Cistanche Tubulosa iridoidsed ja atsüklilised monoterpeenglükosiidid, kankanosiidid L, M, N, O ja P

Cistanche tubulosa(SCHRENK) R. WÕIGE(Orobanchaceae) on mitmeaastane parasiitaim, mis kasvab taime juurtelSalvadoravõiCalotropisliigid, levinud Põhja-Aafrikas, Araabias ja Aasia riikides.1) Selle taime (jaapani keeles Kanka-nikujuyou) varsi on traditsiooniliselt kasutatudimpotentsuse, steriilsuse, lumbago ja keha nõrkuse ravisamuti vereringet soodustav aine.1,2) Meie uuringute käigus bioaktiivsete komponentide varredestC. tubulosa, 3-6) teatasime varem kahekümne neljast fenüületanoidaminoglükosiidist, sealhulgas kankanosiididest H1, H2, I, J1, J2, K1, ja K2ja kaks atsüülitud oligosuhkrut värsketest vartestC. tubulosa. 5,6) Lisaks peadirektorfenüületanoidglükosiidid, ehhinakosiid, akteosiid ja isoakteosiidleiti, et need pärsivad seerumi aspartaataminotransferaasi (AST) ja alaniinaminotransferaasi (soola) taseme tõusu hiirte vigastatud maksas, mille põhjustasD- galaktoosamiin (D-GalN)/ lipopolüsahhariid annustes 25-100 mg/kgper os(p.o.). Samuti selgitati välja fenüületanoidglükosiidide struktuurinõuded hepatoprotektiivse toime jaoks.5) Selles jätkuvas uuringus koostisainete kohta värsketes vartesC. tubulosa, eraldasime veel üksteist iridoidglükosiidi, sealhulgas kankanosiidid L (1), M (2) ja N (3), seitse atsüklilist monoterpeenglükosiidi, sealhulgas kankanosiidid O (4) ja P (5), kolm fenüülpropanoidi ja neli lignaani. See artikkel käsitleb viie uue ühendi isoleerimist ja struktuuri selgitamist (1-5).

LOODUSLIK TUBULOOS SEKSUAALSE DÜSFUNKTSIOONIDE LEEVENDAMISEKS PHGS75% ECH 30% ACT 12%

C. tubulosa värsked varred (kasvatatud Urumqis, Xinjiangi provintsis, Hiinas) ekstraheeriti tagasijooksul metanooliga, et saada metanooliekstrakt (8,36% värsketest vartest). Metanooliekstraktist saadi H2O- ja MeOH-ga elueeritud fraktsioonid (vastavalt 5,63% ja 2,73%) Diaion HP-20 kolonnkromatograafiaga (H2O→MeOH), nagu eelnevalt kirjeldatud.5) MeOH-ga elueeritud fraktsioon allutati SiO2 ja ODS kolonnkromatograafiale ning lõpuks HPLC-le, et saada kankanosiidid L (1, 0.0026%), M (2, 0).{27 }}001%), N (3, 0.00{{60}}7%), O (4, 0.0{{90}}2{{105}}%) ja P (5, 0 .0002%), 6-desoksükatalpol3,7) (6, 0.197%), bartsiosiid3,7) (7, { {147}}.0583%), glurosiid3,7) (8, 0.0443%), kankanoisiid A3) (9, 22,3 mg, 0,0010%), mussaenosiidhape3,7) ( 10, 0,0056%), 8- epilogaanhape3,8) (11, 0,0023%), 8-epideoksülogaanhape3,7) (12, 0,0004%), geniposidhape3,7) (13, 0,0040%) ), kankanosiid E3) (14, 0,0026%), (2E,6Z)-8-bD-glükopüranosüüloksü-2, 6-dimetüül-2, 6-oktadieenhape3 ,9) (15, 31,0 mg, 0,0014%), (2E,6E)-3,7-dimetüül-8-hüdroksüoktadieen-1-üül-ObD-glükopüranosiid10) (16, 0,0082%), 8-hüdroksügeraniool 8-O-bD-glükopüranosiid11) (17, 0,0044%), betulalbusiid A12) (18, 0,0004%), okaspuuriin13) (19, 0,0002%)), (süstal 20, 0,0015%), sinapic aldehüüd 4-ObD-glükopüranosiid14) (21, 0,0001%), ()-pinoresinool ObD-glükopüranosiid4,8,15) (22, 0,0010%), eukommin A3,16) (203,16). %), isoeukomiin A17) (24, 0,0010%) ja ()-süstaresinool ObD-glükopüranosiid4,8,18) (25, 0,0044%).

Kankanosiidide L (1), M (2) ja N (3) struktuurid

Kankanosiid L (1) saadi valge pulbrina negatiivse optilise rotatsiooniga ([a]D 26 - 45,7 MeOH-s). Selle IR-spekter näitas tugevat neeldumisriba 3433 ja 1{{20}}80 cm- 1 juures, mis viitab glükosiidfragmendile. Kiire aatomiga pommitamise (FAB)-MS 1 tsükli positiivsete ja negatiivsete ioonide režiimis näitas kvasimolekulaarsete ioonide piike vastavalt m/z 371 [M Na] ja 347 [M-H]- juures ning molekulaarvalem oli määratud kui C15H24O9 kõrge eraldusvõimega FABMS-i mõõtmisega. Ühendi 1 happeline hüdrolüüs 1,0 M vesinikkloriidhappega (HCl) vabastas D-glükoosi, mis tuvastati HPLC analüüsiga, kasutades optilist rotatsioonidetektorit.{22}}) 1 H- ja 13C-NMR spektrid (CD3OD, tabelid). 1, 2), mis määrati erinevate NMR katsetega,19) näitasid signaale, mis olid omistatavad neljale metüleenile [d 1,43 (1H, br dd, J= ca. 5, 13 Hz, 4a-H), 1,73 ( 1 H, br dd, J= ca 12, 14 Hz, 6a-H), 1,85 (1 H, m, 4b-H), 1,93 (1 H, br dd, J= umbes 8). , 14 Hz, 6b-H), 3,50 (1 H, ddd, J= 2,4, 12,5, 13,0 Hz, 3a-H), 3,83 (1 H, br dd, J=

ca. 5, 13 Hz, 3b-H), 3,78, 4,12 (mõlemad 1 H, mõlemad d, J= 13,1 Hz, 10-H2)], kaks metiini [d 2,15 (1 H, dd, J=7,2, 8,9 Hz, 9-H) ja 2,23 (1H, m, 5-H)] ning atsetaalrühm [d 4,81 (1H, d, J{{28) }},9 Hz, 1-H)] koos b-glükopüranosüülrühmaga [d 4,70 (d, J= 7,9 Hz, 1 -H)]. Nagu on näidatud joonisel 1, näitas 1 H-1 H korrelatsioonispektroskoopia (1 H-1 H COSY) katse 1-l rasvaste joontega kirjutatud osaliste struktuuride olemasolu. Heterotuumalise mitmiksideme korrelatsiooni (HMBC) katses 1-l täheldati kaugkorrelatsioone järgmiste prootonite ja süsiniku vahel (1-H ja 3-C, 8-C; {{ 49}}H ja 7-C 8-C, 10-H ja 8-C; }}H2 ja 7-C, 8-C; 1 -H ja 1-C), nagu on näidatud joonisel 1. Järgmisena iseloomustati 1 suhtelist stereostruktuuri faasitundlikkusega. tuuma Overhauseri parendusspektroskoopia (faasitundlik NOESY) katse, mis näitas NOE korrelatsioone järgmiste prootonipaaride vahel (1-H ja 3aH; 3a-H ja 4a-H; 3b-H ja 4b-H; 4b-H). ja 5-H, 9- H ja 6b-H, 9-H ja 7-H; ja 10-H2), nagu on näidatud joonisel 1. 1 H- ja 13C-NMR spektrid kattusid peamise iridoidkomponendi 6-deoksükatalpooli (6) spektritega, välja arvatud tulenevad signaalid. küllastunud d-laktooli fragmendini. Lõpuks saadi 6 hüdrogeenimisel 1, nii et kankanosiidi L stereostruktuur oli 3,4- dihüdro-6-deoksükatalpool (1).

LOODUSLIK CISTANCHE TUBULOSA POSTI ERUTUSHÄIRE LEVENDAMISEKS PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Kankanosiid M (2) saadi valge pulbrina negatiivse optilise rotatsiooniga ([a]D 26 - 18,7 MeOH-s). IR-spekter 2 näitas neeldumisribasid 3433, 1736, 1655 ja 1076 cm- 1 juures, mis on omistatavad hüdroksüül-, d-laktooni-, olefiini- ja eetriosadele. Positiivsete ioonide FAB-MS spekter 2 näitas kvasimolekulaarse iooni piiki m/z 353 [M Na] juures ja molekulaarvalem määrati kõrge eraldusvõimega positiivsete ioonide FAB-MS mõõtmisega kui C15H22O8. Ühendi 2 happeline hüdrolüüs 1,0 M HCl-ga vabastatud D-glükoosiga. 2 'H- ja 13CNMR spektrid (CD3OD, tabelid 1, 2) näitasid signaale, mis olid omistatavad neljale metüleenile [d 1,66, 2,11 (mõlemad 1H, mõlemad m, 4-H2), 2,15, 2,75 (mõlemad 1H, mõlemad m, 6-H2), 4,29 (1 H, ddd, J= 2,8, 8,4, 14,3 Hz, 3b-H), 4,32, 4,51 (mõlemad 1 H, mõlemad d, J{{61 }},1 Hz, 10-H2), 4,35 (1 H, ddd, J= 3,1, 6,7, 14,3 Hz, 3a-H)], kaks metiini [d 2,97 (1 H, m, 5-H), 3,82 (1H, br s, 9-H)], olefiin [d 5,94 (1H, m, 7-H)] ja küllastunud laktoonrühm (d C 174,9) koos bD-glükopüranosüülrühmaga [d 4,32 (1 H, d, J= 7,9 Hz, 1 -H)]. Nagu on näidatud joonisel 1, näitas 1 H–1 H COZY katse numbril 2 rasvaste joontega kirjutatud osaliste struktuuride olemasolu ja HMBC katses täheldati kaugkorrelatsioone järgmiste prootoni- ja süsinikupaaride vahel ({{ 103}}H ja 1-C; 9-H ja 1-C, {{110 }}H2 ja 7-C, 8-C, 9-1 -H ja 10-C). 2 suhtelist stereostruktuuri iseloomustas faasitundlik NOESY eksperiment, mis näitas NOE korrelatsioone järgmiste prootonipaaride vahel (3a-H ja 4a-H; 3b-H ja 4b-H; 4b-H ja 5- H; 5-H ja 6b-H, 9-H), nagu on näidatud joonisel 1. Seega selgitati 2. stereostruktuur, nagu näidatud.

Kankanosiid N (3) eraldati valge pulbrina negatiivse optilise rotatsiooniga ([a]D 25 - 24,6 MeOH-s). Positiivse iooniga FAB-MS-is 3 täheldati kvasimolekulaarse iooni piiki m/z 371 [M Na] juures. Molekulaarvalem C16H28O8 määrati kõrge eraldusvõimega FAB-MS mõõtmisega. Ühendi 3 happeline hüdrolüüs 10 M HCl-ga vabastas D-glükoosi. 'H- ja 13C-NMR andmed (CD3OD, tabelid 1, 2) näitasid signaale, mis on omistatavad metüülrühmale [d 1.07 (3H, d, J= 7,2 Hz, {{ 28}}H3)], neli metüleeni {d 1,37, 1,87 (igaüks 1H, mõlemad m, 7-H2), 1,65, 1,81 (igaüks 1H, mõlemad m, 6-H2), [3,65 ( 1 H, dd, J= 9,1, 9,8 Hz), 3,90 (1 H, dd, J= 5,9, 9,8 Hz), 11-H2] ja [3,70 (1 H, dd, J= 3,3, 12,0 Hz), 3,88 (1 H, m), 3-H2]}, neli metiini [d 1,69 (1 H, m, 4-H), 1,75 (1 H, m, 9-H), 2,06 (1 H, m, 8-H), 2,16 (1 H, m, 5-H)] ja poolatsetaalrühm [d 4,67 ( 1H, d, J= 7,4 Hz, 1-H)] koos bD-glükopüranosüülrühmaga [d 4,26 (1H, d, J= 7,9 Hz, {{101) }}H)]. Ühendi 3 iridoidstruktuur selgitati 1 H–1 H COZY ja HMBC katsetega ning suhtelist stereostruktuuri iseloomustati faasitundliku NOESY katsega, nagu on näidatud joonisel 1. Järelikult selgitati ühendi 3 stereostruktuur, nagu näidatud.

LOODUSLIK TUBULOOS SEKSUAALPROBLEEMIDE LAHENDAMISEKS PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Kankanosiidide O (4) ja P (5) struktuurid

Kankanosiidid O (4) ja P (5), C16H26O8, saadi ka valgete pulbritena negatiivsete optiliste rotatsioonidega (4: [a]D 23 - 26.1; 5: [a]D 21 - 32). 7 mõlemad MeOH-s). IR-spektrid 4 ja 5 näitasid neeldumisribasid 3433, 1696, 1647 ja 1076 cm- 1 4 puhul ning 3434, 1701, 1647 ja 1{ {95}}76 cm- 1 5 jaoks, mis on omistatav glükosiid-, karboksüül- ja olefiinfunktsioonidele. Nende UV-spektrid näitasid ühist neeldumismaksimumit 217 nm juures, mis näitab a, b-küllastumata karboksüülhappe osa olemasolu mõlemas. 4 ja 5 happelisel hüdrolüüsil vabanes D-glükoosist, samas kui ensümaatilise hüdrolüüsiga glükosidaasiga andsid 4 ja 5 (2E,6E)-8-hüdroksü-2, 6-dimetüül{{37} },6-oktadieenhape20) (4a) ja (2E,6E)-8-hüdroksü-3, 7- dimetüül-2,{{ 47}}oktadieenhape21) (5a). Ühendi 41H- ja 13C-NMR andmed (CD3OD, tabelid 2, 3) näitasid kahele metüülile omistatavaid signaale [d 1,71 (3H, br s, 10-H3), 1,81 (3H, d, J{{ 66}},0 Hz, 9-H3)], kolm metüleeni {d 2,19 (2H, br t, J= ca. 7 Hz, 5-H2), 2,36 (2H, m, 4-H2), [4,24 (1 H, dd, J= 7,6, 12,0 Hz), 4,33 (1 H, dd, J= 6,2, 12,0 Hz), { {96}}H2]} ja kaks triasendatud olefiini [d 5,41 (1 H, ddd, J= 1,2, 6,2, 7,6 Hz, 7- H), 6,75 (1 H, tq, J{ {111}},2, 1,0 Hz, 3-H)] koos b-Dglükopüranosüüli osaga [d 4,34 (d, J= 7,8 Hz, 1 -H)]. Võrreldes süsinikusignaale 13C-NMR spektris 4

4a omadega täheldati glükosüülimise nihet positsioonis 8- (d C 4: 65,5; 4a: 59,4). Glükosiidsideme asukohta kinnitasid ka HMBC katsed, nagu on näidatud joonisel 2. Järelikult selgus, et ühendi 4 stereostruktuur on (2E,6E)-8-bD-glükopüranosüüloksü-2,{{ 16}}dimetüül-2, 6-oktadieenhape. Teisest küljest näitasid ühendi 51H- ja 13C-NMR andmed (CD3OD, tabelid 2, 3) (2E,6E)-8-hüdroksü{{30}} olemasolu. ,7-dimetüül-2, 6-oktadieenhappe fragment [d 1,70 (3H, br s, 10-H3), 2,14 (3H, br s, 9- H3), 2,24 (2H, m, 4-H2), 2,27 (2H, m, 5-H2), 4,05, 4,20 (igaüks 1 H, mõlemad br d, J= ca. 12 Hz, 8-H2), 5,47 (1H, tq, J= 7,1, 0,9 Hz, 6-H), 5,67 (1H, br s, 1-H )] koos bD-glükopüranosüüli osaga [d 4,23 (d, J= 7,7 Hz, 1 -H)]. BD-glükopüranosüüli fragmendi ühenduvus 5-s selgitati HMBC katsete põhjal, nagu on näidatud joonisel 2. Lisaks täheldati tüüpilist glükosüülimise nihet signaalide puhul asendis 8- (d C 5: 75,6; 5a: 68,8). ülalnimetatud tõendite põhjal määrati, et 5. stereostruktuur on (2E,6E)-8-bD-glükopüranosüüloksü-3,7-dimetüül-2,{103 }}oktadieenhape.

Koostisosade mõju kasvaja nekroosifaktor-a (TNF-a) poolt indutseeritud tsütotoksilisusele L929 rakkudes

On teada, et TNF-a vahendab raku apoptoosi indutseerimise kaudu mitmesuguseid elundikahjustusi. Maksa puhul on TNF-a bioloogilised toimed seotud maksatoksiinide, isheemia/reperfusiooni, viirushepatiidi ja alkoholi poolt põhjustatud maksakahjustusega.22-24) Seetõttu peetakse TNF-a oluline sihtmärk põletikuvastaste ja hepatoprotektiivsete ainete avastamisel. Tuginedes ülalmainitud kontseptsioonile, uurisime looduslikult esinevate toodete kaitsvaid koostisosi TNF-a-indutseeritud rakusurma korral L929 rakkudes, mis on TNF-a-tundlik rakuliin.25) Varem oleme teatanud.

et mitmed Piper chaba, 26-29) Boesenbergia rotunda, 30, 31) Punica granatum, 32) Helichrysum arenarium, 33-35) ja Sapindus rarak, 36-38) koostisosad avaldasid pärssivat toimet TNF-a-indutseeritud tsütotoksilisusest L929 rakkudes. Kuna C. tubulosa fenüületanoidsed koostisosad (ntehhinakosiid, akteosiid ja isoakteosiidjne) 5) inhibeeris ka seda tsütotoksilisust, uurisime täiendavalt iridoidi, fenüülpropanoidi ja lignaani koostisosi, nagu on näidatud tabelis 4. Selle tulemusena kankanosiid A (9, inhibeerimine: 16,3± 2.0% 1 juures 00 mM), mussaenosiidhape (10, 44,7± 8,7%), 8-epigaamhape (11, 10,7± 0,4%), 8-hüdroksügeraniool 8-ObD- glükopüranosiid (17, 21,3 ± 2,4%) ja ()-pinoresinool ObD-glükopüranosiid (22, 22,3 ± 1,6%) näitasid olulist aktiivsust. Kuigi nende aktiivsus oli nõrgem kui ehhinakosiidil (IC50= 31,1 mM), akteosiidil (17,8 mM) ja isoatseteosiidil (22,7 mM), mis on peamised fenüületanoidsed koostisosad.5)

LOODUSLIK TUBULOOS SUGUFUNKTSIOONI PARANDAMISEKS PHGS75% ECH 30% ACT 12%