Jujube polüsahhariidid leevendasid kroonilise neeruhaigusega rottide aneemiat

Kontakt: emily.li@wecistanche.com

Shiying Huang et al

Abstraktne

Jujube polüsahhariidid (JP) on üks aktiivsetest toidust saadavatest glükaanidest Ziziphus jujuba puuviljades, mida on peetud verepuuduse raviks. Selles uuringus akroonilineneerudhaigus(CKD) roti mudelit kasutati JP ja selle mehhanismi mõju hindamiseks CKD-ga seotud aneemiale. CKD rottidel paranes JP-ravi märkimisväärseltneerudfunktsiooni, neerudpatoloogilinevigastusja hematoloogilised parameetrid, sealhulgas punaste vereliblede, hemoglobiini, hematokriti ja trombotsüütide arvu suurenemine. Lisaks näitasid LC-MS / MS suunatud metaboolsed tulemused, et JP soodustas CKD rottidel lühikese ahelaga rasvhapete (SCFA) vabanemist. Peale selle muutis JP seerumi erütropoetiini (EPO) taset, neeru EPO mRNA-d janeerudEPO valk HIF-signalisatsiooni kaudu. Need tulemused annavad ühiselt tõendeid selle kohta, et JP mõju CKD-ga seotud aneemiale võib olla seotud SCFA-de vabanemise ja erütropoetiini tootmise reguleerimisega, toetades JP edasist arendamist toidulisanditena CKD-ga seotud aneemia ravis.

Märksõnad: Jujube polüsahhariididKroonilineneerud haigusAneemia Erütropoetiin Hüpoksiast indutseeritav faktor – lühikese ahelaga rasvhapped

Cistanche kohta lisateabe saamiseks klõpsake siin

1. Sissejuhatus

Kroonilineneerud haigus(CKD) on defineeritud kui neeru struktuursete kõrvalekallete või funktsionaalsete kahjustuste kliiniline sündroom ja see muutub kogu maailmas üha suuremaks rahvatervise koormaks (Webster, Nagler, Morton ja Masson, 2017). Neeruaneemia on kroonilise neeruhaiguse üks levinumaid tüsistusi, mis suurendavad surmaohtu (Locatelli et al., 2019). Erütropoetiini (EPO) tootmise puudulikkus on kroonilise neeruhaiguse tunnustatud peamine aneemiat soodustav tegur (Pappa, Dounousi, Duni ja Katopodis, 2015). EPO toodetakse maksas janeerud, mis on erütrotsüütide tootmiseks hädavajalik (Lappin & Lee, 2019). Hüpoksia tingimustes võib hüpoksiaga indutseeritav faktor (HIF) aktiveerida EPO ekspressiooni (Sch¨ odel & Ratcliffe, 2019). Seega on HIF-i sihtimist EPO tootmise esilekutsumiseks peetud uudseks terapeutiliseks strateegiaks CKD-ga seotud aneemia raviks.

Jujube on Ziziphus jujuba Milli viljad. (Rhamnaceae), tuntud ka kui Hiina datli. Jujube on pikaajaline traditsiooniline kasutusala ravimtaimena ja toidulisandina tuhandeid aastaid. Jujube’i kasutatakse terviselisandina inimestele, kellel on hematogeenne või krooniline alatoitumus. Jujube polüsahhariidid (JP), vees lahustuv komponent, mis koosneb monosahhariidi ja uroonhappe erinevatest suhetest (Ji, Hou, Yan, Shi ja Liu, 2020), on üks jujube aktiivsetest koostisosadest (Ji et al., 2017). ), millel on hepatoprotektiivne toime ja immunomoduleeriv toime ning mis suurendab soolebarjääri funktsiooni (Liu et al., 2015, Yue et al., 2015). Tõepoolest, arvatakse, et JP-l on potentsiaalne mõju aneemiale. Kuid JP molekulaarne mehhanism aneemia ravis on endiselt vähem teada.

Viimastel aastatel on metaboomikat laialdaselt kasutatud, et mõista võimalikke tegureid, mis aitavad kaasa haiguse progresseerumisele. Suunatud metaboolikat on laialdaselt kasutatud keerukate inimese haiguste, näiteks kroonilise neeruhaiguse, molekulaarsete markerite tuvastamiseks. Indoksüülsulfaat (IS) ja p-kresüülsulfaat (PCS) olid CKD progresseerumise biomarkerid (Meijers & Evenepoel, 2011) ning trimetüülamiin-N-oksiidi (TMAO) taseme tõus võib otseselt põhjustada neerutuubulointerstitsiaalset fibroosi ja düsfunktsiooni. (Tang et al., 2015). Lühikese ahelaga rasvhapped (SCFA-d), soolestiku mikroobidest sõltuvad metaboliidid, on energiasubstraadid, millel on võime mõjutada erinevaid füsioloogilisi protsesse (LeBlanc et al., 2017), ja on teatatud, et SCFA-de vähenemine aitab kaasa kroonilise neeruhaiguse progresseerumisele. (Koh, De Vader, Kovatcheva-Datchary ja B¨ ackhed, 2016, Wang et al., 2019). Lisaks suutsid SCFA-d kaitsta neerude struktuuri kahjustuste eest oksüdatiivse stressi pärssimise kaudu (Li, Ma ja Fu, 2017). Samaaegselt on leitud, et SCFA-d avaldavad soodsat mõju raua imendumisele ja suurendavad embrüo/loote globiini geeniekspressiooni, mis kutsub esile erütropoeesi ja korrigeerib aneemiat (Tako, Glahn, Knez ja Stangoulis, 2014). SCFA-de mehhanismi neeruaneemia korral tuleb siiski veel selgitada.

Selles uuringus oletame, et JP võib reguleerida SCFA-de vabanemist ja stimuleerida HIF-vahendatud EPO tootmist, mille tulemuseks on neeruaneemia korrigeerimine. Siin uurime JP mõju neeruaneemia leevendamisel 5/6 nefrektoomiaga indutseeritud CKD rottidel, sealhulgas neerufunktsioonid ja hematoloogilised parameetrid. LC-MS/MS-i abil töötati välja sihipärane metaboolne lähenemine kaheksa SCFA määramiseks, sealhulgas äädikhape, propaanhape, isovõihape, võihape, 2-metüülvõihape, isovaleriinhape, palderjanhape ja heksaanhape väljaheites ja neeruproove ja sihtmärgiks olevate SCFA-de taset hinnatakse tervetel ja kroonilise neeruhaigusega rottidel. Lisaks ilmneb ka HIF-i signaalimise seotus JP-ga töödeldud rottidel.

Joonis 1. JP tüüpiline GC-MS kromatograafia. (A) Monosahhariidi struktuurvalemid pärast aldononitriilatsetaadi derivatiseerimist; (B) Standardse monosahhariidide segu ja JP hüdrolüüsitud monosahhariidide tüüpilised GC-MS segaioonkromatograafia (MIC) profiilid. Kromatograafia profiilide piigid vastasid (A) näidatud keemilisele markerile: 1. ramnoos, 2. arabinoos, 3. fukoos, 4. ksüloos, 5. mannoos, 6. glükoos, 7. galaktoos, 8. inositool (ISTD) ).

2. Materjalid ja meetodid

2.1. Jujube polüsahhariidi valmistamine

Z. jujuba viljad osteti ettevõttelt Shenzhen Huahui Pharmaceutical Co., Ltd. Materjalid kinnitas dr Jianping Chen vastavalt Hiina Rahvavabariigi farmakopöa 2015. aasta väljaandele. Vautšeri näidiseid hoiti Shenzheni traditsioonilise hiina meditsiini haiglas numbriga 18100601.

Toores JP ekstraheeriti jujuobist, nagu eelnevalt kirjeldatud, väikeste muudatustega (Ji et al., 2020). Lühidalt, juustu inkubeeriti 10 mahu veega (maht/mass) veevannis temperatuuril 80 °C 3 tundi ja ekstraheeriti 3 korda. Pärast filtreerimist ühendage filtraadid ja kondenseerige see segu rotaatoraurustis kontrollitud vaakumis. Kontsentraadi lahus sadestati täiendavalt neljakordse etanooli (maht/maht) lisamisega 4 °C juures 12 tunniks. Sade koguti tsentrifuugimisega ja kuivatati alandatud rõhul kuivaks, saades toorprodukti JP. Kalorimeetria abil määrati JP puhtus 80%.

2.2. Jujube polüsahhariidi monosahhariidse koostise iseloomustus

Shimadzu GC–MS süsteem (Shimadzu GC–MS TQ8040, mis on liidestatud Shimadzu GC 2010 plussiga), mis on varustatud EI allikaga, SH-Rxi-5Sil MS kapillaarkolonn (30 m × 0, 25 mm ID, 0, 25 µm kile paksus, Shimadzu) kasutati derivatiseerimisel hüdrolüüsitud monosahhariidide määramiseks jaotussuhtega 10: 1. Süstimise, iooniallika ja liidese temperatuur olid 250 °C, 200 °C ja 250 °C. Kolonni algtemperatuuri hoiti 1 minut 120 °C juures, seejärel tõsteti 15 °C/min kuni 160 °C ja hoiti 4 minutit, 2 °C/min kuni 165 °C ja hoiti 2 minutit, 20 °C. /

min kuni 195 ◦C, 5 ◦C/min kuni 250 ◦C ja hoitakse 3 minutit. Heeliumi kandegaasi voolukiirust hoiti 46 cm/s ja 2 μL igast proovist süstiti instrumenti. Analüüdid kvantifitseeriti valitud iooniseire (SIM) režiimis, sihtioon: ramnoos (m/z 129.00), arabinoos (m/z 115.00), fukoos (m/ z 103.{11}}), ksüloos (m/z 115.{13}}), mannoos (m/z 115.{15}}), glükoos (m/z 115.{17}}) ), galaktoos (m/z 115.{19}}), inositool (m/z 126.{21}}). Monosahhariidide standardid loetleti järgmiselt: L ( pluss )-arabinoos (1506–200202), fukoos (112014–201902), D-ksüloos (111508–201605), D-glükoos (110833–201908), ramnoos (110833–201908), ramnoos ), galaktoos (100226–201807), D-mannoos (140651–201805) osteti riiklikest toidu- ja ravimikontrolliinstituutidest. Inositool saadi firmalt Sigma (I7508-50 g).

Ekstraheeritud JP (10 mg) hüdrolüüsiti monosahhariidideks 10 ml 2 mol/L trifluoroäädikhappega (TFA) temperatuuril 105 °C 3 tundi ning JP hüdrolüüsitud monosahhariidid kontsentreeriti ja pesti alandatud rõhul temperatuuril 60 °C kuni. eemaldage TFA ja jäägid lahustati 2 ml vees. Lisati 250 µL 20 mg/ml hüdroksüülamiinvesinikkloriidi/püridiini lahust 100 µL hüdrolüüsitud monosahhariidide lahusesse ja hoiti 90 ◦C veevannis 45 minutit. Seejärel lisati 250 µl atseetanhüdriidi ja hoiti 90 °C veevannis veel 45 minutit. Reaktsiooni lõpus ekstraheeriti segu 5 korda 1 ml tsükloheksaaniga ja tsükloheksaani kiht kontsentreeriti mahuni 1 ml. Süstiti analüüsimiseks 1 µL supernatanti GC-MS-i (Li & Shi, 2013).

2.3. Loomad

Kõik katsed viidi läbi Guangzhou Hiina meditsiini ülikooli institutsionaalse loomahoolduse kasutamise komitee poolt heaks kiidetud protokollidega. Sprague-Dawley rotid, isased ja emased, kaaluga 180–220 g, saadi Guangdongi meditsiinilabori loomakeskusest (Foshan, Hiina, loa nr SCXK (Yue) 2008–0002) ja neid hoiti spetsiifilises patogeenivabas (SPF). ) loomarajatis 12-tunnise valguse-pimeduse tsüklis koos toidu ja veega vabalt.

Indutseeritud neerupuudulikkuse korral viidi läbi 5/6 nefrektoomia vastavalt eelmisele kirjeldusele (Chen et al., 2019). Kõik kirurgilised operatsioonid viidi läbi anesteesia all 10-protsendilise kloraalhüdraadiga. Näidisoperatsiooni rühm (n=6) tegi kõhuõõne avamiseks samu samme ja paljastas neeru. 5/6 nefrektoomiaga rotid jagati juhuslikult kahte rühma. Ravita rotid (CKD rühm, n=6) ja rotid, kes said JP-d (CKD pluss JP rühm, n=6) ​​suukaudselt sondiga annuses 1,2 g/kg/päevas. Pärast 90-päevast kasutamist algas 90-päevane manustamine. 90. päev oli JP viimane manustamisaeg rottidele ja 24 tunni pärast ohverdati loomad kõhuaordist vere võtmisega ning igalt rotilt koguti uriini-, väljaheite-, seerumi- ja neeruproovid. Kõiki proove hoiti enne edasist analüüsi temperatuuril –80 ◦C.

2.4. Biokeemiline analüüs

Tootja juhiseid järgides mõõdeti vere uurea lämmastikku (BUN) ja seerumi kreatiniini (Scr) kreatiniini seerumi tuvastamise komplekti ja BUN tuvastamise komplekti (WAKO, Ginza, Jaapan) abil ning uriini valku mõõdeti Elisa komplektiga (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institution, Nanjing, Hiina). Punaseid vereliblesid (RBC), hemoglobiini (Hb), hematokriti (HCT) ja trombotsüütide arvu (PLT) analüüsis Hematology Systems (Siemens 2021i, Erlangen, Saksamaa) vastavalt tootja juhistele.

2.5. Histoloogiline uuring

Neeru patoloogilise kahjustuse hindamiseks kasutati perioodilist happe-Schiffi (PAS) ja Massoni värvimist, nende hulgas PAS-värvimist, et paljastada neerutorukeste atroofia ja glomerulaarpiirkond, ning Massoni värvimine neeru interstitsiaalse fibroosi jaoks (Xie et al. , 2020). Kvantitatiivse analüüsi meetod viidi läbi vastavalt varasematele uuringutele (Chen et al., 2019). Lühidalt, tubulaarse atroofia skoor PAS-i värvimisel määratleti järgmiselt: 1. haruldane üksik atroofiline tuubul; 2. mitu atroofiliste tuubulite kogumit; 3. massiivne atroofia. Glomerulaarpiirkonda mõõdeti ZEN 3.1 tarkvaraga (Axio Scope A1, ZEISS, Jena, Saksamaa). Massoni värvimise fibrootilist ala mõõdeti Image J tarkvara abil (NIH, Bethesda, MD, USA). Atroofia skoori, glomerulaarpiirkonna ja fibrootilise piirkonna mõõtmiseks püüti juhuslikult vähemalt kümme mikroskoopilist välja (200 ×) kuuest rotist rühma kohta, kusjuures igal mikroskoopilisel väljal oli vähemalt üks glomerulus.

2.6. Immunohistokeemia analüüs

Iga proovi neeruparafiini osa (4 μm) dehüdreeriti järk-järgult kaks korda ksüleeniga ja etanooli gradiendiga (100–95–90–80–70 protsenti), antigeen saadi sidrunhappepuhvriga (pH 6,0). ) 30 minutit, blokeerituna 3-protsendilise vesinikperoksiidiga 10 minutit ja kitse seerumiga 30 minutit toatemperatuuril. Koelõike inkubeeriti eraldi primaarse antikehaga HIF-1 (Bioss, bs-0737R, 1: 500, partii: BA01279129), HIF-2 (Bioss, bs-1447 R, 1: 500, partii: BJ2044786) temperatuuril 4 °C 10 tundi ja HRP-ga konjugeeritud kitse küülikuvastast sekundaarset antikeha (Abcam, ab6712, 1:1000) toatemperatuuril 30 minutit, kasutati DAB-d (diaminobesid in). HRP aktiivsuse tuvastamiseks värviti tuum hematoksüliiniga. . Immunohistokeemiat analüüsiti mikroskoopiliste väljade all 400 korda igast rühmast ja fikseeriti skaala riba=20 μm Axio Scope A1, ZEISS, Jena, Saksamaa abil. Tuuma värvus hematoksüliiniga siniseks ja DAB immunopositiivsus oli pruun, sügavam DAB värvumine tähendab tugevamat immunohistokeemia positiivset.

2.7. EPO tuvastamine

Seerumi EPO sisaldus tuvastati ELISA komplektiga (Abcam, ab274398) ja katses viidati ELISA komplekti protokollile. Kokkuvõttes lisati proovile EPO antikehade kokteil ja inkubeeriti 1 tund. pärast inkubeerimist pesti iga süvendit 3 korda pesupuhvriga, lisati teisele inkubeeritavale 15 minutiks TMB-d ja peatas reaktsioon.

Neeru kogu mRNA ekstraheeriti külmutatud neerukoest Trizoli abil ja mRNA transleeriti cDNA-ks. Reaalajas PCR viidi läbi Maxima SYBR Green/ROX qPCR Master Mix'iga (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA USA, K0223) vastavalt tootjate protokollile. SYBR roheline signaal saadi ja mõõdeti ABI Prism 7300 Sequence Detection Systemiga (Applied Biosystems, Foster City, CA). Praimerid olid: 5′-CCG TCC CAG ATA CCA AAG TC-3′ ja 5′-ACC CGA AGC AGT GAA GTG-3′ rottide EPO (214 bps, NM_017001). 2); 5′- GTC GGT GTG AAC GGA TTT G-3′ ja 5′-TCC CAT TCT CAG CCT TGA C- 3′ GAPDH jaoks (181 bps, NM_017008.3), majapidamine gens sisekontrollina kõigil juhtudel. Ja geeniekspressiooni suhteline kvantifitseerimine arvutati normaliseeritud geeniekspressiooni meetodil (2−ΔΔCT).

Võrdsed kogused neerukoore lüsaatide valku laaditi ja eraldati 10-protsendilise SDS-geeliga ning seejärel kanti üle nitrotselluloosmembraanidele. Pärast blokeerimist 5% rasvavabas piimas 2 tundi toatemperatuuril inkubeeriti membraane primaarse antikehaga temperatuuril 4 °C üleöö. Seejärel inkubeeriti membraane HRP (mädarõika peroksidaas) konjugeeritud hiirevastase IgG-ga (Life Technologies) toatemperatuuril 45 minutit. HRP aktiivsus visualiseeriti Clarity Western ECL Substrate abil ja analüüsiti Tanoni pildisüsteemiga. Selles uuringus kasutati järgmist primaarset antikeha: monoklonaalne EPO (B- 4) hiirtelt (Santa Cruz Biotechnology, sc-5290, lahjendus 1/500), monoklonaalne -aktiin hiirtelt (Cell signaling Technology, 8H10D10, lahjendus 1/1000).

2.8. Lühikese ahelaga rasvhapete analüüs

Shimadzu UHPLC-LCMS/MS-süsteem (Shimadzu LC-MS 8045 liidestatud Shimadzu LC-20AD-ga), mis on varustatud ESI-allikaga.

Kromatograafilised eraldamised viidi läbi Shim-pack GIST C18 (2,1 × 100 mm, 2 μm) kolonnis, kasutades {{10}},1 protsenti sipelghapet vees ( lahusti A) ja atsetonitriil (lahusti B) voolukiirusel 0,3 ml/min gradientelueerimisel: 0–9 min, 25–30 protsenti B; 9–11 min, 30–40 protsenti B; 11–20 min, 40–50 protsenti B; 20–20,1 min, 50–100 protsenti B; 20,1–23 min, 100 protsenti B; 23,1 min–25 protsenti B uuesti tasakaalustamiseks. Kolonni temperatuur oli 35 ◦C ja automaatset proovivõtturit hoiti analüüsi ajal 4 °C juures, 1 μL igast proovist süstiti seadmesse. Analüüdi tuvastamine viidi läbi mitme reaktsiooni jälgimise (MRM) režiimis, mis töötati positiivsete ioonide režiimis. MS parameetrid: Nebuliseeriva gaasi vool: 3,0 l/min; Kuivatusgaas voolab: 10 L/min; Küte Voolugaas: 10 L/min; DL temperatuur: 250 ◦C; liidese temperatuur: 300 ◦C; Kütteplokk: 400 ◦C. MRM-i üleminekud ja kokkupõrkeenergia (CE) valiti ja optimeeriti iga standardderivaadi otsese infusiooni teel. Analüütide kogused MRM-i üleminekud võeti kokku tabelis S1.

Fekaalsed SCFA-d: 3 mg lüofiliseeritud väljaheitele lisati 100 µl 50% atsetonitriili ja segati 2 minutit. Seejärel tsentrifuugiti segu kiirusel 12000 p/min 10 minutit temperatuuril 4 °C ja pipetiti supernatant.

Neerude SCFA-d: kaaluti 100 mg neerukude ja segati jääl 4-kordse tavalise soolalahusega (100 mg/400 μL), et valmistada koe homogenaat. Lisati 3 korda külma metanooli 300 µl koehomogenaadile ja segati vorteksiga 2 minutit, seejärel tsentrifuugiti segu kiirusel 12000 p/min 10 minutit temperatuuril 4 °C ja pipetiti supernatant. Supernatant kuivatati N2-ga ja taastati 100 µl 50-protsendilise atsetonitriiliga.

Lisatud 500 mmol/L N-(3-dimetüülaminopropüül)-Ń-etüülkarbodiimiidvesinikkloriid (EDC, Aladdin, Shanghai, Hiina), 50 mmol/L 3H-[1,2,3]-triasolo[4, 5-b] püridiin-3-ool (HOAT, Aladdin, Shanghai, Hiina) ja 50 mg/ml 12C-dansüülhüdrasiini (12C-DnsHz, J&K, Peking, Hiina) 20 µl prooviekstrakti sama helitugevusega järjestus. EDC ja HOAT valmistati värske 500 mmol/L 2-(N-morfolino)etaansulfoonhappega (MES, Macklin, Shanghai, Hiina). Pärast 90-minutilist inkubeerimist temperatuuril 20 ◦C lisati segule 20 µl 50 mmol/L CuCl2 (Macklin, Shanghai, Hiina), et kustutada derivatiseerimisreaktsioon temperatuuril 40 ◦C 30 minuti jooksul (Zhao & Li, 2018). Derivatiseerimise lõpus lahjendati segu 10 korda 25% atsetonitriiliga. Enne analüüsi segati 100 µl supernatanti 100 µl sisestandardi lahusega. 13C-DnsHz märgist kasutati sisestandarditena (ISTD1-8) vastavalt samale derivatiseerimisreaktsioonile. SCFA-de standard: äädikhape (AA, A116173), propaanhape (PA, P110446), isovõihape (IBA, I103524), võihape (BA, B110438), 2-metüülvõihape (2- BA, M107377), isovaleriinhape (IVA, I108280), palderjanhape (VA, V108271), heksaanhape (HA, H103632) tarniti ettevõttest Aladdin (Shanghai, Hiina).

2.9. Statistiline analüüs

Iga rühma andmed väljendati kui keskmine ± standardhälve (SD). Statistiline olulisus rühmade vahel viidi läbi ühesuunalise ANOVA ja post hoc analüüsiga Student-Newman-Keulsi (SNK) testi või Dunnetti T3 testiga. P väärtust < 0.05="" peeti="" statistiliselt="" oluliseks.="" kõik="" andmed="" saadi="" kasutades="" spss-i="" statistikatarkvara="" (versioon="" 22.0,="" spss="" inc.,="" chicago,="" il,="">

3. Tulemused

3.1. JP parandas CKD rottide neerufunktsiooni

JP monosahhariidi iseloomustati enne loomadega töötlemist. Käesolevas uuringus kasutatud JP koosnes seitsmest monosahhariidist, st ramnoosist (1,62 protsenti), arabinoosist (15,79 protsenti), fukoosist (0,21 protsenti), ksüloosist (4,56 protsenti), mannoosist (3. 00 protsenti), glükoosi (73,44 protsenti) ja galaktoosi (4,99 protsenti) (joonis 1). Meie analüüsimeetodit kinnitasid lineaarsus, täpsus, korratavus, stabiilsus ja taastumine (tabelid S2–S3). Kinnitati, et analüüdid olid toatemperatuuril stabiilsed 24 tundi. JP saagis peaks olema suurem kui 8,63 protsenti ja puhtus ei tohiks olla väiksem kui 77,16 protsenti. Eespool nimetatud JP keemiline analüüs toimis kvaliteedikontrolli lähenemisviisina, et tagada alltoodud loomkatsete reprodutseeritavus.

Scr, BUN ja uriinivalk esindasid kõige enam neerufunktsioone. Scr, BUN ja uriini valgu tasemed kroonilise neeruhaigusega rottidel olid oluliselt kõrgemad kui näidisrühmal (P < {{0}},01).="" pärast="" 90-päevast="" ravi="" jp-ga="" vähenes="" scr,="" bun="" ja="" uriinivalgu="" tase="" võrreldes="" kroonilise="" neeruhaiguse="" rühmaga="" (p="">< 0,01)="" (joonis="">

3.2. JP leevendas neerupatoloogilist kahjustust CKD rottidel

Neeru morfoloogia hindamiseks neerukaalu (KW) ja neeru massi/kehakaalu (KW/BW) järgi kasutati terve parema neeru kaalu võltsrühmas ja jäänuk parema neeru kaalu CKD ja CKD pluss JP rühmas. Katsete lõpus suurenesid kroonilise neeruhaiguse rühma KW ja KW/BW võrreldes võltsrühmaga (kõik P < {{0}}.05).="" 5/6="" nefrektoomiaga="" indutseeritud="" kroonilise="" neeruhaiguse="" mudelis="" põhjustas="" neeru="" proteinaasi="" aktiivsuse="" vähenemine="" neerude="" kompenseerivat="" kasvu,="" neerude="" hüpertroofiaga="" ettevõtted="" (morton="" &="" griffiths,="" 1985)="" ja="" meie="" kinnitasime="" seda="" väidet.="" pärast="" jp-ravi="" vähenes="" kw="" oluliselt="" (p="">< 0,05)="" ja="" suleti="" võltsrühmale="" (p="" ˃="" 0,05);="" samas="" kui="" kw/bw="" veidi="" vähenes="" (p="" ˃="" 0,05).="" (joon.="">

Joonis 2. JP kaitses neerufunktsiooni kroonilise neeruhaigusega rottidel. Scr (A), BUN (B) ja uriini valgu (C) tase erinevates rühmades. (D) neeru kaal, (E) KW/BW. Andmed esitati keskmistena ± SD, n=6 rühma kohta (**P < 0.01="" võrreldes="" võltsrühmaga;="" #p="">< 0,05="" ,="" ##p="">< 0,01="" võrreldes="" kroonilise="" neeruhaiguse="">

Kroonilise neeruhaigusega patsientide rühmas ilmnes neerutuubulite massiivne atroofia võrreldes võltsrühmaga (P < {{0}}.01)="" ning="" glomerulite="" piirkond="" ja="" neerude="" interstitsiaalne="" fibroos="" olid="" peaaegu="" kaks="" korda="" rohkem.="" võltsrühma="" oma="" kvantitatiivses="" analüüsis="" (p="">< 0.01).="" pärast="" jp-ravi="" vähenes="" tubulaarse="" atroofia="" skoor="" peaaegu="" kaks="" korda="" (p="">< 0,01),="" glomeruluse="" piirkond="" oli="" peaaegu="" taastunud="" võltsrühmaks="" (p="">< 0,01)="" ja="" neerude="" interstitsiaalne="" fibroos="" vähenes="" kolmandiku="" võrra="" (p="">< 0,01).="" võrreldes="" kroonilise="" neeruhaiguse="" rühmaga="" (joonis="">

Joonis 3. JP kaitses neerude struktuuri kroonilise neeruhaigusega rottidel. (A) PAS-värvimine. (B) Massoni värvimine. (C) Tubulaarse atroofia skoor. (D) Glomerulaarpiirkond (E) Fibrootiline piirkond. Kõik pildid on esitatud identse suurendusega, 200×, skaala riba=100 μm. Andmed esitati keskmistena ± SD, n=6 rühma kohta (**P < 0,01="" võrreldes="" võltsrühmaga;="" #p="">< 0,05,="" ##p="">< 0,01="" võrreldes="" kroonilise="" neeruhaiguse="" rühmaga="">

3.3. JP moduleeris hematoloogilisi parameetreid CKD rottidel

Hematoloogiliste parameetrite jaoks mõõdeti biokeemiline analüüs, RBC, Hb, HCT ja PLT. Kroonilise neeruhaigusega rottidel langes punaste vereliblede tase 9.06-lt 7,20 × 1012 /l-le, Hb-lt 15,28-lt 13,22 g/dL-le, HCT-le 47,1-lt 40,4 protsendile ja PLT-le tõusis. 1012 kuni 1526 × 109 /L võrreldes võltsrühmaga (P < 0,01),="" mis="" näitas,="" et="" kroonilise="" neeruhaigusega="" rottidel="" täheldati="" aneemia="" tunnuseid.="" rbc,="" hb,="" hct="" ja="" plt="" vähenenud="" tasemed="" jps-ga="" ravitud="" ckd="" rottidel="" taastusid="" (p="">< 0,01)="" (joonis="">

Joonis 4. JP rehabiliteeris kroonilise neeruhaigusega rottide hematoloogilised parameetrid. PLT (A), RBC (B), Hb (C), HCT (D) tase. Andmed esitati keskmistena ± SD, n=6 rühma kohta (**P < 0.01="" võrreldes="" võltsrühmaga;="" #p="">< 0,05="" ,="" ##p="">< 0,01="" võrreldes="" kroonilise="" neeruhaiguse="">

3.4. JP stimuleeris EPO ekspressiooni

Võrreldes võltsrühmaga oli seerumi EPO tase ja neeru EPO mRNA kogus CKD-aneemiaga rottidel oluliselt vähenenud (P < 0.01).="" western="" blot="" analüüs="" näitas,="" et="" epo="" valgu="" tase="" vähenes="" ckd="" rühmas="" ilma="" olulise="" erinevuseta.="" pärast="" jp-ravi="" suurenes="" seerumi="" epo="" tase,="" neeru="" epo="" mrna="" ja="" valk="" oluliselt="" võrreldes="" kroonilise="" neeruhaiguse="" rühmaga="" (p="">< 0,01="" või="" p="">< 0,05)="" (joonis="">

Neerukoores tootsid HIF{0}} peamiselt neerutorukeste epiteelirakud, HIF-2 ekspresseeriti peamiselt endoteelirakkudes ja neerude interstitsiaalsetes fibroblastides (Sch¨ odel & Ratcliffe, 2019). Immunohistokeemiline analüüs näitas, et nagu ka HIF-1 puhul, olid kroonilise neeruhaigusega rottidel torukesed tugevamini värvunud kui võltsrühmas. Pärast JP-ravi oli neerutorukesel tugevam ja suurem pindala värvumine võrreldes kroonilise neeruhaiguse rühmaga, nagu on näidatud joonisel 5E punase noolega. HIF-2 näitas võltsrühmas neerude interstitsiaalis suhteliselt nõrka immunohistokeemiat. Kroonilise neeruhaiguse rühmas oli HIF-2 immunohistokeemia positiivne. Pärast JP-ravi näitas HIF-2 tugevamat immunohistokeemiat võrreldes kroonilise neeruhaiguse rühmaga (joonis 5F).

Joonis 5. JP stimuleeris EPO ekspressiooni. (A) Seerumi EPO sisaldus. (B)NeerEPO suhteline mRNA. GAPDH-d peeti majapidamisgeeniks. (C) EPO valgu ekspressiooni esindavad Western blot kujutised. (D) EPO densitomeetriline analüüs. (E) HIF-i immunohistokeemia{{0}}. (F) HIF- 2 immunohistokeemia, mis on normaliseeritud -aktiinisisaldusele. Immunohistokeemia kujutised on esitatud identse suurendusega, 400×, skaala riba=20 μm. Tuuma värvus hematoksüliiniga siniseks ja DAB immunopositiivsus oli pruun, sügavam DAB värvumine tähendab tugevamat immunohistokeemia positiivset. Punane nool osutab immunohistokeemia positiivsele. Andmed esitati keskmistena ± SD, n=6 rühma kohta (*P < 0,05="" võrreldes="" võltsrühmaga;="" #p="">< 0,05,="" ##p="">< 0,01="" võrreldes="" kroonilise="" neeruhaiguse="">

3.5. JP kutsus esile SCFA-de vabastamise

Kaheksa SCFA vabanemise kvantifitseerimiseks väljaheiteproovides töötati välja LC-MS-il põhinev sihipärane metaboolika lähenemisviis. Kehtestatud meetod valideeriti lineaarsuse, tundlikkuse, täpsuse, maatriksiefekti, täpsuse ja stabiilsuse hindamisega. Madala, keskmise ja kõrge kontsentratsiooniga kvaliteedikontrolli proovid (LQC, QMC, HQC) tundlikkuse, täpsuse, täpsuse ja stabiilsuse valideerimiseks valiti maatriksi standardkõvera madalaima, keskmise ja kõrgeima kontsentratsioonipunktide ning tulemuste alusel. on näidatud tabelites S4–S6. Kinnitati, et analüüdid olid stabiilsed temperatuuril 4 °C 48 tundi. SCFA-de LC-MS/MS kromatogramm on näidatud joonisel 6.

Joonis 6. SCFA-de UHPLC-MS/MS kromatograafia. (A) Ülemine oli SCFA-de derivatiseerimise keemiline võrrand; all oli SCFA-de struktuurvalem pärast dansüülhüdrasiini derivatiseerimist; (B) Segustandardite ja fekaaliproovi UHPLC/MRM-MS kromatogramm, kromatograafilised piigid punktis (B) vastasid punktis (A):1 näidatud keemilisele markerile. 12C-äädikhape; 2. 13C-äädikhape (ISTD1); 3. 12C-propaanhape; 4. 13C-propaanhape (ISTD2); 5. 12C-isovõihape; 6. 12C-võihape; 7. 13C-isovõihape (ISTD3); 8. 13C-võihape (ISTD4); 9. 12C-2-metüülvõihape; 10. 12C-isovaleriinhape; 11. 12C palderjanhape; 12. 13C-2-metüülvõihape (ISTD5); 13. 13C-isovaleriinhape (ISTD6); 14. 13C-palderjanhape (ISTD7); 15.12C-heksaanhape; 16. 13C-heksaanhape (ISTD8).

Mis puutub väljaheiteproovi, siis kroonilise neeruhaiguse rühmas langesid AA ja PA tasemed märkimisväärselt peaaegu 4 korda ja 5 korda võrreldes võltsrühmaga (P < 0.01);="" samas="" kui="" pärast="" jp-ravi="" taastusid="" aa="" ja="" pa="" kogused="" tagasi="" 4/5-le="" valerühmast="" (p="">< {{10}}.01).="" sarnaselt="" vähenesid="" ba="" ja="" va="" tasemed="" kroonilise="" neeruhaiguse="" rühmas="" järsult="" peaaegu="" 30="" korda="" ja="" 4="" korda="" võrreldes="" võltsrühmaga="" (p="">< 0,01).="" jp-ravi="" näitas="" kasvutendentsi,="" kuid="" mitte="" olulist="" paranemist.="" iba,="" iva="" ja="" 2-ba="" sisu="" ei="" näidanud="" märkimisväärset="" muutust="" kroonilise="" neeruhaiguse="" ja="" võltsrühma="" vahel.="" pärast="" jp-ravi="" suurenes="" iba,="" iva="" ja="" 2-ba="" tase="" (p="">< 0,01).="" kuid="" ha="" ei="" näidanud="" ilmset="" muutust="" kolme="" rühma="" vahel="" (joonis="" 7a).="" veelgi="" enam,="" mis="" puudutab="" neerukudet,="" siis="" kroonilise="" neeruhaiguse="" rühmas="" vähenesid="" kaheksa="" scfa="" kogused="" märkimisväärselt="" (p="">< 0,01),="" samas="" kui="" pärast="" jp-ravi="" suurenes="" scfa-de="" tase,="" välja="" arvatud="" ba="" ja="" ha="" (p=""><0,01 või="" p=""><). 0,5).="" ba="" suurenes="" veidi="" ilma="" oluliselt="" ja="" ha="" ei="" muutunud="" pärast="" jp-ravi="" (joonis="">

Joonis 7. SCFA-de sisaldus erinevates rühmades. (A) Fekaalsed SCFA-d. (B) neerude SCFA-d. Andmed esitati keskmistena ± SD, n=6 rühma kohta (**P < 0.01="" võrreldes="" võltsrühmaga;="" ##p="">< 0).="" 01,="" #p="">< 0,05="" võrreldes="" kroonilise="" neeruhaiguse="">

4. Arutelu

Praeguses 5/6 nefrektoomia CKD roti mudelis onneerudfunktsiooninäitajad (Scr, BUN ja uriini valk) suurenesid märkimisväärselt, ilmnes jääkneeru hüpertroofia ja neeru patoloogiline kahjustus, millega kaasnes hematoloogiliste parameetrite muutus. Need andmed olid kooskõlas varasemate uuringutega (Garrido et al., 2015, Morton & Griffiths, 1985). Ülaltoodud näitajad näitasid, et 5/6 nefrektoomiaga indutseeritud CKD-aneemia rotid tuvastati edukalt ja neid sai kontrollida JP kasuliku toime osas CKD-aneemia rottide ravis. Koosneerudfunktsiooniveelgi halvenenud, on aneemiat tunnistatud teadaolevaks oportunistlikuks kroonilise neeruhaiguse komplikatsiooniks, mis mõjutas negatiivselt patsientide elukvaliteeti (Locatelli, Fishbane, Block ja Macdougall, 2017). Neeruaneemia progresseerumisega seotud riskitegurite mõistmine aitab välja töötada ravimeetodeid. Tänapäeval on üha enam tähelepanu pälvinud seos haiguste ja soolestiku mikrobiota ainevahetuse vahel, samas kui seos SCFA-de ja neeruaneemia vahel on endiselt vähem teada. SCFA-d, mida metaboliseeruvad peamiselt Clostridium, Coprococcus ja Bacteroides (Koh et al., 2016), on suunatud spetsiifilistele membraaniga seotud retseptoritele, millel on oluline roll soolestiku tasakaalu ja kogu keha tervise säilitamisel. On juba tõestatud, et SCFA-del on CKD-ga lahutamatu seos ning äädikhappe, propioonhappe ja võihappe taset vähendati kroonilise neeruhaiguse korral (Wang et al., 2019). Adeniinist indutseeritud kroonilise neeruhaigusega rottidel muutus soolestiku mikrobiota arvukus ja mitmekesisus märkimisväärselt, ettevõtted vähendasid propaanhappe, võihappe ja palderjanhappe taset (Lakshmanan, Al, Ali ja Terranegra, 2021). Meie eelmise uuringu põhjal näitas 16S rDNA sekveneerimine, et soolestiku mikrobiota düsbioosi esines 5/6 nefrektoomiaga indutseeritud CKD rottidel võrreldes võltsrühmaga. Mõned SCFA-d, mis toodavad perekondi, eriti võihapet Clostridium, Coprococcus, näitasid CKD rottidel erinevusi (Zheng et al., 2020). Kooskõlas sellega näitasid meie tulemused, et äädikhappe, propioonhappe, võihappe ja palderjanhappe kogused vähenesid kroonilise neeruhaigusega rottidel umbes 60%, 80%, 85% ja 60%, mis näitab, et SCFA-de vähenemine vastas. koos soolestiku keskkonna tasakaalustamatusega. Pange tähele, et CKD-indutseeritud soolestiku keskkonnahäire vallandas soolestiku mikrobiota metabolismi ebanormaalseks (Feng et al., 2019). Lisaks leidsime, et CKD-aneemiaga rottidel vähenes kaheksa tüüpi SCFA-de tase. Näiteks võivad metaboolsete lõpptoodete, st SCFA-de, kõrvalekalded tuleneda kroonilise neeruhaiguse progresseerumisest.

Polüsahhariide, üht toimeainet, on leitud erinevatest ürtidest, nagu Dioscoreae Rhizoma, Schisandra Chinensis, Astragali Radix ja Jujubae Fructus. Polüsahhariide saab kääritada ja lagundada soolestiku mikrobiota. Selle tulemusena esitletakse polüsahhariide soolestiku mikrobiota substraadina, mis metaboliseeruvad SCFA-deks, või arvatakse, et neil on prebiootiline toime, mis parandab soolestiku mikrobiota koostist, et hõlbustada SCFA-de tootmist (Cai et al., 2019). Selles uuringus selgus, et jujubi polüsahhariidid stimuleerisid SCFA-de, näiteks äädikhappe, propaanhappe, isovõihappe, 2-metüülvõihappe, soolestiku mikrobiota vabanemist kroonilise neeruhaigusega rottidel. Lisaks paranes pärast JP-ravi SCFA-de tase CKD-aneemia roti neerudes ja muutuste tendents oli kooskõlas väljaheiteprooviga. Olemasolevate uuringute põhjal oli SCFA-de ja kroonilise neeruhaiguse vaheline seos järk-järgult selgeks saanud. Näiteks teatati, et äädikhape moduleerib immuunsüsteemi ja leevendab ägedat haigustneerudvigastuspärssides NADPH oksüdaasi signaaliülekannet T-rakkudes (Al-Harbi et al., 2018). On tõestatud, et propaanhape takistab adeniinist põhjustatud kroonilise neeruhaiguse progresseerumist vabade rasvhapete retseptorite 2 (FFA2) ja FFA3 kaudu (Mikami et al., 2020). Seetõttu järeldasime, et neerude SCFA taseme taastumine oli haige neeru jaoks kasulik. On teatatud, et JP suurendas soolestiku mikrobiota mitmekesisust ja suurendas SCFA-de aktiivse mikrobiota (Bacteroides) suhtelist arvukust kolorektaalse vähi hiirtel (Ji et al., 2020). Lisaks suurendas JP SCFA-de üldkontsentratsiooni väljaheiteproovides (Ji et al., 2019). Seetõttu järeldasime, et JP võib stimuleerida SCFA-de tootmist, et saavutada CKD progresseerumise pidurdamise eesmärk. JP võib olla ka SCFA-de domineeriva mikrobiota metabolismi substraat, et stimuleerida SCFA-de tootmist kroonilise neeruhaiguse korral, või prebiootikumitaoline komponent soolestiku keskkonna taastamiseks, eriti SCFA-de domineeriva mikrobiota mitmekesisuse taastamiseks ja SCFA-de vabanemise soodustamiseks, et vältida kroonilise neeruhaiguse progresseerumist.

Üldiselt on väikese molekulmassiga ja kõrge keemilise polaarsusega SCFA-sid (süsinikuvaba kui 6) raske otse kromatograafiliselt analüüsida. SCFA-de strateegia isotoopmärgistatud keemiline derivatiseerimine võib parandada instrumendi tundlikkust ja vähendada analüüsivigu, mis pakkus kasulikku strateegiat SCFA-de määramiseks LC-MS/MS analüüsis (Higashi & Ogawa, 2016). Hiljuti on karboksüülhapet sisaldavate inimese plasma metaboliitide tuvastamiseks rahuldavalt kasutatud dansüülhüdrasiiniga märgistatud lähenemisviise (Chen & Zhang, 2020). Selle toetuseks arendasime selles uuringus edasi LC-MS/MS-meetodil põhinevat keemilist derivatiseerimist, et määrata 8 SCFA-d roti väljaheites. SCFA-sid toodab soolestiku mikrobiota ja peaaegu 10 protsenti SCFA-dest eritub väljaheitega (Boets et al., 2015). Seetõttu võib SCFA-de väljaheiteproovi analüüs otseselt kajastada soolestiku keskkonna muutusi ja sellel on rohkem viiteid SCFA-de ja soolestiku mikrobiota vahelises multi-omika ühisanalüüsis. Ebastabiilsuse valideerimisel avastasime, et dansüülhüdrasiiniga märgistatud SCFA-d olid toatemperatuuril ebastabiilsed ja nende intensiivsus massispektris näitas aja jooksul langustendentsi, kuid see võib püsida stabiilsena 48 tundi temperatuuril 4 ◦C. Seega tuleks pärast SCFA-de derivatiseerimist hoida analüüte enne analüüsimist temperatuuril 4 ◦C.

Kaugelearenenud kroonilise neeruhaiguse 4.–5. staadiumis piirab EPO tootmise puudulikkus erütropoeesi, mis aitab kaasa neeruaneemia tekke kõige kriitilisemale tegurile (Sakashita, Tanaka ja Nangaku, 2019). Kliinilise praktika juhised soovitavad aneemia korral rutiinset ravi erütropoeesi stimuleerivate ainetega (ESA). Siiski tuleb muretseda ESA ohutuse pärast, mis on seotud suurenenud surmariski ja kardiovaskulaarsete sündmustega (Thavarajah & Choi, 2019). Neeruaneemiaga patsientidel pidi EPO ekspressioon olema ühtlane või silmanähtavalt kõrgem võrreldes tervete kehadega (Babitt & Lin, 2012). Algstaadiumis näitas EPO tase uuendustrendi, samas kui hilises staadiumis näitas EPO tase varajase staadiumiga võrreldes langustrendi, isegi tavapärasest madalamat (Panjeta, Tahirovi´c, Sofi, ´ Cori ja Derviˇsevi ´c, 2017). Vastavalt varasematele katsetele (Chen et al., 2019; Wang et al., 2020) näitasid meie tulemused, et seerumi EPO tase vähenes CKD-aneemiaga rottidel. Tuvastasime vastavalt neeru EPO mRNA ja valgu taseme CKD rottidel ning neeru EPO valgu tase langes veidi võrreldes võltsrühmaga, samas kui neeru EPO mRNA kogus oli lagunenud ja selle aste oli suurem kui seerumi EPO tase. Neerud on EPO sünteesi peamine allikas täiskasvanutel ja ERSD-ga patsientidel.neerudsäilitab endiselt võime toota erütropoetiini (Bernhardt et al., 2010). Endogeense seerumi EPO taseme korrigeerimiseks ja neeruaneemiaga kohanemiseks aktiveeriti neerude EPO tootmine, kuigineerudvigastusvähendas EPO mRNA ekspressiooni (Sch¨ odel & Ratcliffe, 2019). Pärast JP-ravi tõusis seerumi EPO tase, samuti tõusis neeru EPO mRNA ja valgu tase. Meie eelmises uuringus võis JP stimuleerida HRE transkriptsioonilist aktiivsust ja tugevdada EPO geeni (Chen et al., 2014). Seetõttu oletasime, et JP võib taastada CKD roti seerumi EPO taseme reguleeritud neeruaneemiaks, millele võib kaasa aidata stimuleeritud neeru EPO geeni ekspressioon mRNA tasemel.

Ajukoores leiti HIF-1 peamiselt tubulaarses ja HIF-2 neerude interstitsiumis. Kuna EPO-d toodavad peamiselt fibroblastid, milles HIF-2 paikneb samaaegselt, toetab see, et HIF-2 võib olla EPO tootmist reguleeriv tegur (Maxwell, 2003). Meie uuringus leidsime, et krooniline neeruhaigus võib aktiveerida HIF-1 ja HIF-2 ning JP-ravi võib stimuleerida HIF-1 ja HIF-2 aktiivsust võrreldes kroonilise neeruhaigusega rottidega. . On tõestatud, et HIF{10}} mängib olulist rolli EPO tootmise reguleerimises (Kapitsinou et al., 2010), samas kui HIF{12}} ülesreguleerimine võib mängida neerude kaitset (Jiang et al., 2010) al., 2020), mis parandab kaudselt EPO tootmist. Neeru EPO tootmist reguleeriti esmalt mRNA tasemel, aneemia või hüpoksia korral võis EPO mRNA ekspressiooni suurendada HIF-valgu stimuleerimisega. Varem näitasid farmakoloogilised uuringud, et jujube stimuleeris EPO ekspressiooni HIF-valgu taseme reguleerimise kaudu rakumudelis (Chen et al., 2014, Lam et al., 2016). Seetõttu järeldasime, et JP võib EPO mRNA ekspressiooni HIF-valgu kaudu ülesreguleerida, et saavutada neeruaneemia leevendamise eesmärk.

Lisaks oletame praeguste tulemuste põhjal, et SCFA-de vähenemisel võib olla otsustav roll HIF-vahendatud EPO ekspressioonis, mis aitab kaasa CKD-aneemiale. Sellega vastuolus on näidatud, et suurenenud äädikhappe tase oli kasulik HIF-2 atsetüülimisel ja CREB-d siduva valgu-HIF 2 kompleksi genereerimisel ning indutseeris veelgi EPO ekspressiooni (Xu et al., 2014). Propioonhape nõrgendas HIF-1 /ERK raja kaudu mitokondriaalseid häireid, hipokampuse apoptoosi ja neuroloogilisi puudujääke (Cheng et al., 2019). Lisaks leiti, et võihape stabiliseerib HIF-1, aktiivseid HIF-i sihtmärkgeene käärsoolerakkudel ja leevendab käärsoole põletikulist vastust (Kelly et al., 2015). Meie uuringus avastasime, et äädikhappe, propaanhappe ja võihappe tasemed vähenesid oluliselt koos HIF-valgu ebanormaalse ekspressiooniga CKD rottidel, mis näitas, et HIF-i stabiilsus võib olla seotud SCFA-de vähenemisega ja SCFA-d HIF-i stabiliseerimise mõju EPO ekspressiooni reguleerimiseks.

5. Kokkuvõtted

Kokkuvõtteks tõestasime, et JP parandas CKD-d ja sellega seotud aneemiat, mille mehhanism oli seotud SCFA-de vabanemise ja EPO tootmise reguleerimisega. Ja JP võib olla jujubi bioaktiivne koostisosa aneemia raviks. Need leiud võivad anda tõendeid JP edasiseks arendamiseks toidulisanditena kroonilise neeruhaigusega seotud aneemia raviks.

Eetiline avaldus

Kõik meie uurimistöös tehtud loomkatsed viidi läbi Guangzhou Hiina Meditsiini Ülikooli eetikakomitee poolt heaks kiidetud protokollidega ja kooskõlas riiklike terviseinstituutide laboriloomade hooldamise ja kasutamise juhistega (NIH väljaanded nr 80-23, muudetud 1996). Meie uuringus ei ole ülaltoodud juhiseid rikutud.

Tänuavaldused

Seda tööd toetavad Guangdongi provintsi loodusteaduste sihtasutus (2018A030313305), Hiina loodusteaduste sihtasutus (81804052, 81973577 ja 82004248), Shenzheni teaduse ja tehnoloogia plaani projekt (JSGG2010e Chinese Medicine Province Bur60191912910221663). 20201320).

Viited

Al-Harbi, NO, Nadeem, A., Ahmad, SF, Alotaibi, MR, AlAsmari, AF, Alanazi, WA, … Ibrahim, KE (2018). Lühikese ahelaga rasvhape, atsetaat leevendab sepsise põhjustatud ägedatneerudvigastusNADPH oksüdaasi signaaliülekande pärssimisega T-rakkudes. International Immunopharmacology, 58, 24–31.
Babitt, JL ja Lin, HY (2012). Aneemia mehhanismid kroonilise neeruhaiguse korral. Journal of the American Society of Nephrology, 23(10), 1631–1634.
Bernhardt, WM, Wiesener, MS, Scigalla, P., Chou, J., Schmieder, RE, Günzler, V., …Eckardt, KU (2010). Prolüülhüdroksülaaside inhibeerimine suurendab erütropoetiini tootmist ESRD korral. Journal of the American Society of Nephrology, 21(12),
2151–2156.
Boets, E., Deroover, L., Houben, E., Vermeulen, K., Gomand, SV, Delcour, JA, … Verbeke, K. (2015). In vivo käärsoole lühikese ahelaga rasvhapete tootmise kvantifitseerimine inuliinist. Nutrients, 7(11), 8916–8929.

Cai, Y., Liu, W., Lin, Y., Zhang, S., Zou, B., Xiao, D., … Xie, Z. (2019). Ühendpolüsahhariidid leevendavad eksperimentaalset koliiti, moduleerides soolestiku mikrobiota koostist ja funktsiooni. Journal of Gastroenterology and Hepatology, 34(9),1554–1562.

Chen, G. ja Zhang, Q. (2020). Vabade rasvhapete ja atsüülkarnitiinide samaaegne kvantifitseerimine plasmaproovides, kasutades dansüülhüdrasiini märgistamist ja vedelikkromatograafiat – kolmekordse kvadrupooli massispektromeetriat. Analüütiline ja bioanalüütilineChemistry, 412(12), 2841–2849.

Chen, J., Lam, CT, Kong, AY, Zhang, WL, Zhan, JY, Bi, CW, ... Tsim, KW (2014). Ziziphus jujuba vilja (jujube) ekstrakt indutseerib kultiveeritud Hep3B rakkudes hüpoksiaga indutseeritava faktori -1 kaudu erütropoetiini ekspressiooni. PlantaMedica, 80(17), 1622–1627.

Chen, J., Wang, F., Huang, S., Liu, X., Li, Z., Qi, A., ... Li, S. (2019). Jian-Pi-Yi-Sheni keetmine leevendab neeruaneemiat 5/6 nefrektoomiaga rottidel: erütropoetiini tootmine hüpoksiaga indutseeritud faktorite signaalimise kaudu. Tõenduspõhine täiendav ja alternatiivne meditsiin, 2019, 1–8.
Cheng, Y., Mai, Q., Zeng, X., Wang, H., Xiao, Y., Tang, L., … Ding, H. (2019). Propionaat leevendab pentüleentetrasoolist põhjustatud krampe, sellest tulenevaid mitokondriaalseid häireid, neuronite nekroosi ja neuroloogilisi puudujääke hiirtel. Biochemical Pharmacology, 169, artikkel 113607.
Feng, YL, Cao, G., Chen, DQ, Vaziri, ND, Chen, L., Zhang, J., ... Zhao, YY (2019). Mikrobioom-metaboloomika paljastab soolestiku mikrobiota, mis on seotud glütsiiniga konjugeeritud metaboliitide ja polüamiini metabolismiga kroonilise neeruhaiguse korral. Cellular and Molecular Life Sciences, 76(24), 4961–4978.
Garrido, P., Ribeiro, S., Fernandes, J., Vala, H., Bronze-da-Rocha, E., Rocha-Pereira, P., … Reis, F. (2015). Raua-heptsidiini düsmetabolism, aneemia ja neeru hüpoksia, põletik ja fibroos jäänukneeru roti mudelis. PLoS ONE, artikli 10 lõige 4, artikkel e124048.
Higashi, T. ja Ogawa, S. (2016). Isotoopkoodiga ESI-d suurendavad derivatiseerimisreagendid bioloogilistes proovides leiduvate metaboliitide diferentsiaalanalüüsiks, kvantifitseerimiseks ja profileerimiseks LC/MS abil: ülevaade. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 130, 181–193.
Ji, X., Hou, C., Gao, Y., Xue, Y., Yan, Y. ja Guo, X. (2020). Jujubi (Ziziphus jujuba Mill.) polüsahhariidide soolestiku mikrobiotat moduleerivate mõjude metagenoomiline analüüs kolorektaalse vähi hiiremudelis. Food & Function, 11(1), 163–173.
Ji, X., Hou, C., Yan, Y., Shi, M. ja Liu, Y. (2020). Juujuubi (Ziziphus jujuba Mill.) viljade polüsahhariidide struktuurse iseloomustuse ja antioksüdantse toime võrdlus. International Journal of Biological Macromolecules, 149, 1008–1018.

Ji, X., Hou, C., Zhang, X., Han, L., Yin, S., Peng, Q., … Wang, M. (2019). Zizyphus jujuba cv mõju mikrobiometaboloomiline analüüs. Muzao polüsahhariidide tarbimine kolorektaalse vähi hiirte väljaheite mikrobiota ja metaboliitide puhul.International Journal of Biological Macromolecules, 131, 1067–1076.

Ji, X., Peng, Q., Yuan, Y., Shen, J., Xie, X. ja Wang, M. (2017). Polüsahhariidide isoleerimine, struktuurid ja bioaktiivsus jujube viljadest (Ziziphus jujuba Mill.): ülevaade. Food Chemistry, 227, 349–357.
Jiang, N., Zhao, H., Han, Y., Li, L., Xiong, S., Zeng, L., ... Sun, L. (2020). HIF-1 leevendab diabeetilise nefropaatia tubulaarseid vigastusi HO-1-vahendatud mitokondriaalse dünaamika kontrolli kaudu. Rakkude levik, 53(11), artikkel e12909.
Kapitsinou, PP, Liu, Q., Unger, TL, Rha, J., Davidoff, O., Keith, B., … Haase, VH (2010). Maksa HIF-2 reguleerib erütropoeetilisi reaktsioone hüpoksiale neeruaneemia korral. Blood, 116(16), 3039–3048.
Kelly, CJ, Zheng, L., Campbell, EL, Saeedi, B., Scholz, CC, Bayless, AJ, … Colgan, SP (2015). Mikrobiootast pärinevate lühikese ahelaga rasvhapete ja sooleepiteeli HIF-i vaheline läbirääkimine suurendab koe barjääri funktsiooni. Cell Host & Microbe, 17 (5), 662–671.
Koh, A., De Vadder, F., Kovatcheva-Datchary, P., & B¨ ackhed, F. (2016). Kiudainetest peremeesorganismi füsioloogiani: lühikese ahelaga rasvhapped kui peamised bakteriaalsed metaboliidid. Cell, 165(6), 1332–1345.
Lakshmanan, AP, Al, ZM, Ali, BH ja Terranegra, A. (2021). Prebiootilise kummiakaatsia mõju soolestiku mikrobioomi koostisele eksperimentaalse kroonilise neeruhaigusega rottidel. Biomeditsiin ja farmakoteraapia, 133, artikkel
110992.
Lam, C., Chan, PH, Lee, P., Lau, KM, Kong, A., Gong, A., … Tsim, K. (2016). Jujube (Ziziphus jujuba) sisaldavate ravimtaimede keetmise keemiline ja bioloogiline hindamine: erütropoetiini ekspressiooni esilekutsumine kultuurides. Journal of Chromatography BAnalytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences, 1026, 254–262.
Lappin, TR ja Lee, FS (2019). HIF-i mutatsioonide värskendus: EPO rada ja nende roll erütrotsütoosis. Blood Reviews, 37, artikkel 100590.
LeBlanc, JG, Chain, F., Martín, R., Bermúdez-Humaran, ´ LG, Courau, S., & Langella, P. (2017). Kasulik mõju peremeesorganismi energia metabolismile lühikese ahelaga rasvhapete ja vitamiinide poolt toodetud kommensaalsete ja probiootiliste bakterite poolt. Mikroobirakkude tehased, 16 (1), 79.
Li, L., Ma, L. ja Fu, P. (2017). Soolestiku mikrobiotast pärinevad lühikese ahelaga rasvhapped ja neeruhaigused. Drug Design Development and Therapy, 11, 3531–3542.
Li, L. ja Shi, JY (2013). Kaneeli ajukoore polüsahhariidide ja lipiidide komponentide analüüs GC-MS abil. Zhong Yao Cai, 36(4), 578–580.
Liu, G., Liu, X., Zhang, Y., Zhang, F., Wei, T., Yang, M., … Zhao, Z. (2015). Zizyphus jujube cv.-st ekstraheeritud polüsahhariidide hepatoprotektiivne toime. Huanghetanzao. International Journal of Biological Macromolecules, 76, 169–175.

Locatelli, F., Fishbane, S., Block, GA ja Macdougall, IC (2017). Hüpoksia sihtimine Indutseerivad tegurid aneemia raviks kroonilise neeruhaigusega patsientidel. American Journal of Nephrology, 45(3), 187–199.

Locatelli, F., Hannedouche, T., Fishbane, S., Morgan, Z., Oguey, D. ja White, WB (2019). Kardiovaskulaarne ohutus ja metoksüpolüetüleeni üldine suremus

Glükool-epoetiin beeta ja teised erütropoeesi stimuleerivad ained kroonilise neeruhaiguse aneemia korral: randomiseeritud mittealaväärsusuuring. Ameerika Nefroloogiaühingu kliiniline ajakiri: CJASN, 14(12), 1701–1710.
Maxwell, P. (2003). HIF-1: neerudele erilise tähtsusega hapnikuvastuse süsteem. Journal of the American Society of Nephrology, 14(11), 2712–2722.
Meijers, BK ja Evenepoel, P. (2011). Soole-neeru telg: indoksüüülsulfaat, p-kresüülsulfaat ja kroonilise neeruhaiguse progresseerumine. Nephrology Dialysis Transplantation, 26(3), 759–761.
Mikami, D., Kobayashi, M., Uwada, J., Yazawa, T., Kamiyama, K., Nishimori, K., … Iwano, M. (2020). Lühikese ahelaga rasvhape leevendab adeniinist põhjustatud kroonilist neeruhaigust FFA2 ja FFA3 radade kaudu. Biochimica Biophysica Acta-Molecular and Cell Biology Lipids, 1865(6), artikkel 158666.
Morton, DB ja Griffiths, PH (1985). Juhised valu, stressi ja ebamugavustunde äratundmiseks katseloomadel ja hüpotees hindamiseks. Veterinary Record, 116(16), 431–436.
Panjeta, M., Tahirovi´c, I., Sofi´c, E., Cori ´´c, J., & Derviˇsevi´c, A. (2017). Erütropoetiini ja hemoglobiini taseme tõlgendamine kroonilise neeruhaiguse eri staadiumidega patsientidel. Journal of Medical Biochemistry, 36(2), 145–152.
Pappa, M., Dounousi, E., Duni, A., & Katopodis, K. (2015). Vähemtuntud aneemia patofüsioloogilised mehhanismid diabeetilise nefropaatiaga patsientidel. International Urology and Nephrology, 47(8), 1365–1372.
Sakashita, M., Tanaka, T., & Nangaku, M. (2019). Hüpoksia-indutseeritav faktor-prolüülhüdroksülaasi domeeni inhibiitorid aneemia raviks kroonilise neeruhaiguse korral. Contributions to Nephrology, 198, 112–123. https://doi.org/10.1159/000496531.
Schodel, ¨ J. ja Ratcliffe, PJ (2019). Hüpoksia signaaliülekande mehhanismid: uued tagajärjed nefroloogiale. Nature Reviews Nephrology, 15(10), 641–659.
Tako, E., Glahn, RP, Knez, M. ja Stangoulis, JC (2014). Nisu prebiootikumide mõju soolestiku bakterite populatsioonile ja rauavaegusega broilerikanade raua seisundile. Toitumisajakiri, 13, 58.
Tang, WH, Wang, Z., Kennedy, DJ, Wu, Y., Buffa, JA, Agatisa-Boyle, B., … Hazen, SL (2015). Soolestiku mikrobiotast sõltuv trimetüülamiin-N-oksiidi (TMAO) rada aitab kaasa nii neerupuudulikkuse tekkele kui ka suremusriskile kroonilise neeruhaiguse korral. Tsirkulatsiooniuuringud, 116(3), 448–455.
Thavarajah, S. ja Choi, MJ (2019). Erütropoeesi stimuleerivate ainete kasutamine kroonilise neeruhaiguse ja vähiga patsientidel: kliiniline lähenemine. American Journal of Kidney Diseases, 74(5), 667–674.
Wang, F., Yu, H., Huang, S., Zheng, L., Zheng, P., Zhang, S., … Chen, J. (2020). Jian-PiYi-Shen reguleerib EPO ja raua ringlussevõtu valgu ekspressiooni kroonilise neeruhaigusega aneemilistel rottidel: hüpoksiaga indutseeritava faktori -2 akumuleerumine ERK signaalimise kaudu. Tõenduspõhine täiendav ja alternatiivne meditsiin, 2020, 8894257.
Wang, S., Lv, D., Jiang, S., Jiang, J., Liang, M., Hou, F., … Chen, Y. (2019). Lühikese ahelaga rasvhapete, eriti butüraadi, kvantitatiivne vähendamine aitab kaasa kroonilise neeruhaiguse progresseerumisele. Clinical Science, 133(17), 1857–1870.
Webster, AC, Nagler, EV, Morton, RL ja Masson, P. (2017). Krooniline neeruhaigus. Lancet (London, Inglismaa), 389 (10075), 1238–1252.
Xie, X., Yang, X., Wu, J., Ma, J., Wei, W., Fei, X., ... Wang, M. (2020). Trib1 aitab kaasa isheemiast/reperfusioonist põhjustatud ägedast neerukahjustusest taastumisele, reguleerides neerude makrofaagide polarisatsiooni. Frontiers in Immunology, 11, 473.
Xu, M., Nagati, JS, Xie, J., Li, J., Walters, H., Moon, YA, … Garcia, JA (2014). Atsetaatlüliti reguleerib stressi erütropoeesi. Loodusmeditsiin, 20(9), 1018–1026.
Yue, Y., Wu, S., Li, Z., Li, J., Li, X., Xiang, J., … Ding, H. (2015). Looduslikud jujubi polüsahhariidid kaitsevad eksperimentaalse põletikulise soolehaiguse eest, võimaldades paremat soolebarjääri funktsiooni. Food & Function, 6(8), 2568–2577.

Zhao, S. ja Li, L. (2018). Dansüülhüdrasiini isotoopide märgistamine LC-MS igakülgseks karboksüülhappe submetaboloomi profileerimiseks. Analüütiline keemia, 90(22), 13514–13522.

Zheng, L., Chen, S., Wang, F., Huang, S., Liu, X., Yang, X., … Chen, J. (2020). Soolestiku mikrobiota selged reaktsioonid Jian-Pi-Yi-Sheni keetmisele on seotud paranenud kliiniliste tulemustega 5/6 nefrektoomiaga rottidel. Frontiers in Pharmacology, 11, 604.