Ehhinakosiidi HPLC määramine tsistanche herba vesiekstraktis

Abstraktne: Eesmärk: Ehhinakosiidi määramiseks Cistanche deserticola veeekstraktis töötati välja HPLC meetod. Meetodid: ehhinakosiid määrati HPLC abil. Eraldamine viidi läbi Inertsil ODSSP C18 kolonnis liikuva faasiga, mis koosnes atsetonitriilist (A) ja 0,4% fosforhappe lahusest (B), gradientelueerimise teel. Detekteerimislainepikkuseks määrati 333 nm ja kolonni temperatuur oli 30 kraadi. Voolukiirus oli 1,0 ml·min-1 ja süstimismaht 10 μL. Tulemused: ehhinakosiidi lineaarne seos kontsentratsioonivahemikus 44,93977–539,2764 ug ·m oli hea (r=0.9998). Taastumine oli 94,59%-105,31% (RSD= 2.93%,n=9). Ehhinakosiidi sisaldus Cistanche herba vesiekstraktides oli 15,527,7,347,12,267 mg·g-1

Järeldus: hea korratavusega HPLC meetod on täpne, lihtne ja teostatav. See sobib ehhinakosiidi määramiseks Cistanche deserticola veeekstraktis.

Märksõnad: HPLC; Cistanche deserticola veeekstrakt; ehhinakosiid; sisu määramine

Cistanche deserticola on traditsioonilises hiina meditsiinis kliinilises praktikas sageli kasutatav toonik ja sellel on "kõrbe ženšenni" maine. Hiina farmakopöa 2015. aasta väljaandes sisalduv Cistanche deserticola on Orobaceae taime Cistanche deserticola YC Ma või Cistanche tubulosa (Schenk) Wrighti kuivatatud, kestendav, lihav vars. Sellel on soe iseloom, magus ja soolane maitse ning see kuulub neerude ja jämesoole meridiaanide hulka. Sellel on neerude yangi toniseeriv toime, kasulik on essents ja veri, niisutatakse soolestikku ja leevendatakse kõhukinnisust [2].

Kõrbe ženšenn

"Shennong Materia Medica Classic" väidab, et see võib "toita keskmist, toita viit siseorganit ning tugevdada yini ja toita olemust". Cistanche deserticola sisaldab peamiselt fenüületanoidglükosiide, iridoide ja glükosiide, lignaane ja glükosiide, polüsahhariide, estreid ja alkaloide [3]. Fenüületanoolglükosiidid on Cistanche deserticola peamised aktiivsed komponendid, millest Hiina farmakopöas on Cistanche deserticola identifitseerimise ja sisalduse määramise indikaatorkomponendid ehhiaatsia ja basseiniäär.

Fenüületanoolglükosiid on Cistanche deserticola peamine aktiivne komponent

Farmakoloogilised uuringud [4] näitavad, et Cistanche deserticolal on mitmesugused farmakoloogilised toimed, nagu soolte niisutamine ja kõhukinnisuse leevendamine, maksa kaitsmine, osteoporoosi vastu võitlemine, antioksüdatsioon, vananemisvastane ja väsimusevastane toime. Cistanche deserticola vesiekstrakt võib soodustada rottidel osteoblastide luu morfogeneetilisi proteiin 2 geene, aga ka tartraadiresistentset happelist fosfataasi ja osteokaltsiini ovariektoomiaga hiirte seerumis, samuti Smad1 ja Smad5 geene ning transformeerivaid kasvufaktoreid luuüdis, avaldab luuüdis anti-ospoorne toime- - - - .. [5-6]. Ehhinosiid võib soodustada osteoblastide proliferatsiooni ja soodustada luuüdi mesenhümaalsete tüvirakkude diferentseerumist osteoblastideks in vitro [7–9].

Ehhinosiid, Cistanche deserticola peamine keemiline komponent

Natural Cistanche Echinacoside toodete vaatamiseks klõpsake siin

【Küsi lisa】 E-post: xue122522@foxmail.com /WhatsApp: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Viimastel aastatel on palju teateid ehhinakosiidi ja polüsiidi sisalduse määramise kohta Cistanche deserticola alkoholiekstraktis ja selle liitpreparaatides [10-12], kuid indikaatorkomponentide sisalduse määramise kohta Cistanche deserticola vesiekstraktis on teateid vähe. Selles uuringus kasutati ehhinakosiidi sisalduse määramiseks Cistanche deserticola veeekstraktis kõrgsurvevedelikkromatograafiat (HPLC).

1. Materjal

1.1 Seade

LC-20AT kõrgjõudlusega vedelikkromatograafia, SPD-20A detektor, SIL-20A automaatne proovivõttur, CTO-10ASvp kolonni temperatuurikast, LCsolution vedelikkromatograafia tööjaam, Shimadzu Corporation of Japan; MES125P-OCE-DU elektrooniline analüütiline kaal, Sartorius, Saksamaa; SHZ-D (III) tsirkuleeriva vee mitmeotstarbeline vaakumpump, Henan Yuhua Instrument Co., Ltd.

1.2RC2BSO25 pöördaurusti jahutussüsteem, RV10DS96 rootoraurusti, IKA, Saksamaa; DK-S26 Elektriline termostaadiga veevann, Shanghai Jinghong Experimental Equipment Co., Ltd; UPR-seeria ülipuhta vee masin, Sichuan Youpu Ultra Pure Technology Co., Ltd.

1.2 Meditsiinilised materjalid ja reaktiivid

Meat Rong meditsiiniline materjal, ostetud ettevõttelt Guangzhou Lingnan Traditional Chinese Medicine Slices Co., Ltd., partii number: 18010011806001, 181001. Leobaceae taime Cistanche deserticola kuivatatud, ketendavad, lihavad varred, mille tuvastas Thiird Affiming Chinese Herbalist University of the Chief Guangzhou deserticola Traditsioonilise Hiina meditsiini kohta hoitakse Guangzhou traditsioonilise hiina meditsiini ülikooli kolmanda sidushaigla ravimikontrolliruumis; Ehhinosiidi võrdlusaine, sisaldus 89,7%, Hiina Toidu- ja Ravimikontrolli Kontrolliinstituut, partii number: 111670-201706; Atsetonitriil on kromatograafiliselt puhas (Merck, Saksamaa); Metanool ja fosforhape on analüütiliselt puhtad (Tianjin Fuyu Fine Chemical Co., Ltd.); Vesi on ülipuhas vesi.

2. Meetodid ja tulemused

2.1 Cistanche deserticola veeekstrakti valmistamine

Võtke tsistanši pulber, lisage 10-kordne kogus destilleeritud vett, kuumutage ja püstjahutiga ekstraheerige kaks korda, iga kord 1 tund. Filtreerige, ühendage filtraat ja kasutage pöördaurustit, et kontsentreerida filtraat toorravimisisalduseni 0,100 g · ml-1. Hoida ooterežiimis 4 kraadi juures. 2.2 Kromatograafilised tingimused ja süsteemi sobivus Kromatograafia kolonn: InertsilODS SPC18 kolonn (150 mm × 4,6 mm, 5 μm); Liikuv faas: atsetonitriil (A) - 0.4% fosforhappe lahus (B), gradientelueerimine: 0-5 min, 17% A; 5~25 min, 20%A; 25-30 min, 17%A; Tuvastamise lainepikkus: 333 nm; Kolonni temperatuur: 30 kraadi ; Voolukiirus: 1,0 ml · min-1; Süstimismaht: 10 μL. Nendes kromatograafilistes tingimustes on ehhiaatsia piikide ja külgnevate komponentide vaheline lahutusvõime suurem kui 1,5 ning teoreetiline veergude arv ei tohiks olla väiksem kui 4000 ehhiaatsia piikide puhul. Kromatogramm on näidatud joonisel 1.

Joonis 1 ehhinakosiidi(A) ja Cistanche herba(B) veeekstrakti HPLC kromatogrammid

2.3 Lahuse valmistamine

2.3.1 Võrdluslahus

Kaaluge sobiv kogus ehhinatsetiini võrdlusainet, kaaluge see täpselt, asetage see 10 ml mõõtekolbi, lisage lahustumiseks metanool ja muutke see sisaldama 898,794 ehhinatsetiini milliliitri μG võrdluslahuse kohta, mida hoitakse ooterežiimis 4 kraadi juures.

Cistanche deserticola ehhinosiid

2.3.2 Testlahus

Mõõtke täpselt 2,0 ml Cistanche deserticola vesiekstrakti, aurustage veevannis, lahustage metanoolis, viige 10 ml mõõtekolvis konstantse mahuni ja loksutage korralikult . 0.22 μm mikropoorset membraanfiltratsiooni, nimelt.

2.4 Lineaarse seose uurimine

Mõõtke täpselt 0,25, 0,50, 1,00, 2,00, 2,50 ja 3,00 ml võrdluslahust punktis 2.3.1 ja asetage need 5 ml mõõtekolbi, lisage metanool konstantse mahuni ja loksutage korralikult, et saada gradient kontsentratsiooniks 44,9397,8,948,8. 359,5176, 449,3970 ja 539,2764 μG · mL-1 võrdluslahust, 0,22 μM Mikropoorne membraanfiltratsioon. Tehke määramine vastavalt punktis 2.2 toodud kromatograafilistele tingimustele ja registreerige piigi pindala. Kasutades abstsissina võrdlusaine massikontsentratsiooni (X, μ G · mL-1), on piigi pindalaks ordinaat (Y) ja saadakse lineaarse regressiooni võrrand: Y=13185.0X-32273,0, r=0.9998. Tulemused näitasid, et ehhiaatsia oli vahemikus 44,5439 μ7 kuni 74,59 μ7. Lineaarne seos kontsentratsioonivahemikus g · ml-1 on hea.

2.5 Täpsuskatse

Võtke 539,2764 μG · mL-1 võrdluslahust, süstige proov pidevalt 6 korda vastavalt punktis 2.2 toodud kromatograafilistele tingimustele ja registreerige piigi pindala. Tulemused: Echinacea piigi pindala RSD oli 1,81%, mis näitab instrumendi head täpsust.

2.6 Stabiilsuskatse

Mõõtke täpselt 2,0 ml Cistanche deserticola vesiekstrakti, aurustage veevannis kuivaks, lahustage metanoolis, viige 10 ml mõõtekolvis konstantse mahuni, loksutage korralikult, 0,22 μ Filtreerige mikropoorse membraaniga, süstige proove määramiseks 0, 2, 2, 12 ja 8, 2, 12 tunni pärast. tingimused punktis 2.2 ja registreerige piigi pindala. Tulemused: Echinacea piigi pindala RSD oli 1,16%, mis näitab, et katselahuse stabiilsus oli 24 tunni jooksul hea.

2.7 Korratavuse test

Mõõtke täpselt 6 portsjonit 2,0 ml Cistanche deserticola vesiekstrakti, valmistage paralleelselt 6 portsjonit uuritavat lahust vastavalt punktis 2.3.2 kirjeldatud meetodile, süstige proove määramiseks vastavalt punktis 2.2 kirjeldatud kromatograafilistele tingimustele ja registreerige piigi pindala. Tulemused: Echinacea massikontsentratsiooni RSD oli 1,28%, mis näitab, et meetodil oli hea korratavus.

Cistanche deserticola eksperiment

2.8 Proovi lisamise taastamise test

Mõõtke täpselt 9 portsjonit 1,0 ml Cistanche deserticola vesiekstrakti, lisage 0,8, 1,0 ja 1,2 ml võrdluslahust (101,552 mg · ml - 1), aurustage veevannis, lahustage metanoolis ja viige ml mõõtekolvis mahuni; Loksutage korralikult, 0,22 μ Filter mikropoorse filtrimembraaniga kõrge, keskmise ja madala kontsentratsiooniga katselahuse valmistamiseks. Valmistage paralleelselt 3 osa igast kontsentratsioonist, mõõtke vastavalt punktis 2.2 toodud kromatograafilistele tingimustele, registreerige piigi pindala ja arvutage proovi lisamise saagis. Tulemused on toodud tabelis 1.

2.9 Proovi sisalduse määramine

Mõõtke täpselt 3 portsjonit 2,0 ml Cistanche deserticola veeekstrakti, aurustage veevannis kuivaks, lahustage metanoolis, viige 10 ml mõõtekolvis konstantse mahuni, loksutage korralikult, 0,22 μ Filtreerige mikropoorse membraaniga, mõõtke kromatograafiliste tingimuste järgi ja arvutage herne pindala 2. Tulemused on toodud tabelis 2.

Tabel 1: ehhinakosiidi taastumiskatsete tulemused

Tabel 2 Ehhinakosiidi sisalduse määramise tulemused Cistanche herba vesiekstraktis

3. Arutelu

3.1 Katseartikli valmistamismeetod

Cistanche deserticola vesiekstrakt sisaldab erinevaid keemilisi komponente, nagu fenüületanoolglükosiide ja polüsahhariide, mis põhjustavad teatud häireid testitavate komponentide töös. Selles uuringus uuriti kahte erinevat lahusti kontsentratsiooni, 50% metanooli ja metanooli. Tulemused näitasid, et uuritava produkti kromatogrammi piikide eraldusefekt, kasutades lahustina 50% metanooli, oli ehhiaatsia ja külgnevate komponentide vahel halb. Kasutades lahustina metanooli, on ehhiaatsia glükosiidi piigi eraldusvõime hea ja teised lisandite piigid ei sega. Seetõttu valiti katselahuse lahustiks metanool. Kasutades lahustina metanooli, aurustati Cistanche deserticola vesiekstrakt veevannis kuivaks. Kasutati kahte töötlemismeetodit: metanooli lahustamist, konstantse mahuga loksutamist ja metanooli ultraheli (10 min) lahustamist. Tulemused näitasid, et kahe meetodi vahel ei olnud olulist erinevust. See meetod valiti katselahuse valmistamiseks metanooli lahustamise ja pideva mahu loksutamise lihtsa toimimise tõttu.

Hiina ürdi tsitanche

3.2 Liikuva faasi valik

Selles uuringus viidati liikuvale faasile (metanool-0,1% sipelghape), mida kasutati Cistanche deserticola sisalduse määramiseks Hiina farmakopöas (I köide) (2015). Tulemused näitasid, et ehhiaatsia glükosiidi tipp suurenes ja tekkis eesrindlik nähtus, mis võib olla seotud liikuva faasi nõrga elueerimisvõimega; Viidates asjakohasele kirjandusele [12-13], kasutati liikuva faasina atsetonitriil-0,5% äädikhapet, kuid ehhiaatsia piigi kuju oli halb ja esines sabade moodustumist. Arvestades liikuva faasi pH väärtust, kasutati lõpuks liikuva faasina atsetonitriil-0,4% fosforhapet. Selle tulemusena oli ehhiaatsia piikide teoreetiline plaatide arv suurem kui 4000 ning eraldusvõime ehhiaatsia ja külgnevate komponentide piikide vahel oli suurem kui 1,5. Piigi kuju oli sümmeetriline, ilma lisandite piikide segamiseta ja baasjoon oli stabiilne. Seetõttu kasutati selles uuringus ehhiaatsia sisalduse määramiseks kromatograafilise liikuva faasina atsetonitriili-0,4% - 0.4% fosforhapet. Selles uuringus kasutati HPLC meetodit Echinacea määramiseks Cistanche deserticola vesiekstraktis.

Cistanche ekstrakti pulber

Meetod on lihtne, täpne ja reprodutseeritav. See sobib ehhiaatsia määramiseks cistanche deserticola vesiekstraktis ja seda saab kasutada cistanche deserticola vesiekstrakti kvaliteedikontrolli meetodina. See uuring määras ainult ehhiaatsia sisalduse Cistanche deserticola veeekstraktis. Edaspidi on kavas määrata ehhiaatsia sisaldus Cistanche deserticola liitkeeduses, et uurida erinevate tegurite mõju ehhiaatsia sisaldusele, andes võrdlusaluse Cistanche deserticola sisaldava keeduse kvaliteedikontrolliks.