Preeklamptilisest rasedusest põhjustatud neerukahjustus taastub pärast sünnitust transgeense roti mudelis

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

Sarah M. Kedziora 1,2,3,4,5, Kristin Kräker 1,2,3,4,5, Lajos Markó1,2,3,4,5, Julia Binder 6, Meryam Sugulle 7,8, Martin Gauster 9 , Dominik N. Müller 1,2,3,4,5, Ralf Dechend 1,2,3,4,5,10, Nadine Haase 1,2,3,4,5,† ja

Florian Herse 1,2,3,4,*

1 Eksperimentaalsete ja kliiniliste uuringute keskus (ECRC), Charité – Universitätsmedizin Berlin ja Max Delbrucki molekulaarmeditsiini keskuse ühine koostöö, 13125 Berliin, Saksamaa; sarah.kedziora@mdc-berlin.de (SMK); kristin.kraeker@charite.de (KK); lajos.marko@charite.de (LM);dominik.mueller@mdc-berlin.de (DNM); ralf.dechend@charite.de (RD); nadine.haase@mdc-berlin.de (NH)

2 Max Delbrucki molekulaarmeditsiini keskus (MDC) Helmholtzi assotsiatsioonis, 13125 Berliin, Saksamaa

3 Charité-Universitätsmedizin Berlin, Freie Universität Berlin ja Humboldt-Universitätzu Berlin korporatiivne liige, 10117 Berliin, Saksamaa

4 Berliini Charité tervishoiuinstituut – Berliin Universitätsmedizin, 10117 Berliin, Saksamaa

5 DZHK (Saksamaa südame-veresoonkonna uuringute keskus), partnersait Berliin, 13353 Berliin, Saksamaa

6 Viini Meditsiiniülikooli sünnitusabi ja günekoloogia osakond, 1090 Viin, Austria

7 Kliinilise Meditsiini Instituut, Arstiteaduskond, Oslo Ülikool, 0318 Oslo, Norra

8 Oslo ülikooli haigla sünnitusabi ja günekoloogia osakond, 0450 Oslo, Norra

9 Rakubioloogia, histoloogia ja embrüoloogia osakond, Gottfried Schatzi uurimiskeskus, Grazi meditsiiniülikool, 8036 Graz, Austria;

10 Helios Klinikum, 13125 Berliin, Saksamaa

† Need autorid andsid käsikirjale võrdse panuse.

Abstraktne:

Preeclampsia (PE) is characterized by the onset of hypertension (≥140/90 mmHg) and the presence of proteinuria (>300 mg/l/24 h uriin) või muud ema organite talitlushäired. Inimese PE ajal on täheldatud neerukahjustusi. Mõned uuringud näitavad, et PE diagnoosiga naistel on suurem risk hilisemas elus neeruhaiguste tekkeks. Inimuuringutes ei saa aga PE-d kui selle arengu üht põhjust uurida. Siin püüdsime uurida PE mõju sünnitusjärgsele neerukahjustusele väljakujunenud transgeense PE roti mudelis. Inimese angiotensinogeeni geeni kandvatel emastel rottidel tekib pärast paaritumist inimese-reniini geeni kandvate isaste rottidega preeklamptiline fenotüüp, kuid nad on normotensiivsed enne ja pärast rasedust. Raseduse ajal tekkisid rottidel kerged tubulaarsed ja glomerulaarsed muutused, mida hinnati histoloogilise analüüsiga, suurenenud neerukahjustuse markerite geeniekspressioon, naguneerudvigastusmarker 1 ja sidekoe kasvufaktor ning albuminuuria võrreldes emaste metsiktüüpi rottidega (WT). Kuid neli nädalat pärast sünnitust puudus enamik PE-ga seotud neerupatoloogiaid, sealhulgas albuminuuria ja kõrgenenud biomarkeri ekspressioon. Tuvastati ainult glomerulaarkimbu kerge suurenemine. Üldiselt mõjutasid transgeensete PE-rottide glomerulaar- ja tubulaarsed funktsioonid raseduse ajal. Kuid peaaegu kõik need PE ajal täheldatud patoloogiad taastusid pärast sünnitust.

Märksõnad: preeklampsia;neerudvigastus; sünnitusjärgne; transgeense roti mudel

Cistanche hoiab ära neerukahjustuse

Chengdu Wecistanche võib pakkuda cistanche tooteid

1. Sissejuhatus

Preeclampsia (PE) affects about 5–8% of all pregnancies worldwide, with a high maternal mortality rate due to complications such as eclampsia, HELLP-syndrome, or edema [1–3]. According to the International Society for the Study of Hypertension in Pregnancy, PE is characterized by the development of gestational hypertension (resting systolic blood pressure (BP) ≥ 140 and/or diastolic ≥ 90 mmHg) at or after 20 weeks of gestation in previously normotensive women [1]. Since proteinuria is present in only 75% of all cases [4], the American College of Obstetrics and Gynecology adapted guidelines for PE established in 2019 stated that "either proteinuria (>300 mg/l 24-h uriini kohta) või muu ema elundi talitlushäire" [1,5]. PE-i aluseks olev patoloogia ei ole veel täielikult teada, kuid platsenta päritolu, millega kaasnevad immunoloogilised düsfunktsioonid ja vaskulaarsed muutused, mängib rolli. oluline roll, mis on tingitud olulisest pikaajalisest kardiovaskulaarsest ja metaboolsest riskist emadele ja lastele [6–9]. Mitmed uuringud näitavad, et PE ei ole seotud ainult ägeda haigusega.neerudvigastusi, kuid võib põhjustada tõsist neeruhaigust ja -puudulikkust nii pärast sünnitust kui ka hilisemas elus [10–12]. Neerukahjustust inimese PE ajal kirjeldasid esmakordselt Spargo et al. glomerulaarsete endoteliinidena, mis tähendab laienenud glomeruleid koos kapillaari valendiku hävimisega [13], mis on tingitud endoteeli- või mesangiaalrakkude hüpertroofiast [14]. Preeklampsiaga naistel on kirjeldatud glomerulaarskleroosi esinemist, kapillaaride ummistumist glomerulaarkapillaari seina paksenemise tõttu, makrofaagide infiltratsiooni ja endoteeli fenestrate tiheduse vähenemist [15–18]. Need struktuurimuutused, samuti vasokonstriktsioon ja plasmamahu vähenemine aitavad kaasa neerude filtreerimisvõime vähenemisele [15,19]. Preeklamptilise raseduse ajal esinev struktuurne neerukahjustus näib olevat pöörduv [19], samas kui sünnitusjärgne funktsionaalne mõju on olemas ning teatatud on PE seosest ja lõppstaadiumis neeruhaiguse (ESRD) tekkeriskist hilisemas elus. 20,21]. On tõendeid selle kohta, et avastamata krooniline hüpertensioon enne preeklamptilist rasedust suurendab inimestel sünnitusjärgset neeruhaiguse riski [12, 20, 21].

Neerukahjustust PE-raseduste ajal on iseloomustatud paljudes loommudelites. Glomerulaarsete muutustega seotud mehhanismid hõlmavad angiogeenset tasakaalustamatust [9, 22–24]. Vähendatud emaka perfusioonirõhu (RUPP) rotimudelis PE korral sai neerukahjustuse taastada vaskulaarse endoteeli kasvufaktori (VEGF) raviga [25, 26]. Lisaks näib preeklamptilise neerukahjustuse oluline mehhanism olevat suurenenud oksüdatiivne ja põletikuline stress, mis suurendab reaktiivsete hapnikuliikide (ROS) tootmist ja komplemendi aktivatsiooni [27–30]. Kuigi need mehhanismid põhjustavad raskeid neerukahjustusi raseduse ajal, puuduvad teadmised selle kohta, kas neerukahjustus esineb PE loommudelis pärast sünnitust. Sünnitusjärgsetele neerukahjustustele keskendunud loomkatsed on läbi viidud vaid üksikud. RUPP mudelis taastus keskmine arteriaalne vererõhk ja albuminuuria kaheksa nädalat pärast sünnitust. Glomerulaar- ega tubulaarset kahjustust ei esinenud, kuid glomerulaarfiltratsiooni kiirus vähenes [31].

Selle uuringu eesmärk oli hinnata PE sünnitusjärgset mõju lapseleneerudinimese reniin-angiotensinogeeni transgeense roti mudelis. Selles mudelis oli inimese angiotensinogeeni transgeensetel emastel rottidel normaalne vererõhk enne ja pärast rasedust. Neil tekkis hüpertensioon raseduse viimasel kolmandikul alles pärast paaritumist inimese reniini geeni sisaldavate isaste rottidega, nagu eelnevalt kirjeldatud [32,33]. Damsil tekkis raseduse ajal preeklamptiline fenotüüp [34], sealhulgas sünnitusjärgne südame ümberkujundamine [35]. Me oletasime, et pikaajalist neerukahjustust, mida on kirjeldatud PE puhul inimestel ja näriliste mudelitel, vahendab kõrge vererõhk (hüpertensiivne kriis) preeklamptilise raseduse ajal ja see taastab sünnitusjärgse.

Tsistanche ekstrakti kasulikkus: ravige neeruhaigusi

2. Tulemused

2.1. Preeklamptiline fenotüüp transgeense roti mudelis

Rasedatel transgeensetel emastel rottidel ilmnesid PE sümptomid (joonis 1A), samas kui WT rottidel neid sümptomeid ei tekkinud. Vererõhk preeklamptilise raseduse ajal tõusis pärast platood 12. päevalt 14. päevani ja vähenes normotensiivsete väärtusteni kahe päeva jooksul pärast rasedust. Vererõhk püsis normotensiivsena kuni uuringu lõpuni ja neli nädalat pärast sünnitust (joonis 1B). Võrdluse võimaldamiseks mõõdeti WT rotte üksikutel päevadel (p0, 9, 15, 19, 28, 35, 42, 49). Keskmine arteriaalne vererõhk oli tiinuse ajal WT rottidel vastavalt 105,3 ± 4,6 mmHg ja preeklampsiaga tiinetel rottidel vastavalt 148,4 ± 2{26}},7 mmHg. See oli oluliselt kõrgem preeklamptilise raseduse korral (metsiktüüp, WTd19 vs. PEd19; p < 0,0001)="" ja="" normaliseerunud="" sünnitusjärgsel="" perioodil="" (ped19="" vs.="" ped49,="" p="">< 0,0001;="" joonis="" 1c).="" pe-rottidel="" ilmnes="" raseduse="" ajal="" oluliselt="" kõrgem="" uriini="" albumiinisisaldus="" võrreldes="" uriini="" kreatiniiniga="" kui="" wt-ga="" (wtd21="" vs.="" ped21,="" p="0.0024)" ja="" albumiini="" eritumine="" taastus="" pärast="" sünnitust="" pe-rottidel="" (ped21="" vs.="" ped49,="" p="" {{35).="" }}.0004;="" joonis="" 1d).="" kuigi="" uriini="" albumiin="" oli="" pärast="" sünnitust="" wt="" rottidel="" kõrgem="" kui="" pe="" rottidel,="" ei="" olnud="" olulist="" erinevust="" (wtd49="" vs="" ped49,="" p="0.4917)." pe-l="" oli="" üldine="" mõju="" albumiini="" tasemele="" erinevatel="" ajahetkedel="" (2w-anova:="" f(1;29)="16.15;" p="">

Nagu on näidatud ühes meie varasematest uuringutest, näitasid preeklampsia rotid platsenta ja loote kehakaalu langust võrreldes kontrollrottidega [35], mistõttu ema kehakaal vähenes tiinuse lõpus. Keskmineneerudkaal transgeensete ja WT rottide vahel oli sarnane (WTd{{0}},8 g ± 0.{{10}}6; PEd21=0,7 g ± 0,07) ja pärast rasedust (WTd50=0,9 g ± 0,05; PEd50=1,0 g ± 0,06) (joonis S1A).Neerkaal, mis oli normaliseeritud ema kehakaalu järgi, näitas oluliselt kõrgemaid väärtusi PE rühmas võrreldes WT-ga (WTd21 vs PEd21 p=0,002; WTd50 vs PEd50 p=0,001; joonis S1B) See mõju oli peamiselt tingitud ema kehamassi vähenemisest PE rühmas, mis oli peamiselt tingitud poegade ja platsentade arvu ja kaalu vähenemisest PE rühmas [35].

2.2. Neerukahjustuse markergeenide muutunud ekspressioon

Tubulaarsete vigastuste, angiogeneesi, fibroosi, kudede põletiku või oksüdatiivse stressi spetsiifilised geenid valiti hüpoteesipõhiselt ja analüüsiti PE ja WT raseduse ajal ja pärast seda. Kõige olulisemad muutused neeru geeniekspressioonis tuvastati preeklamptilise raseduse ajal (joonis 2A). Spetsiifiliste torukujuliste vigastuste markerite ekspressioon,neerudvigastusmolekul 1 (Kim-1, joonis 2B) ja neutrofiilide želatinaasiga seotud lipokaliin 2 (Ngal, joonis 2C) suurenesid preeklamptilise roti tiinuse ajal märkimisväärselt 25- korda. Nefriin (Nphs-1), mis on osa podotsüütide pilu diafragmast, ekspresseerub sarnaselt PE- ja WT-rottidel tiinuse ajal, mis viitab sellele, et pilumembraani ei kahjustata. Enamik geene, mis on seotud angiogeneesi ja vasokonstriktsiooniga, ekspresseerusid sarnaselt preeklamptilise raseduse ajalneerud. Ei endoteliin-1 (Et-1), veresoonte endoteeli kasvufaktor (VEGF-a) ega nende retseptorid (Flt-1, Flk-1, sool-1 ) näitas raseduse ajal oluliselt muutunud geeniekspressiooni. Fibrootiliste muutuste tuvastamiseksneerudkude, markergeenid, nagu kollageen tüüp 1 ja 4 (Col-1, Col{3}}), sidekoe kasvufaktor (GF) ja transformeeriv kasvufaktor-beeta 1 (Tgf -1) mõõdeti. Col-1 ja Ctgf olid preeklamptilise raseduse ajal oluliselt muutunud (joonis 2A, D). Põletikuliste protsesside iseloomustamiseks kasutati spetsiifilisi markergeene CD68 (diferentseerumise 68 molekuli klaster) ja Mcp-1 (monotsüütide kemoatraktantne valk 1). CD68 ekspressioon suurenes märkimisväärselt preeklamptilise raseduse ajal võrreldes WT-ga. Neerude oksüdatiivse stressi markerid hõlmavad NADPH oksüdaasi 2 (Ncf-1, Ncf-4, Cyb-a, Cyb-b) ja neeruspetsiifilise NADPH oksüdaasi 4 (Nox-4) komponente. ). Ncf-4 ekspressioon suurenes PE ajal veidi, kuid oluliselt (joonis 2E).

Keskendudes geeniekspressioonile pärast preeklamptilist rasedust, ilmnesid vaid mõned olulised erinevused (joonis 2A). Põletikumarker CD68 suurenes oluliselt pärast preeklamptilist rasedust võrreldes sünnitusjärgse WT-ga. Nefronikahjustuse, angiogeneesi ja vasokonstriktsiooni ning fibroosiga seotud geenid ekspresseerusid sarnaselt PE- ja WT-rottidel pärast rasedust. Oksüdatiivse stressi marker Ncf-4 näitas PE-rottidel jätkuvalt veidi kõrgemat ekspressiooni võrreldes sünnitusjärgse WT-ga (joonis 2E). Lisaks suurenes sünnitusjärgselt PE-rottidel Nox-4 ekspressioon oluliselt (joonis 2F). Geeni ekspressiooni- ja p-väärtused on näidatud tabelis S2.

cistanche ekstrakti pulbri eelised: põletikuvastane

2.3. Kerge struktuurne neerukahjustus

Glomerulite suurenemine ja suurenenud kapillaaride seina paksenemine, mis on glomerulaarsete endoteliinide tunnus, kaasnevad albuminuuriaga inimese ja roti preeklamptilise raseduse korral [13, 17, 27]. Esiteks hindasime glomerulaarset kahjustust roti preeklamptilise raseduse ajal ja glomerulite tunnuseid, nagu suurus ja tihedus. Histoloogilises analüüsis PE raseduse ajal glomerulaari suurus ei muutunud (joonis 3A). Glomerulaarkapillaaride piirkonna iseloomustamise kaudu saab tuvastada kapillaaride seina paksenemist ja glomerulaarskleroosi. PE-rottidel oli suurem perioodiline happe-Schiffi (PAS)-positiivse ala protsent (WTd21 vs. PEd21, p=0.0293; joonis 3B). Neerutorusüsteem on füsioloogiliseks funktsioneerimiseks üliolulineneerud. Preeklampsia rottide tubulaarsete kahjustuste hindamine viidi läbi torukujulise vigastuse skoori, põletiku ja perivaskulaarse fibroosi analüüsimise teel. Torukujuline süsteem PE-raseduse ajal oluliselt ei muutunud, kuid nende raseduste ajal esines kerge torukujuline vigastus. Täheldati neerutorukeste laienemist ja harja piiride hõrenemist (joonis 3C). Põletik kvantifitseeriti makrofaagide arvu järgi neeru medullas. Võrdlus ei näidanud olulist erinevust raseduse ajal, kuigi PE-rottidel oli suurem, kuid mitte märkimisväärne arv CD68--positiivseid rakke, mis jäid vahemikku 10–50 vaatevälja kohta (joonis 3D). Suhteline fibrootiline pindala arvutati perivaskulaarse fibroosi kvantifitseerimiseks, kuigi PE- ja WT-rottide veresooned tundusid raseduse ajal sarnased (joonis 3E).

Lisaks viidi läbi glomerulaarsete ja tubulaarsete kahjustuste iseloomustusneerudpärast PE ja WT rottide tiinust. Glomerulaarkimbu pindala suurenes mõlemas rühmas pärast sünnitust; aga võrreldes WT-ga olid glomerulid oluliselt suurenenud (WTd50 vs. PEd50, p=0.0406; joonis 3A). Glomerulaarse kimpu pindala ei muutunud pärast sünnitust PE-rottidel võrreldes WT-rottidega (joonis 3B). Kalduvus neerutuubulite kahjustusele esinesneerudPE-rottidelt pärast rasedust, kuigi mitte oluliselt (joonis 3C). Sarnaselt raseduse ajal tehtud tähelepanekutele onneerudPE-rottidel oli pärast sünnitust rohkem CD68 pluss rakke vaatevälja kohta, kuid võrdlus ei olnud oluline (joonis 3D). Perivaskulaarses fibroos PE- ja WT-rottide vahel sünnitusjärgselt olulisi erinevusi ei esinenud (joonis 3E)

2.4. Neerufunktsioon on PE-raseduse ajal veidi muutunud

Iseloomustamiseks mõõdeti uriini parameetreidneerudfiltreerimine ja eritumine. Neerukahjustuse korral võib reabsorptsiooni mõjutada. Rühmapõhises võrdluses vähenes uriini kreatiniini sisaldus preeklamptilise raseduse ajal ja pärast seda oluliselt võrreldes WT-ga ja PE-rühmas 19. päeval võrreldes d49-ga (iga võrdlus p < 0,0001;="" joonis="">

Samamoodi oli naatrium oluliselt madalam PE d19-s võrreldes PE d49-ga (p=0.0263; joonis 4C). Mõõdetud elektrolüütidest oli preeklamptilise raseduse ajal oluliselt mõjutatud ainult kaaliumi ja kloriidi kontsentratsioon (K pluss p=0,0063; Cl−p=0,0034; joonis 4D,E). Lisaks oli kaaliumisisaldus WT d19 korral oluliselt madalam kui WT d49 (K pluss p=0,0042; joonis 4D). Märkimisväärselt oli PE-rottidel suurem uriinieritus võrreldes rasedate WT-ga või pärast sünnitust.

3. Arutelu

Uurisime PE mõjuneerudtransgeense roti mudelis ja analüüsiti, kas neerumuutused ilmnesid pärast sünnitust. PE ajal muutus neeru geeniekspressioon. Esinesid kerged glomerulaarsed muutused koos suurenenud glomerulaartiheduse ja tubulaarsete muutustega. Võib tuvastada suurenenud albumiini eritumist. Muutunud ekspressioon esines nefronikahjustusega (Kim-1, Ngal), fibroosiga (Col-1, Ctgf), põletikuga (CD68) ja oksüdatiivse stressiga (Ncf-4) seotud markergeenides. . Torukujulise vigastuse biomarkeri Kim-1 [36] ekspressioon tõusis PE ajal ja normaliseerus pärast rasedust, mis näitabneerudkahju ainult PE ajal. Tuvastati ainult Ngal ekspressiooni kerge 25-kordne suurenemine, samas kui teised teatasid torukujulise vigastuse korral kiirest 1000-kordsest suurenemisest [37]. Täheldasime kergeid muutusi oksüdatiivse stressi markergeenide (Ncf-4, Nox-4) ekspressioonis neerudes PE ajal. Need tähelepanekud käivad koos uuringutega, mis kirjeldavad kõrgenenud ROS-i ja mitokondriaalse funktsiooni halvenemist raseduse ajal.neerudteistest PE mudelitest [28,30]. On näidatud, et agonistlikud autoantikehad (AT1-AA), mis esinevad preeklampsiaga naiste plasmas, on seotud ROS-i tootmisega erinevates kudedes, sealhulgasneerud[28,38]. Meie PE roti mudelis taastus enamik neerumuutusi pärast sünnitust. Pärast PE-d püsisid ainult oksüdatiivse stressi markergeenid (Ncf-4, Nox-4), kerge glomerulaarsuurenemine ja vähenenud kreatiniini eritumine. Ema kehakaal vähenes PE ajal madalama platsenta ja loote kaalu tõttu, kuid mitte erinev sünnitusjärgselt, nagu on näidatud varem [34, 35]. Seetõttu eeldame, et kreatiniini eritumise muutused ei tulenenud lihasmassi erinevustest, vaid lisaks neerufunktsiooni kahjustusest.

Me oletasime, et preeklamptiline rasedus üksi ei ole neerukahjustuse soodustamiseks piisav ja mõjutab edasisi südame-veresoonkonna kahjustusi, nagu inimestel täheldati. Enamik teiste PE loommudelite uuringuid näitavad raseduse ajal neerumuutusi, nagu glomerulaarde suurenemine, fibroos, glomeruloskleroos ja proteinuuria [39–42]. Kuid vaid vähesed keskenduvad PE rasedusjärgsele mõjuleneerud. RUPP mudelis kordusid BP ja albuminuuria kaheksa nädalat pärast sünnitust ning glomerulaar- ega tubulaarset kahjustust ei tuvastatud [31]. Dahli soolatundlikel rottidel esinesid emastel rottidel kaheksa nädalat pärast sünnitust glomerulaar- ja tubulaarsed vigastused, mis tuvastati nefriini ja KIM-1 suurenenud valgusisaldusena uriinis [43]. Koos meie leidudega toetavad need tulemused tõendeid selle kohta, et püsiv kõrge vererõhk võib olla pärast preeklamptilist rasedust inimestel täheldatud neerukahjustuse põhjus. Lisaks surve sõltuvusneerudkahju on esile toonud Mori jt. Nad kasutasid angiotensiin II indutseeritud hüpertensiooni mudelit, milles neerud olid kaitstud enamiku neeruvigastuste (fibroos, tubulaarsed kahjustused) eest, kui kõrget neerude arteriaalset rõhku reguleeris krooniline servokontroll [44]. Need leiud toetavad meie arusaama, et rasedusega seotud neerukahjustus PE-s sõltub rasedusega seotud hüpertensiooni pöörduvusest PE-s.

Meie esialgne hüpotees põhines tähelepanekutel naiste kohta, kellel oli anamneesis PE, kes näitasid suuremat riski haigestuda hilisemas elus ESRD või kroonilise neeruhaiguse tekkeks [12,45]. Enamikul naistest ei olnudneerudfunktsiooni test enne PE [45]. Meie tulemused näitavad, et PE üksi ei pruugi olla neeruhaiguse tekitamiseks piisav. Dai et al. väidavad, et naistel, kellel oli varem esinenud hüpertensioon, millele kaasnes PE, oli kõrgeim risk ESRD tekkeks võrreldes nendega, kellel oli kas juba olemasolev hüpertensioon või PE [20]. Kattah et al. näitas, et naistel, kellel on anamneesis PE, oli neli korda suurem risk haigestuda ESRDsse ja 20 protsendil neist oli vähenenud risk.neerudfunktsioon enne rasedust [21]. Need uuringud rõhutavad varem avastamata hüpertensiooni potentsiaalset rolli, mille tulemuseks on kattuv PE, mis aitab kaasa neeruhaigusele. Lisaks soovitame, et neeruhaiguse tekkimine pärast preeklamptilist rasedust on tingitud mitmetest neerufunktsiooni mõjutavatest haigustest. Mitme tabamuse hüpoteesi kohaselt aitaksid kaks või enam sündmust kaasa neeruhaiguse tekkele ja PE võib olla ainult üks tegur.

Meie uuring näitab eksperimentaalse protseduuriga seotud piiranguid, kuna kaasasime kaks ajapunkti, raseduse lõpus ja sünnitusjärgselt. Organid koguti ja analüüsiti vastavalt mõlemast ajapunktist, kuid pikisuunalist BP mõõtmist sai teha ainult nende puhul, kes ohverdati pärast sünnitust. Mõlemad rühmad esitasid raseduse ajal võrreldavad BP väärtused. Lisaks mõõdeti pikisuunalist BP-d ainult aeg-ajalt WT-s, et täita loomkatsetes 3R põhimõtet. Meie rühma varasemad uuringud näitasid, et WT-rottidel ei arene raseduse ajal hüpertensioon [34].

Kokkuvõtteks võib öelda, et PE transgeense roti mudel näitas raseduse ajal kerget neerukahjustust, mis enamasti lahenes pärast sünnitust. Preeklamptilise roti raseduse ajal esines väike neerukahjustus koos oksüdatiivse stressi biomarkerite tõusuga ja glomerulaarfiltratsiooni muutustega. Need tulemused osutasid kergele kahjustuseleneerudpärast preeklamptilist rasedust ja seetõttu ei saanud see täielikult välistada PE kui sünnitusjärgse neeruhaiguse riskitegurit. Arvame, et neerukahjustuse ja sellele järgneva puudulikkuse korral on vaja täiendavaid neerufunktsiooni mõjutavaid sündmusi.

cistanche tubolosa testosteroon: Cistanche võib ravida neeruhaigusi ja parandada seksuaalfunktsiooni

4. Materjalid ja meetodid

4.1. Loomade uuring

Inimese angiotensinogeeni geeni (Tg(hAgt)L1623) suhtes transgeensed emased SD-rotid paaritati inimese reniinigeeni (Tg(hRen)L10J) suhtes transgeensete isaste SD-rottidega, nagu eelnevalt kirjeldatud [32,35]. Emastel rottidel kontrolliti iga päev tupekorki, mida eeldati tiinuse esimesel päeval (d1). Transgeensete loomade ristamise tulemusel tekkinud rasedatel transgeensetel emastel rottidel tekkis tüüpiline preeklamptiline fenotüüp (PE) koos hüpertensiooni ja albuminuuriaga ning neid kasutati katseprotseduuris [32]. SD metsiktüüpi (WT) emased ja isased ristati ja neid kasutati kontrollina. Kõiki rotte hoiti standardtingimustes kontrollitud temperatuuriga 22 ± 2 °C, õhuniiskusega 55 ± 15 protsenti ja 12:12-tunnise valguse-pimeduse tsükliga. Loomadel oli kogu katse vältel ad libitum toitu (Nuusutamine V{14}}) ja vett. Rotid surmati kahes erinevas lõpp-punktis: tiinuse lõpus (21. päev, n=9WT; 8PE) ja neli nädalat pärast sünnitust (50. päev, n=9WT; 11PE) peade mahavõtmisega sügava isofluraani all. anesteesia, viimane ajapunkt vastab u. inimestel kaks aastat [46]. Elundid ja veri koguti ja säilitati kuni edasise kasutamiseni temperatuuril –80 ◦C. Neerukapsel, rasvapadi ja neerupealised eraldati sellestneerud, mis edasiseks analüüsiks lõigati risti pooleks. Uuringu on heaks kiitnud kohalikud omavalitsused (Berliin tervishoiu- ja sotsiaalamet).

4.2. Vererõhu mõõtmine

DSI telemeetriaseadmed (HD-T11) implanteeriti inhalatsioonianesteesia all isofluraaniga (isofluraan-õhk komposiit 2–2,5 protsenti) 14 päeva enne paaritumist, nagu eelnevalt kirjeldatud [34]. Seega saab vererõhku (BP) mõõta regulaarselt enne rasedust, selle ajal ja pärast sünnitust 5-minutiliste intervallidega. Loomi peeti BP salvestuste ajal üksikult.

4.3. Uriini mõõtmine

24-tunnine uriin koguti raseduse ajal 19. päeval ja pärast rasedust 49. päeval, nagu eelnevalt kirjeldatud [47]. Uriiniproove analüüsiti kliinilise keemia analüsaatoriga AU480 (Beckman Coulter), järgides tootja juhiseid. Albumiini kontsentratsiooni mõõtmiseks viidi läbi otsene konkureeriv ELISA (CellTrend, Luckenwalde, Saksamaa). Kloriidi, kaaliumi ja naatriumi kogused tuvastati ioonselektiivsete elektroodide abil. Kreatiniin muundati ensümaatiliselt ja kvantifitseeriti kolorimeetriliselt (nr OSR61204, Beckman Coulter, Krefeld, Saksamaa). Kõik uriini parameetrid normaliseeriti kas diureesi või kreatiniini kontsentratsiooni järgi.

4.4. Geeniekspressiooni analüüs

Geeniekspressiooni analüüs viidi läbi nagu eelnevalt kirjeldatud [48]. Lühidalt, külmutatudneerudkude homogeniseeriti Qiazol Lysis Reagent (Qiagen) ja Precellys keraamiliste helmestega (Peqlab Biotechnology, Erlangen, Saksamaa). Kogu RNA eraldati RNeasy Mini Kitiga (Qiagen, Hilden, Saksamaa) järgides tootja protokolli. Suure mahutavusega cDNA pöördtranskriptsioonikomplekt (Applied Biosystems, Waltham, USA) mRNA komplementaarseks DNA-ks (cDNA). Suhtelise geeniekspressiooni kvantifitseerimiseks viidi läbi pöördtranskriptsiooni-kvantitatiivne polümeraasi ahelreaktsioon (RT-qPCR), kasutades QuantStudio 3 reaalajas PCR süsteemi (Applied Biosystems) kas TaqManFast Universal PCR Master Mix või Fast SYBR Green Master Mix ( mõlemad Thermo FisherScientifific, Waltham, MA, USA). Praimer ja sondid kujundati kasutades Primer Express3.{7}} ja sünteesis BioTez, Saksamaa (praimeri järjestused: tabel S1). Praimerid lahjendati lõppkontsentratsioonini 10 mM, sondid 5 mM. Sihtmärk-mRNA ekspressiooni analüüsiti kvantitatiivselt standardkõvera meetodil. Kõik ekspressiooniväärtused normaliseeriti majapidamisgeeniga 18S. Geenid valiti enne analüüsi hüpoteesipõhiselt.

4.5. Immunohistokeemia

Neerviilud fikseeriti 4-protsendilises formaliinis (24 tundi), dehüdreeriti ja sisestati parafiini. Theneerudlõigati elektroonilise pöörleva mikrotoomiga (Thermo Fisher) risti 2- ja 4-µm paksusteks viiludeks.Neerviilud värviti ja skaneeriti samaaegselt, kasutades Slide Scanner Panoramic MIDI-d objektiivi plaan-kromaatiga 20×/0.8× (Zeiss), et tagada võrreldavus, nagu eelnevalt kirjeldatud [35]. Himaalaja-eosiini (HE) värvimine viidi läbi vastavalt tootja protokollile (T865, Carl Roth, Karlsruhe, Saksamaa). Glomerulaarsete endoteliinide tuvastamiseks mõõdeti glomerulaar-kapillaarkimbu piirkonna ümbermõõt kolmes kortikaalses vaateväljas neeru kohta (n=5). Torukujulise kahjustuse poolkvantitatiivne analüüs viidi läbi, kasutades eelnevalt kirjeldatud vigastusskoori [49]. Viisteist medullakujutist (200-kordne suurendus) hinnati pimendatud viisil, võttes arvesse torukujulise laienemise, degeneratsiooni, nekroosi, kihi moodustumise ja pintsli piiri kaotamise protsenti. Süsivesikuterikaste komponentide (glükogeeni) tuvastamiseks glomerulites kasutati perioodilist happe-Schiffi (PAS) värvimist. Objektiklaase inkubeeriti 0,5-protsendilises perioodilises happes (Sigma Aldrich, 5 minutit, Steinheim, Saksamaa), loputati ja rakendati Schiffi reaktiivi (Merck, Darmstadt, Saksamaa) (10-min tumedus). Slaidid värviti Himaalaja värviga (Carl Roth, 5 min). PAS-positiivset pindala 8–10 glomerulaarpiirkonnast neeru kohta (n=5) mõõdeti ImageJ värviläve pistikprogrammi [50] abil. Perivaskulaarse fibroosi mõõtmiseks kasutati Masson-Goldner trikroomi (MGT) värvimist. Neeruklaasid (2 µm) värviti vastavalt tootja protokollile (3459, Carl Roth). Mõõdeti kolme hästi raamitud arteri sidekoe, veresoone ja valendiku ümbermõõt neeru kohta. Fibrootiline pindala arvutati veresoonte kogupindala suhtes. Makrofaagid neerukoes värviti hiire anti-roti CD68 antikehaga (kloon ED1; nr MCD341R, Bio-Rad, kon. 1:100) [51,52]. Kasutati sekundaarset Cy3- konjugeeritud eesli anti-hiire-IgG antikeha (nr 715-165-151, Jackson ImmunoResearch) (kon. 1:300) ja tuumad värviti Vectashieldi kinnitussöötmega DAPI-ga (40, 6-diamiid-2-fenüül-Lindal; nr H-1200; Vector Laboratories, Burlingame, USA). CD68-positiivsed rakud loendati käsitsi kümnes vaateväljas (suurendus 200x) neeru kohta (n=5), kui tuum kolokaliseeriti Cy3 signaaliks. Histoloogiline analüüs viidi läbi pimendatud viisil, kasutades tarkvara juhtumivaaturit (3D Hitech Ltd., Budapest, Ungari) ja Image J (National Institute of Health, Bethesda, MD, USA).

4.6. Statistika

Statistiline analüüs viidi läbi tarkvara GraphPad Prism 6 ja 7 abil. Väärtused on esitatud kui keskmine ± standardhälve (SD). Tulemused kuvatakse kujul n=8–11 ravirühma ja ajapunkti kohta. Kõrvalekalded tuvastati ROUT-meetodiga, kasutades maksimaalset valede avastamise määra 1 protsenti, väärtusi testiti Gaussi jaotuse suhtes ja rühmade võrdlemiseks kasutati tavalist kahesuunalist ANOVA-d (dispersioonanalüüs) koos Sidaki mitmekordse võrdlustestiga. F-väärtus on näidatud vastavate vabadusastmetega. p-väärtused on näidatud kui * Väiksem või võrdne 0.{{10}}5, ** Väiksem või võrdne 0.01, *** Väiksem kui või võrdne 0,001, **** Väiksem või võrdne 0,0001.

desertliving cistanche: parandab neerufunktsiooni