Jianpi Bushen Yiqi keetmise mõju immuunfunktsioonile ja neuromuskulaarsetele ühendustele EAMG hiirtel

2.3 Harknääre ja lümfisõlmede histomorfoloogiline võrdlus igas hiirte rühmas

Nagu näidatudJoonis 1, tüümuse ajukoor ja medullatühi kontrollrühmhiired olid selgelt piiritletud, korrapäraselt paigutatud rakkudega. Seevastumudeli kontrollrühmilmnesid ebaselged kortikaalsed-medullaarsed piirid ja hõre rakkude jaotus. Võrreldes mudelirühmaga on hiiredprednisooni rühmjamadala, keskmise ja suure annusega Jianpi Bushen Yiqi keetmisrühmadnäitasid suhteliselt selgeid kortikaalseid-medullaarseid piire ja tihedaid, hästi organiseeritud rakke.

Joonis 2näitab, et tühja kontrollrühma lümfisõlmede rakkudel oli täielik struktuur ja korrapärane paigutus. Primaarsed lümfoidsed folliikulid olid ajukoores nähtavad, ilma sekundaarsete folliikulite ega idukeskusteta. Mudelrühmas oli rakustruktuur korrastamata, vohanud primaarsed folliikulid ning nähtavad sekundaarsed folliikulid ja idukeskused. Prednisooni ja Jianpi Bushen Yiqi rühmadel oli vähenenud lümfoidsete folliikulite hüperplaasia.

Tabel 3näitab, et võrreldes tühja kontrollrühmaga oli mudelrühmal vähenenud ajukoore ja medulla pindala suhe harknääres ja suurenenud idukeskused lümfisõlmedes (P < 0,05 või P < 0,01). Võrreldes mudelirühmaga,prednisoonjasuure annusega Jianpi

 

 

 

Joonis 1 Erinevate hiirerühmade harknääre koe histopatoloogilise morfoloogia võrdlus (HE värvimine)

 

Tabel 3. Tüümuse koore-medullaarse pindala suhte ja lümfisõlmede idukeskuste arvu võrdlus igas hiirte rühmas

Ühik: (x̄ ± s)

Grupp	n	Tüümuse ajukoore/medulla pindala suhe	Idukeskuse number (LN-i kohta)
Tühi juhtelement	3	3.62 ± 0.18	0.00 ± 0.00
Mudeli juhtimine	3	1.74 ± 0.11 ᵃ	6.47 ± 1.51 ᵃ
Prednisoon	3	4.62 ± 1.41 ᵇ ᶜ	3.52 ± 0.35 ᵇ ᶜ
Keetmine Väike annus	3	2.91 ± 0.42 ᶜ	5.77 ± 0.66 ᶜ
Keetmine Keskmine annus	3	3.41 ± 1.05 ᶜ	4.12 ± 0.25 ᶜ
Keetmine suur annus	3	4.60 ± 0.55 ᵇ ᶜ	3.00 ± 0.71 ᶜ

Märkmed:

ᵃ: P < 0,01 vs. tühi kontroll

ᵇ: P < 0,05 vs. Model Control

ᶜ: P < 0,01 vs. Model Control

Bushen Yiqirühmad näitasid kõrgemat ajukoore ja medulla pindala suhet. Kõik sekkumisrühmad, sealhulgas prednisoon ja kõik kolm keetmisannust, vähendasid oluliselt idukeskuste arvu (P < 0,01). Võrreldes prednisooni rühmaga, keetminemadala ja keskmise annusega rühmadnäitas siiski veidi rohkem idukeskusi, samas kuisuurte annustega rühmolulist erinevust ei olnud.

Märkus. Mustad nooled osutavad lümfisüsteemi folliikulitele ja punased nooled idukeskustele.

Joonis 2 Erinevate hiirerühmade lümfisõlmede kudede histopatoloogilise morfoloogia võrdlus (HE värvimine)

 

 

 

 

2.4 Th1, Th2, Th17, Treg ja Tfh rakkude protsentide võrdlus põrnarakkude suspensioonides

Nagu näidatudTabel 4, võrreldes tühja kontrollrühmaga,mudelirühmnäitas Th1, Th2, Th17 ja Tfh rakkude suurenenud protsenti ning vähenenud Tregi protsenti (P < 0,05 või P < 0,01). Võrreldes mudelirühmaga,keskmise ja suure annusega keetmisrühmadoli vähendanud Th1 protsenti ja suurendanud Treg protsenti; kõik kolm keetmisrühma näitasid vähenenud Th17 ja Tfh protsenti. Nimelt,prednisooni rühmvähendas Tregi protsenti, tekitades muret selle potentsiaali pärast immuunsüsteemi homöostaasi häirida.

Võrreldes prednisooni rühmaga näitasid kõik keetmisrühmad Th2, Th17 ja Tfh rakkude vähenemist. Thekeskmise ja suure annusega rühmadveelgi vähenenud Th1 ja suurenenud Treg-rakud (P < 0,05 või P < 0,01), mis näitab tasakaalustatumat immuunregulatsiooni.

 

 

 

Märkus: NMJ, neuromuskulaarne ristmik; AChR, atsetüülkoliini retseptor.

Joonis 3 AChR morfoloogia võrdlus erinevate hiirerühmade lihasrühmade neuromuskulaarsetes ühendustes
(immunofluorestsentsvärvimine, × 100)

 

Tabel 4. Th1, Th2, Th17, Treg ja Tfh rakkude protsentide võrdlus põrnarakkude suspensioonides erinevates hiirerühmades

Ühik: (% , x̄ ± s)

Grupp	n	Th1	Th2	Th17	Treg	Tfh
Tühi juhtelement	6	0.05 ± 0.04	0.03 ± 0.02	0.11 ± 0.06	16.42 ± 2.59	9.45 ± 3.29
Mudeli juhtimine	7	3.43 ± 1.11 ᵃ	0.82 ± 0.22 ᵃ	1.64 ± 0.65 ᵇ	7.99 ± 3.26 ᵃ	18.27 ± 4.21 ᵃ
Prednisoon	7	1.84 ± 0.26	0.84 ± 0.47	1.03 ± 0.71	5.02 ± 1.58 ᵃ	15.32 ± 3.84
Keetmine Väike annus	7	1.42 ± 0.59 ᶜ ᵉ	0.60 ± 0.16 ᶜ ᶠ	0.73 ± 0.24 ᶜ ᶠ	14.97 ± 2.11 ᶠ	10.35 ± 3.72 ᶜ ᶠ
Keetmine Keskmine annus	7	1.08 ± 0.59 ᶜ ᵉ	0.47 ± 0.14 ᶜ ᶠ	0.45 ± 0.20 ᶜ ᶠ	13.82 ± 2.21 ᶠ	9.87 ± 3.65 ᶜ ᶠ
Keetmine suur annus	7	1.23 ± 0.62 ᶜ ᵉ	0.32 ± 0.14 ᶠ	0.34 ± 0.22 ᶜ ᶠ	13.50 ± 2.47 ᶠ	7.97 ± 3.60 ᶜ ᶠ

Märkmed:

ᵃ: P < 0,01 vs. tühi kontroll

ᵇ: P < 0,05 vs. tühi kontroll

ᶜ: P < 0,01 vs. Model Control

ᵈ: P < 0,05 vs. Model Control

ᵉ: P < 0,05 vs prednisoon

ᶠ: P < 0,01 vs. prednisoon

 

 

2.5 AChR morfoloogia võrdlus NMJ-s igas lihasrühmas

Joonis 3näitab, et tühja kontrollrühma NMJ AChR-id olid struktuurselt terved ja paistsid kompaktsete kringlilaadsete moodustistena. Mudelrühmas olid silma-, sternocleidomastoid-, delta- ja sääreluu eesmiste lihaste NMJ-d killustatud ja deformeerunud, samal ajal kui mälumis-, interkostaalsed ja diafragma lihased olid tugevasti häiritud. Kõik sekkumisrühmad näitasid AChR morfoloogia paranemist erineval määral.

Nagu näidatudTabel 5, võrreldes tühja kontrollrühmaga oli mudelrühmal märkimisväärselt vähenenud AChR pindala suhe mitmes lihases (P < 0,05 või P < 0,01). Võrreldes mudelirühmaga,prednisoonjakeskmise annusega keetminerühmad näitasid suurenenud AChR pindala silma lihastes. Theväikese annuse keetmisrühmparanenud AChR piirkonnad deltalihas ja sääreluu eesmises osas. Thesuurte annustega rühmparanenud AChR piirkonnad silma-, sternocleidomastoid-, deltalihas- ja sääreluu eesmises lihases.

Võrreldes prednisooniga, onmadala annusega rühmparanenud AChR piirkonnad silma- ja mälumislihastes; akeskmise annusega rühmmälumislihases; jasuurte annustega rühmsternocleidomastoideus ja tibialis anterior (P < 0,05 või P < 0,01).

Tabel 5. AChR piirkonna võrdlus neuromuskulaarses ristmikus igas hiirte lihasrühmade rühmas

Ühik: (% , x̄ ± s)

Grupp	n	Silma lihased	Närimislihas	Sternocleidomastoid	Deltalihas	Interkostaalne lihas	Diafragma	Sääreluu eesmine
Tühi juhtelement	3	3.83 ± 0.28	4.28 ± 0.29	4.48 ± 0.77	3.79 ± 0.12	3.78 ± 0.22	4.80 ± 0.26	3.60 ± 0.32
Mudeli juhtimine	3	2.58 ± 0.34 ᵃ	2.55 ± 0.45 ᵃ	2.15 ± 0.31 ᵇ	2.33 ± 0.15	2.55 ± 0.33	2.98 ± 0.34ᵇ	2.95 ± 0.49
Prednisoon	3	3.33 ± 0.49ᶜ	2.67 ± 0.55	3.83 ± 0.54	3.49 ± 0.38	3.60 ± 0.16	3.45 ± 0.67	3.02 ± 0.40
Keetmine Väike annus	3	2.76 ± 0.49ᵉ	3.05 ± 0.37ᵉ	3.77 ± 0.64	2.77 ± 0.44ᶜ	3.03 ± 0.25	3.33 ± 0.33	3.44 ± 0.71ᶜ
Keetmine Keskmine annus	3	3.32 ± 0.40ᶜ	3.27 ± 0.75ᵉ	3.98 ± 0.43	3.27 ± 0.65	3.50 ± 0.28	3.85 ± 0.42	3.56 ± 0.52
Keetmine suur annus	3	3.46 ± 0.37ᶜ	3.34 ± 0.23ᵉ	4.54 ± 0.67ᶜ	3.69 ± 0.39	3.75 ± 0.36	3.75 ± 0.35	3.84 ± 0.52ᶜ

Märkmed:

ᵃ: P < 0,05 vs. tühi kontroll

ᵇ: P < 0,01 vs. tühi kontroll

ᶜ: P < 0,05 vs. Model Control

ᵈ: P < 0,01 vs. Model Control

ᵉ: P < 0,05 vs prednisoon

 

Tabel 6. AChR-Ab, IL-6 ja TNF-tasemete võrdlus erinevates hiirerühmades

Ühik: (x̄ ± s)

Grupp	n	AChR-Ab (P⁻¹)	IL-6 (pg·ml⁻¹)	TNF- (pg·ml⁻¹)
Tühi juhtelement	12	1.00 ± 0.13	110.66 ± 30.75	25.84 ± 9.71
Mudeli juhtimine	12	3.13 ± 0.97 ᵃ	327.91 ± 38.71 ᵃ	124.15 ± 37.61 ᵃ
Prednisoon	11	2.05 ± 0.29 ᵇ ᶜ	487.21 ± 124.09 ᵇ	78.76 ± 22.35 ᵇ ᶜ
Keetmine Väike annus	13	2.50 ± 0.49ᵉ	306.42 ± 93.91ᶜ	89.14 ± 25.90 ᶜ
Keetmine Keskmine annus	13	1.98 ± 0.34 ᶜ	278.60 ± 63.97ᶜ	80.36 ± 21.95ᶜ
Keetmine suur annus	13	1.42 ± 0.33 ᶜ	224.43 ± 49.03ᶜ	84.26 ± 36.60ᶜ

Märkmed:

ᵃ: P < 0,01 vs. tühi kontroll

ᵇ: P < 0,01 vs. Model Control

ᶜ: P < 0,01 vs. Model Control

ᵈ: P < 0,05 vs prednisoon

ᵉ: P < 0,01 vs prednisoon

2.6 Seerumi AChR-Ab, IL-6 ja TNF-tasemete võrdlus

Tabel 6näitab, et võrreldes tühja kontrollrühmaga onmudelirühmtal oli märkimisväärselt kõrgenenud AChR-Ab, IL-6 ja TNF- (P < 0,01). Võrreldes mudelirühmaga,prednisoonjakeskmise ja suure annusega keetmisrühmadoluliselt vähenenud AChR-Ab. Siiskiprednisooni tõus IL-6, samas kuisuures annuses keetmise rühm vähenes IL-6. Nii prednisooni kui kakeskmise ja suure annusega rühmadvähenenud TNF- (P < 0,05 või P < 0,01).

Võrreldes prednisooniga, onväikese annuse keetmisrühmoli kõrgem AChR-Ab tase, kuidkõik keetmisrühmadvähendas IL-6, vältides prednisooni põletikuvastast toimet.

3. Arutelu

Kliiniliselt liigitatakse MG silma müasteenia gravis (oMG) ja generaliseerunud MG (gMG). oMG avaldub peamiselt ptoosi ja diploopiana ning võib areneda gMG-ks, mida iseloomustab süsteemne skeletilihaste nõrkus [1]. Traditsioonilise hiina meditsiini (TCM) teooria omistab MG patogeneesi düsfunktsioonidelepõrn ja neer. Põrn juhib lihaseid ja jäsemeid, olles sünnijärgne juur ning Qi ja vere allikas. Neer salvestab essentsi ning juhib luid ja luuüdi. Mõlema puudus põhjustab lihasnõrkust, nagu on näha MG-s [15–16].

Põhineb TCM-i "juure ravimise" põhimõttel,põrna ja neerude toniseeriminemuutub keskseks. TheJianpi Bushen Yiqi keetminekehastab seda lähenemist. Selle peamine koostisosa,Astragalus membranaceus, suurendab põrna Qi ja tõstab Yangi.Kilpkonnakarbi liimjahirvesarve liimrikastavad neeruessentsi ja yangi, tugevdades lihaseid ja luid.Koodonopsis, Angelica sinensis, Bupleurum, Cimicifugajameega praetud lagritstoimivad sünergiliselt vere toitmiseks, Yangi tõstmiseks ja valemi ühtlustamiseks.

Selle koostise peamine lisand onCistanche deserticola, tuntud ravimtaimtoniseeriv neeru yang ja täiendab elutähtsat olemust. On näidatud, et Cistanche suurendab immuunmodulatsiooni ja parandab väsimuskindlust, muutes selle ideaalseks sellistes tingimustes nagu MG. XJCistanche andmetel toetab Cistanche ekstraktnärvide ja lihaste elujõudu, edendabneurotransmitterite tasakaalja parandabimmuunhomöostaas- MG patofüsioloogiaga otseselt seotud mehhanismid.

Selles uuringus kasutati EAMG hiiremudelit, et hinnata keetmise mõju käitumuslikele, immuunsüsteemile ja NMJ struktuurimõõtmetele. Tulemused näitasid sedaprednisoonparandas haardetugevust ja Lennoni skoori, kuid põhjustas märkimisväärsetkaalulangus, mis on kooskõlas teadaolevate glükokortikoidide kõrvaltoimetega [19]. Seevastu kõik keeduannusedsuurenenud kehakaal, mis näitab paremat ohutust.

Terapeutiline efektiivsus oliannusest sõltuv, koossuurte annustega rühmsaavutades võrreldava haardetugevuse ja Lennoni skoori paranemise prednisooni pakkumisegatõhusust ja ohutust.

Immuunorganiindeksid näitasid, et prednisoon vähendas harknääre indeksit ja põhjustas ajukoore-medullaarset atroofiat, vähendades tsentraalset taluvust [20]. Keetmine aga säilitas või parandas tüümuse struktuuri, eriti suurtes annustes. Põrnaindeksid järgnesid akahefaasiline reguleerimismuster, kus madalad ja keskmised annused pärsivad ebanormaalset immuunproliferatsiooni, samas kui suur annus säilitas tasakaalu.

Kõik keetmisrühmad vähendasid lümfisõlmede folliikulite hüperplaasiat, kuigi ainult suur annus sobis prednisooniga idukeskme supressiooni korral, mis viitab nii tsentraalse kui ka perifeerse immuunsuse kõrgemale reguleerimisele suurtes annustes.

Kuna EAMG [4] aluseks on CD4⁺ T-rakkude tasakaalustamatus, on keetmise võimetasakaalustage Th1/Th2/Th17/Tfh ja Tregrakud on otsustava tähtsusega. Erinevalt prednisoonist, mis vähendas Tregi, on keetmine (eriti keskmised ja suured annused)täiustatud Tregja pärssisid põletikueelseid alarühmi. Seeimmuunmodulatsioon, immuunsupressiooni asemel sobib paremini autoimmuunhaiguste, nagu MG, vajadustega.

NMJ terviklikkuse jaoks näitas keetminemitme lihase AChR parandamine, edestades prednisooni mitmes lihasrühmas. Lisaks vähendas see tõhusaltAChR-Ab, IL-6 ja TNF-, mille suur annus näitab kõige ulatuslikumat põletikuvastast toimet – ilma prednisooni IL-6 taseme tõusuta.

 

Järeldus

TheJianpi Bushen Yiqi keetmine, rikastatudCistanche deserticola, avaldab EAMG hiirtel mitut sihtmärki sisaldavat terapeutilist toimet. See:

Tasakaalustab uuesti Th/Treg telje ja pärsib Tfh-vahendatud B-rakkude aktivatsiooni

Vähendab patogeenseid antikehi ja põletikulisi tsütokiine

Parandab NMJ struktuure ja taastab lihaste funktsiooni

Võrreldes prednisooniga on see paremohutus, immuunsüsteemi taastaminejamitme lihase sihtimine, tuues esile selle potentsiaali akliiniline alternatiivvõitäiendav raviMG jaoks.

Tulevased uuringud peaksid seda uurimabioaktiivsed ühendid, metaboolsed rajadjamolekulaarsed sihtmärgid, võib-olla läbivõrgufarmakoloogiajaproteoomika, et kiirendada selle arengut uudse TCM-põhise ravivahendina.