Kuidas Cistanche aitab luude tervist?

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

[Abstraktne]Eesmärk:Uurida luuüdi mesenhümaalsete tüvirakkude (MSC) suunalist diferentseerumist, mis on põhjustatud neere toniseerivast traditsioonilisest Hiina meditsiinist, ja töötada välja teooria "neer reguleerib luud ja luuüdi". Meetod: traditsioonilise hiina meditsiini vedelik

Cistancheehhinakosiidvõib leevendadaosteoporoos

SD-rottidele manustati intragastraalselt 4 päeva ja seejärel koguti ravimseerumi valmistamiseks kõhuaordist verd. 4. põlvkonna M SC-d inokuleeriti kahele 6-süvendiga plaadile mõõtmetega 5 × 106, mõlemal 6 süvendiga, mis jaotati tühjaks rühmaks,

Morinda officinalis'e rühm, eucommia ulmoides'i rühm, psoraleeni rühm,cistancherühm, epimeediumrühm. Kui rakud kasvavad 80 protsendini, lisatakse igale traditsioonilise hiina meditsiini rühmale ravimit sisaldav seerumi LD M EM sööde ja jätkatakse tühja rühma algse söötme kultiveerimist; 10. induktsioonipäeval võetakse 6-kaevuplaat ALP-värvimiseks; teine ​​on 6-20. päeval hästi värvitud Alizarin Rediga. Tulemused: Morinda officinalis rühm, Eucommia ulmoides rühm,Cistancherühm, Epimedium rühm näitas positiivset ALP värvumist 10. päeval, valgeid kaltsiumisõlmesid nähti umbes 14. päeval ja Alizariini punane värvumine oli positiivne 20. päeval. Järeldus: "Neer

"Peamise luu ja luuüdi" teooriast juhindudes võib neere toniseeriv Hiina meditsiin esile kutsudaluuluuüdi mesenhümaalseid tüvirakke, et diferentseeruda osteoblastideks.

Märksõnad: luuüdi mesenhümaalsed tüvirakud; osteoblastid; suunatud diferentseerimine

Traditsiooniline hiina meditsiin usub, et neerud domineerivadluud, säilitada essentsi ja toota luuüdi. Nii kliinilised kui ka eksperimentaalsed uuringud on kinnitanud selle teooria kliinilist juhtivat olulisust, kuid luuüdi mesenhümaalsete tüvirakkude (MSC) diferentseerumise indutseerimise kohta ei ole uuringuid läbi viidud. M SC-d on teatud tüüpi pluripotentsed täiskasvanud tüvirakud, mis esinevad peamiselt luuüdis, aga embrüonaalsel perioodil ka mesenhümaalse päritoluga luuvälistes kudedes, nagu naha fibroblastid, rasvkoe tüvirakud, skeletilihaste satelliitrakud ja veresoonte endoteelirakud. . Luuüdi M SC-d (BM SC) on luuüdi stroma komponendid. Pärast isoleerimist ja in vitro kultiveerimist on neil teatud induktsioonitingimustes võime mitmel viisil diferentseeruda osteoblastideks, kondrotsüütideks, närvirakkudeks, adipotsüütideks, kardiomüotsüütideks jne. Peamised seemnerakkude allikad luukoetehnoloogias on osteoblastid ja BMSC-d. Kuigi osteoblastidel on hea osteogeenne aktiivsus, on nende allikas piiratud, neid on raske eraldada ja saada suurtes kogustes ning neil on ebapiisav potentsiaal ulatuslikuks laienemiseks in vitro, mida on raske rahuldada luukoetehnoloogia kliiniliste rakenduste vajadusi; BM SC-del pole mitte ainult hea osteoblastide diferentseerumispotentsiaal ja kõrge diferentseerumispotentsiaal. Osteogeenne aktiivsus, tugev proliferatsioonipotentsiaal ja mugav allikas võivad rahuldada autoloogset koetehnoloogiat.

Cistancheehhinakosiidsaab ravidaosteoporoos

1 Materjal ja meetodid

1.1 Materjal

1.1.1 Katseloomad

Kaksteist SPF SD rotti, mis kaaluvad 120 g ~ 150 g, ei piirdu ainult isas- ja emasloomadega, mille pakub Guangzhou traditsioonilise hiina meditsiini ülikooli eksperimentaalkeskus.

1.1.2 Reaktiivid ja seadmed Haiclone L-DM EM sööde, Haiclone Lõuna-Ameerika veiseloote seerum (FBS), Morinda officinalis, Psoralen, Eucommia, Cistanche, Epimedium Hiina meditsiiniline pulber, DM SO (sigma), Alizarin red (Guangzhou Weijia), leeliselise fosfataasi plekk (Nanjing Jiancheng Biological Co., Ltd.), 0,25 protsenti pankreatiin (GI BCO ettevõte). 0,22 μm süstlafilter (MI LL Ipo re), 75 cm2 kultuurikolb, 96-kaevuplaat, 6-kaevuplaat (corning). Rotatsioonaurusti, mikroplaadilugeja (Thermo), külmtsentrifuug (sigma 3K 15), CO2 inkubaator (SH ELDO NA firma).

1.2 Meetod

1.2.1 Traditsioonilist Hiina meditsiini sisaldava seerumi valmistamine

Võtke 150 g Hiina meditsiinilist toorpulbrit, lisage 10-kordne kogus 70% etanooli, kuumutage püstjahutiga kaks korda, iga kord 1 tund, filtreerige, ühendage filtraat, kontsentreerige filtraat alandatud rõhul 300 ml-ni. jahuta toatemperatuuril ja säilita hilisemaks kasutamiseks külmkapis 4 kraadi juures. Traditsioonilise hiina meditsiini vedelik lahjendatakse 0,3 g toorravimi/ml ja sondiga, iga kord 1 ml, kaks korda päevas, pärast pidevat manustamist 4 päeva jooksul võetakse veri kõhuaordist, pärast üleöö sadestamist, tsentrifuugitakse 2500 r juures 20 minutit. , koguge supernatant ja nõelake Steriliseerige läbi filtri ja hoidke temperatuuril -20 kraadi.

1.2.2 MSC-de eraldamine ja kasvatamine

Pärast SD-rottide tuimastamist läbi kõhuõõne võeti mõlema alajäseme reieluu ja sääreluud aseptilistes tingimustes välja ning pehmed koed puhastati, luuotsad trimmiti rongadega, medullaarne õõnsus paljastati ja 10. ml süstalt kasutati L-DM EM imemiseks, mis sisaldas 10 protsenti veise loote seerumit. Peske medullaarset õõnsust söötmega korduvalt, kuni luu muutub valgeks ja valguse läbilaskvus suureneb. Koguge medullaarse õõnsuse pesuvedelik 75 cm2 kultiveerimiskolbi ja asetage see 37-kraadisesse 5% CO 2 inkubaatorisse. Vahetage vedelikku iga 2-3 päeva järel.

1.2.3 MSC-de läbimine

Kui rakud on pudeli põhjast 90 protsenti täis, seeditakse need 0,25 protsendi trüpsiiniga, seejärel pipeteeritakse rakususpensiooni ja passeeritakse suhtega 1:3.

1.2.4 MSC-d kutsuvad esile diferentseerumise

Kui P4-rakud on 90% ulatuses üle kasvanud, lagundatakse neid 0,25% trüpsiiniga, et valmistada rakususpensioon. Rakud külvatakse 2 6-süvendiga plaatidele, mille rakkude tihedus on 5 × 106 süvendi kohta ja 6 süvendiga plaadi kohta. Jagatud tühja rühma, Morinda officinalis rühma, Psoralen rühma, Eucommia ulmoides rühma, Cistanche cistanche rühma, epimeediumi rühma. Kui rakud olid pudeli põhjast 80 protsenti täis, söödet vahetati. Jätkati tühja katserühma algse söötme kultiveerimist ja Hiina meditsiini rühmale lisati 10 protsenti Hiina meditsiini sisaldavat seerumit sisaldavat L-DM EM söödet.

1.2.5 Leeliselise fosfataasi värvimine

Induktsioonikultuuri 10. päeval võeti 6-süvendiga plaat välja ja värviti vastavalt aluselise fosfataasi värvimiskomplekti meetodile. Jälgige tulemusi mikroskoobi all.

1.2.6 Alizariinpunane värvimine

Induktsioonikultuuri 20ndal päeval võtke 6-süvend välja, aspireerige osteoblastide induktsioonilahus, peske 3 korda P BS-ga, fikseerige 95% alkoholiga 10 minutit, lisage 0,1%. Alizarin Red-Tr on-HCl (pH 8,3), 37-kraadine veevann 30 min, jälgige tulemusi mikroskoobi all.

Cistancheehhinakosiidsuudab vastu seista apoptoosile ja soodustadaluukasvu

2 tulemust

2.1 Rakumorfoloogia vaatlus

MSC-d on fibroblastilaadsed rakud, mis pärast seina külge kinnitumist moodustavad fusiformi (vt joonis 1). Pärast induktsioonilahuse lisamist ei muutunud tühja rühma rakud oluliselt; alates 3. päevast ilmnes Morinda officinalis'e rühma, Eucommia ulmoides'i rühma, Cistanche deserticola rühma ja Epimedium'i rühma rakkudes rakkude agregeeritud kasv ja veidi suurenenud rakumaht (vt joonis 2), 14 päeva hiljem ilmnes ilmselge sõlmede moodustumine tagumise mikroskoobi all (vt joonis 3). Psoraleenirühma rakkudes ei toimunud ilmseid muutusi.

2.2 Leeliselise fosfataasiga värvimine

10. päeval värviti leeliselise fosfataasiga Morinda officinalis'e rühm, Eucommia ulmoides'i rühm, Cistanche cistanche rühm ja Epimedium rühm. Oli näha, et rakkude agregatsiooniala muutus lillaks ja mustaks (vt joonis 4) ning rakkude dispersioon oli sinine (vt joonis 5). ). Psoraleeni rühm ja tühi rühm olid negatiivsed.

2.3 Alizariinipunane värvimine

21. päeval värvisid Morinda officinalis'e rühm, Eucommia ulmoides'i rühm, Cistanche rühm, Epimedium'i rühm Alizarin Red 6-kaevu plaadi põhjas valget teralist ainet ja pärast värvimist tumepunaseks. Jitiani rühm, psoraleeni rühm, eucommia rühm, cistanche rühm, epimeediumi rühm. Mikroskoobi all on rakkude agregatsioonipiirkonnas punased osakesed, mis on kaltsiumisõlmed (joonis 6). Psoraleeni rühm ja tühi rühm olid negatiivsed.

3 Arutelu

3.1 Traditsioonilist Hiina meditsiini sisaldava seerumi valmistamine

Traditsioonilise hiina meditsiini koostis on keeruline ja iga komponenti on raske uurida. Seerumi farmakoloogia suudab mingil määral ületada ebakindlate tegurite, nagu traditsioonilise hiina meditsiini preparaatide füüsikalised ja keemilised omadused, sekkumise katsetulemustele ning see on suhteliselt lähedal ravimi tegelikule biotransformatsioonile organismis.

Tegelik protsess. See tähendab, et sellel on kaks peamist eelist: ① see peegeldab ühendi biokeemilist transformatsiooniefekti organismis;

②Saage üle ravimi enda füüsikaliste ja keemiliste omaduste otsesest sekkumisest katsesse [1].

Nii seerumipreparaadi kui ka M SC-st saadud loomad on SD-rotid ja seerumi valmistamiseks kasutatakse homoloogseid loomi, mis võivad vähendada liikide erinevustest tingitud immuunvastust ja parandada katsetulemuste usaldusväärsust [2], võttes arvesse loomade ainevahetust. . Erinevad, võta kaalu, kehapinna teisendamise meetodit manustada. Mõned inimesed arvavad, et on palju ensüüme, antikehasid, komplemente, tsütokiine ja muid bioloogiliselt aktiivseid aineid, millel võib olla otsene mõju in vitro katsetes kasutatavatele rakkudele, viirustele, patogeenidele ning kudedele ja organitele, mis võivad häirida katsete tulemusi ja mõjutada ravimi efektiivsuse objektiivset hindamist. Farmakoloogilised häired pärast seerumi inaktiveerimist [3]. Hiina traditsioonilise meditsiini komponendid on aga keerulised ja farmakoloogiline toime organismile keeruline. Inaktiveerimata seerum suudab paremini kajastada ravimi toimet organismis ja katse ajal ei täheldatud tsütotoksilist toimet.

3.2 Neere toniseeriva hiina meditsiini indutseeriv toime MSC-de suunatud diferentseerumisele

Luuüdi M SC-d (BM SC) on luuüdi stroma komponendid. Pärast isoleerimist ja in vitro kultiveerimist on neil teatud induktsioonitingimustes võime mitmel viisil diferentseeruda osteoblastideks, kondrotsüütideks, neurotsüüdideks, adipotsüütideks, kardiomüotsüütideks jne. Eksperimentaalsed uuringud on näidanud, et nii traditsioonilisel Hiina meditsiinil [4] kui ka neere toniseerival hiina meditsiinil [5] on MSC-de osteoblastideks diferentseerumist esile kutsuv toime. Katses võivad viis Hiina meditsiinilist seerumit, mis on valmistatud viiest ravimist, millel on "neere toniseerivad ning luid ja lihaseid tugevdav toime", välja arvatud psoraleen, indutseerida MSC-de diferentseerumist osteoblastideks, kuid spetsiifiline mehhanism jääb alles. edasi uurida.

3.3 Neere toniseeriva traditsioonilise hiina meditsiini sisaldava seerumi kliiniline tähtsus MSC-de osteoblastideks diferentseerumise esilekutsumisel.

Luukoetehnoloogial on laialdased väljavaated kliinilisteks rakendusteks ja sellest on saanud kaasaegse ortopeedia uurimistöö koht. BM SC-d, mis on praegu luukoetehnoloogia kõige ideaalsemad seemned, võivad kõrvaldada nende segavate tegurite mõju katsetulemustele ja aidata vähendada seerumi mitterakulist sisaldust. Selle mõju uurimise keskne ülesanne on see, kuidas seda võimalikult lihtsatel tingimustel teha. Diferentseeruvad otse osteoblastideks ja muunduvad seejärel küpseteks luurakkudeks. Praegu on MSC-de osteoblastideks diferentseerumiseks tavaliselt kasutatavad indutseerijad deksametasoon, mis koosneb C-vitamiinist ja naatriumglütserofosfaadist. Kliiniliselt on deksametasoonil kõrvaltoimed, nagu infektsioon, osteonekroos ja osteoporoos, ning sellel on märkimisväärne inhibeeriv toime rakkude proliferatsioonile in vitro [6, 7], mis piirab MSC-de kasutamist indutseerijana in vivo pärast siirdamist. Neere toniseeriv Hiina meditsiin indutseerib MSC-sid osteoblastideks diferentseeruma. Pikaajalises kliinilises rakenduses ei ole neere toniseeriva Hiina meditsiini toksilisi ja kõrvaltoimeid täheldatud. Seetõttu on selle kasutamisel indutseerijana in vivo lai kliiniline kasutusvõimalus.

Lühidalt öeldes on suurem osa praegustest uuringutest M SC-de kui luukoetehnoloogia seemnerakkude kohta alles katsejärgus. Praegu uuritakse, kuidas saada lühikese aja jooksul piisavalt MSC-sid ja indutseerida neid lihtsate meetoditega osteoblastideks diferentseeruma. Keskendu. Kuigi traditsioonilised hiina ravimid, millel on neere ergutav ning luid ja lihaseid tugevdav toime, võivad indutseerida MSC-d diferentseeruma osteoblastideks, on sellel helge tulevik MSC-de diferentseerumise indutseerijana hilinenud ühinemise, mitteliitumise ja luumurdude osteoporoosi ravis. . Toimemehhanismi tuleb veel uurida.

Cistanche ehhinakosiidsuudab vastu seista apoptoosile ja soodustadaluude kasv