3. Tulemused

3.1. KRG inhibeeris TYR aktiivsust ja pärssis melaniini sisaldust rakuvabas süsteemis

TYR ensüüm osaleb melanogeneesi kiirust piiravas etapis [20,21]. Seetõttu, et kontrollida, kas KRG suutis selle ensüümi tootmist pärssida, teostasime rakuvaba seente TYR analüüsi. Nagu on näidatud joonisel 1A, inhibeeris KRG tugevalt TYR tootmist. B16/F10 rakke töödeldi KRG-ga ja stimuleeriti a-MSH-ga, et indutseerida melaniini sekretsiooni, ning leiti, et KRG supresseeris seda tõhusalt, nagu on näidatud joonisel 1B. Mõlemas katses kasutati positiivse kontrollina tuntud valgendavat ainet Kojic hapet.

Asjakohaste uuringute kohaselt on tsistanche tavaline ravimtaim, mida tuntakse kui "imerohtu, mis pikendab eluiga". Selle põhikomponent on tsistanosiid, millel on erinevad toimed, nagu antioksüdant, põletikuvastane ja immuunfunktsiooni edendav toime. Tsistanche ja naha valgendamise vaheline mehhanism seisneb cistanche glükosiidide antioksüdantses toimes. Inimese nahas sisalduv melaniini toodetakse türosiini oksüdeerumisel, mida katalüüsib türosinaas ja oksüdatsioonireaktsioon eeldab hapniku osalemist, mistõttu kehas olevad hapnikuvabad radikaalid muutuvad oluliseks melaniini tootmist mõjutavaks teguriks. Cistanche sisaldab tsistanosiidi, mis on antioksüdant ja võib vähendada vabade radikaalide teket organismis, pärssides seega melaniini tootmist.

Klõpsake valikul Cistanche tablettide eelised

Lisateabe saamiseks:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

3.2. KRG mõju MITF-i ja TRP-de mRNA ja valgu ekspressioonidele

Eespool nimetatud tulemused näitasid KRG mõju TYR-ile ja melaniini sisaldusele. KRG poolt põhjustatud melaniini inhibeerimise mehhanismi selgitamiseks hindasime aga melanogeneesi rajaga seotud geenide transkriptsiooni ja translatsiooni: TRP-1 ja TRP-2, TYR ja mikroftalmiaga seotud transkriptsioonifaktor (MITF) ). Nagu on näidatud joonistel 2A ja B, inhibeeris KRG tugevalt melanogeneesi raja kõiki nelja komponenti. Seetõttu kinnitati KRG in vitro uuringus tõhusa valgendusainena.

3.3. KRG suukaudse lisamise mõju kehakaalule ja toidutarbimisele

Kunstlik UVB-kiirgus põhjustab loomadel stressi, mille tagajärjeks võib olla isutus; Seetõttu hindasime 5 nädala jooksul UVB-kiirgusega kokku puutunud HRM{0}} hiirte toidutarbimist ja toitumise tõhusust, keda raviti päikesekaitsekreemiga ja kellele manustati suukaudselt KRG-d. Nagu on näidatud joonisel 3A, ei toimunud normaalses, kontroll-UVB- või ravirühmas kehakaalus olulisi muutusi. Samuti leiti, et toidu tarbimine on positiivse kontrolli ja KRG-ga ravitud rühmades oluliselt suurenenud, nagu on näidatud joonisel 3B. Need tulemused näitavad, et kuigi UVB indutseeris hiirtel stressi, hoidis KRG-ravi tõhusalt ära isu ja kehakaalu kaotuse hiirtel.

3.4. Kortsudega seotud geenide ekspressiooni analüüs UVB-kiirgusega HRM-2 hiirtel

Et mõõta KRG mõju nahakortsude tekkele, kiiritati HRM{0}} hiiri UVB-ga, et tekitada kortse. Pärast 5-nädalast kiiritamist eraldati nahakoed ja analüüsiti kortsudega seotud geenide (st IL-1b, MMP-2 ja MMP- 9) ekspressiooni. Nagu on näidatud joonistel 4A ja B, oli ELISA-ga määratud MMP-2 valgu ekspressioon ja reaalajas PCR-ga määratud mRNA ekspressioon positiivses kontrollrühmas ja KRG-ravis oluliselt madalam. võrreldes UVB-kiirgusega kontrollrühma kuuluvatega. MMP-9 ja IL-1b tase langes samuti oluliselt KRG-ga töödeldud rühmades võrreldes UVB-kiirgusega kontrollrühmaga, nagu näitas reaalajas PCR (joonised 4C ja D).

3.5. KRG mõju melanogeneesile UVB-kiirgusega nahakahjustuste korral

KRG valgendamise efektiivsuse kinnitamiseks uuriti melaniini moodustumise erinevust UVB-kiirguse 1., 3. ja 5. nädalal, jagades HRM-2 hiirte seljanaha vasakpoolseks (töötlemata) ja parempoolseks (UVB). ja prooviga töödeldud lõigud). Nagu on näidatud joonisel fig 5A, ei ilmnenud hiirte UVB-kiirgusega kokkupuute 1. nädalal koos päikeseblokaatori ja KRG-ga ravimisel melaniini tootmise märkimisväärset vähenemist mõlema KRG annuse korral. 3. nädalal vähenes melaniini tootmine positiivse kontrolli päikeseblokaatoriga ravitud rühmas ja KRG rühmades võrreldes UVB-kiirgusega kontrollrühmaga, nagu on näidatud joonisel 5B. 5. nädalal, nagu on selgelt näidatud joonisel 5C, vähenes positiivse kontrolli päikeseblokaatoriga ravitud rühm ja mõlemad KRG-ga töödeldud rühmad melaniini tootmises olulist vähenemist. Need tulemused näitasid, et KRG oli tõhus nahka valgendav aine.

3.6. KRG mõju kortsude tekkele HRM-2 hiirtel

Et määrata KRG mõju kortsude tekkele ja sügavusele, kiiritati HRM{0}} hiiri UVB-ga, et kutsuda esile fotovananemine, ning naha kortsude sügavust mõõdeti 3D-analüsaatoriga, nagu on kirjeldatud jaotises Materjalid ja meetod. lõik (2.11), 3., 4. ja 5. nädalal. Nagu on näidatud joonistel 6A ja B, näitasid positiivse kontrolli päikeseblokaatoriga ravitud rühmad ja mõlemad KRG-ga töödeldud rühmad kortsude moodustumise ja sügavuse olulist vähenemist.

3.7. KRG mõju epidermise paksuse vähenemisele ja kollageeni suurenemisele

UV-kiirgus võib suurendada epidermise paksust, muutes naha paksemaks ja karedaks. Lisaks võib pidev kokkupuude UVB-kiirgusega lagundada MMP-sid ja põhjustada kollageeni kadu, mis on naha hea tervise jaoks oluline [22]. Nagu on näidatud joonisel 7A, vähenes UVB poolt indutseeritud epidermise paksus tugevalt positiivse kontrolli päikeseblokaatoriga töödeldud rühma ja mõlema KRG-ga töödeldud rühma poolt. Veelgi enam, joonisel fig 7B on näidatud, et epidermise paksus, nagu visualiseeriti hematoksüliini ja eosiiniga värvimisega, vähenes positiivse kontrolli päikeseblokaadiga töödeldud rühmas ja mõlemas KRG-ga töödeldud rühmas. Massoni trihhoomiga värvimine, mis viidi läbi HRM-2 hiirte naha maatriksikomponentide visualiseerimiseks, näitas kollageenikiudude lagunemise tõttu vähenenud värvimise intensiivsust UVB-kiirgusega kontrollrühmas; vastupidi, hiirtel, keda raviti päikeseblokaadi ja mõlema KRG doosiga, suurenes värvimise intensiivsus järsult võrreldes UVB kontrollrühmaga (joonis 7C). Need tulemused näitasid selgelt, et KRG on nahka valgendava ja vananemisvastase toimega ohutu ja tõhus ravi.

3.8. Punase ženšenni kreemi mõju inimese nahale

Naha elastsust (nimetatakse ka elastsuseks) mõõdeti tabelis 1 näidatud viisil. Katserühmas, kellele manustati 3 protsenti punast sisaldavat kreemi, täheldati elastsuse keskmine suurenemine 0.03386. ženšenn. Kontrollrühmas, kes sai kreemi ilma ženšennita, suurenes keskmine vastupidavus 0,0255 võrra.

Nagu on näidatud tabelis 2, suurendati katserühma õlisisaldust 67,8 protsendini võrreldes kontrollrühmaga, kus õlisisaldus oli 45,6 protsenti. Üksikasjalikumalt näitasid tulemused, et õlisisaldus suurenes kõigis rühmades 50 protsenti. katserühmad: 46,6 protsenti poolkeral, 25,4 protsenti vasakpoolsel põsel ja 32,6 protsenti üldiselt.

Niiskusesisaldus vähenes nii kontroll- kui katserühmas, nagu on näidatud tabelis 3. Selle põhjuseks peeti ilmastikutingimuste muutumist oktoobrist novembrini Korea Vabariigis.

Nahatooni muutus katserühmas oli keskmine langus 8,24; vastupidi, kontrollrühmas oli tõus 2,12 (tabel 4). Üksikasjalikult tõsteti otsmiku naha toonust nii kontroll- kui katserühmas. Katserühmas langes nahatoon nii paremal põsel kui ka vasakul põsel; seevastu kontrollrühmas tõusis nende nahatoon nii otsmikul kui paremal põsel, mis viitas naha tumenemisele. Seetõttu järeldame, et ženšennkreem vähendas naha kalduvust oma värvi kaotada; teisisõnu tugevdas see helendavat efekti.

Naha keskmine erüteem vähenes katserühmas 33,8 ja kontrollrühmas 3,6 (tabel 5). Need tulemused viitavad tugevalt punase ženšenni ekstrakti positiivsele mõjule naha üldise seisundi parandamisel ilma kõrvalmõjusid esile kutsumata.

4. Arutelu

Melanotsüüdid on spetsiaalsed melaniini tootvad rakud, mida leidub epidermise basaalkihis. Need rakud osalevad melaniini tootmises ja transpordis naaberkeratinotsüütidesse ning sellest tulenevalt ühtlase naha pigmentatsioonikihi moodustumisega. Melaniin on oluline pigment, mis täidab kahte funktsiooni. Esimene ja kõige olulisem funktsioon on naha pigmenteerimine ja teine ​​funktsioon on kaitsta nahka kahjuliku UV-kiirguse eest, vähendades reaktiivsete hapnikuliikide arvu [23,24]. Kui nahk puutub kokku UV-kiirgusega, aktiveerub a-MSH hormoon, mis põhjustab melaniini tootmist melanotsüütidest [25]. Kogu selle melaniini tootmisprotsessi peamised regulaatorid on MITF, TYR-i reguleerimise transkriptsioonifaktor, ja türosiiniga seotud valgud (TRP-1 ja TRP-2) [4,26e28]. Need komponendid osalevad melaniini ja naha pigmentatsiooni tootmises.

Naha vananemist võib laias laastus jagada kahte tüüpi [29]. Sisemine (või endogeenne) vananemine on vältimatu vananemisnähtus, mis ilmneb koos inimese vananemisega. Seda tüüpi vananemise kliinilised tunnused on suhteliselt kerged ja hõlmavad peeneid kortse, kuiva nahka ja vähenenud elastsust [30]. Fotovananemine (eksogeenne vananemine) viitab vananemisnähtusele, mida täheldatakse nahal, mis on pikka aega päikesevalguse käes. Kahjustuse eest vastutav element on päikesevalguses UVB. Seda tüüpi fotovananemist saab ennetada, kui enne päikese kätte minekut kasutada müügilolevat päikesekaitsekreemi ja minimeerida päikese käes viibimise aega. Eksogeense vananemise kliinilised tunnused on kahjulikud, näiteks väga kare, kuiv nahk, mille elastsus on vähenenud, ja sügavate kortsude teke koos tugeva naha lõtvumisega. Fotovananenud nahk on väga vastuvõtlik ka pigmentatsioonihaigustele, nagu päikese lentiigo [31,32].

Veelgi enam, kui nahk on UVB-d sisaldava päikesevalguse käes üle eksponeeritud, suureneb ekstratsellulaarsete MMP-de hulk, mis põhjustab maatriksvalkude, mille põhikomponent on kollageen, lagunemist [33]. Kollageen on ülemaailmselt tunnustatud kui vajalik element naha elastsuse tagamiseks ja selle lagunemine põhjustab teadaolevalt varajase kortsude teket ja vähendab naha elastsust. Pärast kokkupuudet UVB-ga lagundab MMP-de suurenemine kollageeni ja muid substraatvalke [34]. Seega on see päikesekiirgus nahale tekitatud haavatüüp ja meie keha teeb jõupingutusi haavade paranemiseks uue kollageeni sünteesi kaudu. Kuna haavade paranemise protsess ei ole alati täiuslik, põhjustab naha pidev kokkupuude UVB-kiirgusega vananemise kliinilisi sümptomeid, sealhulgas kortse.

Kuigi melanotsüüdid vabastavad suurel hulgal lahustuvaid komponente, peetakse melanogeneesi regulaatoriteks prostaglandiin E2, prostaglandiin F2a, adrenokortikotroopne hormoon ja NO [35-38]. Tsütokiinide mõju melanogeneesi protsessile on aga üsna keeruline. Näiteks IL-perekonna hulgas osalevad melanogeneesi stimuleerimises IL-1a/1b ja granulotsüütide-makrofaagide kolooniaid stimuleerivad tegurid; aga IL-6, transformeeriv kasvufaktor beeta 1 (TGF-b1) ja koenekroosifaktor a (TNF-a) pärsivad melaniini tootmist. Meie tulemused näitasid, et IL-1b suurenes UVB-kiirgusega kontrollrühmas, kuid vähenes oluliselt KRG-ravi tõttu. Kokkuvõtteks võib öelda, et KRG ja KRG kreemil olid tugevad melanogeensed ja nahka valgendavad omadused ning neid võib arendada kaubanduslikult saadavaks kosmeetikavahendiks.

Huvide konfliktid

Tänuavaldused

Lisa A. Täiendavad andmed

Viited

[1] Brenner M, kuulmine VJ. Melaniini kaitsev roll UV-kahjustuste eest inimese nahas. Photochem Photobiol 2008;84:539e49.

[2] Kim DS, Jeong YM, Park IK, Hahn HG, Lee HK, Kwon SB, Jeong JH, Yang SJ, Sohn UD, Park KC. Uus 2-imino-1,3-tiasoliini derivaat KHG22394 inhibeerib melaniini sünteesi hiire B16 melanoomirakkudes. Biol Pharm Bull 2007;30:180e3.

[3] Kim DS, Kim SY, Park SH, Choi YG, Kwon SB, Kim MK, Na JI, Youn SW, Park KC. 4-n-butüülresortsinooli pärssiv toime türosinaasi aktiivsusele ja melaniini sünteesile. Biol Pharm Bull 2005;28:2216e9.

[4] Kim HR, Kim H, Jung BJ, You GE, Jang S, Chung DK. Lactobacillus plantarum'ist eraldatud lipoteikoiinhape inhibeerib melanogeneesi hiire B16F10 melanoomirakkudes. Mol Cells 2015;38:163e70.

[5] Goldstein B. ženšenn: selle ajalugu, levik ja rahvatraditsioon. Am J Chin Med (Gard City, NY) 1975;3:223e34.

[6] Chevallier A. Ravimtaimede entsüklopeedia. St Leonards. Uus-Lõuna-Wales: Dorling Kindersley pty piiratud; 1996. aasta.

[7] Kim BM, Kim DH, Park JH, Na HK, Surh YJ. Ginsenosiid Rg3 kutsub esile inimese rinnavähi (MDA-MB-231) rakkude apoptoosi. J Cancer Eelmine 2013;18:177e85.

[8] Kim EK, Lee JH, Cho SH, Shen GN, Jin LG, Myung CS, Oh HJ, Kim DH, Yun JD, Roh SS. Musta Panaxi ženšenni valmistamine uute meetoditega ja selle kasvajavastane toime. The Korea Journal of Herbology 2008;23:85e92.

[9] Saba E, Jeong DH, Roh SS, Kim SH, Kim SD, Kim HK, Rhee MH. Musta ženšenniga rikastatud Chong-Myung-Tangi ekstraktid parandavad rottide ruumilist õppimiskäitumist ja kutsuvad esile in vitro põletikuvastase toime. J Ginseng Res 2017;41:151e 8.

[10] Saba E, Kim SH, Kim SD, Park SJ, Kwak DM, Oh JH, Park CK, Rhee MH. Diabeedi tüsistuste leevendamine ginsenosiidiga Rg{7}}rikastatud punase ženšenni ekstraktiga lääne dieediga toidetud LDLe/hiirtel. J Ginseng Res 2017;42:352e5.

[11] Saba E, Son Y, Jeon BR, Kim SE, Lee IK, Yun BS, Rhee MH. Atsetüüleburikoiinhape laetiporus sulfurous var. miniatuurid pärsivad põletikku hiire makrofaagide RAW 264.7 rakkudes. Mükobioloogia 2015;43:131e6.

[12] Dai D, Zhang CF, Williams S, Yuan CS, Wang CZ. Ženšenn vähi vastu: potentsiaalne roll põletiku poolt vahendatud angiogeneesi moduleerimisel. Am J Chin Med 2017;45:13e22.

[13] Saba E, Jeon BR, Jeong DH, Lee K, Goo YK, Kim SH, Sung CK, Roh SS, Kim SD, Kim HK jt. Musta ženšenni ekstrakt leevendab rottidel hüperkolesteroleemiat. J Ginseng Res 2016;40:160e8.

[14] Christensen LP. Ginsenosiidide keemia, biosüntees, analüüs ja võimalikud tervisemõjud. Adv Food Nutr Res 2009;55:1e99.

[15] Song M, Mun JH, Ko HC, Kim BS, Kim MB. Korea punase ženšenni pulber melasma ravis: kontrollimatu vaatlusuuring. J Ginseng Res 2011;35:170e5.

[16] Cabanes J, Chazarra S, Garcia-Carmona F. Kojic acid, kosmeetiline nahavalgendusaine, on türosinaasi katehkolaasi aktiivsuse aeglaselt seonduv inhibiitor. J Pharm Pharmacol 1994;46:982e5.

[17] Bissett DL, Hannon DP, Orr TV. Päikese vananenud naha loommudel: histoloogilised, füüsilised ja nähtavad muutused UV-kiirgusega kiiritatud karvutu hiire nahas. Photochem Photobiol 1987;46:367e78.

[18] Cardiff RD, Miller CH, Munn RJ. Hiire kudede lõikude käsitsi hematoksüliini ja eosiini värvimine. Cold Spring Harb Protoc 2014;2014:655e8.

[19] Chang JY, Kessler HP. Massoni trikroomplekk aitab eristada müofibroomi pea- ja kaelapiirkonna silelihaste kahjustustest. J Formos Med Assoc 2008;107:767e73.

[20] Ohguchi K, Tanaka T, Iliya I, Ito T, Iinuma M, Matsumoto K, Akao Y, Nozawa Y. Gnetol kui tugev türosinaasi inhibiitor perekonnast Gnetum. Biosci Biotechnol Biochem 2003;67:663e5.

[21] Yokota T, Nishio H, Kubota Y, Mizoguchi M. Lagritsaekstraktide glabridiini pärssiv toime melanogeneesile ja põletikule. Pigment Cell Res 1998;11:355e61.

[22] Jablonska-Trypuc A, Matejczyk M, Rosochacki S. Maatriksi metalloproteinaasid (MMP-d), peamised ekstratsellulaarse maatriksi (ECM) ensüümid kollageeni lagunemisel, vähivastaste ravimite sihtmärgina. J Enzyme Inhib Med Chem 2016;31: 177e83.

[23] Englaro W, Bertolotto C, Brunet A, Pagès G, Ortonne JP, Ballotti R. Mitogeen-aktiveeritud proteiinkinaasi raja inhibeerimine käivitab B16 melanoomi rakkude diferentseerumise. Journal of Biological Chemistry 1998;273:9966e70.

[24] Tam I, Stepien K. Melanotsüüdid-immunokompetentsed pigmenteerunud rakud. Postepy Dermatologii I Alergologii 2007;24:188.

[25] Lee HJ, Lee WJ, Chang SE, Lee GY. Hesperidiin, populaarne antioksüdant, pärsib melanogeneesi erk1/2-vahendatud MITF-i lagunemise kaudu. Int J Mol Sci 2015;16: 18384e95.

[26] Hu YH, Liu X, Jia YL, Guo YJ, Wang Q, Chen QX. Klorokneelhapete inhibeeriv kineetika seente türosinaasil. J Biosci Bioeng 2014;117:142e6.

[27] Masamoto Y, Ando H, Murata Y, Shiraishi Y, Tada M, Takahata K. Euphorbia lathyris L. seemnetest eraldatud esculetiini seente türosinaasi inhibeeriv toime. Biosci Biotechnol Biochem 2003;67:631e4.

[28] Wu M, Hemesath TJ, Takemoto CM, Horstmann MA, Wells AG, Price ER, Fisher DZ, Fisher DE. c-Kit käivitab kahekordse fosforüülimise, mis seob olulise melanotsüütide faktori Mi aktiveerimise ja lagunemise. Genes Dev 2000;14:301e12.

[29] Tobin DJ. Sissejuhatus naha vananemisse. Journal of Tissue Viability 2017;26:37e 46.

[30] Helfrich YR, Sachs DL, Voorhees JJ. Ülevaade naha vananemisest ja fotovananemisest. Dermatol Nurs 2008;20:177e83. viktoriin 184.

[31] Fisher GJ, Kang S, Varani J, Bata-Csorgo Z, Wan Y, Datta S, Voorhees JJ. Fotovananemise ja kronoloogilise naha vananemise mehhanismid. Archives of Dermatology 2002;138:1462e70.

[32] El-Domyati M, Attia S, Saleh F, Brown D, Birk D, Gasparro F, Ahmad H, Uitto J. Sisemine vananemine vs. fotovananemine: naha võrdlev histopatoloogiline, immunohistokeemiline ja ultrastruktuurne uuring. Experimental Dermatology 2002;11:398e405.

[33] Brennan M, Bhatti H, Nerusu KC, Bhagavathula N, Kang S, Fisher GJ, Varani J, Voorhees JJ. Maatriksi metalloproteinaas-1 on peamine kollagenolüütiline ensüüm, mis vastutab kollageenikahjustuste eest UV-kiirgusega inimnahas. Fotokeemia ja fotobioloogia 2003;78:43e8.

[34] Quan T, Qin Z, Xia W, Shao Y, Voorhees JJ, Fisher GJ. Maatriksit lagundavad metalloproteinaasid fotovananemisel. J Investig Dermatol Symp Proc 2009;14:20e4.

[35] Gillbro JM, Olsson MJ. Naha välguagentide melanogenees ja mehhanismid – olemasolevad ja uued lähenemisviisid. Int J Cosmet Sci 2011;33:210e21.

[36] Roméro-Graillet C, Aberdam E, Clément M, Ortonne JP, Ballotti R. Ultraviolettkiirgusega kiiritatud keratinotsüütide poolt toodetud lämmastikoksiid stimuleerib melanogeneesi. Journal of Clinical Investigation 1997;99:635.

[37] Wakabayashi Y, Nakajima H, Imokawa G. N-seotud süsivesikute modifikaatorite tühistav toime tüvirakufaktorile ja endoteliini{2}}stimuleeritud epidermise pigmentatsioonile inimese epidermise ekvivalentides. Journal of Dermatological Science 2013;69:215e28.

[38] Mizoguchi M. Melanotsüütide areng: julgustava sõnumiga noortele naisteadlastele. Pigment Cell Res 2004;17:533e44.

Lisateabe saamiseks: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501