Kuidas Cistanche veeekstrakt soodustab soolestiku peristaltikat ja parandab kõhukinnisust?

Shuai Yan, 1,2 Yin-zi Yue, 1 Xiao-peng Wang, 1 Hong-li Dong, 1 Shu-guang Zhen, 1 Ben-sheng Wu, 1 ja Hai-hua Qian3

Teatati, et traditsioonilisel hiina meditsiinil on hea mõju funktsionaalse kõhukinnisuse ravis. See töö püüdis tõestada Herba vesiekstraktide mõjuCistanche(AEHC) STC-ravi kohta ja võimalike mehhanismide määramiseks loperamiidist põhjustatud aeglase transiidi kõhukinnisuse (STC) mudeli abil. AEHC bioaktiivsete komponentide tuvastamiseks ja kinnitamiseks viidi läbi HPLC. Leiti, et AEHC nõrgendas STC vastuseid, mis põhinevad suurenenud väljaheite kogusel, niiskusesisaldusel ja soolestiku liikumiskiirusel, samuti GAS, MTL, SS ja CGRP seerumitasemetel. Suurenes ka c-komplekti valgu ja mRNA tase, Cajali (ICC) interstitsiaalsete rakkude märgistamine. Samal ajal tõusis ainult ckiti ligandi SCF valgu tase. Meie andmete analüüs näitas, et AEHC võib ilmselgelt parandada ICC funktsiooni PI3K, SCF ja c-kit hõlmava signaaliraja kaudu ning suurendada käärsoole motoorika indekseid, nagu GAS, MTL, SS ja CGRP. Huvitav on märkida, et AEHC näis olevat tõhus kõhukinnisuse korral, seega on täpsete mehhanismide selgitamiseks vaja täiendavaid katseid.

Lisateabe saamiseks võtke ühendust:Joanna.jia@wecistanche.com

Tistanche'is sisalduv akteosiidil on hea toime antioksüdantidele

1. Sissejuhatus

Kõhukinnisus on tavaline funktsionaalne seedetrakti haigus ja rahvatervise probleem, mida iseloomustab pidevalt raske, harv või mittetäielik roojamine [1]. Kõhukinnisuse levimus varieerub 0,7 protsendist 81 protsendini kogu maailmas, eriti eakatel [2, 3]. Aeglane transiidi kõhukinnisus (STC) on tavaline seedetrakti kaebus 13–37 protsendil kroonilise ravile vastupidava kõhukinnisusega patsientidest [4, 5]. Epidemioloogilised andmed näitavad STC suuremat esinemissagedust noorte naiste seas kui meestel [6]. STC põhjustab raskesti lahendatavat kõhukinnisust, mis näitab vähest ravivastust konservatiivsele ravile ja kalduvust neurodegeneratiivsete häirete tekkeks. See pole nii lihtne kui funktsionaalne haigus, vaid nõuab invasiivset ja agressiivset ravi [7].

Mitmeid praeguseid keemilisi ravimeid, nagu osmootsed või sekretoorsed lahtistid ja täiteained, kasutatakse üldiselt

kõhukinnisuse raviks [8], kuigi nende kasutamine on piiratud suurte kulutuste ja kõhuõõne kõrvalmõjude (nt valu, krambid ja puhitus) tõttu [9]. Praegu on kõhukinnisuse ravis esmatähtis seedekulgla reguleerimine. Tsisapriid loodi algul maohaiguste ravi soodustava vahendina, kuid hiljem võeti see südame rütmihäirete riski tõttu välja [10].

Tegaserod on selektiivne 5-hüdroksütrüptamiini retseptori antagonist, mis võib stimuleerida soolestiku peristaltikat ja sekretsiooni [11, 12]. Prukalopriid on kõrge selektiivsuse ja spetsiifilisusega uudne dihüdrobensofuraankarboksamiidi derivaat ja 5-HT retseptori agonist, mis võib suurendada mao-, peensoole- ja käärsoole motoorikat ning toimib kiiremini dünaamikas [13–15]. Prostaglandiini E1 derivaadina võib lubiprostoon selektiivselt aktiveerida CIC-kanalit, et soodustada seedetrakti sekretsiooni ja suurendada soolestiku ülekande mõju [16].

Kõhukinnisuse motoorika on laialt levinud probleem, kuid selle etioloogia pole veel selge. Sellegipoolest on veenvad tõendid näidanud Cajali (ICC) interstitsiaalsete rakkude panust kõhukinnisuse patogeneesi [17]. ICC leidub seedetrakti närvilõpmete ja silelihasrakkude vahel. ICC-d tunnustatakse üldiselt südamestimulaatori rakkudena seedetrakti aktiivsuse ja neuro-lihase ülekande vahendajatena [18]. Uuringud on näidanud, et aeglase kõhukinnisusega patsientide käärsoole ICC tihedus on märkimisväärselt madalam kui tavalistel patsientidel [19]. Sellest tulenevalt võib ICC arvu vähenemine põhjustada aeglase laine aktiivsuse puudumist, mõjutades seega kontraktiilset vastust ja põhjustades aeglase transiidiga kõhukinnisusega patsientidel transiidi hilinemist. Siinkohal võib ICC leevendamine ravimite abil olla aeglase transiidi kõhukinnisuse ravimisel otsustava tähtsusega.

Erinevad taimsed ravimid ja traditsiooniline hiina ravim Mula on hiljuti tähelepanu äratanud kui uudseid ravimeid kroonilise kõhukinnisuse raviks, mis on tingitud paranenud väljaheite tootmisest [20, 21]. HerbaCistancheon traditsiooniline taimne ravim, mida kasutatakse kroonilise neeruhaiguse, naiste viljatuse, rikkaliku menorraagia ja impotentsuse raviks [22, 23]. HerbaCistanchetakistab aju neuronite apoptoosi, ekspresseerides MES23.5 rakkudes apoptoosiga seotud tegureid ja neurotroofseid tegureid [24]. Herba Cistanche on näidanud ka farmatseutilist potentsiaali Yang-Qi neeru-Yangi puudulikkuse sündroomi ravis. Hiljutine uuring on näidanud, et HerbaCistanchesuurendab mitokondriaalset hingamist ja glutatiooni antioksüdantset seisundit H9c2 kardiomüotsüütides [25].

TCM usub, et kõhukinnisusel on tihe seos neerudega. Neer, mis avaneb välissuguelundites ja pärakus, reguleerib urineerimist ja roojamist. Jäätmete vedu põhineb neeru qi edendamisel ja neeru yini toitmisel. Kui neeru yang on puudulik või eluvärava tuli kustub, põhjustab jämesoole külm ummistus jäätmete seiskumist. Kõhukinnisust põhjustab ka kuiv soole liikumine, kuna neeruessentsi puudulikkus ei suuda toota piisavalt vedelikku [26].

HerbaCistancheon tavaline ühendav ürt, mis on maitselt magus ja soolane ning olemuselt soe. Tänu jämesoolele ja neerumeridiaanidele võib see toniseerida neeru yangi ja niisutada soolestikku, et leevendada kõhukinnisust. Seda üksikut ürti ja selle Hiina ravimpreparaate on laialdaselt kasutatud kõhukinnisuse raviks märkimisväärse efektiivsusega [27].

Hiinas Herba mõjuCistancheKõhukinnisuse juured on registreeritud [28, 29] ja Shen Nongi hiinakeelses raamatus Materia Medica nimetatakse neid "kuivatatud mahlateks varteks".Cistancheliigid" [30]; aga teaduslik tõestus Herba mõju kohtaCistancheKõhukinnisuse juured ei ole siiani eksisteerinud, Hiina farmakopöas on kliiniliselt efektiivne annus 20 g päevas ja kliiniline toime ei suurene annusega veelgi.

Alates HerbastCistancheon nii napp [31], standardses selle kliinilise annuse STC raviks eksperimentaalsete uuringute abil mitte ainult ei hoia ära ebapiisava annuse tõttu ebaõnnestunud ravi, vaid hoiab ka patsiendid eemal majanduslikust kahjust ja isegi ravimiga seotud väärkasutamisest. Me loodame

tulemused võivad panna teadusliku aluse uutele kõhukinnisusevastastele ravimitele. Seetõttu on oluline uurida Herba vesilahustCistanche'i omasoolestiku edendamise funktsioon ja selle toime ICC-le käesolevas uuringus.

2. Materjalid ja meetodid

2.1. Herba Cistanche vesiekstrakti valmistamine.

Kõik HerbaCistancheosteti ettevõttelt Nanjing Haichang Chinese Medicine Group Co., Ltd. (Nanjing, Hiina), mis koristati, koguti ja töödeldi standardsete etnobotaaniliste tavade järgi Hiina Sinkiangi piirkonna istandustest. Taime identiteedi tegi morfoloogiliselt kindlaks professor Tu Lin Lu Nanjingi Hiina meditsiini ülikoolist, Nanjing, Hiina. Vautšeri näidis (NUCMCHS-2015628) deponeeriti Nanjingi Hiina Meditsiini Ülikooli Terviseteaduste Kolledžis Nanjingis, Hiinas.

Herba viiludCistanche, kaaluga 500 g, pulbristati elektrilise segistiga ja ekstraheeriti 5000 ml destilleeritud veega, misjärel vesiekstrakti puhastati 100 C juures 2 tundi, kasutades tsirkuleerivat ekstraheerimisseadet.

membraani poorid (Millipore, Billerica, MA, USA) ja ekstraktidest saadud jääk lahustati 4000 ml vees. Pärast püstjahutiga ekstraheerimist ekstraktid koguti ja aurustati, et saada lõplik proovisaadus. Vesiekstraktid kontsentreeriti kuivaks pelletiks (1 g/ml), kasutades a

edaspidiseks kasutamiseks. Tahked proovid taastati destilleeritud vees, et saada katse jaoks vajalikud annused 10, 20 ja 40 mg/kg kehakaalu kohta.

2.2. Loomad.

Selles uuringus kasutatud katseprotokolli vaatas läbi ja kiitis eetiliste protseduuride ja teadusliku hoolduse alusel heaks Suzhou traditsioonilise hiina meditsiini haigla – institutsionaalne loomade hooldamise ja kasutamise komitee, Suzhou, Hiina (SHTCM-IACUC; loa number: PNU{{2} }). Kõik ag-ga isasrotid (Sprague Dawley tüvi) osteti Shanghai Laboratory Animal Research Centerist vastavalt riiklike tervishoiuinstituutide juhistele. Loomadel oli vaba juurdepääs standardsele dieedile (AIN-93 M) ja kraaniveele ad libitum ning neid peeti individuaalselt roostevabast terasest suhtelise õhuniiskuse protsendiga ning eksponeeriti iga päev 12 tundi loomulikku valgust ja 12 tundi pimedat.

2.3 Eksperimentaalne disain.

Vastavalt varasematele uuringutele [32, 33] kasutati loperamiidi rottidel kõhukinnisuse esilekutsumiseks. Kokku jaotati 60 rotti juhuslikult 5 rühma (rühma kohta): A: normaalne rühm (NG), B: mudelrühm (Lop pluss kandjaga töödeldud rühm), C: kõhukinnisusega rottide rühm, keda raviti madala vesilahusega ekstraktiga. Herba Cistanche (Lop pluss LAEHC-ga töödeldud rühm), D: kõhukinnisusega rottide rühm, keda raviti Herba Cistanche keskmise vesilahusega (Lop pluss MAEHC-ga töödeldud rühm) ja E: kõhukinnisusega rottide rühm, keda raviti Herba kõrge vesisisaldusega ekstraktiga. Cistanche (Lop pluss HAEHC-ga töödeldud rühm). Rühma A töödeldi tavalise soolalahusega (10 ml/kg); B-rühma raviti loperamiidiga

(4 mg/kg); Rühma C töödeldi loperamiidi (4 mg/kg) ja madala vesilahusega Herba Cistanche ekstraktiga (1 g/kg); D rühma töödeldi loperamiidi (4 mg/kg) ja Herba Cistanche keskmise vesilahuse (2 g/kg) ja rühma E loperamiidiga (4 mg/kg) ja Herba Cistanche kõrge vesilahusega (4 g/kg) kg). Kõigile normaalse rühma rottidele süstiti kõhukinnisuse esilekutsumiseks 0,9 protsenti naatriumkloriidi, teistele aga loperamiidi 0,9 protsendilises naatriumkloriidis kaks korda päevas 3 järjestikuse päeva jooksul. Herba Cistanche vesiekstrakt suspendeeriti vees ja seda manustati suukaudselt üks kord päevas 4. päevast 18. päevani rühmas C, rühmas D ja rühmas E, samas kui rühmad A ja B said sondi kaudu ühtlase koguse vett.

2.4. Kromatograafiline seisund.

HPLC profileerimine viidi läbi Shimadzu vedelikkromatograafiasüsteemis (Tokyo, Jaapan), mis koosnes LC-20AT pumbast ja

jälgiti lainepikkusel 330 nm temperatuuril 30 C. Isokraatne liikuv faas koosnes metanoolist 0,1% sipelghappest (80:20, maht/maht) ja jooksis voolukiirusel 1,0 ml/min . Kromatograafiline eraldamine oli

osakeste suurus 5 m, Beijing Dikma Science and Technology Co., Ltd., Peking, Hiina).

2.5. Treeningu, toidutarbimise, veetarbimise, keha analüüs

Kummi (20% puusüsi ja 10% kummikummi vesisuspensioon) manustati suukaudselt igale loomale mahus 25 ml/kg. 30 minuti pärast ohverdati loomad humaanselt emakakaela dislokatsiooniga ja tükeldati. Läbiti peensooled pylorusest pimesooleni ning mõõdeti söejahu läbitud vahemaa ja peensoole kogupikkus. Üksiku roti puhul arvutati soolestiku läbimise protsent söejahu läbitud vahemaa protsendina peensoole kogupikkusest. Järgmine võrrand arvutab soolestiku läbimise kiiruse ( protsenti ): söe läbitud vahemaa / vahemaa pylorusest pimesooleni 100 protsenti .

2.6. Vereproovide ja kudede kogumine. Katseperioodi lõpus allutati rottidele 12-tunnine paastumine, kuid neile võimaldati vaba juurdepääs veele. Seejärel anesteseeriti kõik rotid 30 minutit hiljem naatriumpentobarbitaali (50 mg/kg) intraperitoneaalse süstimisega ja asetati reguleeritava temperatuuriga lauale. Vereproovid koguti ja tsentrifuugiti kiirusel 3500 p/min 15 minutit, et saada seerumit. Käärsool lõhestati kohe ja loputati tavalise soolalahusega temperatuuril 4 °C ning seejärel jagati kaheks tükiks. Üks fragment fikseeriti 10-protsendilises formaliinis ja töödeldi jagatud parafiinis järgnevaks immunohistokeemiliseks (IHC) analüüsiks, samas kui teine ​​fragment oli kaal ja juuksed. Muutused treeningus, toidu tarbimine, vesi

hoiti kuni analüüsimiseni temperatuuril 80 C. tarbimist, kehakaalu ja juukseid jälgiti ja registreeriti iga päev kogu katseperioodi vältel. Vaatlesime "muutusi treeningus" järgides konkreetseid samme: isevalmistatud kasti (60 cm kõrge, 50 cm pikk ja 80 cm lai koos tumeda välisseinaga) kasutatakse avatud välikatse jaoks; valge maa oli pimedas ja vaikses ruumis musta joonega jagatud teemantideks (12 cm); 100 W pirn rippus 1 m kõrgusel karbi keskosast; rotid paigutati modelleerimise 4., 6., 12. ja 18. päeval kasti keskele. Horisontaalse liikumise skoorina kasutati ruutude arvu, mille rotid läbisid 5 minuti jooksul, ja vertikaalse liikumise skoorina rottide püstiasendit 5 minuti jooksul. Horisontaalsed ja liikumise hinded pluss vertikaalse liikumise hinded näitavad rottide harjutuste mahtu. Iga rotti mõõdeti üks kord [34, 35].

2.7. Fekaalparameetrite mõõtmine.

Suukaudse manustamise viimasel päeval koguti iga SD-roti värsked väljaheitegraanulid 6 tunniks ümara põhjaga korgiga torudesse ja registreeriti iga rühma kogukaal. Väljaheite niiskusesisalduse määramiseks kuivatasime elektrilise kaaluga väljaheitegraanuleid kuni konstantse massi saavutamiseni ja mõõdeti kuivkaal. Niiskusesisaldus

2.8. GAS-i, MTL-i, SS-i ja CGRP hindamine.

Gastriini (GAS), motiliini (MTL), somatostatiini (SS) ja kaltsitoniini geeniga seotud peptiidi (CGRP) kontsentratsiooni seerumis hinnati ELISA abil, kasutades kaubanduslikult saadavaid komplekte.

2.9. Histoloogiline analüüs.

SD-rottidelt kogutud põiki käärsooled fikseeriti 10-protsendilise formaliiniga 12 tundi, sisestati

m paksused viilud, mis värviti hematoksüliini ja eosiiniga (H&E, Sigma-Aldrich, MO, USA). Nende sektsioonide morfoloogilisi tunnuseid täheldati valgusmikroskoopia abil, mille järel mõõdeti Leica Application Suite'i (Leica Microsystems, Šveits) abil villuse pikkus, krüpti paksus ja lihase paksus.

2.10. Immunohistokeemiline analüüs.

Järgisime Zhu jt meetodeid. (2016) [36]; värvimata 5 m lõigud olid

värviti küüliku anti-c-komplektiga (1:100) temperatuuril 4 °C üleöö. Sekundaarse antikeha ja avidiin-biotiin-peroksidaasi kompleksi meetodit kasutati vastavalt tootja juhistele. Mittespetsiifilise seondumise kõrvaldamiseks kasutati immunoglobuliini-negatiivset kontrolli. c-kiti ekspressioonitasemed

2.11. Soole transiidi kiiruse analüüs.

Soolestiku läbimise suhe viidi läbi vastavalt varem teatatud protokollidele [36]; lühidalt, pärast 14-päevast ravi, paastusid kõik SD-rotid 12 tundi, kuid neile võimaldati vaba juurdepääs veele.

Reaalajas polümeraasi ahelreaktsioon. C-komplekti, SCF ja PI3K mRNA geeniekspressioonitasemed käärsooles määrati kogu RNA ekstraheerimise komplekti (TIANGEN Biotech,

Peking, Hiina) vastavalt tootja protokollidele. Reaalajas PCR viidi läbi ABI StepOnePlus Real-Time PCR süsteemiga (ABI). PCR-toodete tuvastamiseks kasutati SYBR Green I Real-Time PCR Master Mixi (QPK201, Toyobo, Jaapan). Reaktsioonid viidi läbi kolmes korduses. Seejärel oli 0,5 g kaaluv värske roti käärsoole kude homoloogne.

l) ekstraheeriti vastavalt tootja juhistele, kasutades TRIzol Reagenti (Invitrogen, USA). cDNA esimese ahela sünteesimiseks kasutati pöördtranskriptsiooni-PCR komplekti (Takara Biotechnology Co., Inc.) vastavalt tootja protokollile. Kõik sihitud parameetrid on näidatud tabelis 1. Tsükliprotokoll oli järgmistes tingimustes: 95 °C 5 minutit (DNA denatureerimine), millele järgnes 40 tsüklit 95 °C juures 15 sekundit, 60 °C 20 sekundit ja 72 °C. 40 s. Amplifikatsioonitsüklite lõpus viidi läbi sulamiskõvera analüüs.

2.12. Western blot analüüs.

C-komplekti ja SCF valgusisaldust käärsooleproovide homogenaatides hinnati Western blot meetodil. Lühidalt öeldes määrati homogenaatide koguvalgud, kasutades bitsinhoniinhappe testi (Pierce Biotechnology, Rockford, IL, USA). BioRad elektroforeesisüsteemis (BioRad Laboratories, Hercules, CA, USA) kasutati valkude eraldamiseks naatriumdodetsüülsulfaat-polüakrüülamiidgeeli (SDS-PAGE). Seejärel kanti valgud polüvinülideendifluoriidi (PVDF) membraanidele. Pärast 2-tunnist töötlemist blokeeriva puhvriga TBS-is, mis sisaldas 5% rasvavaba piima toatemperatuuril, inkubeeriti PVDF-i membraane üleöö 1:1000 lahjendatud anti-c-komplektiga (Santa Cruz, CA, USA), 1:500 lahjendatud anti-c-kit. SCF (Sigma, MO,

USA) ja vastavalt 1: 8000 lahjendatud anti-aktiini (Kangchen, Shanghai, Hiina) antikehi. Primaarse antikeha seondumine tuvastati vastava HRP-ga konjugeeritud sekundaarse antikeha abil (Beyotime, Jiangsu, Hiina). Kemoluminestsentsi tuvastamiseks kasutati täiustatud kemoluminestsentsi komplekti (Pierce Biotechnology Inc., Rockford, IL, USA) ja Odyssey Infrared Imaging Systemi (Gene Company Ltd., Hongkong). Laadimiskontrollina kasutati majapidamisprolaktiini. Valgu ekspressiooni kogus on esitatud aktiini taseme suhtes.

2.13. Statistiline analüüs.

Mõõtmisandmed esitati keskmise standardveana (SEM) ja analüüsiti SPSS abil

16.{1}} tarkvara (SPSS, Chicago, IL, USA). Kõigi parameetrite oluliste erinevuste määramiseks kasutati ühesuunalist dispersioonanalüüsi (ANOVA), millele järgnesid Duncani mitme vahemiku testid. Väärtusi peeti statistiliselt olulisteks

3. Tulemused

3.1. Herba Cistanche koostis ja funktsionaalsed komponendid.

Nagu on näidatud joonisel 1, sisaldavad Herba Cistanche juured suures kontsentratsioonis mitmeid lahtistava toimega seotud bioaktiivseid komponente. Ehhinakosiidide ja verbakosiidide üldkontsentratsioonid olid vastavalt 0,64 mg/g ja 0,16 mg/g. Kõrgefektiivse vedelikkromatograafia (HPLC) abil tuvastati LP-s sobiva retentsiooniaja juures kaks piiki, mis näitavad kõrget ehhinakosiidi ja verbaskosiidi taset.

3.2. Üldine tähelepanek.

SP-rotid ei surnud kogu katse jooksul, mis näitab loommudeli paremat turvalisust ja töövõimet. Võrreldes A-rühmaga oli mudelirühma rottidel kohev karv, väsimus, kuiv väljaheide ja

halvenes modelleerimisaja pikenemisega.

3.3. AEHC mõju väljaheite arvule ja niiskusesisaldusele loperamiidist põhjustatud kõhukinnisusega rottidel.

Võrreldes tavaliste väljaheidetega olid B-, C-, D- ja E-rühmade väljaheited kuivad, väikesed ja kõvad ning enne töötlemist ei põlenud.

süstiti ju rottidele loperamiidi (ravimiga ravitud on sümptomeid leevendanud kui keha ja 3(b)).

kaal ei erinenud oluliselt kõigis katserühmades, kuigi E-rühma kehakaal oli veidi väiksem kui teistel rühmadel (joonis 2 (a)). Lisaks sõid kõhukinnisusega SD-rotid oluliselt vähem toitu kui rühm A ( ), samas kui erinevused rühmade B, C, D ja E vahel (joonis 2 (b)) ei olnud olulised. Veetarbimine ei muutunud ka rühma A ja B rühma vahel. Lisaks ei tuvastatud olulist veetarbimise suurenemist

et ravi AEHC-ga ei põhjustanud mingeid muutusi. Kuigi soolestiku transiidi määr rühmades C, D ja oli ka oluliselt kõrgem, oli rühmades C, D ja E oluliselt madalam suhe kui rühmas A.

3.4. AEHC mõju peensoole transiidi kiirusele loperamiidist põhjustatud kõhukinnisusega rottidel.

Nagu on näha jooniselt 4, ei tuvastatud viie rühma vahel peensoole läbimise algtasemes erinevusi. Grupil B on märgatavalt madalam söepulbri tõukejõud võrreldes rühmaga A (𝑃 < 0.01).="" kuigi="" soolestiku="" transiidi="" määr="" rühmas="" c,="" d="" ja="" e="" oli="" samuti="" oluliselt="" kõrgem="" kui="" rühmas="" b="" (𝑃="">< 0,05),="" oli="" rühmade="" c,="" d="" ja="" e="" suhtarv="" oluliselt="" madalam="" kui="" rühmas="">

3.5. Sekkumine AEHC-ga suurendab osaliselt käärsoole motoorika indeksi funktsiooni.

B-rühma rottidelt saadud GAS-i ja MTL-i seerumitasemed langesid oluliselt võrreldes A-rühma omadega (𝑃 < {{0}}.01,="" vastavalt).="" teisest="" küljest="" on="" rühmades="" c,="" d="" ja="" e="" (vastavalt="" 𝑃="">< 0.05)="" herba="" cistanche="" ekstraktide="" manustamisest="" tulenevad="" gas-i="" ja="" mtl-i="" tasemed="" tõhusalt="" kõrgemad="" kui="" rühmas="" b="" ss-väärtused="" b-rühma="" rottidel="" olid="" kõrgemad="" kui="" a-rühmal="" (𝑃="">< 0,01);="" rühmadel="" c,="" d="" ja="" e="" on="" nõrgenenud="" ss="" tase="" (𝑃="">< 0,05)="" (joonis="" 5).="" võrreldes="" kõhukinnisusega="" rottidega="" olid="" cgrp="" tasemed="" a-rühma="" normaalsetel="" rottidel="" (𝑃="">< 0,01)="" ja="" herba="" cistanche'i="" manustatud="" rühmades="" c,="" d="" ja="" e="" konstantsed="" (𝑃=""> 0,05).

3.6. Käärsoole histoloogiline muutus.

Uurimaks, kas AEHC-ravi võib esile kutsuda käärsoolekoe struktuurseid muutusi, mõõdeti pärast H&E värvimist viie rühma rottide põikkäärsooles villuse pikkust, krüptikihi paksust ja lihaste paksust. Võrreldes igas rühmas rottide käärsoole patoloogiat, oli käärsoole limaskest sile ja sisaldab väikeseid artereid ja väikeseid veene submukoosis ning suurt hulka rasvrakke. Lisaks koosnes lihaskiht silelihasrakkudest ja subserosa oli täielik. Villuse keskmine pikkus oli B-rühmas oluliselt lühem kui A-rühmas (𝑃 < {0}}.01).="" siiski="" kasvas="" c-rühma="" villi="" keskmine="" pikkus="" võrreldes="" b-rühmaga="" oluliselt="" enam="" kui="" 30="" protsenti="" (joonised="" 6="" ja="" 7)="" (𝑃="">< 0,05).="" samal="" ajal="" suureneb="" villuse="" keskmine="" pikkus="" rühmades="" d="" ja="" e="" oluliselt="" võrreldes="" rühmaga="" b="" (joonised="" 6="" (a)="" ja="" 6="" (b))="" (𝑃="">< 0,="" 01).="" lisaks="" oli="" lihase="" paksuse="" muutus="" väga="" sarnane="" villuse="" pikkusega.="" b-rühmas="" lihaste="">

oli A-rühmaga võrreldes dramaatiliselt õhem. Kuid rühmade C, D ja E lihaste paksuse tase suurenes 30–35 protsenti võrreldes rühma B omaga (joonised 6 ja 7). Üldiselt näitavad need leiud, et AEHC võib suurendada kõhukinnisusega rottide käärsoole villi pikkust ja lihaste paksust.

3.7. AHEC-ravi manustamine c-Kiti ja SCF-i suurenenud valgu ekspressioon.

Selle immunoreaktiivsus tuvastati käärsooles, kuna kõigi rühmade rakud olid c-komplekti suhtes positiivsed. Nagu on näidatud joonisel 8, oli c-kiti ekspressioonitase rühmas B madalam kui rühmas A (𝑃 < 0.05).="" c-komplekti="" ekspressioonitase="" rühmas="" c="" oli="" kõrgem="" kui="" rühmas="" b="" (𝑃="">< 0.{{20}}5),="" samas="" kui="" c-komplekti="" oli="" rohkem="" rühmas="" d="" ja="" rühmas.="" e="" kui="" b-grupis="" (𝑃="">< 0.05).="" pärast="" 2-nädalast="" töötlemist="" erineva="" kontsentratsiooniga="" herba="" cistanche="" vesiekstraktiga="" tuvastati="" western="" blot="" analüüsiga="" c-komplekti="" ja="" scf="" valgu="" ekspressioonitasemed.="" western="" blot="" analüüs="" näitas,="" et="" c-kit="" ja="" scf="" ekspressioonitasemed="" olid="" pärast="" loperamiidiga="" töötlemist="" rottide="" käärsooles="" märkimisväärselt="" madalamad="" (joonis="" 9).="" joonis="" 8(e)="" näitab,="" et="" vähenenud="" c-komplekt="" kõhukinnisusega="" rottidel="" suurenes="" pärast="" rottide="" töötlemist="" 500="" µg/ml="" aehc-ga="" (𝑃="">< 0,05)="" oluliselt="" 31,2="" protsenti.="" lisaks="" tõstis="" töötlemine="" 100="" ja="" 200="" g/ml="" aehc-ga="" c-kit="" valgu="" ekspressioonitaset.="" scf="" valgu="" ekspressioon="" suurenes="" märkimisväärselt="" 20,1,="" 24,7="" ja="" 8,4="" protsenti,="" kui="" raviti="" aehc-ga="" vastavalt="" 100,="" 200="" ja="" 500="" µg/ml="" (joonis="" 9).="" 3.8.="" aehc="" mõju="" c-kit,="" scf="" ja="" pi3k="" mrna="" ekspressioonile.="" et="" uurida,="" kas="" aehc-ravi="" võib="" mõjutada="" lihaskontraktsiooniga="" seotud="" mrna="" reguleerimist,="" täheldati="" spetsiifilisi="" praimereid="" kasutades="" kõhukinnisusega="" rottide="" jämesooles="" c-kit,="" scf="" ja="" pi3k="" ekspressioonitasemeid.="" tulemused="" näitasid,="" et="" c-komplekti="" mrna="" tasemed="" rühmas="" b="" olid="" oluliselt="" madalamad="" kui="" rühmas="" a="" (𝑃="">< 0,05),="" samas="" kui="" mrna="" tasemed="" rühmades="" c,="" d="" ja="" e="" olid="" kõrgemad="" kui="" rühmas="" b="" (𝑃="">< 0,05).="" (joonis="" 10).="" uurisime="" ka="">

komplekti ligandi SCF ekspressioon. SCF-i mRNA ekspressioon B-rühma rottidel oli oluliselt madalam kui A-rühmas, samas kui ravi AEHC-ga rühmas C, D ja E suurendas SCF-i mRNA ekspressiooni (joonis 10). Lisaks uurisime AEHC mõju PI3K geeniekspressioonile. 14. päeval oli PI3K geeniekspressiooni tase rühmades C, D ja E oluliselt kõrgem kui rühmas B (𝑃 <>

4. Arutelu

Kõhukinnisus on väga levinud haigus, mida iseloomustab halb väljaheide. See vähendab oluliselt elukvaliteeti ja toob kaasa tohutu majandusliku koormuse nii patsientidele kui ka riiklikule ravikindlustusele [32]. Looduslikud tooted ja ravimtoit tõmbavad nüüd üha suuremat tähelepanu, kuna neist võivad saada uued ravimid, mida kasutatakse kõhukinnisuse raviks [37, 38]. Seetõttu uurisime AEHC terapeutilist toimet loperamiidist põhjustatud kõhukinnisusega rottidele. Loperamiidi, atropiin-difenoksülaati ja morfiini kasutatakse laialdaselt laboriloomade kõhukinnisuse esilekutsumiseks. Kolmest ravimist põhjustab loperamiid väljaheite evakueerimise pikenemist ja soolestiku luminaalse transiidi viivitust, kuna see pärsib nii vee sekretsiooni kui ka sujuvat liikumist sooleseinas [39]. Selle uuringu kehakaalu analüüs ei leidnud erinevusi igas rühmas. Pärast katset ka erinevust ei leitud. AEHC madala annusega rühmas oli endiselt madalaim kehakaal, kuid mudelrühma ja tavarühma kehakaal oli suurim. Kõhukinnisus on üldiselt funktsionaalne haigus. Selles uuringus esile kutsutud aeglane transiidi kõhukinnisus ei mõjutanud rottide toitainete omastamist ega nende kehakaalu katse ajal. Enne modelleerimist ei esinenud rühmade vahel erinevusi rottide väljaheidete ja niiskusesisalduse osas; kuid need mõlemad vähenesid pärast modelleerimist märkimisväärselt ja väljaheidete niiskusesisaldus suurenes pärast AEHC kasutamist erinevates annustes. Pärast käärsoole süsiniku pulbri raketikütuse kiiruse uurimist.

rottide puhul täheldati mudelrühmas kiiruse ilmset langust, samas kui see jäi normaalseks AEHC madala, keskmise ja suure annusega rühmades. Tulemused näitasid, et loperamiidist põhjustatud krooniline transiidikõhukinnisus, mida raviti erinevate Herba Cistanche annustega, võib taastada käärsoole raketikütuse funktsiooni erineval määral. Seedetrakti hormoonid on suure jõudlusega bioaktiivsed ained, mida sekreteerivad seedetrakti limaskesta ja kõhunäärme endokriinsed rakud, millel on nii erutus kui ka pärssimine, et reguleerida seedetrakti motoorset funktsiooni [40, 41], millest GAS, MTL ja SS omavad suurt mõju. Eelmised kaks hormooni stimuleerivad seedemahla eritumist, ahendavad seedetrakti silelihaseid, soodustavad seedetrakti sisu liikumist ja ergutavad mao-sooletrakti motoorikat. SS, vastupidi, pärsib seedemahla sekretsiooni, seedetrakti silelihaste kokkutõmbumist ja seedetrakti tühjenemist [42]. GAS-i ja MTL-i tasemed mudelirühma käärsoolekoes leiti olevat madalaimad, mis näitab, et modelleerimismeetod alandas kindlasti GAS-i ja MTL-i kontsentratsiooni käärsoolekoes. Käärsoole motoorika peamiste seedetrakti hormoonidena suurenes GAS-i ja MTL-i kontsentratsioon AEHC erinevate annuste võrra ja suurendas seega käärsoole motoorikat. Seevastu SS-i tase mudelrühma käärsoolekoes oli kõrgeim, mis näitab, et modelleerimismeetod võib soodustada SS-i kontsentratsiooni käärsoolekoes. CGRP on üks võimsamaid vasodilataatoreid ja selle lõdvestav toime on 10-korda tugevam kui kontraktsiooniefekt. Olulise neurotransmitteri või neuromodulaatorina, mis reguleerib seedefunktsioone, võib CGRP pärssida enamikku seedetrakti motoorikatest ja erinevate seedemahlade sekretsioonist [43]. CGRP kontsentratsioon mudelrühmas oli kõrgem kui A-rühmas, mis näitab, et modelleerimismeetod võib suurendada CGRP kontsentratsiooni käärsoolekoes, mis võib olla ka üks tegureid käärsoole peristaltika vähenemisel, mis põhjustab kõhukinnisust. CGRP kontsentratsioon AEHC rühmade käärsoolekoes oli madalam kui mudelrühmas, mis viitab sellele, et AEHC-l oli käärsoole liikumisele suhteliselt nõrk inhibeeriv toime. c-Kit on transmembraanne valk. Selle ligandi tüvirakufaktorit (SCF) toodavad neuronirakud ja silelihasrakud. See soodustab ICC arengut ja diferentseerumist ning säilitab selle normaalse füsioloogilise funktsiooni. c-Kit märgistus peegeldab kaudselt ICC kogust ja tihedust [44, 45]. Lisaks mängib ICC rakk võtmerolli seedetrakti motoorika reguleerimisel ja toimib seedetrakti liikumise südamestimulaatorina. Seega võivad mõned mao-sooletrakti motoorika häired põhjustada ICC-rakkude koguse ja funktsiooni langust. Varasemate uuringute kohaselt vähenes kroonilise transiidi kõhukinnisusega patsientide käärsoole rakkude arv. Seetõttu vaadeldi käesolevas uuringus rottide käärsoole rakke, kasutades spetsiifilisi ekspressiooni ja immunohistokeemilisi meetodeid. Võrreldes normaalse rühmaga vähenes rakkude arv mudelrühmas märkimisväärselt, kuid suurenes pärast ravi. Uuring näitas, et ICC rakud ja tüvirakufaktorid (SCF) on tihedalt seotud c-kit/SCF signaaliteega. SCF on c-kiti loomulik ligand, mida ekspresseeritakse keha erinevates kudedes, kuid peamiselt

mida toodavad luuüdi stroomarakud. Iga c-kit monomeer ühendab rakuväliste domeenide 1–3 kaudu SCF-ga. Pärast SCF-i dimerisatsiooni muutub c-kit monomeeri struktuur ja tekitab homodimeerumise, mille tulemuseks on aminohappejäägi autofosforüülimine rakumembraanis ja stimuleeritakse erinevaid teisi signaalmolekule, et reguleerida ICC rakulisi funktsioone. Teine signaalmolekul on fosfatidüülinositooli 3-kinaas (PI3K), apolipoproteiin, mis muudab 4,5- difosfoinositiidi 3,45-trifosfoinositiidiks kombinatsioonis c-komplekti türosiiniga 721. Varasemad uuringud näitasid, et PI3K inhibiitorid Wortmannin ja LY294002 põhjustasid signaali blokeerimisega ICC ebanormaalset arengut [46]. Meie katses leiti, et c-kit ja SCF valgu ja mRNA ekspressioonid mudelirühmas alguses vähenesid, kuid seejärel suurenesid erinevate annustega AEHC rühmades, ehkki normaalsest madalamal tasemel. PI3K mRNA ekspressioon suurenes märkimisväärselt. Seetõttu võib SCF/c-kit hakata kehtima PI3K kaudu. Tulemused näitasid, et AEHC võib reguleerida seedetrakti silelihaseid, suurendades ICC-rakkude hulka. AEHC väike annus ei avaldanud märkimisväärset mõju kõhukinnisusele, samas kui selle keskmine ja suur annus lühendasid rottide esimest roojamisaega, suurendasid väljaheite niiskusesisaldust, parandasid käärsoole raketikütust, täpsustasid väljaheite kogust, suurendasid GAS-i. , MTL ja CCK taset ning tugevdas käärsoole kontraktiilsust. AEHC efektiivne annus on pärast konversiooni algselt 20 g/päevas, mis on samaväärne selle uuringu keskmise ja suure annusega.

5. Kokkuvõtted

AEHC soodustab soolestiku motoorikat, parandades ICC funktsiooni ja reguleerides neurotransmittereid selles uuringus, mis tõestas, et AEHC-l on potentsiaal kõhukinnisust ravida ja ennetada. Ekstraktid parandasid jämesoole aeglase laine tootmist ja reguleerisid kontraktsioonilise aktiivsuse rütmi SCF mRNA kogus PI3K mRNA kogus c-Kit mRNA kogus12 Tõenduspõhine silelihaste täiendav ja alternatiivne meditsiin, suurendades ICC kogust läbi PI3K/SCF/ c-kit signaali rada. Täiendavad eksperimentaalsed uuringud võivad aga parandada arusaamist AEHC teistest molekulaarsetest radadest STC ravimisel ja aidata suunata tulevasi kliinilisi uuringuid, mis hindavad selle mõju ja ohutust.

Huvide konfliktid

Autorid kinnitavad, et huvide konflikti ei esine.

Autorite kaastööd

Shuai Yan ja Yin-Zi Yue panustasid sellesse töösse võrdselt. Kõik autorid on lõpptöö heaks kiitnud.

Tänuavaldused

Seda tööd toetas Hiina riikliku loodusteaduste fondi (NSFC) toetus ja seda rahastas Hiina valitsus (81573979). Uuringut toetasid ka Hiina Jiangsu provintsi traditsioonilise hiina meditsiini administratsiooni tehnoloogiaprojekt (nr YB2017061), Suzhou teadus- ja tehnoloogiaarenduse programm Hiinas (nr SYSD2015172), Hiina Suzhou tööstustehnoloogia innovatsiooni projekt ( nr SYSD2016136, nr SYS201775 ja nr SYS201776) ning Hiina Suzhou traditsioonilise hiina meditsiini haigla kolledžiprojekt (YQN2015007). Autorid tunnustavad tänulikult rahalist toetust projektile, mida rahastab Hiina doktoriõppe sihtasutus (2017M620220).

Viited

[1] JY Chang, GR Locke, MA McNally jt, "Funktsionaalsete gastrointestinaalsete häirete mõju ellujäämisele kogukonnas", American Journal of Gastroenterology, vol. 105, nr. 4, lk 822–832, 2010. [2] SM Mugie, M. A Bennington ja C. Di Lorenzo, "Kõhukinnisuse epidemioloogia lastel ja täiskasvanutel: süstemaatiline ülevaade", Best Practice & Research Clinical Gastroenterology, vol. 25, nr. 1, lk. 18, 2011. [3] NC Suares ja AC Ford, "Kroonilise idiopaatilise kõhukinnisuse levimus ja riskifaktorid kogukonnas: süstemaatiline ülevaade ja metaanalüüs", American Journal of Gastroenterology, vol. 106, nr. 9, lk 1582–1591, 2011. [4] A. Lembo ja M. Camilleri, "Krooniline kõhukinnisus", The New England Journal of Medicine, vol. 349, nr. 14, lk 1360–1368, 2003. [5] S. Singh, S. Heady, E. Coss-Adame ja SSC Rao, "Clinical utility of colon manometry in slow-transit constipation", Neurogastroenterology & Motility, vol. 25, nr. 6, lk 487–495, 2013. [6] DM Preston ja JE Lennard-Jones, "Noorte naiste raske krooniline kõhukinnisus: idiopaatiline aeglane transiidi kõhukinnisus", Gut, vol. 27, nr. 1, lk 41–48, 1986. [7] P. Kashyap, PJ Gomez-Pinilla, MJ Pozo jt, "Ano1 immunoreaktiivsus tuvastab Cajali komplekt-positiivsete interstitsiaalsete rakkude ammendumise aeglase transiidi kõhukinnisusega patsientidel "Neurogastroenterology & Motility, vol. 23, nr. 8, lk 760–765, 2011. [8] JD Belsey, M. Geraint ja TA Dixon, "Süsteemiline ülevaade ja metaanalüüs: polüetüleenglükool täiskasvanutel, kellel on mitteorgaaniline kõhukinnisus", International Journal of Clinical Practice, vol. . 64, nr. 7, lk 944–955, 2010. [9] AC Ford ja NC Suares, "Laksatiivide ja farmakoloogiliste ravimeetodite mõju kroonilise idiopaatilise kõhukinnisuse korral: süstemaatiline ülevaade ja metaanalüüs", Gut, vol. 60, nr. 2, lk 209–218, 2011. [10] OM Aboumarzouk, T. Agarwal, R. Antakia, U. Shariff ja RL Nelson, "Cisapride for intestinal constipation", Cochrane Database of Systematic Reviews, vol. 19, nr. 1, lk. CD007780, 2011. [11] MA Kamm, S. Muller-Lissner, NJ Talley jt, "Tegaserod for ¨ kroonilise kõhukinnisuse raviks: Randomiseeritud, topeltpime, platseebokontrollitud rahvusvaheline uuring", American Journal of Gastroenterology, kd. 100, ei. 2, lk 362–372, 2005. [12] A. Shin, M. Camilleri, G. Kolar, P. Erwin, CP West ja MH Murad, "Süstemaatiline ülevaade metaanalüüsiga: väga valikuline {{80} }HT4 agonistid (prukalopriid, velusetrag või naronapriid) kroonilise kõhukinnisuse korral, Alimentary Pharmacology & Therapeutics, vol. 39, nr. 3, lk 239–253, 2014. [13] J.-H. Chen, Q. Zhang, Y. Yu et al., "Neurogenic and Myogenic Properties of Pan-Colonic Motor Patterns and their Spatiotemporal Organisation in Rats", PLoS ONE, vol. 8, nr. 4, artikli ID e60474, 2013. [14] VL Serebruany, ME Mouelhi, H.-J. Pfannkuche, K. Rose, M. Marro ja DJ Angiolillo, "Uuringud 5-HT4 retseptori ekspressiooni ja tegaseroodi mõju inimese trombotsüütide agregatsioonile in vitro", American Journal of Therapeutics, vol. 17, nr. 6, lk 543–552, 2010. [15] HS Winter, C. Di Lorenzo, MA Benninga jt, "Oral prucalopride in children withfunctional constipation", Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition, vol. 57, nr. 2, lk. 197–203, 2013. [16] A. Bove, F. Puccini, M. Bellini jt, "Konsensusavaldus AIGO/SICCR: Kroonilise kõhukinnisuse ja takistatud defekatsiooni diagnoosimine ja ravi (I osa: Diagnoos )," World Journal of Gastroenterology, vol. 18, nr. 14, lk 1555–1564, 2012. [17] GL Lyford, C.-L. Tema, E. Soffer jt, "Cajali interstitsiaalsete rakkude pan-käärsoole vähenemine aeglase transiidi kõhukinnisusega patsientidel", Gut, vol. 51, nr. 4, lk 496–501, 2002. [18] J.-P. Wang, G.-F. Ding ja Q.-Z. Wang, "Cajali interstitsiaalsed rakud vahendavad ergastavat sümpaatilist neurotransmissiooni merisea eesnäärmes", Cell and Tissue Research, vol. 352, nr. 3, lk 479–486, 2013. [19] W.-D. Tong, B.-H. Liu, L.-Y. Zhang, S.-B. Zhang ja Y. Lie, "Cajali interstitsiaalsete rakkude vähenemine aeglase transiidi kõhukinnisusega patsientide sigmoidses käärsooles", International Journal of Colorectal Disease, vol. 19, nr. 5, lk 467–473, 2004. [20] D. Wu, X. Wang, J. Zhou jt, "Traditsiooniline hiina valem, libestav sooletablett, parandab loperamiidist põhjustatud rottide kõhukinnisust, mis on seotud Cl-sisalduse suurendamisega. sekretsioon läbi distaalse käärsoole epiteeli," Journal of Ethnopharmacology, vol. 130, nr. 2, lk 347–353, 2010. [21] D.-Y. Tema ja S.-M. Dai, "Traditsioonilise Hiina taimse ravimi Paeonia lactiflora Pall. põletikuvastane ja immunomoduleeriv toime", Frontiers in Pharmacology, vol. 2, artikkel 10, 2011. [22] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao ja C.-M. Tzeng, "Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): traditsioonilise hiina meditsiini üks parimaid farmaatsia kingitusi", Frontiers in Pharmacology, vol. 7, artikkel 41, 2016.