Fenüületanoidglükosiidide biosünteesis osalevate vesinikperoksiidile reageerivate EST-de tuvastamine Cistanche Salsa rakukultuuris

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

J. CHEN et al

Abstraktne
Vesinikperoksiid on tõhus abiootiline esilekutsuja, mis võib taimedes esile kutsuda sekundaarse metaboliidi biosünteesi. Näitame, et soolataluva ravimtaime rakususpensiooni kultuurisCistanchesalsa, bioaktiivsete komponentide tootminefenüületanoidglükosiidid(PeGs) suurenes pärast H2O2-ga töötlemist. PeG-dega seotud geenide tuvastamiseks(fenüületanoidglükosiidid)H2O2 poolt mõjutatud biosünteesi, koostasime H2O2-le reageerivate geenide supressiooni subtraktiivse hübridisatsiooni raamatukogu, kasutadesCistanchesalsarakuliini ja tuvastas 105 ekspresseeritud järjestuse märgist (EST) ja 85 geeni. EST raamatukogu funktsionaalne annotatsioon ja geeniontoloogia analüüsid näitasid geene, mis on seotud erinevate stressireaktsioonidega, sekundaarsete metaboliitide biosünteesiga ja transkriptsiooni regulatsiooniga. Nende hulgas tuvastasime kaks PeG-dega seotud geeni(fenüületanoidglükosiidid)biosünteesi rada (4-kumaraatkoensüüm A ligaas ja tsinnamaadi 4-hüdroksülaas) ja kaks WRKY tüüpi transkriptsioonifaktorit. Valitud geenide ekspressioone pärast H2O2-ga töötlemist analüüsiti RT-qPCR abil. PeG varajane suurenenud transkriptsioon(fenüületanoidglükosiidid)biosünteesi raja geenid näitasid pärast ravi, et H2O2 indutseeris PeG-sid(fenüületanoidglükosiidid)biosüntees selle võtmegeenide ülesreguleerimise kaudu.
Täiendavad märksõnad: tsinnamaat-4-hüdroksülaas, 4-kumaraatkoensüüm A ligaas, subtraktiivse hübridisatsiooni supressioon.Cistanchesalsa. fenüületanoidglükosiidid.

Sissejuhatus

Cistanchesalsaon mitmeaastane parasiit haloxylos ammodendrun juurtel ja kasvab Lääne-Hiina kõrbealal. Sajandeid,Cistancheliiki on kasutatud traditsioonilise ravimtaimena (Wang et al. 2012). Bioaktiivsed komponendid onfenüületanoidglükosiidid(PeG-d), millel on märkimisväärne mõju reaktiivsete hapnikuliikide (ROS) kliirensile, kiirguskaitsele, immuunsuse tugevdamisele ja vananemisvastasele toimele (Nan et al. 2013). PeG-d(fenüületanoidglükosiidid)biosüntees sisseCistancheinitsieeritakse fenüülalaniinist (joonis 1 lisa) ja sünteesitud kofeiinhapet glükosüülitakse edasi erinevate PeG-de moodustamiseks(fenüületanoidglükosiidid)(Wang jt 2012). Kolm peamist PeG-d(fenüületanoidglükosiidid), ehhinakosiidi, akteosiidi ja 2'-atsetüüllakteosiidi peetakse kõige aktiivsemateks komponentideksCistanche(Kobayashi et al. 1984). Nende sisu täiustamiseksCistancherakukultuuris on testitud erinevaid esilekutsujaid, sealhulgas kitosaan, putrestsiin, Ag plus ja osmootne stress (Ouyang et al. 2005a,b, Cheng et al. 2005, 2006, Liu jt 2007, Liu ja Cheng 2008). Kuid PeG-dega seotud geenid(fenüületanoidglükosiidid)biosüntees sisseCistanche, peamiselt fenüülalaniini metabolismi raja geene, on harva tuvastatud. Hiljuti tuvastati Cistanche deserticolas ainult fenüülalaniini ammoniaaklüaasi (PAL) kodeeriv geen (Hu et al. 2011). Teised geenid, mis kodeerivad näiteks tsinnamaadi-4-hüdroksülaasi (C4H), mis võib katalüüsida tsinnamaadi muundumist kumarhappeks, ja 4-kumaraatkoensüüm A ligaasi (4CL), mis on ligniini ja flavanoidide oluline geen. biosüntees, ei ole leitudCistanche.
Me kasutasime rakukultuuriCistanchesalsaPeG-de uurimiseks(fenüületanoidglükosiidid)biosüntees ja sellega seotud geenide ekspressioon. Samuti uurisime tõhusa esilekutsuja H2O2 mõju PeG-dele(fenüületanoidglükosiidid)biosüntees. Lisaks leida PeG-des osalevad varakult reageerivad geenid(fenüületanoidglükosiidid)biosünteesi käigus viisime läbi supresseeriva subtraktiivse hübridisatsiooni (SSH), et koostada H2O2-tundlike geenide cDNA raamatukogu.

Joonis 1. RT-qPCR-ga määratud suhteline geeniekspressioon pärast H2O2-ga töötlemist. CsWRKY1 - WRKY transkriptsioonifaktor (Contig07), CsC4H1 - tsinnamaat4-hüdroksülaas (Contig09), Cs4CL1 - 4-kumaraat: ligaas (Contig03), CsHSP1 - kuumašoki valk 70 kDa (Contig 01) ja CsSOD1 - superoksiidi dismutaas (Contig16). Rakke töödeldi 80 ug dm -3 H2O2-ga vedelas keskkonnas 2 tundi ja ekspressioone võrreldi veega töödeldud kontrolliga. Tähendab pluss - kolme bioloogilise korduse SD; * - P < 0,05,="" **="" -="" p=""><>

materjalid ja meetodid

CS2001 rakuliin loodi kroonlehtedestCistanchesalsa(CA Mey.) Beck koguti Neimenggu provintsis ja subkultuuris. Kultiveerimismeetod sarnanes varem avaldatud protokolliga (Liu et al. 2007). Üldiselt kasutati subkultuuri jaoks tahket Murashige ja Skoogi (1962; MS) söödet ja PeG-de jaoks vedelat söödet(fenüületanoidglükosiidid)biosüntees (see oli modifitseeritud MS sööde, millele oli lisatud 30 g dm-3 glükoosi ja 20 mg dm-3 indool-3-äädikhapet). H2O2-ga töötlemiseks inokuleeriti 5.0 ± 0,2 g rakku kiire kasvuperioodi jooksul, tavaliselt 20–30 päeva pärast nende subkultuuri tahkes söötmes, 50 cm3 vedelasse söötmesse 250 cm3 Erlenmeyeri kolvis. ja kultiveeritakse pimedas erineva H2O2 kontsentratsiooniga või ilma. PeG-d(fenüületanoidglükosiidid)sisaldust pärast 10-päevast induktsiooni H2O2-ga analüüsiti varem avaldatud meetodil (Liu et al. 2007), mis põhines pöördfaasi kõrgsurvevedelikkromatograafial metanooli gradiendiga elueerimisel.

Rakud koguti 2 tundi pärast H2O2 töötlemist söötmest filterpaberiga, kasutades Büchneri lehtrit, seejärel külmutati vedelas lämmastikus ja jahvatati pulbriks. Iga 2 g rakupulbrit lüüsiti, kasutades 1 cm3 2-merkaptoetanooli, 1 cm3 200 g dm{{10}} sarkosüüli, ja 8 cm3 GTC puhvrit (5 M guanidiiniumsotiotsüanaat, 62,5 mM Tris-HCl, pH 8,0, 6,25 mM EDTA, pH 8,0, 5 mM tiouurea ja 10 mM ditiotreitool). Seejärel inkubeeriti rakke jääl 15 minutit, seejärel lisati 1/3 mahust 8,5 M CH3COOK-i, pH 6,0, ja rakke inkubeeriti jääl 15 minutit ja seejärel tsentrifuugiti 15 000 g juures 15 minutit. . Supernatant lisati kogu RNA sadestamiseks võrdsele mahule isopropanoolile. Kogu RNA-d puhastati täiendavalt RNeasy minikomplektiga (Qiagen, Hilden, USA) vastavalt tootja juhistele. Messenger RNA eraldati kogu RNA-st, kasutades Oligotex mRNA midi komplekti (Qiagen).

fenüületanoidglükosiididsisseCistancheSalsa

SSH raamatukogu genereeriti kontroll- ja 30% H2O2- esilekutsutud rakuproovidest 2 tundi pärast esilekutsumist, kasutades PCR-select cDNA lahutamise komplekti (Clontech, Mountain View, USA). Raamatukogu ehitamiseks puhastati tooted eraldi, kasutades geelipuhastuskomplekti (Qiagen) ja klooniti pGEM vektorisse, kasutades TA kloonimiskomplekti (Tiangen, Peking, Hiina). Sõltumatute kloonide plasmiidid eraldati ja sekveneeriti, kasutades T7 praimerit. Kõiki raamatukogust pärit ekspresseeritud järjestuse märgise (EST) järjestusi (koos vektorjärjestuste eemaldamisega) kasutati pidevaks kokkupanekuks CAP3-ga (//doua.prabi.fr/software/cap3). EST-d rühmitati kontiigideks ja üksikuteks; neid kasutati homoloogiaotsinguks, kasutades NCBI programmi BLASTx (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov). Seejärel märgiti järjestusi, analüüsiti ja klassifitseeriti vastavalt geeniontoloogia (GO) terminitele, kasutades Blast2GO-d (//www. blast2go.com).
Reaalajas kvantitatiivne polümeraasi ahelreaktsioon (RT-qPCR) viidi läbi vastavalt Bustini et al. (2009). cDNA proovid sünteesiti PrimeScript RT reaktiivikomplekti (Takara, Dalian, Hiina) abil 0,5 ug kogu RNA-st. RT-qPCR viidi läbi, kasutades SYBR Premix Ex Taq II ja ROX plus komplekte (Takara) ABI 7300 reaalajas PCR-süsteemis (Applied Biosystems, Foster City, USA) kolme tehnilise kordusega. Praimerid kujundati veebipõhise tarkvara Primer3 abil vastavalt Takara antud juhistele; selles uuringus kasutatud praimerid on loetletud tabelis 1 Suppl. Geeniekspressioonid normaliseeriti 18S RNA-ks, mille ekspressioon oli kõigis proovides stabiilne.

Tulemusi analüüsiti R versiooni 3.1.1 abil, erinevuste olulisust kontrolliti Studenti t-testiga.

Tulemused

Vesinikperoksiid indutseeris kõigi kolme peamise PeG biosünteesi(fenüületanoidglükosiidid)sisseCistanchesalsasuspensioonrakud (tabel 1), kuid ilma nähtava mõjuta rakkude kasvule (joonis S2). Ehhinakosiidi sisaldus tõusis juba pärast 10 ug dm-3 H2O2-töötlust (P < 0.05),="" suurem="" tõus="" registreeriti="" pärast="" 20="" ug="" dm="" -3="" h2o2-ravi="" (p="">< 0,01)="" ja="" suurim="" tõus="" oli="" pärast="" 40,="" 80="" ja="" 160="" ug="" dm-3="" h2o2-ravi.="" sarnased="" tulemused="" on="" näidatud="" ka="" akteosiidi="" kohta,="" kuid="" selle="" sisaldus="" saavutas="" haripunkti="" pärast="" 80="" ug="" dm="" -3="" h2o2-ga="" töötlemist.="" 2'-atsetüüllakteosiidi="" biosüntees="" oli="" h2o2="" töötlemise="" suhtes="" vähem="" tundlik;="" selle="" sisalduse="" märkimisväärne="" tõus="" (p="">< 0,05)="" oli="" h2o2="" kontsentratsioonidel="" üle="" 40="" ug="" dm-3.="" pärast="" 80="" ug="" dm-3="" h2o2-ga="" töötlemist="" on="" kõigi="" kolme="" peamise="" peg-i="">(fenüületanoidglükosiidid)suurenes oluliselt (P < 0,01)="" võrreldes="" kontrolliga.="" seetõttu="" kasutati="" seda="" kontsentratsiooni="" edasistes="">
H2O2 poolt ülesreguleeritud varakult reageerivate geenide jaoks rikastatud raamatukogu loomiseks kasutasime cDNA-dCistanchesalsasuspensioonrakke töödeldi 80 ug dm-3 H2O2-ga 2 tundi. SSH raamatukogu 129 rekombinantse klooni ühekäiguline sekveneerimine andis pärast vektorjärjestuse välistamist 105 puhast EST-i. Neid selgeid EST-sid kasutas kokkupanekuks CAP3 ning genereeriti 18 kontiigi ja 67 üksikut (tabel 2). Seega eraldati selles raamatukogus 85 geeni. Puhaste 105 EST-i keskmine pikkus oli 527 aluspaari, mis on piisav järjestuse sarnasuspõhise funktsionaalse klassifikatsiooni jaoks.

fenüületanoidglükosiididsisseCistancheSalsa

Kõik raamatukogust saadud 85 geeni otsiti BLASTx-ga GenBanki mitteliigse valgu andmebaasi põhjal järjestuste sarnasuse tuvastamiseks (E-väärtus väiksem kui 0.001 või sellega võrdne). Kakskümmend üks geen ei näidanud andmebaasis ühtegi tabamust, need võivad olla spetsiifilisedCistanchesalsa. BLASThitsi tulemused imporditi Blast2GO tarkvarasse edasiste GO ja KEGG raja rikastamise analüüside jaoks. 64-st BLAST-i tabamust saanud geenist 50 märgiti teiste liikide homoloogsete geenide kirjelduse järgi. Annoteeritud geenid nimetati vastavalt BLAST-i tabamuste kirjeldusele. GO analüüs (joonis 3 lisa) näitab, et nende 50 geeni hulgas oli 14 geeni, mis olid seotud reaktsioonidega stiimulitele ja üle 30 metaboolsete protsessidega seotud geeni (tabelid 1 ja 2). Nende geenide hulgast eraldati ootuspäraselt kaks PeG biosünteesi raja geeni homoloogi: 4-kumaraadi koensüüm A ligaas (nimega Cs4CL1: Contig03) ja tsinnamaadi 4-hüdroksülaas (nimega CsC4H1: Contig14). Lisaks viidi läbi RT-qPCR, et kinnitada geenide indutseeritud ekspressiooni raamatukogust pärast H2O2-ga töötlemist.

Kinnitamaks, et SSH raamatukogust tuvastatud olulised geenid reageerisid H2O2-ravile, on kahe PeG ekspressioonid(fenüületanoidglükosiidid)Pärast töötlemist mõõdeti RT-ga biosünteesi rajaga seotud geene (Cs4CL1, CsC4H1), kahte ROS-i indutseeritud geeni (CsSOD1: Contig 16, CsHSP1: CISTH099) ja ühte WRKY perekonna transkriptsioonifaktori sarnast geeni (CsWRKY1: Contig 07). H2O2-ga (joonis 1). CsC4H1, Cs4CL1, CsSOD1 ja CsWRKY1 avaldised olid vastavalt 2 tundi pärast H2O2 ülesreguleeritud rohkem kui 15-, 3- korda, 45- korda ja 4- korda ravi. CsHSP1 ekspressioon muutus pärast H2O2-ravi ainult 1, 8 korda.
CsWRKY1, CsC4H1 ja Cs4CL1 ekspressioonide ajalist kulgu pärast H2O2-ga töötlemist analüüsiti täiendavalt RT-qPCR abil (joonis 2). CsC4H1 ja Cs4CL1 ekspressioonid suurenesid tugevalt (vastavalt rohkem kui 80- korda ja 50- korda) pärast 16- h ravi ja seejärel vähenesid 32 tunni pärast. CsWRKY1 ekspressioon oli 4 tunni pärast ülesreguleeritud rohkem kui 20- korda ja seejärel langes 8 tunni pärast (joonis 2).

Joonis 2. CsWRKY1 (A), CsC4H1 (B) ja Cs4CL1 (C) suhteline ekspressioon erinevatel aegadel pärast töötlemist 80 ug dm-3 H2O2-ga. Avaldised normaliseeriti kontrolliks; (töödeldud veega). Tähendab pluss - kolme bioloogilise korduse SD; * - P < 0,05,="" **="" -="" p=""><>

Arutelu

Vesinikperoksiid on tuntud taimede esilekutsuja, mis avaldab taimedele erinevat mõju. Nagu ROS, võib see indutseerida ROS-i eemaldamise süsteemi, mis koosneb superoksiidi dismutaasist, katalaasist, peroksidaasidest jne, ning see toimib soola, osmootse ja dehüdratsiooni allavoolu signaalina.

rõhutab (Wi jt 2006, Kar 2011, Furlan jt 2013, Sathiyaraj jt 2014). Arvati, et H2O2 tekkega taimedes kaasneb indutseeritud sekundaarsete metaboliitide biosüntees.Cistanchesalsarakukultuur. Nagu oodatud, näitavad meie tulemused, et PeGs(fenüületanoidglükosiidid)biosünteesCistanche salsarakukultuur indutseeriti pärast H2O2-ga töötlemist (tabel 1). Kolme peamise PeG-i sisu(fenüületanoidglükosiidid)suurenes pärast H2O2-ravi, mis näitab selle keskset rolli PeG-de biosünteesis. SSH raamatukogus rikastatud geenid viitasid veelgi selle mõjule PeG-dele(fenüületanoidglükosiidid)biosünteesi esilekutsumineCistanche salsa.

Paljud tuntud H2O2-reageerivad geenid, nagu askorbaatperoksidaas (CISTH069, Karyotou ja Donaldson 2005), h-kinooni oksidoreduktaas (CISTH125, Bello jt 2001), CsSOD1, CsHSP1 (Baruah jt 4), ja haigusresistentsuse geenid (Contig10, Nanda et al. 2010), rikastati SSH raamatukogus (tabel 3, tabel 2). Mõned neist tüüpilistest ROS-ile reageerivatest geenidest, mille ekspressioon oli indutseeritud pärast H2O2-ravi, kinnitati täiendavalt RT-qPCR-ga (joonised 1 ja 2), mis näitab, et siin konstrueeriti kvalifitseeritud SSH raamatukogu. Sellest raamatukogust leiti ka kaks PeG biosünteesi raja geeni CsC4H1 ja Cs4CL1 ning need kaks geeniekspressiooni indutseeriti H2O2 töötlemisega ajast sõltuval viisil (joonis 2). See viitab sellele, et H2O2-ravi indutseeris PeG-sid(fenüületanoidglükosiidid)biosüntees geneetilisel tasemel PAL-raja geenide reguleerimise kaudu. Samas ei tuvastatud SSH raamatukogus PAL-i ja teisi allavoolu PeG-de biosünteesi geene (Wang et al. 2012); see võib olla tingitud sellest, et raamatukogu pole piisavalt järjestatud. Täiendava analüüsiga tuleks selgitada seost CsC4H1 ja Cs4CL1 indutseeritud ekspressioonide ja suurenenud PeG-de biosünteesi vahel pärast H2O2-ravi.

Lisaks H2O2-raviga indutseeritud PAL-raja geenidele leiti SSH raamatukogust kaks WRKY perekonna transkriptsioonifaktorit (CsWRKY1, CsWRKY2) (tabel 3 ja tabel 2 lisavarustus) ning CsWRKY1 indutseeritud ekspressiooni kinnitas RT-qPCR . Selle ekspressioon reageeris H2O2-ravile varem kui kahe PAL-raja geeni, Cs4CL1 ja CsC4H1, ekspressioon (joonis 2). Varasemate uuringute põhjal on riisis täheldatud mõnede WRKY transkriptsioonifaktorite ja PAL raja geenide koosekspressiooni (Gupta et al. 2012). Lisaks on PAL geeni ekspressioon OsWRKY03 üleekspressioonimutandis ülesreguleeritud (Liu et al. 2005). Eespool nimetatud kaks WRKY perekonna transkriptsioonifaktorit võivad samuti olla seotud PeG-dega(fenüületanoidglükosiidid)biosüntees sisseCistanchesalsa. Huvitaval kombel leiti SSH raamatukogust dehüdratsiooniga seotud EST-e (CISTH067, CISTH064), mis võib viidata sellele, et H2O2-ravi oli seotud dehüdratsioonile reageerivate geenide ekspressioonigaCistanchesalsanagu on täheldatud teistes taimedes (Schmidt jt 2013, Zhou jt 2013). SSH raamatukogus tuvastati üks giberelliini (GA) signaaliülekandega seotud geen, giberelliini retseptori gid1b-sarnane (CISTH092), mis viitab GA signaaliülekande ja H2O2-ravi seosele.Cistanchesalsa, millest teatati ka odra puhul (Bahin et al. 2011). Siiski on vaja rohkem uuringuid, et kinnitada, kas need geenid on seotud PeG-dega(fenüületanoidglükosiidid)biosüntees. Lisaks ülalmainitud geenidele sisaldab siin konstrueeritud SSH-teek ka geene BLAST-tabamustega või ilma. See parandab meie arusaamist H2O2 mõjust C. salsale ja esiteks annab teavet selle PeG-de biosünteesis osalevate geenide kohta.

Kokkuvõtteks hindasime H2O2 mõju PeG-dele(fenüületanoidglükosiidid)induktsioonCistanchesalsarakukultuur. SSH raamatukogu konstrueeriti pärast H2O2-ga töötlemist ja valitud geenide ekspressiooni kinnitati RT-qPCR-ga. Tuvastati kaks PeG biosünteesi rajaga seotud geeni ja muud H2O{5}}tundlikud geenid. Need leiud laiendavad meie arusaamist H2O2-indutseeritud PeG-dest(fenüületanoidglükosiidid)biosüntees sisseCistanchesalsamolekulaarsele tasemele, pakkudes teavet geenide manipuleerimiseksCistanchesalsarakukultuurid PeG-de parandamiseks(fenüületanoidglükosiidid)tootmine.

Päritolu: "Fenüületanoidglükosiidide biosünteesis osalevate vesinikperoksiidile reageerivate EST-de tuvastamine Cistanche salsa rakukultuuris"J. CHEN et al.

--- BIOLOGIA PLANTARUM 59 (4): 695-700, 2015 J. CHEN et al. DOI: 10,1007/s 10535-015-0541-a

Viited

Bahin, E., Bailly, C., Sotta, B., Kranner, I., Corbineau, F., Leymarie, J.: Reaktiivsete hapnikuliikide ja hormonaalsete signaaliradade vaheline läbirääkimine reguleerib odra teravilja puhkeperioodi. - Taimerakkude keskkond. 34: 980-993, 2011.
Baruah, K., Norouzitallab, P., Liayati, L., Sorgeloos, P., Bossie, r P.: kuumašokivalgu (Hsp) indutseeriva toote poolt tekitatud reaktiivsed hapniku liigid aitavad kaasa Hsp70 tootmisele ja Hsp{1} }vahendatud kaitseimmuunsus Artemia franciscanas patogeensete vibrioonide vastu. - Dev. Comp. Immunol. 46: 470-479, 2014.
Bello, RI, Gomez-Diaz, C., Navarro, F., Alcain, FJ, Villalba, JM: NAD(P)H: kinooni oksidoreduktaasi 1 ekspressioon HeLa rakkudes  vesinikperoksiidi roll ja kasvufaas. - J. biol. Chem. 276: 44379-44384, 2001.
Bustin, SA, Vandesompele, J., Pfaffl, MW: qPCR ja RT-qPCR standardimine. - Genet. Eng. Biotehnoloogia. Uudised 29: 40-43, 2009.
Cheng, XY, Wei, T., Guo, B., N, I W., Liu, CZ:Cistanchedeserticola rakususpensiooni kultuurid:fenüületanoidglükosiididbiosüntees ja antioksüdantne aktiivsus. - Protsess Biochem. 40: 3119-3124, 2005.
Cheng, XY, Zhou, HY, Cui, X., Ni, W., Liu, CZfenüületanoidglükosiididbiosüntees sisseCistanchedeserticola rakususpensiooni kultuurid kitosaani esilekutsuja abil. - J. Biotechnol. 121: 253-260, 2006.
Furlan, A., Llanes, A., Luna, V., Castro, S.: Abstsitsiinhape vahendab veestressist põhjustatud vesinikperoksiidi tootmist maapähklites. - Biol. Taim. 57: 555-558, 2013.
Gupta, SK, Ra, i AK, Kanwar, SS, Chand, D., Singh, NK, Sharma, TR: Üksik funktsionaalne blastresistentsuse geen Pi54 aktiveerib riisis keeruka kaitsemehhanismi. - J. exp. Bot. 63: 757-772, 2012.
Hu, GS, Jia, JM, Hur, YJ, Chung, YS, Lee, JH, Yun, DJ, Chung, WS, Yi, GH, Kim, TH, Kim, DH: fenüülalaniini ammoniaagi-lüaasi geeni molekulaarne iseloomustusCistanchedeserticola. - Mol. Biol. Rep. 38: 3741-3750, 2011.
Kar, RK: Taimede reaktsioon veestressile: reaktiivsete hapnikuliikide roll. - Taimede signaalikäitumine 6: 1741-1745, 2011.
Karyotou, K., Donaldson, RP: askorbaatperoksidaas, vesinikperoksiidi püüdja ​​glüoksüsomaalsetes membraanides. - Kaar h. Biochem. Biophys. 434: 248-257, 2005.
Kobayashi, H., Karasawa, H., Miyase, T., Fukushima, S.: Uuringud koostisainete kohtacistancheon herba. 4. Kahe uue fenüülpropanoidglükosiidi, tsistanosiid-C ja tsistanosiid-D isoleerimine ja struktuurid. - Chem. Pharm. Bull. 32: 3880-3885, 1984.

Liu, CZ, Cheng, XY: täiustaminefenüületanoidglükosiididbiosüntees rakukultuuridesCistanchedeserticola osmootse stressi tõttu. - Plant Cell Rep. 27: 357-362, 2008.
Liu, JY, Guo, ZG, Zeng, ZL: paranenud koguneminefenüületanoidglükosiididprekursoriga söötmise teel suspensioonikultuurileCistanchesalsa. - Biochem. Eng. J. 33: 88-93, 2007.
Liu, XQ, Bai, XQ, Qian, Q., Wang, XJ, Chen, MS, Chu, CC: OsWRKY03, riisi transkriptsiooni aktivaator, mis toimib kaitsesignalisatsioonirajal OsNPR1-st ülesvoolu. - Cell Res. 15: 593-603, 2005.
Murashige, T., Skoog, F.: läbivaadatud sööde kiireks kasvuks ja tubaka koekultuuride biotestideks. - Füsioloogia. Taim. 15: 473-497, 1962.
Nan, ZD, Zeng, KW, Shi, SP, Zhao, MB, Jiang, Y., Tu, PF:Fenüületanoidglükosiididmille varred on põletikuvastase toimegaCistanchedeserticola, mida kasvatatakse Tarimi kõrbes. - Fitoteraapia 89: 167-174, 2013.
Nanda, AK, Andrio, E., Marino, D., Pauly, N., Dunand, C.: Reaktiivsed hapniku liigid taime-mikroorganismi varase interaktsiooni ajal. - J. Integr. Plant Biol. 52: 195-204, 2010.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: täiustatud tootminefenüületanoid glükosiididprekursoriga toitmise teel rakukultuurileCistanchedeserticola. - Protsess Biochem. 40: 3480-3484, 2005a.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: täiustatud tootminefenüületanoidglükosiididkõrvalCistanchedeserticola rakud, mida kultiveeriti sisemise ahela õhutranspordi bioreaktoris koos sõelumistoruga. - Ensüümi mikrobiool. Tehn. 36: 982-988, 2005b.
Salcedo-Morales, G., Jimenez-Aparicio, AR, Cruz-Sosa, F., Trejo-Tapia, G.: In vitro haustoriumi anatoomiline ja histokeemiline iseloomustus Castilleja tenuiflora juurtest. - Biol. Taim. 58: 164-168, 2014.
Sathiyaraj, G., Srinivasan, S., Kim, YJ, Lee, OR, Parvin, S., Balusamy, SR, Khorolragchaa, A., Yang, DC: vesinikperoksiidi aklimatiseerimine suurendab soolade taluvust, aktiveerides kaitsega seotud valke Panaxi ženšenn CA Meyer. - Mol. Biol. Vabariik 41: 3761-3771, 2014.
Schmidt, R., Mieulet, D., Hubberten, HM, Obata, T., Hoefgen, R., Fernie, AR, Fisahn, J., Segundo, BS, Guiderdoni, E., Schippers, JHM, Mueller-Roeber, B.: SOOLARESSPONSIIVNE ERF1 reguleerib reaktiivse hapniku liigist sõltuvat signaaliülekannet soolastressile reageerimise ajal
riisis. - Plant Cell 25: 2115-2131, 2013.
Wang, T., Zhang, XY, Xie, WY:Cistanchedeserticola YC Ma, "Desert Ginseng": ülevaade. - Amer. J. lõug. Med. 40: 1123-1141, 2012.
Wi, SG, Chung, BY, Kim, JH, Lee, KS, Kim, JS Vesinikperoksiidi sadestumise muster riisi lehtede kestadesse soolastressi all. - Biol. Taim. 50: 469-472, 2006.
Zhou, XF, Jin, YH, Yoo, CY, Lin, XL, Kim, WY, Yun, DJ, Bressan, RA, Hasegawa, PM, Jin, JB: CYCLIN H1 reguleerib põua stressireaktsioone ja sinise valguse põhjustatud kõhuõõne avanemist reaktiivsete hapnikuliikide akumuleerumise pärssimine Arabidopsises. - Plant Physiol. 162: 1030-1041, 2013.