeris oluliselt AFB1-indutseeris kaspaasi-1, kaspaasi-3 ja kaspaasi mRNA ekspressiooni-11

Samuti on teatatud, et kaspaasi signaalirada osaleb oksüdatiivse stressi ja põletikuliste reaktsioonide protsessis. ROS võib põhjustada mitokondriaalse membraani kahjustusi, põhjustades tsütokroom c väljavoolu ja aktiveerides kaspaasi signaaliraja. Seetõttu tuvastasime kaspaasi signaaliraja võtmetegurite mRNA ekspressiooni. Tulemus kinnitas, et AFB1 suurendas märkimisväärselt kaspaasi-1, kaspaasi-3 ja kaspaasi-11 mRNA ekspressiooni, samas kui moriin vähendas märkimisväärselt nende tegurite ekspressiooni (joonis 10).

ARUTELU

AFB1 on kõige toksilisem mükotoksiin, mis on aspergilloosi peamine põhjus. AFB1 toksilisuse, sealhulgas hepatotoksilisuse, neurotoksilisuse ja kantserogeensuse kohta on tehtud palju uuringuid. Maks kui peamine võõrutusorgan ja peamine ainete metabolismi transformatsioonikoht loomadel on äärmiselt haavatav AFB1 kahjustuste suhtes, mida vahendavad peamiselt 4 mehhanismi: tsütokroom P450 (CYP450) ensüümsüsteem, mitokondrid, immuunsüsteem ja vabad radikaalid. . Pärast AFB1 sisenemist kehasse imendub see seedetrakti kaksteistsõrmiksoolest ja siseneb portaalveeni kaudu maksa, kus see muudetakse hepatotsüütides I faasi metabolismi ensüümi CYP450 ensüümsüsteemis CYP1A2 ja CYP3A4 abil AFBO-ks (Yang et al. ..2013). Ülaltoodud protsess on kõige olulisem põhjus, miks AFB1 põhjustab kehahäireid ning tekitab toksilisust ja kantserogeenset toimet. AFB1 võib indutseerida ka hepatotsüütide apoptoosi, suurendades surmaretseptorite FAS ja TNFR1 ekspressiooni ning vähendades antiapoptootiliste retseptorite XIAP ja Bcl{18}} ekspressiooni (Mughal et al., 2017). Eelmistes katsetes. , oleme kinnitanud, et AFB1 võib tibudel põhjustada maksa- ja neerukahjustusi ning mehhanismi esialgselt selgitanud.

Morin on omamoodi looduslik flavonoid, millel on looduslik antioksüdantne struktuur. Oksüdatsioonil moodustunud kinoonil on tugev antioksüdantne toime, mis võib kaitsta rakumembraanil olevaid küllastumata rasvhappeid oksüdatsiooni eest (Xie et al, 2003). Uuringud on kinnitanud, et moriin võib mängida teatud kaitsvat rolli IFOS-i põhjustatud maksakahjustuste vastu hiirtel, pärssides oksüdatiivset stressi. põletik kui ka raku apoptoos (Ozdemir et al2020). Morin võib leevendada ka LPS-i põhjustatud mastiiti, inhibeerides PI3K / AKT, MAPK, NF-kB. ja NLRP3 signaalirajad (Jiang et al..2020). Moriini seonduv kaitsev toime AFB1-põhjustatud kahjustustele jääb aga teadmata. Seetõttu uuriti selles katses peamiselt moriini kaitsvat mõju AFB-le, mis põhjustas maksa- ja neerukahjustusi, ning selgitas selle mehhanismi.

Moriini annuse ja toime täpsema hindamise põhjal valiti intraperitoneaalne süst. Veelgi enam, moriini manustamisviis oli kooskõlas hiirte ja rottide omaga (Jiang et al..2020;

Khamchai jt, 2020). Esiteks uuriti AST, ALT, BUN ja CRE taset seerumis, et kinnitada, et AFB1 toksilisuse mudel loodi edukalt. AFB1 rühma maksa- ja neerukahjustuse indeksid suurenesid märkimisväärselt, samas kui moriinirühmad inhibeerisid märkimisväärselt nende ensüümide ekspressiooni, mis kinnitas esialgselt moriini rolli kaitsmisel AFB1-põhjustatud maksa- ja neerukahjustuste eest tibudel. Samal ajal leidsime, et kuigi rühmade vahel ei olnud märkimisväärset erinevust maksaindeksis, paranes kehakaalu kasvukiirus märgatavalt moriiniga ravirühmas (20 mg/kg, 80 mg/kg), mis kinnitab morin tibude kaalu kohta. Lisaks kinnitas histopatoloogiline uuring, et moriin leevendas tõhusalt AFB-d . Järgmisena uurisime moriini kaitsemehhanismi AFB1-põhjustab maksa- ja neerukahjustusi tibudel.

NETid kui kaasasündinud immuunsuse esimene kaitseliin, on organismi jaoks kahe teraga mõõk. Ühelt poolt mängib see olulist rolli organismi kaitses haigustekitajate eest. Teisest küljest põhjustab see koekahjustusi ja osaleb mõne haiguse, näiteks ateroskleroosi ja tromboosi tekkes (Moschonas ja Tselepis, 2019). Uuring kinnitas, et NET-idel ja histoonidel on veise rinnaepiteelirakkude (BMEC) vigastuses oluline roll ning liigsete NET-ide moodustumise pärssimine võib leevendada mastiidiga seotud vigastusi (Wei et al.2019a). Samuti oleme leidnud, et AFB1 võib põhjustada tibude maksa- ja neerukahjustusi, indutseerides HET-ide vabanemist. Kas moriini kaitsev toime AFB1-le tibudel tekitatud vigastustele on seotud HET-idega, on samuti meie katse oluline eesmärk. HET-id toimivad kana elutähtsate kaasasündinud immuunvastustena ja parim aeg HET-ide tuvastamiseks seerumis on 24 tunni jooksul, seega valiti uuringu ajastus. Leiti, et moriin vähendas märkimisväärselt HET-ide moodustumist seerumis ja esmalt kinnitati, et moriin leevendas AFB{7}}vigastusi tibudel, pärssides HET vabanemist.

Organismi normaalses ainevahetusprotsessis on redoks dünaamilises tasakaalus, kuid kui reaktiivsete hapnikuliikide (ROS) tootmine organismis ületab antioksüdantide koguse, tekib oksüdatiivne stress. Oksüdatiivne stress on seotud paljude maksahaigustega, nagu maksa fibroproliferatiivne haigus, alkohoolne maksahaigus ja mittealkohoolne rasvmaksahaigus (Cichoz-Lach ja Michalak, 2014). MDA on ROS-i poolt toodetud lipiidide peroksüdatsiooni lõppsaadus ja võib sõltumatult kajastada membraanisüsteemi kahjustuse astet ja vabade radikaalide rünnaku astet rakkudele, seega peetakse seda heaks markeriks oksüdatiivse stressi hindamisel (Wang et al. , 2019). SOD on spetsiifiline antioksüdantne ensüüm, mis eemaldab superoksiidi aniooni ROS-i vabadest radikaalidest, mis kaudselt näevad organismi võimet eemaldada hapnikuvabu radikaale, ja millel on maksakahjustuse uurimisel äärmiselt oluline funktsioon (Zhang et al.. 2018) . GSH-Px on oluline näitaja rakkude redoksseisundi mõõtmiseks, mis võib neutraliseerida hapnikuradikaalide toksilisust, varustades otse H plussiga ja vähendades

maksa oksüdatiivne kahjustus. CAT eksisteerib loomade erinevates kudedes, eriti suurtes kontsentratsioonides maksas, mis võib vesinikperoksiidi tõhusalt lagundada süsinikdioksiidiks ja veeks, et kaitsta rakke oksüdatiivsete kahjustuste eest (Alfonso-Prieto et al., 2009). Tulemus näitas, et AFB1 vähendas märkimisväärselt antioksüdantsete ensüümide GSH-Px, SOD ja CAT taset ning suurendas ka antioksüdantsete ensüümide MDA taset, samas kui moriini rühm näitas vastupidist suundumust, leevendades tõhusalt oksüdaasi ja antioksüdantsete ensüümide vahelist tasakaalustamatust, mis näitab et moriin võib tõhusalt pärssida AFB1-põhjustatud oksüdatiivset stressi.

On teatatud, et ROS võib põhjustada põletikuliste tsütokiinide ekspressiooni ning tuumafaktori kappa B (NF-xB) ja mitogeen-aktiveeritud proteiinkinaasi (MAPK) radade aktiveerimist (Li et al. 2014). NF-xB valk moodustab tavaliselt p65-st ja p50-st homo/heterodimeerid ning on tsütoplasmas inaktiivses olekus, kuna moodustub trimeerikompleks inhibeeriva valguga IkB (Pantano et al., 2006). Pärast patogeeni poolt stimuleerimist eraldatakse IkB trimeerist ja NF-kB dimeer puutub kokku tuuma lokaliseerimise järjestustega (NLS), mis sisenevad kiiresti tsütoplasmast tuuma ja seonduvad tuuma DNA spetsiifiliste järjestustega, soodustades seotud geenide transkriptsioon (Zhang ja Ghosh, 2001). TNF- on kõige olulisem põletikku soodustav tsütokiin, mis osaleb NF-B aktiveerimises, indutseerides IL-18, IL-6, COX ekspressiooni -2, iNOS ja muud allavoolu põletikulised vahendajad (Rajendran et al 2018). Meie tulemused näitasid, et AFB1 soodustas märkimisväärselt põletikuliste faktorite TNF-, IL-1, IL-6 ja põletikuliste vahendajate COX-2 ja iNOS mRNA ekspressiooni, kuid moriini rühm inhibeeris ekspressiooni oluliselt. nendest teguritest, mis näitab, et moriin võib tõhusalt pärssida AFB{21}}indutseeritud põletikulist vastust tibudel.

Uuringud on näidanud, et oksüdatiivne stress on üks apoptoosi indutseerivatest teguritest (Chandra et al., 2000) ja paljud apoptoosi indutseerivad ained on üldiselt raku oksüdatiivse metabolismi oksüdeerijad või stiimulid. NF-kB aktiveerimine võib juhtida proapoptootiliste faktorite geenide transkriptsiooni või pärssida apoptootiliste valkude ekspressiooni. Samal ajal on kaspaasi signaalirada ja põletikuline reaktsioon paralleelsed. Kaspaas-1 mängib olulist rolli Il-1 sekretsioonis ja kaspaas-11 on inimese põletikulise kaspaasi-4 ja pereliikmete kaspaasi-4 kaspaasi{{9} homoloogia }} (Van Opdenbosch ja Lamkanfi, 2019). Kinnitasime, et AFB1 suurendab märkimisväärselt kaspaasi-1, kaspaasi-3 ja kaspaasi-11 ekspressiooni, samas kui moriin vähendas oluliselt nende tegurite ekspressiooni, kinnitades, et moriin võib tõhusalt pärssida AFB1-indutseeritud kaspaasi signaalirada tibudel.

Ülaltoodud tulemuste põhjal kinnitasime, et moriin võib tõhusalt leevendada AFB{0}}põhjustatud maksa- ja neerukahjustusi tibudel, mis võib olla moriini praktiliseks rakendamiseks eksperimentaalse aluse ja teoreetilise viiteallikaks. Järgmises uurimistöös tuleks valida moriiniga söötmisrežiim, näiteks joogivesi ning moriini mõju kinnitamiseks linnukasvatuses on vaja rohkem tibusid ja vanemaid kanu.

KOKKUVÕTE

Moriini kui looduslikku ühendit, mida tavaliselt leidub Hiina taimsetes ravimites ja toidulisandites, on põhjalikult uuritud ja selle ohutus on kinnitatud ning selle tulemused on rahuldavad. Meie katsed näitasid veel, et moriin võib tõhusalt leevendada AFB{0}}põhjustatud maksa- ja neerukahjustusi, pärssides HET-ide vabanemist, oksüdatiivset stressi ja põletikulist reaktsiooni. Seetõttu näitab see uuring, et moriinil on söödalisandina potentsiaal kaitsta kodulindude maksa ja neerusid, vältida kahjulike ainete sisaldust söödas ja parandada kodulindude jõudlust.