Cistanche Tubulosa monoterpeeni koostisosad – kankanosiidide A–E ja kankanooli keemilised struktuurid –

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

Haihui XIE, Toshio MORIKAWA, Hisashi MATSUDA, Seikou NAKAMURA, Osamu MURAOKA ja Masayuki YOSHIKAWA

Abstraktne

Eraldati neli uut iridoidglükosiidi, kankanosiidid A (1), B (2), C (3) ja D (4), klooritud iridoid kankanool (5) ja atsükliline monoterpeenglükosiid kankanosiid E (6). Cistanche tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) kuivatatud varte metanooliekstraktist koos 16 teadaoleva ühendiga. Nende uute ühendite (1–6) struktuurid määrati keemiliste ja füüsikalis-keemiliste tõendite põhjal.

Võtmesõnad:Cistanche tubulosa; kankanosiid; kankanool; iridoid; monoterpeen; Orobanchaceae

Cistanche tubulosa(SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae)on mitmeaastane parasiitaim, mis kasvab Salvadora või Calotropis liikide juurtel ja on levinud Põhja-Aafrikas, Araabias ja Aasia riikides.1) Selle taime (jaapani keeles Kanka-nikujuyou) varsi on traditsiooniliselt kasutatud impotentsuse ja steriilsuse raviks. , lumbago ja keha nõrkus.2) Varem eraldati Hiina ja Pakistani C. tubulosast mitu iridoide, monoterpenoidi, fenüületanoide ja lignaane. 1,3–7) Hiina looduslike ravimite bioaktiivsete koostisosade seeriauuringute käigus,8–18) neli uut iridoidglükosiidi, kankanosiidid A (1), B (2), C (3) ja D (4). ), eraldati selle taimse ravimi metanooliekstraktist klooritud iridoid kankanool (5) ja atsükliline monoterpeenglükosiid kankanosiid E (6) koos 16 teadaoleva ühendiga, sealhulgas 12 monoterpeeniga (7–18). See artikkel käsitleb uute monoterpeeni koostisosade (1-6) eraldamist ja struktuuri selgitamist.

Cistanche tubulosa

Metanooli ekstrakt kuivatatud vartestCistanche tubulosa(26,8 protsenti sellest taimsest ravimist) viidi läbi normaalfaasi ja pöördfaasilise silikageeli kolonnkromatograafia ja korduv HPLC, et saada kankanosiidid A (1, 0.0{{10 }}54 protsenti ), B(2, 0.030 protsenti ), C (3, 0.00 27 protsenti ) ja D (4, {{40}.0015 protsenti ), kankanool (5, 0.0{ {66}}34 protsenti ) ja kankanosiid E (6, 0.027 protsenti ) koos mussaenosiidhappega19) (7, 0.020 protsenti ) , geniposidhape19) (8, 0,030 protsenti), 8-epilogaanhape7) (9, 0,033 protsenti), glurosiid19) (10, 0,14 protsenti), antirrhiid20) (11, 0,0079 protsenti), ajugol19) (12, 01,03 protsenti). protsenti), bartsiosiid19) (13, 0,21 protsenti), 6-desoksükatalpol19) (14, 0,11 protsenti), argyool21) (15, 0,0030 protsenti), tsistaniin22,23) (16, 0,0040 protsenti), cis (takloriin22) 17, 0,0035 protsenti ), (2E,6Z)-8-bD-glükopüranosüüloksü-2, 6-dimetüül-2, 6-oktadieenhape24) (18, 0,0028 protsenti ), D-mannitool25) (4,19 p ercent ), uridiin25) (0,0069 protsenti), (3R)-3-hüdroksü-2- pürrolidinoon26,27) (0,0020 protsenti) ja (3R)-3-hüdroksü-1-metüül{ {97}}pürrolidinoon27) (0,0059 protsenti).

Kankanosiid A (1) struktuur Kankanosiid A (1) saadi amorfse pulbrina ja sellel oli negatiivne optiline rotatsioon ([a]D 25 107,4 kraadi MeOH-s). IR-spekter 1 näitas neeldumisriba 1647 cm 1 juures, mis on omistatav olefiini funktsioonile, lisaks tugevatele neeldumisribadele 3410 ja 1076 cm 1 juures, mis viitavad glükosiidfragmendile. Positiivse ja negatiivse iooniga kiire aatomiga pommitamise (FAB)-MS puhul täheldati kvasimolekulaarsete ioonide piike m/z 369 (M Na) ja 345 (MH) juures ning kõrge eraldusvõimega FAB-MS analüüs näitas molekulaarset. valem 1 on C16H26O8. Ühendi 1 happeline hüdrolüüs 1,0 M vesinikkloriidhappega (HCl) vabastas D-glükoosi, mis tuvastati HPLC analüüsiga, kasutades optilist pöörlemisdetektorit.8,10-12,15-18) 1H- (CD3OD, tabel 1) ja 13C-NMR (tabel 2) spektrid 1, mis määrati erinevate NMR-katsetega,28) näitasid kahele metüülile omistatavaid signaale [d 1,31 (s, 10-H3), 1,51 (br s, {{47}). }H3)], kaks metüleeni [d 1,49, 2,02 (mõlemad m, 6a- ja 6b-H), 1,64, 1,67 (mõlemad m, 7b- ja 7a-H)], kaks metiini [d 2,21 (dd, J 2,7) , 9,5 Hz, 9-H), 2,71 (m, 5-H)] ja a,b-küllastumata atsetaalrühm [d 5,33 (d, J 2,7 Hz, 1-H) ), 5,95 (br s, 3-H)] koos b-glükopüranosüülrühmaga [d 4,62 (d, J=7,9 Hz, 1 -H)]. Nagu on näidatud joonisel 1, näitas 1 H-1H korrelatsioonispektroskoopia (1 H-1 H COSY) katse 1-l rasvaste joontega kirjutatud osaliste struktuuride olemasolu. Heterotuumaliste mitmiksidemete korrelatsioonide (HMBC) katses 1-l täheldati kaugkorrelatsioone järgmiste prootonite ja süsiniku vahel (3-H, 1 -H ja 1-C; 11- H3 ja 3-C; 3-H, 5-H, 6-H2, 9-H, 11-H3 ja 4- C ; 11-H3 ja 5-C; 10-H3 ja 7-C; 1-H, 7-H2, 9-H, 10-H3 ja 8-C; 10-H3 ja 9-C; 7-H2 ja 10-C), nagu on näidatud joonisel 1. Ühendi 1 ensümaatiline hüdrolüüs b-glükosidaasiga andis aglükooni, kankageniin a (1a), nagu on näidatud joonisel 3. 13C NMR spektri võrdlus ühendi 1a spektritega näitas glükosüülimise nihet positsioonis 1 1- positsiooni ümber. [1: dC 94,1 (1-C), 134,6 (3-C), 53,3 (9-C); 1a: dC 92,9 (1-C), 135,3 (3-C), 54,7 (9-C)]. Seega selgitati, et punktis 1 oleva bD-glükopüranosüülrühma ühenduvus on 1a 1-asendis. Järgmisena iseloomustati 1 suhtelist stereostruktuuri tuuma Overhauseri võimendusspektroskoopia (NOESY) katsega, mis näitas NOE korrelatsioone järgmiste prootonpaaride vahel (1-H ja 10-H3; 3-H ja 11-H3; 5-H ja 6b-H, 9-H; 6b-H ja 7b-H; 7a-H ja 10-H3; 7b-H ja {{ 190}}H), nagu on näidatud joonisel 2. Lõpuks määrati 1-asendi 1 absoluutne konfiguratsioon 1,1-disahhariidi 13C NMR glükosüülimise nihkereegliga29), mis leiti. kasutada poolatsetaaliühendite puhul.30,31) 1H-NMR analüüsi, sealhulgas NOESY katsega võrreldes kinnitati, et 1. positsiooni stereostruktuur püsis punktis 1a. Leiti, et glükosüülimise nihke väärtused [Dd 1,2 ppm (1 -C) ja 0,9 ppm (1- C), püridiin-d5] on iseloomulikud R, Rhemiatsetaali kombinatsioonile, mis vastas 1 absoluutsele stereostruktuurile. nagu on näidatud joonisel 3. Järelikult määrati absoluutne konfiguratsioon 1-asendis 1 S-konfiguratsiooniks ja 1. absoluutne stereostruktuur selgitati välja nagu näidatud.

Kankanosiidide B (2) ja C (3) struktuurid Kankanosiid B (2) eraldati samuti negatiivse optilise rotatsiooniga amorfse pulbrina ([a]D 26 118,7 kraadi MeOH-s). IR-spekter 2 näitas neeldumisribasid 3410, 1647 ja 1{{5{{80}}}85 cm 1 juures, mis on omistatavad hüdroksüül-, olefiini- ja eetrifunktsioonidele. Molekulaarvalem C15H24O10 2 määrati kvasimolekulaarsete ioonide piikide järgi positiivsetes ioonides FAB-MS ja kõrge eraldusvõimega FAB-MS. Ühendi 2 happeline hüdrolüüs 1,0 M HCl-ga vabastas D-glükoosi, mis identifitseeriti HPLC analüüsiga, kasutades optilist rotatsioonidetektorit.8,10-12,15-18)1H- (CD3OD, tabel 1) ja13C-NMR ( Tabel 2) spektrid 28) 2-st näitasid signaale, mis olid omistatavad kahele metüleenile [d 1,40 (DDD, J 5,2, 7,3, 13,5 Hz, 6a-H), 2,52 (DDD, J 7,0, 9,2, 13,5 Hz, 6b-H), . , 3,99 (mõlemad d, J 11,9 Hz, 10-H2)], neli metiini [d 2,21 (dd, J 6,4, 8,6 Hz, 9-H), 2,83 (m, 5- H), 4,02 (dd, J 5,2, 7,0 Hz, 7-H), 5,49 (d, J 6,4 Hz, 1-H)] ja tsisolefiinide paar [d 4,95 (dd, J 4,0) , 6,1 Hz, 4-H), 6,22 (dd, J 1,8, 6,1 Hz, 3-H)] koos b-glükopüranosüüli fragmendiga [d 4,72 (d, J 7,9 Hz, 1 - H)]. Prootoni ja süsiniku signaalid 1 H- ja 13C-NMR andmetes 2 olid sarnased 6-desoksükatalpooli (14) omadega, välja arvatud signaalid, mis tulenevad 7- ja 8- positsioonid. Nagu on näidatud joonisel 1, näitas 1 H–1 H COZY katse numbril 2 rasvaste joontega kirjutatud osaliste struktuuride olemasolu ja HMBC katses täheldati kaugkorrelatsioone järgmiste prootoni- ja süsinikupaaride vahel ({{ 122}}H, 1 -H ja 1-C; 1-H ja 3-C; 10-H2 ja 7- C; 1-H , 7-H, 9-H, 10-H2 ja 8-C; 7-H, 10-H2 ja 9-C ; 7-H ja 10-C). 2 suhtelist stereostruktuuri iseloomustas NOESY eksperiment, mis näitas NOE korrelatsioone järgmiste prootonpaaride vahel (1-H ja 10-H2; 3- H ja 4-H; 5-H ja 6b-H, 9-H; 6b-H ja 7-H; 7-H ja 9-H), nagu on näidatud joonisel 2. Lõpuks saadi ühendi 14 aluseline töötlemine 5-protsendilise kaaliumhüdroksiidi (KOH) vesilahusega 2 ja 19, 32), nii et ühendi 2 stereostruktuur oli selge.

Kankanosiid C (3) eraldati amorfse pulbrina, millel oli negatiivne optiline rotatsioon ([a]D 26 ± 34.0 kraadi MeOH-s). Negatiivse iooniga FAB-MS-is 3 täheldati isotoobi kvasimolekulaarsete ioonide piikide paari m/z 399 ja 401 (MH) juures. Molekulaarvalemiks 3 määrati kõrge eraldusvõimega FAB-MS mõõtmisega C15H25ClO1{87}}. Ühendi 3 happeline hüdrolüüs 1,0 M HCl-ga vabastas D-glükoosi, mis tuvastati HPLC analüüsiga, kasutades optilist rotatsioonidetektorit.8,10-12,15-18)1H- (CD3OD, tabel 1) ja13C-NMR ( Tabel 2) spektrid 28) 3-st näitasid kolmele metüleenile omistatavaid signaale [d 1,70 (br dd, J umbes 3, 13 Hz, 4a-H), 2,70 (br dd, J umbes 6, 13 Hz, 4b-H) , 1,68 (br d, J ca 13 Hz, 6a H), 2,44 (m, 6b-H), 4,01, 4,04 (mõlemad d, J 11,3 Hz, 10-H2)], viis metiini [d 2,47 (dd, J 2,5, 7,9 Hz, 9-H), 2,61 (m, 5- H), 3,94 (br s, 7-H), 5,10 (br d, J ca. 3 Hz, 3-H), 5,48 (d, J=2,5 Hz, 1-H)] ja b-glükopüranosüülosa [d 4,60 (d, J=8,0 Hz, 1 -H)]. Prootoni- ja süsinikusignaalid 1H- ja 13C-NMR-spektris 3 olid kattuvad 2-ga, välja arvatud 3- ja 4- positsioonidest tingitud signaalid. BD-glükopüranosüüli ja kloori funktsiooni positsioonid punktis 3 selgitati H-H COZY ja HMBC katsetest, nagu on näidatud joonisel 1. Järelikult konstrueeriti 3. tasapinnaline struktuur selliseks, nagu näidatud. 3 suhteline stereostruktuur määrati NOESY katsega, milles täheldati NOE korrelatsioone järgmiste prootonpaaride vahel (1-H ja 3-H, 10-H2; 3- H ja 4a-H; 4b-H ja 5- H; 5-H ja 6b-H, 9-H; 6b-H ja 7-H; {{121} }H ja 9-H), nagu on näidatud joonisel 2.

Kankanosiid D (4) ja kankanooli (5) struktuurid Kankanosiid D (4) eraldati amorfse pulbrina negatiivse optilise rotatsiooniga ([a]D 25 30,6 kraadi MeOH-s). IR-spekter 4 näitas neeldumisriba 1655 cm 1 juures, mis on tingitud olefiini funktsioonist, ja tugevaid absorptsiooniribasid 3410 ja 1078 cm 1 juures, mis viitab selle glükosiidstruktuurile. Positiivse iooniga FAB-MS-is 4 täheldati kvasimolekulaarse iooni piiki m/z 341 (M Na) juures. Molekulaarvalem C15H26O7 4 määrati kõrge eraldusvõimega FAB-MS mõõtmisega. Ühendi 4 happeline hüdrolüüs 1,0 M HCl-ga vabastas D-glükoosi,8,10-12,15-18), samas kui (R)-rotundity (4a) 33,34) saadi ühendi 4 ensümaatilise hüdrolüüsiga b-glükosidaasiga. 1H-NMR (tabel 3, CD3OD) ja 13C-NMR (tabel 4) spektrid28) 4 näitasid signaale, mis on omistatavad metüülile [d 1,69 (s, 10-H3)], kolmele metüleenile [d 1,41, 2,06 (mõlemad m, 4-H2), 1,51, 2,01 (mõlemad m, 6a- ja 6b-H), 2,23 (br dd, J umbes 8, 15 Hz, 7a-H), 2,37 (br dd , J umbes 8, 15 Hz, 7b-H)], metiin [d 2,90 (m, 5-H)] ja kaks metüleeni, mis kannavad hapniku funktsiooni {d [3,56 (DDD, J 2,8, 7,4) , 13,2 Hz), 3,97 (DDD, J 4,9, 8,0, 13,2 Hz), 3-H2], 4,04, 4,18 (mõlemad d, J 12,2 Hz, 1-H2)} koos b-ga glükopüranosüüli osa [d 4,25 (d, J 7,7 Hz, 1 -H)]. BD-glükopüranosüüli osa asukohta 4-s selgitati HMBC katsega 3-positsiooniks (joonis 1). Nende tõendite põhjal tehti kindlaks, et 4 absoluutne stereostruktuur on selline, nagu näidatud.

Kankanool (5) saadi positiivse optilise pöördega amorfse pulbrina ([a]D25 11,1 kraadi). Keemiline ionisatsioon (CI)-MS 5 näitas kvasimolekulaarse iooni (MH) tõttu m/z 221 ja 223 juures paari isotoobiiooni piike. Kõrge eraldusvõimega CI-MS mõõtmine 5 näitas, et molekulaarvalem on C9H13ClO4. 'H-NMR (tabel 1, CD3OD) ja 13C-NMR (tabel 2) spektrid28) 5 näitasid järgmiste funktsioonide olemasolu: kolm metüleen [d 1,60 (DDD, J 2,5, 5,5, 13,1) Hz, 4a-H), 1,80 (br dd, J ca 3, 13 Hz, 4b H), 1,83 (br d, J ca 12 Hz, 6a-H), 2,57 (m, 6b-H), 3,75 , 3,88 (mõlemad d, J 9,2 Hz, 10-H2)], viis metiini [d 2,76 (dd, J 4,3, 8,0 Hz, 9-H), 2,50 (m, 5- H), 3,80 (br s, 7-H), 5,17 (br d, J umbes 3 Hz, 3-H), 5,26 (d, J=4,3 Hz, 1-H) ]. 5 tasapinnalist struktuuri kinnitasid 1 H–1 H COZY ja HMBC katsed. See tähendab, et 1 H–1 H COZY katse numbril 5 näitas paksus joones kirjutatud osastruktuuride olemasolu ja HMBC katses täheldati pikamaakorrelatsioone, nagu on näidatud joonisel 1. 5 suhteline stereostruktuur oli määrati NOESY katsega, milles täheldati NOE korrelatsioone järgmiste prootonipaaride vahel (1-H ja 9-H; 3-H ja 4a-H; 4b-H ja {{ 93}} H; 5-H ja 6b-H, 9-H; 6b-H ja 7-H; 7-H ja 9-H), nagu näidatud 2. Võrreldes 1H- ja 13C-NMR andmeid ühendi 5 kohta 14a andmetega, mis saadi ühendi 14 töötlemisel 5% HCl vesilahusega, nagu on näidatud joonisel 1, 35) kloori asukoht. 5. rühma toetati 3-positsioonil. Lisaks saadi ühendi 5 atsetüülimisel atseetanhüdriidi (Ac2O) ja püridiiniga 3,{119}}oksiid (5a), samas kui 14a andis diatsetaadi (14b) samades atsetüülimistingimustes. Need tõendid ajendasid meid ka kinnitama, et kloorifunktsiooni asukoht on 3b-positsioon (diagramm 3). Järelikult määrati 5 stereostruktuur selliseks, nagu näidatud.

Kankanosiid E (6) struktuur Kankanosiid E (6) eraldati amorfse pulbrina negatiivse optilise rotatsiooniga ([a]D 25 20.0 kraadi MeOH-s). IR-spekter 6 näitas neeldumisribasid lainepikkustel 3410, 1647, 1085 cm1, mis on omistatavad glükosiid- ja karbonüülfunktsioonidele, samas kui selle UV-spekter näitas neeldumise maksimumi 211 nm juures (log e 4,63), mis näitab karboksüül-b-küllastumata happe olemasolu. Molekulaarset valemit C16H28O8 6 iseloomustas positiivsete ja negatiivsete ioonide FAB-MS ja kõrge eraldusvõimega MS mõõtmine. 6 vabanenud D-glükoosi,8,10-12,15-18), samas kui (2E,6R)-8-hüdroksü-2,6-dimetüül- 2-oktaanhappe hüdrolüüs (6a) 36) saadi ühendi 6 ensümaatilise hüdrolüüsi teel b-glükosidaasiga. 1H-NMR (tabel 3, CD3OD) ja 13C-NMR (tabel 4) spektrid28) 6 näitasid (2E,6R)-8-hüdroksü-2,6- dimetüül-2-oktaanhappe fragment [d 0,95 (d, J 6,4 Hz, 10-H3), 1,30, 1,48 (mõlemad m, 5-H2), 1,45, 1,70 (mõlemad m, { {70}}H2), 1,65 (m, 6-H), 1,81 (s, 9-H3), 2,22 (2H, m, 4-H2), 3,61, 3,94 (mõlemad m, 8-H2), 6,78 (dd, J=1,2, 7,3 Hz, 3-H)] koos bD-glükopüranosüüli osaga [d 4,26 (d, J=7,6 Hz, 1 -H)] . Võrreldes süsiniku signaale 13C-NMR spektris 6 ja 6a, täheldati glükosüülimise nihet umbes 8-asendis 6. Glükosiidsideme asukohta kinnitasid ka HMBC katsed, nagu on näidatud Joonis 1. Järelikult selgus, et ühendi 6 absoluutne stereostruktuur on (2E,6R)-8-b-D-glükopüranosüüloksü-2,6-dimetüül-2-oktaanhape.

cistanche ekstrakti kasu

Eksperimentaalne

Füüsiliste andmete saamiseks kasutati järgmisi instrumente: spetsiifilised pöörded, Horiba SEPA-300 digitaalne polarimeeter (l 5 cm); UV-spektrid, Shimadzu UV-1600 spektromeeter; IR-spektrid, Shimadzu FTIR-8100 spektromeeter; EI-MS, CI-MS ja kõrge eraldusvõimega CI-MS, JEOL JMS-GCMATE massispektromeeter; FAB-MS ja kõrglahutusega MS, JEOL JMS-SX 102A massispektromeeter; 'H-NMR spekter, JEOL EX-270 (270 MHz) ja JNM-LA500 (500 MHz) spektromeetrid; 13C-NMR spektrid, JEOL EX-270 (68 MHz) ja JNM-LA500 (125 MHz) spektromeetrid sisestandardina tetrametüülsilaaniga; ja HPLC detektor, Shimadzu RID-6A murdumisnäitaja ja SPD- 10Avp UV-VIS detektorid. Analüütilistel ja ettevalmistavatel eesmärkidel kasutati vastavalt HPLC kolonni, YMC-Pack ODS-A (250 x 4,6 mm id) ja (250 x 20 mm id) kolonne.

Kromatograafias kasutati järgmisi katsetingimusi: tavalise faasi silikageeli kolonnkromatograafia, silikageeli BW-200 (Fuji Silysia Chemical, Ltd., Aichi, Jaapan, 15{{10}}—35 0 võrk); pöördfaasiline silikageeli kolonnkromatograafia, Chromatorex ODS DM1020T (Fuji Silysia Chemical, Ltd., Aichi, Jaapan, 100-200 mešši); TLC, eelnevalt kaetud TLC plaadid silikageeliga 60F254 (Merck, 0,25 mm) (tavaline faas) ja silikageeliga RP- 18 F254S (Merck, 0,25 mm) (pöördfaas); pöördfaasi HPTLC, eelnevalt kaetud TLC plaadid silikageeliga RP-18 WF254S (Merck, 0,25 mm); ja tuvastamine saavutati pihustamisega 1% Ce(SO4)2–10% H2SO4 vesilahusega, millele järgnes kuumutamine.

Taimne materjal

Cistanche tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT kuivatatud varred osteti 2005. aasta jaanuaris Hiinast Urumqist Xinjiangi provintsis Jaapanist Eishin Trading Co., Ltd. kaudu ja botaanilise identifitseerimise viis läbi professor Jia Xiaoguang Xinjiangi traditsioonilise hiina instituudis. ja etnoloogilised ravimid. Selle taime vautšeri näidis (2005.01. Xinjiang-01) on meie laboris.

Ekstraheerimine ja isoleerimine

C. tubulosa kuivatatud varred (50 kg) pulbristati ja ekstraheeriti kolm korda metanooliga tagasijooksul 3 tundi. Lahusti aurustamine alandatud rõhul andis metanooliekstrakti (1340 g, 26,8 protsenti sellest taimsest ravimist). Metanooliekstrakt (16{71}} g) allutati normaalfaasi silikageelkolonnkromatograafiale [3,2 kg, CHCl3-MeOH-H2O (10 : 3 : 1 → 7 : 3 : 1, madalam kiht → 6:4:1)MeOH], et saada kuus fraktsiooni [Fr. 1 (5.{85}}4 g), Fr. 2 (9,84 g), Fr. 3 (7,80 g), Fr. 4 (13,28 g), Fr. 5 (113,6{{104}} g) ja Fr. 6 (7,61 g)]. Fraktsioon 1 (5.{41}} g) eraldati pöördfaasilise silikageeli kolonnkromatograafiaga [150 g, MeOH-H2O (40 6: 60→ 5{{ 162}} : 50→60 : 40, v/v)→MeOH], et saada viis fraktsiooni [Fr. {{50}} (83{{201}} mg), Fr. 1-2 (590 mg), Fr. 1-3 (180 mg), Fr. 1-4 (124 mg) ja Fr. 1-5 (3200 mg)]. Fr. {{60}} (830 mg) eraldati täiendavalt HPLC-ga [MeOH-H2O (10: 90, maht/maht)], saades kankanooli (5, 20). mg, 0,0034 protsenti, argyool (15, 18 mg, 0,0030 protsenti), tsistaniin (16, 24 mg, 0,0040 protsenti) ja Fr. 1-1-2 (62 mg), mis eraldati täiendavalt HPLC [MeOH-H2O (2:98, maht/maht)] abil, et saada (3R)-3-hüdroksü-2-pürrolidinoon (0,0020 protsenti). ) ja (3R)-3-hüdroksü-1-metüül-2-pürrolidinoon (0,0059 protsenti). Fr. 1-2 (590 mg) puhastati HPLC [MeOH-H2O (35:65, maht/maht) ja CH3CN-H2O (20:80, maht/maht)] abil, saades tsistankloriin (17, 21 mg, 0,0035). protsenti). Fraktsiooni 2 (9,72 g) töödeldi pöördfaasilise silikageeli kolonnkromatograafiaga [290 g, MeOH-H2O (20 : 80 → 30 : 70 → 40 : 60 → 60 : 40, v/v) → MeOH]. seitse murdosa [Fr. 2-1 (1986 mg), Fr. 2-2 (1563 mg), Fr. 2-3 (3931 mg), Fr. 2-4 (375 mg), Fr. 2-5 (486 mg), Fr. 2-6 (460 mg) ja Fr. 2-7 (336 mg)]. Fr. 2-1 (466 mg) eraldati HPLC [MeOH-H2O (5:95, maht/maht)] abil, saades uridiini (0,0069 protsenti). Fr. 2-2 (535 mg) eraldati HPLC [MeOH-H2O (10:90, maht/maht)] abil, saades antirriidi (11, 15 mg, 0,0079 protsenti) ja 6-desoksükatalpooli (14, 214). mg, 0,11 protsenti). Fr. 2-3 (535 mg) eraldati HPLC [MeOH-H2O (20:80, maht/maht)] abil, saades glurosiidi (10, 110 mg, 0,14 protsenti) ja bartsiosiidi (13, 164 mg, 0,21 protsenti) . Fr. 2-4 (375 mg) eraldati HPLC [MeOH-H2O (30 : 70, maht/maht)] abil, saades kankanosiidid A (1, 32 mg, 0,0054 protsenti) ja D (4, 9 mg, 0,0015 protsenti). ). Fr. 2-6 (460 mg) eraldati veel HPLC [MeOH-H2O (45 : 55, maht/maht)] abil, saades kankanosiidi E (6, 161 mg, 0,027 protsenti) ja (2E,6Z){{192 }}bD-glükopüranosüüloksü-2, 6-dimetüül-2, 6-oktadieenhape (18, 17 mg, 0,0028 protsenti). Fraktsiooni 3 (7,60 g) töödeldi pöördfaasilise silikageeli kolonnkromatograafiaga [230 g, MeOH-H2O (20 : 80 → 40 : 60 → 50 : 50 → 60 : 40, v/v) → MeOH]. viis murdosa [Fr. 3-1 (2652 mg), Fr. 3-2 (593 mg), Fr. 3-3 (3610 mg), Fr. 3-4 (190 mg) ja Fr. 3-5 (336 mg)]. Fr. 3-1 (480 mg) puhastati HPLC-ga [MeOH-H2O (10:90, maht/maht)], et saada kankanosiid B (2, 19 mg, 0,018 protsenti), geniposidhape (8, 32 mg, 0,030). protsenti ) ja ajugooli (12, 12 mg, 0,011 protsenti). Fraktsioon 4 (13,10 g) allutati pöördfaasilises silikageelikolonnkromatograafias [390 g, MeOH-H2O (10:90→20:80→30:70→40:60→50:50, maht/maht) → MeOH], et saada seitse fraktsiooni [Fr. 4-1 (6114 mg), Fr. 4-2 (430 mg), Fr. 4-3 (1058 mg), Fr. 4-4 (170 mg), Fr. 4-5 (2595 mg), Fr. 4-6 (1635 mg) ja Fr. 4-7 (1064 mg)]. Fr. 4-2 (430 mg) eraldati veel HPLC [MeOH-H2O (5:95, maht/maht)] abil, et saada 2 (70 mg, 0,012 protsenti) ja kankanosiid C (3, 16 mg, 0,0027 protsenti). . Fr. 4-6 (1058 mg) eraldati samuti HPLC [MeOH-H2O (15:85, maht/maht)] abil, et saada mussaenosiidhape (7, 116 mg, 0,020 protsenti) ja 8-epilogaanhape. (9, 193 mg, 0,033 protsenti). Fraktsiooni 5 (15,15 g) töödeldi pöördfaasilise silikageeli kolonnkromatograafiaga [455 g, MeOH-H2O (0 : 100 → 10 : 90 → 20 : 80 → 40 : 60 → 50 : 50, maht/maht) → MeOH ] anda seitse murdosa [Fr. 5-1 (9311 mg), Fr. 5-2 (1114 mg), Fr. 5-3 (306 mg), Fr. 5-4 (347 mg), Fr. 5-5 (1620 mg), Fr. 5-6 (1453 mg) ja Fr. 5-7 (1106 mg)]. Fr. 5-1 (9311 mg) kristalliti MeOH-st, saades D-mannitooli (3337 mg, 4,19 protsenti).

Tuntud ühendid (7-18) identifitseeriti nende füüsikaliste andmete ([a]D, IR,1H-NMR, 13C-NMR, MS) võrdlemise teel esitatud väärtustega 1,7,19-24,26,27) või kaubanduslike proovide omad.25) Kankanosiid A (1): amorfne pulber, [a]D 25 107,4 kraadi (c 1,50, MeOH). Kõrge eraldusvõimega positiivsete ioonide FAB-MS: arvutatud C16H26O8Na jaoks (M Na) 369,1525; leitud 369,1522. IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1076 cm1. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD ja püridiin-d5) d: toodud tabelis 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD ja püridiin-d5) d C: antud tabelis 2. Positiivsete ioonide FAB-MS: m /z 369 (M Na). Negatiivse iooni FAB-MS: m/z 345 (MH).

Kankanosiid B (2): amorfne pulber, [a]D 26 118,7 kraadi (c 0,10, MeOH). Kõrge eraldusvõimega positiivsete ioonide FAB-MS: arvutatud C15H24O10Na jaoks (M Na) 387,1267; leitud 387,1261. IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1085 cm1. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: toodud tabelis 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) dC: toodud tabelis 2. Positiivsete ioonide FAB-MS: m/z 387 (M Na). Negatiivse iooni FAB-MS: m/z 363 (MH).

Kankanosiid C (3): amorfne pulber, [a]D 26 34.0 kraad (c 1.00, MeOH). Kõrge eraldusvõimega negatiivsete ioonide FAB-MS: arvutuslik C15H24ClO10 jaoks (MH) 399,1058; leitud 399,1077. IR (KBr): 3410, 2964, 1159, 1078, 1048, 949 cm1. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: toodud tabelis 1. 13C NMR (125 MHz, CD3OD) dC: toodud tabelis 2. Negatiivse iooni FAB-MS: m/z 399, 401 (MH).

Kankanosiid D (4): amorfne pulber, [a]D 25 30,6 kraadi (c 0,50, MeOH). Kõrge eraldusvõimega positiivsete ioonide FAB-MS: arvutatud C15H26O7Na jaoks (M Na) 341,1204; leitud 341,1210. IR (KBr): 3410, 2940, 1655, 1078, 1040 cm1. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: toodud tabelis 3. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) dC: toodud tabelis 4. Positiivsete ioonide FAB-MS: m/z 341 (M Na). Negatiivse iooni FAB-MS: m/z 317 (MH).

Kankanool (5): amorfne pulber, [a]D25 11,1 kraadi (c 1,40, MeOH). Kõrge eraldusvõimega CI-MS: arvutuslik C9H14ClO4 jaoks (MH) 221,0580; leitud 221,0582. IR (KBr): 3399, 3004, 1165, 1096, 1059, 1048, 955 cm1. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: toodud tabelis 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) dC: toodud tabelis 2. CI-MS m/z (protsent): 221 (MH) (5 ), 223 (MH) (2), 185 (88), 167 (100), 149 (71) ja 57 (49).

Kankanosiid E (6): amorfne pulber, [a]D 25 20,0 kraadi (c 200, MeOH). Kõrge eraldusvõimega positiivsete ioonide FAB-MS: arvutatud C16H28O8Na jaoks (M Na) 371,1682; leitud 371,1690. UV [MeOH, nm (loge)]: 215 (4,16). IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1085, 1043 cm1. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: toodud tabelis 3. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) dC: toodud tabelis 4. Positiivsete ioonide FAB-MS: m/z 371 (M Na). Negatiivse iooni FAB-MS: m/z 347 (MH).

cistanche ekstrakti kasu

1-4 ja 6 happeline hüdrolüüs 1 M HCl-ga

1-4 või 6 (igaüks 1,5 mg) lahust 1 M HCl-s (0,5 ml) kuumutati tagasijooksul 3 tundi. Pärast jahutamist valati reaktsioonisegu jäävette ja neutraliseeriti Amberlite IRA-400-ga (OH-vorm) ning vaik eemaldati filtrimisega. Seejärel ekstraheeriti filtraat EtOAc-ga. Vesikihile viidi läbi HPLC analüüs järgmistes tingimustes: HPLC kolonn, Ka sensor LC NH{{10}}, 4,6 mm id 250 mm (Tokyo Kasei Co., Ltd., Tokyo, Jaapan); tuvastamine, optiline pööramine [Shodex OR-2 (Showa Denko Co., Ltd., Tokyo, Jaapan)]; liikuv faas, CH3CN-H2O (75:25, maht/maht); kaaslase kiirus 0,8 ml/min; kolonni temperatuur, toatemperatuur. Vesikihis sisalduva D-glükoosi identifitseerimine viidi läbi, võrreldes selle retentsiooniaega ja optilist pöörlemist autentse proovi omadega: tR 12,3 min (positiivne optiline pöörlemine)

1, 4 ja 6 ensümaatiline hüdrolüüs b-glükosidaasiga

Ühendi 1 (7,7 mg) lahust H2O-s (1,5 ml) töödeldi b-glükosidaasiga (50 mg, mandli, Oriental Yeast Co., Tokyo, Jaapan) ja lahust segati 37 kraadi juures. 3 päevaks. Pärast EtOH lisamist reaktsioonisegule eemaldati lahusti alandatud rõhul ja jääk puhastati HPLC-ga [MeOH-H2O (55:45, maht/maht)], et saada kankageniin a (1a, 2,3 mg, 56 protsenti). . Sarnase protseduuri abil saadakse (R)-rotundiool33,34) (4a, 1,2 mg, 69 protsenti) ja (2E,6R)-8-hüdroksü-2, 6-dimetüül{{30} }oktaanhape36) (6a, 6,8 mg, 62 protsenti) saadi vastavalt 4-st (3,5 mg) ja 6-st (20,4 mg).

Kankageniin a (1a): valge pulber, [a]D 25 18,4 kraadi (c 0,20, MeOH). Kõrge eraldusvõimega EI-MS: arvutatud C10H16O3 (M) jaoks 184,1099; leitud 184,1106. IR (KBr): 3410, 2940, 1684 cm1. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: toodud tabelis 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) dC: toodud tabelis 2. EI MS: m/z (protsent): 184 (M, 37) , 95 (100).

Ühendi 14 leeliseline töötlemine 5% KOH vesilahusega

Ühendi 14 (23.0 mg) lahust 5% KOH vesilahuses (1.{5}} ml) segati 80 kraadi juures 2 tundi. Reaktsioonisegu neutraliseeriti Amberlite HCR-W2-ga (H-vorm). Lahusti eemaldamisel filtraadist alandatud rõhul saadi jääk, mis puhastati HPLC-ga [MeOH-H2O (5:95, maht/maht)], saades ühendi 2 (4,0 mg, 16 protsenti) ja 1932) (10,5 mg). , 43 protsenti).

14 happega töötlemine 5% HCl vesilahusega

Ühendi 14 (25{2}} mg) lahust 5% HCl vesilahuses (2{5}} ml) segati toatemperatuuril 3 tundi. Reaktsioonisegu valati jäävette ja kogu reaktsioonisegu ekstraheeriti EtOAc-ga. EtOAc ekstrakti pesti järjestikku NaHC03 küllastunud vesilahuse ja soolveega, seejärel kuivatati veevaba MgSO4 pulbriga ja filtriti. Lahusti eemaldamisel filtraadist alandatud rõhul saadi jääk, mis eraldati HPLC-ga [MeOH-H2O (20: 80, maht/maht)], et saada 14a (4,0 mg, 25 protsenti).

14a

Valge pulber, [a]D 20 21,5 kraadi (c 0,30, MeOH). Kõrge eraldusvõimega CI-MS: arvutuslik C9H14ClO4 jaoks (MH) 221,0580; leitud 221,0587. IR (KBr): 3410, 2962, 1365, 1152, 1055, 945 cm1. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: toodud tabelis 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) dC: toodud tabelis 2. CI-MS: m/z (protsenti): 221 (MH) ( 7), 223 (MH) (3), 203 (M H2O) (97), 205 (M H2O) (33), 185 (7), 167 (12), 159 (32), 121 (27), 110 (48), 95 (64), 85 (100), 67 (56) ja 57 (65).

5 ja 14a atsetüülimine

Ühendi 5 (2,5 mg) lahust püridiinis (0,5 ml) töödeldi äädikhappe anhüdriidiga (Ac2O, 0,4 ml) ja segu segati toatemperatuuril 12 tundi. Reaktsioonisegu valati jäävette ja kogu reaktsioonisegu ekstraheeriti EtOAc-ga. EtOAc ekstrakti pesti järjestikku 5% HCl vesilahuse, NaHC03 küllastunud vesilahuse ja soolveega, seejärel kuivatati veevaba MgSO4 pulbriga ja filtriti. Lahusti eemaldamine filtraadist alandatud rõhu all andis jäägi, mis puhastati HPLC-ga [MeOH-H2O (35:65, maht/maht)], et saada ühend 5a (2,3 mg, 77 protsenti). Sarnase protseduuriga valmistati ka 14b (2,7 mg, 87 protsenti) ja puhastati HPLC-ga [MeOH-H2O (55:45, maht/maht)] ühendist 14a (2,1 mg).

5a

Valge pulber, [a]D 20 1,8 kraadi (c 0,18, MeOH). Kõrge eraldusvõimega CI MS: arvutatud C11H15O5 (MH) jaoks 227,0919; leitud 227,0925. IR (KBr): 2962, 1734, 1374, 1258, 1237, 1169, 1103, 1053, 947 cm1. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: toodud tabelis 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) dC: toodud tabelis 2. CI-MS m/z (protsent): 227 (MH) (28 ), 209 (M H2O) (4), 184 (3), 166 (45), 149 (22), 138 (38), 122 (44), 94 (31), 85 (100) ja 57 (34). ).

14b

Valge pulber, [a]D 20 23,7 kraadi (c 0,06, MeOH). Kõrge eraldusvõimega CI-MS: arvutuslik C13H18ClO6 jaoks (MH) 305,0792; leitud 305,0790. IR (KBr): 1744, 1376, 1243, 1231, 1001, 941 cm1. 'H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: toodud tabelis 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) dC: toodud tabelis 2. CI-MS: m/z (protsent): 305 (MH) ( 2), 307 (MH) (1), 263 (MH C2H3O) (6), 265 (MH C2H3O) (3), 245 (30), 203 (8), 185 (100), 167 (7), 149 (33), 121 (26), 95 (15), 85 (37) ja 57 (93).

Tänuavaldused

Seda uurimistööd toetasid 21. COE programm, akadeemilise piiri projekt ja Jaapani haridus-, kultuuri-, spordi-, teadus- ja tehnoloogiaministeeriumi teadusuuringute toetus. Autorid tänavad Hiinas Urumqis asuvat Xinjiangi traditsiooniliste hiina ja etnoloogiliste ravimite instituudi professorit Xiaoguang Jiat taimse materjali tuvastamise eest.

cistanche kasu

Viited ja märkmed

1) Kobayashi H., Oguchi H., Takizawa N., Miyase T., Ueno A., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Pharm. Bull., 35, 3309-3314 (1987).

2) Xinjiang Science and Technology Press, "Xinjiangi peamiste ravimtaimede kultuuritehnikad", Xinjiangi traditsioonilise hiina ja etnoloogilise meditsiini instituut, 2004, lk 84–88.

3) Du N., Zhou P., Wang J., Liu C., Li W., Zhongguo Yaoke Daxue Xue bao, 24, 46-48 (1993).

4) Xue D., Zhongguo Zhongyao Zazhi, 22, 170-171 (1997).

5) Song Z., Mo S., Chen Y., Tu P., Li W., Zhao Y., Zheng J., Zhongguo Zhongyao Zazhi, 25, 728-730 (2000).

6) Song Z., Tu P., Zhao Y., Zheng J., Zhongcaoyao, 31, 808-810 (2000).

7) Yoshizawa F., Deyama T., Takizawa N., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Pharm. Bull., 38, 1927-1930 (1990).

8) Matsuda H., Morikawa T., Tao J., Ueda K., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 50, 208-215 (2002).

9) Morikawa T., Matsuda H., Toguchida I., Ueda K., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 65, 1468-1474 (2002).

10) Tao J., Morikawa T., Toguchida I., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., Bioorg. Med. Chem., 10, 4005-4012 (2002).

11) Morikawa T., Tao J., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 66, 638-645 (2003).

12) Tao J., Morikawa T., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 51, 654-662 (2003).

13) Matsuda H., Morikawa T., Xie H., Yoshikawa M., Planta Med., 70, 847-855 (2004).

14) Sun B., Morikawa T., Matsuda H., Tewtrakul S., Harima S., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 67, 1464-1469 (2004).

15) Morikawa T., Sun B., Matsuda H., Wu LJ, Harima S., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 52, 1194-1199 (2004).

16) Xie H., Wang T., Matsuda H., Morikawa T., Yoshikawa M., Tani T., Chem. Pharm. Bull., 53, 1416-1422 (2005).

17) Morikawa T., Xie H., Matsuda H., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 69 (2006) trükis.

18) Morikawa T., Xie H., Matsuda H., Wang T., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 54, 506-513 (2006).

19) Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pharm. Bull., 33, 3645-3650 (1985).

20) Otsuka H., Phytochemistry, 33, 617-622 (1993).

21) Zhao W., Yang G., Xu R., Qin G., Phytochemistry, 41, 1553-1555 (1996).

22) Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pharm. Bull., 32, 1729-1734 (1984).

23) Xu Z., Yang S., Yang J., Lu R., Zhongcaoyao, 30, 244-246 (1999).

24) Wang SJ, Pei YH, Hua HM, Chin. Chem. Lett., 12, 343-344 (2001).

25) Need teadaolevad ühendid tuvastati nende füüsikaliste andmete võrdlemisel kaubanduslikult saadud proovidega.

26) Pires R., Burger K., Tetrahedron, 53, 9213-9218 (1997).

27) Kamal A., Ramana KV, Ramana AV, Babu AH, Tetrahedron: Asymmetry, 14, 2587-2594 (2003).

28) Ühendite 1-6 ja sarnaste ühendite (19, 1a, 5a, 14a, 14b) 1 H- ja 13C-NMR spektrid määrati moonutusteta võimenduse abil polarisatsiooniülekande (DEPT), topeltkvantfiltri korrelatsioonispektroskoopia abil ( DQF COSY), heteronukleaarse mitme kvantkoherentsi (HMQC) ja heteronukleaarse mitme sideme ühenduvuse (HMBC) katsed.

29) Nishizawa M., Kodama S., Yamase Y., Kayano K., Hatakeyama S., Ya mada H., Chem. Pharm. Bull., 42, 982-984 (1994).

30) Yoshikawa M., Ueda T., Matsuda H., Yamahara J., Murakami N., Chem. Pharm. Bull., 42, 1691-1693 (1994).

31) Matsuda H., Shimoda H., Uemura T., Ueda T., Yamahara J., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 47, 1753-1758 (1999).

32) Damtoft S., Jensen SR, Nielsen BJ, Phytochemistry, 24, 2281-2283 (1985).

33) Watanabe K., Takada Y., Matsuo N., Nishimura H., Biosci. Biotehnoloogia. Biochem., 59, 1979-1980 (1995).

34) Takikawa H., Yamazaki Y., Mori K., Eur. J. Org. Chem., 229-232 (1998).

35) Kitagawa I., Fukuda Y., Taniyama T., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 39, 1171-1176 (1991).

36) Yamaguchi K., Shinohara C., Kojima S., Sodeoka M., Tsuji T., Biosci. Biotehnoloogia. Biochem., 63, 731-735 (1999).