Immuunsüsteemiga seotud geeniekspressioon hanepoegade neerudes ja põrnas, kes on nakatunud hane nefriitilise astroviirusega

Võtke ühendusttina.xiang@wecistanche.comlisateabe saamiseks.

ABSTRAKTNEHane nefriitiline astroviirus (GNAstV) isoleeriti esmakordselt 2018. aastal, põhjustades hanetööstusele suurt majanduslikku kahju. Peremehest on aga vähe teadaimmuunvastusGNAstV infektsiooni vastu. Selles uuringus jagati nelikümmend {{0}}päevast hanepoega juhuslikult kahte rühma: nakkus- ja negatiivse kontrollrühma. Iga nakkusrühma hanepoeg nakatati intramuskulaarselt 0,5 ml GNAstV-JSHA-ga, samas kui negatiivse kontrollrühma hanepoegadele inokuleeriti sama kogus PBS-i. Histopatoloogilised muutused ja viiruse asukohtpõrnjaneeruduuriti ja immuunsüsteemiga seotud geenide ekspressioon määrati qPCR abil 7 ja 14 päeva pärast nakatumist. Meie tulemused näitasid, et GNAstV infektsioonist põhjustatud põrna lümfotsüütide ja neeruepiteelirakkude degeneratsioon ja nekroos ning need rakud olid viiruse suhtes positiivsed. Lisaks kutsus GNAstV infektsioon esile mustrituvastusretseptorite (RIG-I, MDA-5 ja TLR3) ja võtmeadaptermolekulide aktiveerimise.

(MyD88, MAVS ja IRF7) põrnas ja neerus ning reguleeris üles interferooni geeniekspressiooni põrnas ja viirusevastaseid valke (MX1, OASL ja IFITM3) põrnas ja neerus. Lisaks leiti kõrge interleukiini (IL)-1 ja IL-8 ekspressioonitase põrnas ning iNOS-i ekspressioonitase põrnas ja neerus. Need tulemused näitasid, et GNAstV infektsioon aktiveeris peremeesorganismi kaasasündinud immuunvastuse. Lisaks suurendas GNAstV infektsioon CD8t, MHCI ja MHCII ekspressioonitasemeid, mis näitab, et adaptiivne immuunvastus oli aktiveeritud. Pealegi ekspresseeriti TGF-i põrnas ja neerudes tugevalt, mis võib olla GNAstV immuunvastuse strateegia infektsiooni tekitamiseks. Huvitaval kombel vähenes nii IL-1 kui ka IL-6 mRNA tase neerudes, mis võib aidata vähendada neerukahjustusi. See on esimene uuring, mis teatas muutustest immuunsüsteemiga seotud geeniekspressioonis vastuseks GNAstV infektsioonile, ja meie tulemused annavad ülevaate viiruse patogeneesist.

Märksõnad: hane nefriitiline astroviirus, immuunvastus, põrn, neer, hanepoeg

Klõpsake siin, et saada teavet tsisternide varre eeliste kohta ja omada kogemusi

SISSEJUHATUS

Alates 2017. aastast on mitmes hanekarjas Ida-Hiinas 4- kuni 16-ühepäevastel hanepoegadel ilmnenud tõsine podagra puhang, mis on toonud kaasa suuri majanduslikke kahjusid hanetööstusele. Nakatunud hanepoegadel oli vähenenud kehakaal ning neerud paistes ja kahvatud, kusejuhades esinesid valged uraadid ning vistseraalsete organite ja liigeseõõne pinnal uraaditase. 2018. aastal eraldati nakatunud hanepoegadest uus hane astroviirus, mille paljunemiskatsed tõestasid, et see on hanepodagra haiguse peamine põhjustaja. See viirus erines geneetiliselt tuntud mam astroviirusest ja astroviirusest. See moodustas eraldiseisva kladi vastavalt täispika ORF2 valgu (kapsiidivalgu) aminohappejärjestusele, mis on genoomi kõige varieeruvam piirkond. Seetõttu tuleks rohkem tähelepanu pöörata viiruse poolt hanepoegadele tekitatavale kahjule. Käesolevas uuringus nimetatakse uut hane astroviirust hane nefriidi astroviiruseks (GNAstV).

Kuna GNAstV on äsja esilekerkiv viirus, on enamik uuringuid keskendunud selle isoleerimisele, geneetilisele analüüsile ja diagnostikameetodite loomisele (Yuan et al., 2018; Wan jt, 2019; Yin jt, 2020). Siiski on vähe teada peremeesorganismi immuunvastusest GNAstV infektsioonile. Hane nefriitiline astroviirus põhjustab hanepoegadel peamiselt neeru-, maksa- ja põrnakahjustusi ning neerudes ja põrnas on avastatud suurem viiruskoormus võrreldes teiste elunditega (Jin et al, 2018; Xu et al, 2019). Põrnakahjustused ja suur viiruskoormus näitavad, et viirus võib kahjustada immuunvastust. Kaasasündinud immuunsüsteem mängib viirusnakkuse ajal olulist rolli, olles esimene kaitseliin viiruse sissetungi vastu (Chow J et al., 2015). Mustri tuvastamise retseptorid (PRR) tunnevad ära viiruse nukleiinhapped ja kutsuvad esile kaasasündinud vastuse, sealhulgas tsütokiinide, nagu I-1, TNF-x ja IFN, ning viirusevastaste valkude, nagu OASL, IFITM3 ja MX1, tootmise. Membraaniga seotud Toll-like retseptor 3 (TLR3) ja tsütosoolsed RIG-I-sarnased retseptorid, mis sisaldavad peamiselt RIG-1 ja MDA-5, on kõige olulisemad PRR-id, mis tunnevad ära viiruse RNA. Kaasasündinud immuunvastus kutsub esile signaali, et kutsuda esile adaptiivne immuunvastus, mis kontrollib viirusnakkust nakkuse järgnevas faasis. Adaptiivne immuunsüsteem hõlmab antikeha-vahendatud/B-raku vastuse I vastust ja rakuvahendatud vastust, mis nõuavad CD3 plus, CD4 plus, CD8 plus ja MHC klassi I ja II molekulide kaasamist. Praegu on ebaselged mehhanismid, mille abil GNAstV mõjutab peremeesorganismi kaasasündinud ja adaptiivseid immuunvastuseid. Hiina on koduks maailma suurimale hanepopulatsioonile; seetõttu on hane immuunvastuse uurimine GNAstV infektsioonile oluline GNAstVandi patogeensuse ja immuunsuse mehhanismi selgitamiseks, mis kontrollib selle levikut. Selles uuringus olid 2-päevased hanepojad nakatunud GNAstV-ga. Seejärel uuriti histopatoloogilisi muutusi ja viiruse asukohta, samuti immuunsüsteemiga seotud geeniekspressiooni põrnas ja neerus.

MATERJALID JA MEETODID

Eetikaavaldus

Kõik loomkatsed viidi läbi vastavalt teadus- ja tehnoloogiaministeeriumi (Peking, Hiina) katseloomade suunistele ning need kiitis heaks Nanjingi põllumajandusülikooli institutsionaalne loomade hooldamise ja kasutamise komitee.

Viirus

GNAstV-JSHA isolaat (GenBank registreerimisnumber MK125058) eraldati haigetelt podagraga hanepoegadelt (Jiangsu provints, Hiina) ja seda hoiti meie laboris. GAstV-JSHA tiiter oli 1 × 104.{5}} protsenti koekultuuri infektsioossest annusest (TCID50)/ml, määratuna hane neeru epiteelirakkude tiitrimisega vastavalt Reed & Muenchi meetodile.

Loomkatse

Põrna- ja neeruproovid koguti meie eelmisest loomkatsest, mida kirjeldati Xu uuringus (Xuet al., 2019). Lühidalt, 2-päevased nelikümmend GNAstV-nakkuseta hanepoega jaotati juhuslikult kahte rühma: nakkus- ja negatiivne kontrollrühm. Iga nakkusrühma hanepoeg nakatati intramuskulaarse inokuleerimise teel 0,5 ml GNAstV-JSHA-ga, samas kui negatiivse kontrollrühma hanepoegadele inokuleeriti sama kogus PBS-i.

Kõiki hanepoegi jälgiti iga päev kliiniliste tunnuste suhtes. 7 päeva pärast nakatumist (dpi) surmati igast rühmast 10 hanepoega ja uuriti suuri muutusi ning seejärel koguti neer ja põrn. Osa neist probleemidest fikseeriti histopatoloogiliseks uuringuks 10-protsendilises formaldehüüdis, ülejäänud säilitati edasiste katsete jaoks -80 kraadi juures. 14 dpi juures ellujäänud hanepojad surmati ning koed koguti ja säilitati, nagu eespool mainitud.

Histopatoloogiline uuring

Fikseeritud proovid dehüdreeriti alkoholide seeriaga, selgitati ksüleenis ja sisestati parafiini. Seejärel lõigati proovid järjestikku 4 μm sektsioonideks ja värviti rutiinsete meetoditega hematoksüliini ja eosiiniga. Värvitud lõike uuriti valgusmikroskoobiga.

Viiruse asukoha tuvastamine in situ hübridiseerimise abil

In situ hübridisatsiooni (FISH) meetod viidi läbi vastavalt kaubandusliku ISH komplekti (Boster, Hiina) juhistele koos mõningate muudatustega. Enne ISH läbiviimist testiti proovi tundlikkust ja spetsiifilisust ning optimeeriti seeria eeltöötluste abil. Lühidalt, deparafineeritud koelõike töödeldi eelnevalt HCl-ga (0,2 M, 15 min) ja proteinaasi K-ga (40 ug/mL, 20 min, 37 kraadi). Proteaas K inhibeeriti fikseerimisega 4% paraformaldehüüdis 5 minuti jooksul. Seejärel viidi läbi hübridisatsiooni ja hübridisatsioonijärgsed etapid. Sondid lisati hübridisatsioonipuhvrile kontsentratsioonis 0.{10}} ug/mL; sonde sisaldav puhver denatureeriti 98 kraadi juures 10 minutit ja jahutati kohe jääl. Ligikaudu 20 μl hübridisatsioonisegu pipeteeriti koelõikudele, kaeti dietüülpürokarbonaadiga töödeldud katteklaasidega ja inkubeeriti 16–20 tundi 42 kraadi juures. Viiruse RNA-ga hübridiseerunud sondid tuvastati 3,3-N-diaminobensidiintetrahüdrokloriidiga konjugeeritud DIG-vastase antikeha abil. Objektiklaasid värviti metüülrohelisega ja suleti neutraalse kummiga. Tundlikkuse parandamiseks kasutati proteinaas K-d kudede läbilaskvuse suurendamiseks, et hõlbustada sondide sisenemist koesse.

Immuungeenide analüüs kvantitatiivse reaalajas PCR abil

Kogu RNA ekstraheeriti Trizoliga (Invitrogen, CA) ja RNA pöördtranskriptsioon viidi läbi, kasutades HiScript Q RT SuperMix komplekti (Vazyme, Hiina). Kvantitatiivseks PCR-iks kasutati termotsüklirit (AB7300; Life Technologies). Immuunsüsteemiga seotud geenide määramiseks kasutati tarkvara Primer 5.0, nagu on näidatud tabelis 1. Ribonukleiinhappe ekspressioon normaliseeriti GAPDH kui majapidamisgeeni kvantifitseerimisega. Suhtelisi transkriptsioonitasemeid analüüsiti meetodil, kasutades 2-AACT-d

Statistiline analüüs

Kontrollrühma ja katserühma vahelisi erinevusi analüüsiti Studenti t-testiga. Tulemused on väljendatud keskmise ± standardhälbena. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistical="" significance="" compared="" with="" the="" control="" group,="" and="">< 0.01="" was="" considered="" to="" indicate="" a="" high="" degree="" of="" significance="" compared="" with="" the="" control="">

TULEMUSED

Kliinilised muutused

Inokuleerimata kontrollis ei täheldatud surma ega ilmseid kliinilisi tunnuseid. Kuid 20 nakatunud hanepoegadest 5 suri katse ajal ja GNAstV-ga nakatunud hanepoegadel täheldati kehakaalu langust. Lahkamisel tundusid negatiivse kontrollrühma elundid normaalsed, kuid surnud hanepoegadel tuvastati elundite (maks, süda ja neerud), sapikottide ja liigeseõõne pinnal uraaditaset. Lisaks täheldati kõigil nakatunud hanepoegadel paistes ja kahvatuid neere, kus kusejuhades oli valge uraat. Patoloogilisi muutusi näidati meie eelmises uuringus (Xu et al..2019). Need tulemused näitasid, et oleme edukalt loonud hanepoegadel GNAstV nakkuse loommudeli.

Histopatoloogilised muutused neerudes ja põrnas

Histopatoloogilisel uuringul olid negatiivse kontrolli hanepoegade neerud ja põrnad histoloogiliselt normaalsed (joonised 1A ja 1B). Kuid neerude epiteelirakkude degeneratsioon ja nekroos japõletikulinenakatunud hanepoegade neerudes täheldati rakkude infiltratsiooni (joonis 1C). Lisaks põrna nekrooslümfotsüüdidja põletikuliste rakkude infiltratsioon leiti ka põrnades (joonis 1D).

Viiruse asukoht neerudes ja põrnas

Hane nefriitilise astroviiruse asukohta neerudes ja põrnas uuriti ISH abil. Nagu on näidatud joonisel fig 2, tuvastati neerutuubulite epiteelirakkude tsütoplasmas mitmeid pruune osakesi, kuid neeru glomerulites pruune osakesi ei täheldatud. Põrna lümfotsüütides ja põrna makrofaagirakkudes tuvastati vähe pruune osakesi. Need tulemused näitavad, et GNAstV võib nakatada neerutuubulaarseid epiteelirakke ja põrna lümfotsüüte.

PRR-i ja adaptermolekulide ekspressioon GNAstV-ga nakatunud hanepoegade põrnas ja neerus PRR(RIG-1, MDA-5 ja TLR3) ja võtmeadaptermolekulide (MAVS, MyD88 jaIRF7) põrnades ja neerudes määrati qPCR abil, nagu on näidatud joonisel 3. 3 PRR-i mRNA tase põrnas oli nakatunud rühmas 7 ja 14 dpi juures märkimisväärselt suurenenud võrreldes negatiivse kontrollrühmaga (P<0.05). the="" rig-1="" and="" tlr3="" mrna="" levels="" in="" the="" kidneys="" were="" also="" increased="" in="" the="" infected="" group="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" compared="" with="" that="" in="" the="" negative="" control="">< 0.01).="" the="" mda-5="" mrna="" level="" was="" higher="" in="" the="" infected="" group="" at="" 14="" dpi,="" but="" no="" difference="" in="" mda-5="" mrna="" expression="" was="" observed="" between="" the="" infected="" and="" negative="" control="" groups="" at="" 7="" dpi(p="">0.05). Seega oli adaptermolekulide ekspressioon nakatunud rühmas 7 ja 14 dpi juures oluliselt kõrgem kui kontrollrühmas (P<0.05). these="" results="" indicate="" that="" gnastv="" infection="" activates="" the="" host's="" innate="" immune="">

Tsütokiini ekspressioon GNAstV-ga nakatunud hanepoegade põrnas ja neerus

Tsütokiini IL-1, I-6, IL-8, Ⅱ-10, TGF-B ja iNOS ekspressioonid määrati qPCR abil, nagu on näidatud joonisel 4. Põrnas IL-1B ja TGF-B mRNA tasemed nakkusrühmas 7. ja 14.dpi olid ilmselgelt kõrgemad kui negatiivse kontrollrühma omad (P<0.01). furthermore,="" the="" i-8="" and="" inos="" mrna="" levels="" in="" the="" infection="" group="" at="" 14="" dpi="" were="" higher="">< 0.05).="" but="" no="" differences="" in="" the="" levels="" were="" observed="" between="" the="" infection="" and="" negative="" control="" groups="" at="" 7="" dpi(p=""> 0.05). Moreover, no difference in I-6 mRNA expression at 7 and 14 dpi was observed between the infection and control groups(P>0.05). Neerudes olid I-1 mRNA tasemed 7 ja 14 dpi juures ning I-6 7 dpi juures infektsioonirühmas madalamad kui negatiivses kontrollrühmas (P< 0.05),="" whereas="" the="" tgf-b="" and="" inos="" mrna="" levels="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" and="" the="" i-8="" mrna="" level="" at="" 14="" dpi="" were="" higher="" in="" the="" infection="" group="" than="" those="" in="" the="" negative="" control="" group=""><0.05). no="" difference="" in="" i-10="" expression="" was="" detected="" between="" the="" infection="" and="" control="" groups(p="">0.05).

Viirusevastaste valkude ekspressioon GNAstV-ga nakatunud hanepoegade põrnas ja neerus

IFN-d mRNA tase. põrnas ning viirusevastaste valkude (OASL, IFITM3.ja MIX1) ekspressioon neerus ja põrnas määrati nii, nagu on näidatud joonisel 5. Põrnas määrati mRNA tasemedIFN-2. OASL, IFITM3 ja MX1 7 ja 14 dpi juures olid nakatunud rühmas oluliselt kõrgemad kui negatiivses kontrollrühmas (P< 0.05).="" in="" the="" kidney,="" the="" mrna="" levels="" of="" oasl,="" ifitm3,="" and="" mx1="" at="" 14="" dpi="" were="" obviously="" higher="" in="" the="" infected="" group="" than="" in="" the="" negative="" control="" group=""><0.05); however,="" no="" significant="" differences="" in="" levels="" were="" observed="" between="" the="" infection="" and="" negative="" control="" group="" at="" 7="" dpi(p="">0.05).

CD4t, CD8 plus ja MHC klassi ja I molekulide ekspressioon GNAstV-ga nakatunud hanepoegade põrnas

Antigeeni esitlemisega seotud geenide (CD4', CD8', MHC klass I ja II molekulid) ekspressioon põrnas määrati qPCR abil, nagu on näidatud joonisel 6. MHC I ekspressioonitasemed 7 ja 14 juuresdpi olid nakatunud rühmas oluliselt kõrgemad kui negatiivse kontrollrühma omad (P < 0,05).="" mhc="" ii="" ekspressioonitasemed="" 14="" dpi="" juures="" olid="" nakatunud="" rühmas="" ilmselgelt="" kõrgemad="" kui="" negatiivses="" kontrollrühmas=""><0.05); however,="" no="" difference="" in="" levels="" was="" observed="" between="" the="" 2="" groups="" at="" 7="" dpi(p="">0.05). CD8 pluss mRNA tasemed 7 ja 14 dpi juures olid nakatunud rühmas oluliselt kõrgemad kui negatiivses kontrollrühmas (P< 0.05).="" but="" no="" changes="" in="" cd4+mrna="" levels="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" were="" found="" between="" the="" 2="" groups="" (p="">0.05).

ARUTELU

Hane nefriitiline astroviirus on äsja isoleeritud viirus, mis võib põhjustada vistseraalset podagra ja hanepoegade surma, põhjustades suuri kahjusid hanekarjadele.Seni ei ole selle raviks vaktsiine ega raviaineid. Seetõttu on vaja uurida peremeesorganismi immuunvastust viirusele, et mõista selle patogeneesi ning töötada välja vaktsiinid ja ravimeetodid. Selles uuringus lõime edukalt loommudeli hanepoegadel intramuskulaarse inokuleerimise teel GNAst V-JSHA-ga. Viiruse paiknemine põrna lümfotsüütides ja makrofaagides ning põrna lümfotsüütide nekroos näitavad, et GNAstV võib nakatada põrna ja põhjustada peremeesorganismi immuunsüsteemi kahjustusi. Seni pole aga teateid GNAstV-ga nakatunud hanepoegade immunoloogilise vastuse kohta. Lisaks täheldati neeruepiteelirakkudes kõrget viiruse tiitrit. ja see võib kaasa aidata neerukahjustustele ja kusihappe eritumise häiretele.

Kaasasündinud immuunsüsteem on esimene kaitseliin sissetungiva patogeeni vastu. Meie uuringus põhjustas GNAstV infektsioon TLR3 suurenemise. RIG-1 ja MIDA-5 mRNA ekspressioon põrnas ja neerus, mis näitab, et kaasasündinud immuunsüsteem aktiveerus, mis võib kaasa aidata viiruse invasiooni pärssimisele. Peamiste adaptermolekulide (MyD88 ja IRF7) ülesreguleerimine ) kinnitas neid tulemusi veelgi. IFN toodetakse pärast PRR-i aktiveerimist, mis mängib kriitilist rolli viiruse supressioonis mitmete IFN-stimuleeritud geenide indutseerimise kaudu, mille toodetel on otsene viirusevastane toime. Meie uuringus suurenes pärast GNAstrV infektsiooni IFN-z ekspressioon põrnas ja viirusevastaste valkude (OASL, MX1 ja IFITM3) ekspressioon põrnas ja neerus. Viirusevastaste valkude suurenenud tootmine võib olla kasulik viiruse invasiooni pärssimiseks. Vastavalt sellele näitasid meie tulemused, et TLR3.RIG-1. MDA-5 ja IRF7 aktiveeriti GNAstV infektsiooni ajal. Eelnev uuring näitas ka, et süsteemi tüüp piirab inimese astroviiruse replikatsiooni in vitro ja in vivo ning pakub kaitset astroviiruse poolt indutseeritud barjääri läbilaskvuse eest (Marvin et al..2015). TLR3 ja OASL leiud erinesid aga teiste põrna PRR-i ja viirusevastaste valkude leidudest, kuna nii TLR3 kui ka OASL ekspressioon vähenes 14 dpi juures võrreldes 7 dpi-ga. See võib olla seotud negatiivse tagasiside reguleerimisega või viiruskoormuse vähendamisega. Järelikult võib lL-1B 14 dpi juures olla tingitud keha regulatsioonimehhanismidest liigse põletikueelse tsütokiini tootmise vastu. Huvitav on see, et nakatunud rühmas vähenes I-1 mRNA tase neerudes. Selle põletikueelse tsütokiini madalam tase võib aidata leevendada neerukahjustusi. Varasemad uuringud teatasid, et inimese astroviiruse ja kalkuni astroviiruse tüüp 2 (TASt V-2) infektsioonid ei olnud seotud põletikuga ja põhjustasid vähe kahjustusi soolestiku villides (Koci et al..2003; Sebire et al.2004), mis viitab sellele, et et see võib olla epiteelirakkude astroviirusnakkuse tunnuseks. I-6 on ka põletikuline tsütokiin, mis kutsub esile viirusevastase toime tõhusa immuunvastuse kaudu, kuid osaleb ka protsessides, mis põhjustavad veresoonte kahjustusi,põletikveresoonte seina ja tromboos. Meie uuringus ei leitud pärast GNAstV-nakkust põrnas olulisi muutusi IL{0}}-s; see võib olla seotud suurte erinevustega üksikute hanepoegade vahel. Kuid I-6 ekspressioon vähenes neerudes, sarnaselt -1B; see võib samuti aidata leevendada neerukahjustusi. I-8 on vahendaja, kes vastutab lokaalses põletikulises infiltraadis osalevate neutrofiilide värbamise eest. Selles uuringus oli I-8 põrnas ja neerus ülesreguleeritud ning see võis seega kaasa aidata põletiku tekkele. IL-10 on põletikuvastane tsütokiin, mis võib pärssida põletikueelset tsütokiini tootmist. Selles uuringus põhjustas GNAstV IL-10 taseme ilmse languse põrnas; see võib viidata tõsisele põrna põletikule ja üks põrnakahjustuse põhjusi. Samuti on näidatud, et nakatumine teiste viirusnakkustega, nagu Jaapani entsefaliidi viirus ja Zika viirus, põhjustab I-10 ekspressiooni vähenemist (Swarup et al. 2007; Abreu 2019), kuid täpne mehhanism aluseks olev GNAstr Vinfection vajab täiendavat uurimist. TGF- on immunosupressiivne tsütokiin. Seega näitab TGF-B taseme tõus põrnas ja neerus, et GNAstV infektsioon võib esile kutsuda immuunsupressiooni. Lisaks teatati, et T AStV-2 infektsioon tõstis kalkunite seerumi TGF-taset (Koci et al. 2003). On näidatud, et suurenenud TGF-i tootmine pärsib immuunvastust ja suurendab viiruse replikatsiooni (Letterio ja Roberts, 1998). Seega võib suurenenud TGF-i tootmine aidata kaasa GNAstV replikatsioonile, pärssides peremeesorganismi immuunvastust. iNOS on kaasasündinud immuunvastuse oluline komponent ja mängib võtmerolli viirusnakkuste kontrolli all hoidmisel. Meie uuringu tulemused näitasid, et GNAstV infektsioon

ilmselgelt ülesreguleeritud INOS-i ekspressioon. Kõrge iNOS-i tootmine võib võimaldada peremeesorganismil viirusinfektsioonile vastu seista. Meie tulemused olid kooskõlas varasemate uuringute tulemustega, mis näitasid, et TAStV{0}} infektsioon indutseerib iNOS-i tootmist, mis piirab astroviiruse replikatsiooni (Qureshi et al., 200l; Koci jt, 2004; Meyerhoff et al., 2012). ).

Adaptiivne immuunsüsteem mängib viirusnakkuste kontrolli all hoidmisel võtmerolli. Meie uuringus suurendas GNAstVinfection MHC Ia, MHC Iix ja CD8 plus mRNA taset ning see näitab, et humoraalsed ja rakulised immuunvastused olid aktiveeritud. Varem teatati, et inimese astroviirusnakkus kutsub esile antikehade tootmise, mis võivad viiruse neutraliseerida (Kurtzand Lee, 1978). Siiski ei leitud uuringus olulisi muutusi CD4 pluss mRNA ekspressioonis. Arvestades, et CD4"T-rakud on B-rakkude küpsemise ja antikeha spetsiifilisuse jaoks olulised, on võimalik, et GNAst V ei suutnud esile kutsuda tugevat humoraalset immuunvastust. See võib seletada, miks 7 dpi juures ei täheldatud MHC Ⅱaekspressiooni ilmset suurenemist. Lisaks , CD8 ja MHCIa mRNA tasemed 14 dpi juures langesid võrreldes 7 dpi-ga. See võib olla seotud viiruste koormuse vähenemisega, nagu eespool mainitud. Selles uuringus ei tuvastatud GNAst V antikeha, kuna kaubanduslikku komplekti pole saadaval. , tuleb täiendavalt uurida antikehade rolli GNAstVinfectionis.

Kokkuvõttes näitasid meie andmed immuunvastuse mustreid GNAst V-ga nakatunud hanepoegade põrnas ja neerus. GNAst V infektsiooni korral aktiveeriti kaasasündinud ja adaptiivse immuunsusega seotud geenid. Tsütokiinide ja viirusevastaste valkude tootmine aga hanepoegi haiguse eest ei kaitsnud. See on esimene uuring, milles teatatakse muutustest immuunsüsteemiga seotud geeniekspressioonides vastuseks GNAst Vinfectionile, mis võib veelgi aidata selgitada peremeesorganismi GNAstV interaktsioonide molekulaarseid mehhanisme.