Cistanche keemiliste toimeainete tuvastamise meetod

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche Deserticola keemiliste komponentide tuvastamine X500R QTOF süsteemi abil

Li Yuejie, Cheng Haiyan, Liu Ting, Li Lijun, Jin Wenhai SCIEX, Aasia ja Vaikse ookeani rakenduste tugikeskus (Shanghai), Hiina

Sissejuhatus

Cistanche deserticolasalvestati esmakordselt "Shen Nong Materia Medicas"; seda tuntakse ka kui "Dayun", "Rousong Rong" ja "Zong rong". Traditsioonilise taimse ravimina on sellel neeru yangi toitev, verevoolu parandav, lahtistav, immuunsüsteemi stimuleeriv ja muud mõjud[1]. 1983. aastal hakkasid Jaapani teadlane H. Kobayashi ja teised uurima selle keemilist koostistCistanche Deserticola[2] ja sellest ajast alates on see muutunud Hiina meditsiini uuringutes populaarseks teemaks, mis on viimase 30 aasta jooksul tekitanud suurt huvi nii kodu- kui ka välismaal.Cistanche Deserticolakuulub fenooli sisaldavate taimede klassiglükosiidid, iridoidid ja nendeglükosiidid, lignaanid ja nendeglükosiidid.

Kvadrupoolne lennuaja (QTOF) massispektromeetria on tundlik ja spetsiifiline tööriist Hiina meditsiini komponentide tuvastamiseks, mis on järk-järgult muutunud teadustöös hädavajalikuks. See tehnoloogia on ületanud traditsioonilised tehnilised väljakutsed üksikute süstide tagasiulatuvate analüüsidega, mis võimaldavad hankida olulisi andmeid ja kõige põhjalikumat prooviteabe hankimist. Täpse massi ja kõrge eraldusvõimega TOF-MS ja TOF-MS/MS andmete kasutamine võimaldab samaaegset, väga spetsiifilist sihitud ja mittesihitud kvalitatiivset analüüsi. Kuid seadme töö ja tarkvara kasutamise keerukus on selle tehnoloogia levikut ja arengut oluliselt piiranud. Siin tutvustame uut QTOF-süsteemi, mis kasutab revolutsioonilist uut N-tüüpi geomeetriapõhist TOF-teed, intuitiivset tarkvara ja täpseid molekulmassi tehnikaid, mida on lihtsam kasutada Hiina meditsiini komponentide tuvastamisel.

Selle meetodi eelised on järgmised:

1. X500R kasutab vastupidavat, tööstusharu heakskiidetud Turbo VTM iooniallika ja õhukardina gaasiliidese disaini, millel on tugev saastevastane funktsioon;

2. SCIEX OS tarkvaral on integreeritud hankimise, töötlemise ja aruandlusfunktsioonid ühel platvormil; liides on intuitiivne, hõlpsasti hallatav ja sellel on ühe puutega automaatse reguleerimise parandus, mis tagab, et igasuguse asjatundlikkusega analüütikud saavad kvaliteetseid ja usaldusväärseid andmeid;

3. SCIEX OS-i tarkvara kasutamine andmete töötlemiseks Hiina meditsiini komponentide tuvastamiseks on lihtne ja võimaldab kiiret kasuliku teabe hankimist, seega ;

4. MS/MS spektreid sisaldavatest Hiina meditsiini raamatukogudest saadakse täpsemad ja usaldusväärsemad identifitseerimise tulemused;

5. Kõrge eraldusvõimega MS/MS Hiina meditsiini andmebaasid põhinevad "Hiina farmakopöa" 1. osa TCM toimeainetel; kaasa arvatud farmakopöa komponentide viited ja ravimtaimede toimeained, on seal ligi 900 ühendit

cistanche deserticola tõhusust parandav

Eksperimentaalne protsess

1. Kasutades TOF-MS-IDA MS/MS režiimi, süstige proov ja võtke samaaegselt primaarsed prekursorioonid ja vastavad sekundaarsed spektrid;

2. SCIEX OS tarkvara sihitud sõelumine, sihtühendite ja sekundaarsete spektrite kinnitamine koos Hiina meditsiini standardite ja sobitusmeetodite skriinimisega võib suurendada täpsust ja töö tootlikkust.

3. SCIEX OS-i tarkvara mittesihitud tuvastamise töövoog kasutab tulemuste kontrollimiseks teegiotsinguid ja täielikke tundmatuid otsinguid ChemSpideris, tagades, et lihtsama töövooga tuvastatakse rohkem komponente.

Proovid ja eeltöötlusmeetod

Näidisallikas:

Ostetud Shanghai apteekidest viilutatud kujul

Eeltöötlusmeetod:

1. Viilud purustati pulbriks;

2. 0,9 mg kaaluti ja sukeldati 40 minutiks 3 ml metanooli;

3. Etapi 2 proovi ultraheliga töödeldi 1 tund;

4. Tsentrifuugiti ja supernatant eemaldati proovina kasutamiseks.

Vedelikkromatograafia (LC) tingimused

Kromatograafiline kolonn: XSelect HSS T3, 2,1 x 150 mm, 3,5 µm;

Liikuv faas: kasutati gradientelueerimist

Liikuv faas: A on 0,1 protsenti sipelghapet vett-2mM NH4FA

B on 95 protsenti atsetonitriili-5 protsenti vett-2mM NH4FA

Voolukiirus: 0,5 ml/min

Kolonni temperatuur: 40ºC

Sisestatud kogus: 5 µL

Massispektromeetria meetod:

Skannimismeetod: TOF MS-IDA-15 MS/MS kvalitatiivne sõelumine

ESI iooniallika parameetrid:

Õhkkardina gaas CUR: 35psi; IS pinge: 5500 V/-4500V

Lähtetemperatuur: 600ºC

Pihustusgaas GAS1: 55psi; Abigaas GAS2: 60psi

Instrumentide režiimi otsing:

Ühe nupuvajutusega (valige paremas alanurgas MS Check), täisautomaatne TOF-MS ja TOF-MS/MS parandusrežiim tagavad, et mis tahes teadmiste tasemega analüütikud saavad täpseid, usaldusväärseid ja reprodutseeritavaid andmeid.

Positiivse ja negatiivse ioonirežiimi BPC-d:

Ühendi tuvastamise protseduur

1. Suunatud komponentide tuvastamise töövoog

1.1: molekulaarvalemi otsing

Nõutavad on ainult keemilise ühendi nimetus ja molekulaarvalem; neid saab töötlemismeetodi loomiseks otse sisestada või importida Exceli kopeerimise ja kleepimise funktsiooni abil

Kui tulemuste tabel on loodud, saab kvantitatiivseid ja kvalitatiivseid tulemusi vaadata samas aknas. Punase/rohelise indikaatorisüsteemi kasutatakse massi täpsuse, retentsiooniaja, isotoobi tüübi ja identifitseerimiskindluse näitamiseks andmebaasi sobitamise teel.

SCIEX OS-i tarkvara võimaldab kasutajatel tulemusi filtreerida ja kuvada ainult neid ühendeid, mis vastavad aktsepteerimiskriteeriumidele ja jäävad kasutaja määratud usaldusvahemikku. See suudab kiiresti leida sihipäraseid tulemusi suurtes andmebaasides.

MS/MS spektrite TCM-i andmebaas võimaldab sekundaarset sobitamist ja annab usaldusväärsemaid tulemusi (hall värv andmebaasis näitab MS/MS andmeid)

Kirjandus sisaldab fenoolide nimetusi ja molekulaarseid valemeidglükosiidaktiivsed koostisosad. Kasutades ülaltoodud protsessi sihtkomponentide tuvastamiseks, tehti kindlaks, et proov sisaldab 39 tüüpi fenoolglükosiide:

Peale fenooliglükosiidaktiivsed komponendid, sisaldab Cistanche ka suurt hulka ühendeid, nagu iridoidid, glükosiidid ja lignaanid. Tuvastamise tulemused on järgmised:

Iridoidide, glükosiidide ja lignaanide identifitseerimisnimekiri:

1.2: Otsing andmebaasist:

53 ühendit saadi TCM-i andmebaasi sobiva tuvastamise teel: 43 positiivset iooni, 22 negatiivset iooni ja 12 kordust, mis on loetletud allpool. Peale aktiivse fenooliglükosiidid, iridoide, glükosiide ja lignaane, sisaldab ka Cistanche

2. Mittesihitud komponentide analüüs

Mittesihitud komponentide tuvastamist saab teha sisseehitatud ChemSpider otsingufunktsiooniga, et määrata tundmatute klassifikatsioon ja tüüp. Mittesihitud komponentide tuvastamiseks valige lihtsalt "mittesihitud" režiim ja molekulaarse valemi otsing arendab töötlemismeetodi. Töövoog on järgmine:

Täielike tundmatute puhul kuvatakse molekulaarvalemite otsingutulemused tipptasemel brauseriaknas TOF MS massispektri alumises osas; ChemSpideri andmebaasiotsinguga loetletakse tulemused prioriteedi järgi ja ChemSpideris saadud struktuuriteavet võrreldakse automaatselt saadud MS/MS spektriga, mis annab kiireks tuvastamiseks teisese tagasiside.

Kokkuvõte

1. Kiire kõrge eraldusvõimega andmete kogumine; ühe süstiga saadi kõrge eraldusvõimega TOF MS ja MS/MS andmed 39 identifitseeritava fenoolglükosiidi aktiivse komponendi ja 16 iridoidi, lignaani ja glükosiidiga;

2. Sekundaarsete spektrite TCM-i andmebaas pakub täiendavat sobivusteavet ja tarkvara annab automaatselt andmebaasi vaste skoori. Skoori kasutades saab Hiina meditsiini komponente lihtsalt, kiiresti ja täpselt tuvastada;

3. Seade on lihtne ja sellel on ühe nupuvajutusega automaatse reguleerimise parandus, mis tagab, et igasuguse asjatundlikkusega analüütikud saavad kvaliteetseid ja usaldusväärseid andmeid;

4. Uus SCIEX OS-i tarkvaraversioon integreerib andmete hankimise, töötlemise (kvantitatiivse ja kvalitatiivse), kuvamise, aruandluse ja andmebaasihalduse. See lahendab paljude kasutajate raskused intuitiivse ja hõlpsasti kasutatava liidesega;

5. Nii sihitud kui ka mittesihitud sõeluuringu töövood on lihtsad ning sisseehitatud meetodite juhend aitab kasutajatel meetodeid täpselt ja kiiresti luua.

Viited

1. ISBN 978-7-5067-7337-9, Hiina farmakopöa [S]. Peking: riiklik farmakopöa komisjon, 2015

2. Lei, Song Zhihong, Tu Pengfei; Perekonda Cistanche kuuluvate taimede keemilise koostise uurimise edusammud, "Chinese Herbal Medicine", 34. köide, nr 5, mai 2003, 473-476.