Vitex Leucoxyloni vesipõhisest leheekstraktist sünteesitud raua nanoosakeste roheline süntees ja iseloomustus ning selle biomeditsiinilised rakendused

Abstraktne:Vesiekstrakti saamiseks kasutati külmekstraktsiooni meetoditVitex leukoksülonlehed vahekorras 1:10. Raua nanoosakesed (FeNP-d) sünteesiti lehtede vesiekstrakti abilV. Leucoxylonredutseeriva ainena. FeNP-de valmistamiseks kasutati fütomeditsiini meetodit, segades 1 ml taimeekstrakti 1 mM raudsulfaadiga. Sünteesitud FeNP-de uurimiseks kasutati skaneerivat elektronmikroskoopiat (SEM), Fourier-transformatsiooni infrapunaspektroskoopiat (FTIR), ultraviolettkiirguse nähtavat spektroskoopiat (UV-Vis) ja energiat hajutavat röntgenspektroskoopiat. Redutseerivat reaktsiooni näitas lahuse värvuse muutus ja musta värvi moodustumine kinnitab FeNP-de moodustumist. Suurim neeldumispiik (max) leiti UV-Vis spektraalanalüüsis 395 nm juures. FTIR spektridV. Leucoxylonlehtede vesiekstrakt näitas mõne piigi nihkeid, nimelt 923,96 cm−1 ja 1709,89 cm−1, funktsionaalrühmadega karboksüülhapped, küllastumata aldehüüdid ja ketoonid, mis puudusid FeNP-de FTIR-spektrites ja vastutavad FeNP-de moodustumise eest. SEM-piltidel täheldati FeNP-sid läbimõõduga 45–100 nm. FeNP-de loomist kinnitas EDX, mis näitab tugevat signaali metallilise raua piirkonnas 6–8 Kev juures. XRD näitas kristalset olemust ja keskmise läbimõõduga 136,43 nm.Antioksüdant,põletikuvastane, tsütotoksilised jahaavade paranemistin vitro testid näitasid FeNP-de olulist aktiivsust. Käesoleva uuringu kumulatiivsed tulemused näitavad, et FeNP-de roheline sünteessuurendab selle bioloogilist aktiivsustja võib toimida kuivõimalik nahahaavu parandav ainejatsütotoksiline aine vähi vastu. Tulevased uuringud on vajalikud FeNP-de sünteesiga seotud mehhanismide tuvastamiseksV. Leucoxylonja selle biomeditsiinilised rakendused.

Märksõnad:Vitex leukoksülon; raua nanoosakesed; SEM; haavade paranemist; tsütotoksiline

CISTANCHE EELISEDANTIOKSIDANT,PÕLETIKAVASTANE, TÜTOTOKSILISED JAHAAVADE PARANEMIST

1. Sissejuhatus

Nanotehnoloogia rakendamine teaduses ja tehnoloogias uute materjalide tootmiseks nanomõõtmelisel tasemel on kiiresti kasvav valdkond [1]. Nanotehnoloogia tegeleb materjalide valmistamisega aatomitasandil, et saada eristatavad omadused, mida saab eelistatud rakenduste jaoks manipuleerida. See valdkond kasvab kiiresti oma rakendustega teaduses ja tehnoloogias uute materjalide tootmiseks nanoskaala tasemel [2]. Erinevad tööstussektorid on viimastel aastatel nanotehnoloogia omaks võtnud tänu selle rakendustele elektrooniliste salvestussüsteemide [3], biotehnoloogia [4], sihtanalütide magnetilise eraldamise ja eelkontsentreerimise, ravimite sihipärase kohaletoimetamise [5] ning geenide ja ravimite kandjate valdkondades. tarne [3,5,6]. Järelikult võivad need osakesed avaldada ühiskonnale olulist mõju tänu paljudele rakendustele, milleks neid saab kasutada. Nanoosakesed (NP-d) on osakeste massid, mille suurus on alla saja nanomeetri ja mida peetakse nanotehnoloogia valdkonnas võtmetähtsusega struktuurseteks massideks. NP-de kõrgem aktiivsus on nii nende iseloomulik tunnus kui ka kvaliteet, mille poolest nad on kõige tähelepanuväärsemad [7]. Orgaanilised ja anorgaanilised NP-d on kaks peamist klassifikatsiooni, mida saab nanoosakeste suhtes rakendada. Anorgaanilised nanoosakesed võivad sisaldada magnetilisi NP-sid, väärismetallide NP-sid (nagu kuld ja hõbe) ja pooljuhtide NP-sid (nagu titaandioksiid ja tsinkoksiid). Orgaanilised nanoosakesed võivad sisaldada süsiniku NP-sid. Anorgaanilised nanoosakesed äratavad suurt tähelepanu, kuna neil on suurepärased materjaliomadused ja funktsionaalne mitmekülgsus. Neid on uuritud kui võimalikke vahendeid nii meditsiinilise pildistamise kui ka haiguste raviks nende suurusest tulenevate omaduste tõttu [8]. NP-de erinevaid keemilisi, füüsikalisi ja bioloogilisi omadusi mõjutavad tugevalt mitmesugused parameetrid, sealhulgas nanoosakeste suurus ja morfoloogia, samuti pinnakate, mis määratakse tavaliselt nanoosakeste sünteesi käigus. Kavandatava bioloogilise aktiivsuse kaotuse põhjustab kolloidse stabiilsuse vähenemine. pH, ioontugevus ja hulk valke, mis vastavatel asjaoludel interakteeruvad AgNP-dega, mõjutavad kõik kolloidset stabiilsust. Selle tulemusena on õige sünteesitehnika valik konkreetsete rakenduste jaoks soovitud osakeste karakteristikute saamiseks kriitiline [9].

Praegu on palju erinevaid NP-sid, mida saab sünteesida mitmesuguste füüsikaliste, keemiliste, bioloogiliste ja hübriidprotsesside abil. Paljude uuringute tulemuste kohaselt hõlmavad nanoosakeste tootmise füüsikalised ja keemilised protsessid orgaaniliste lahustite, ohtlike ühendite, oluliste energiakoguste ja stabiliseerivate ainete kasutamist, mis ei ole biolagunevad [10]. Seetõttu muutub rohelise nanotehnoloogia valdkonnas üha populaarsemaks NP-de süntees, kasutades redutseerivate ja piiravate ainetena looduslikult saadavaid materjale, nagu taimeekstraktid, erinevad mikroorganismid, nende metaboliidid ja mõned looduslikud humiinained [11,12]. Keskkonnasõbralikke sünteesimeetodeid on kasutatud mitmesuguste metalliliste nanoosakeste, sealhulgas hõbeda, kulla, raua, vase ja tsingi tootmiseks. Lihtsate ja keskkonnasõbralike meetodite väljatöötamine NP-de sünteesiks on nanotehnoloogia üks peamisi fookusi. Biomaterjale, nagu mikroorganisme ja taimeekstrakte, saab kasutada mitmesuguste NP-de valmistamise protsessis [13,14]. Kuna aga mõned organismid on patogeenid, on nendega tegelemine ohtlik. Edu saavutamiseks tuleb mikroorganisme hoida kultuuris ja allutada hoolikalt kontrollitud tingimustele, sealhulgas temperatuur, pH ja muud parameetrid. Kuna see välistab mikroobse kultuuri säilitamise töömahuka protsessi, võib NP-de süntees taimeosi kasutades mõnikord osutuda soodsamaks kui muud bioloogilised protsessid [15]. Selle tulemusena on see pälvinud palju tähelepanu oma loomupäraste omaduste tõttu, mille hulka kuuluvad loodusvarade kasutamine, kiirus, keskkonnasõbralikkus ja healoomulisus. Need ahvatlevad omadused on meditsiinilistes rakendustes kasutamiseks hädavajalikud. Rohelise sünteesi teel toodetud nanoosakeste suurus on täpselt määratletud ja kontrolli all, need ei sisalda saasteaineid ja meetodit on lihtne suurendada. Need on mõned rohelise sünteesi täiendavad eelised [16]. Sünteesitud nanoosakeste bioloogiline aktiivsus on suures osas määratud ja peenhäälestatud metalliioonide stabiilsuseks ja vähendamiseks kasutatavate roheliste materjalidega. Üks NP-de ideaalseid omadusi peaks olema see, et neil peab olema suurepärane võime eristada potentsiaalseid sihtmärke (patogeene) ja imetaja (peremeesrakke) [17].

Seetõttu uuriti V. leucoxyloni lehtede vesiekstrakti potentsiaali hõlbustada raua nanoosakeste (FeNP) moodustumist käesolevas uuringus. Raud on üks elemente, mida võib Maal kõige rohkem leida. Hiljuti hakati seda tunnustama kui oluliste NP-de uut klassi, kuna sellel on mitmesuguseid unikaalseid omadusi, sealhulgas kõrge koertsiivsus ja superparamagnetism. Cataly sis, elektroonikaseadmed, teabesalvestus, andurid, ravimite kohaletoimetamise tehnoloogia, biomeditsiin, magnetsalvestusseadmed ja keskkonna puhastamine on vaid mõned paljudest põnevatest rakendustest, mis on FeNP-sid kasutanud [18]. Lisaks võib mitmete uuringute kohaselt FeNP-sid luua erinevatest taimeekstraktidest. Nende taimeekstraktide hulka kuuluvad Eucalyptus globuluse leht [19], granaatõuna leht [20] ja banaanikoore tuhk [21]. Taim V. leucoxylon, mida käesolevas uuringus kasutati, kuulub perekonda Verbenaceae. Teda tuntakse ka viielehelise puhta puuna (kannada: Sengeni, Holenekki, Holllalakki) ja seda võib kohata piirkonnas jõekallastel igihaljastes ja pooligihaljastes metsades ning niisketes lehtmetsades ojade ääres. See võib ulatuda kuni 20 m kõrguseks ja seda liigitatakse tagasihoidliku kuni suure lehtpuu alla. India Lääne-Ghati metsade pikkuses võib seda leida suurel hulgal. On teatatud, et V. leucoxyloni lehtede ekstrakti infusioonil on lai valik farmakoloogilisi toimeid, nagu põletikuvastane, antioksüdant, antipsühhootikum, antidepressant, parkinsonismivastane ja antihüperlipideemiline toime [22]. Looduslikke tooteid on läbi ajaloo ja eriti rahvameditsiinis kasutatud väga erinevate vaevuste ja haiguste raviks. See tava pärineb iidsetest aegadest. Looduslike toodete keemia meetodid, mis on olnud kasutusel pikka aega, on võimaldanud leida tohutul hulgal bioaktiivseid sekundaarseid metaboliite, mis pärinevad maismaa- ja mereallikatest. Märkimisväärset hulka neist looduslikult esinevatest ainetest kaalutakse praegu potentsiaalsete ravimitena [23].

On veel avastamata palju looduslikult esinevaid kemikaale ja toitaineid, mis on inimkonnale kasulikud. Sellest tulenevalt on kohene nõudlus uuenduslike ravivõimaluste uurimise ja arendamise järele, mida saab edukalt kasutada terapeutilistes sekkumistes, tekitades samas minimaalse hulga kõrvaltoimeid.

Praegu soovitatud FeNP-de roheline sünteesiprotsess on selge ja kulutõhus. Käesolevas uuringus püüti nanoosakesi luua toatemperatuuril ilma kemikaale või füüsikalisi tehnikaid kasutamata. Vitexi leukoksülooni tehas valiti selleks, et sünteesida raua nanoosakesi, ja raua nanoosakeste tugevuse hindamiseks viidi läbi põhjalikud süstemaatilised in vitro mudelid. Selle taime kohta on avaldatud vaid piiratud arv uurimusi nanoosakeste kontseptsiooni ja nende biomeditsiiniliste rakenduste kohta. Sellest tulenevalt otsustasime, et seda uuringut oleks kasulik läbi viia järgmiste eesmärkidega: fütokemikaalide sõelumine ja sekundaarsete metaboliitide arvu mõõtmine V. leucoxylonis; V. leucoxyloni FeNP-de roheline süntees ja iseloomustamine; V. leucoxyloni ja selle FeNP-de antioksüdantsete ja põletikuvastaste toimete võrdlev uuring in vitro; V. leucoxyloni ja selle FeNP-de lehtede vesiekstrakti in vitro tsütotoksiline toime nahavähi, kopsuvähi ja suuvähi vastu; V. leucoxyloni ja selle sünteetiliste FeNP-de lehtede vesiekstrakti in vitro haavade paranemise aktiivsus kriimustustestiga.

2. Materjalid ja meetodid

2.1. Taimse materjali kogumine

2022. aasta märtsis korjati Indias Karnataka osariigi Uttari kannada rajoonis Lääne-Ghatide Anshi metsapiirkonnast V. leucoxyloni värskeid lehti. Lehed tuvastas ja kinnitas dr Kotresha K., taksonomist, botaanika osakond, Karnataka Science College, Dharwad; Karnataka, viidates vautšeri näidisele, mis on deponeeritud Karnataka teaduskolledži botaanikaosakonda, Dharwad, Karnataka. Pärast kogumist pesti värsket taimelehtmaterjali jooksva kraanivee all, kuivatati päikese käes ja seejärel jahvatati mehaanilise veski abil jämedaks pulbriks. Pulbrit hoiti konteinerites, mis suleti toatemperatuuril, et seda saaks hiljem kasutada toorlahusti ekstraheerimise protsessis.

2.2. Taimeekstrakti valmistamine

Soxhleti seadet kasutades ekstraheeriti 25 g pulbristatud lehti 48 tundi 250 ml destilleeritud veega. Vesiekstrakt kontsentreeriti edasi rotaatoraurustiga ja kuivatati seejärel eksikaatorites, enne kui seda hoiti suletud pudelis temperatuuril 4 °C kuni kasutamiseni. FeNP-de sünteesiks kasutati vesiekstrakti redutseeriva ja stabiliseeriva ainena.

2.3. Lahustid ja reaktiivid

Kõik kasutatud kemikaalid ja lahustid olid analüütilise kvaliteediga ja osteti ettevõttelt Hi-media (Hubli, India).

2.4. Fütokeemiline analüüs

Järgides protseduuri, mida on kirjeldanud Deepti et al. (2012), lehtede toorvesiekstrakti V. leucoxylon testiti kvalitatiivselt erinevate fütokeemiliste koostisosade, nagu flavonoidid, alkaloidid, fenoolid, glükosiidid, steroolid, ligniinid, saponiinid, antrakinoonid, tanniinid ja redutseerivad suhkrud, olemasolu [24].

2.5. Raua nanoosakeste süntees

Kõigepealt lisati 1 ml V. leucoxyloni lehtede vesiekstrakti 10 ml 0,05 mM FeSO4 vesilahusele ja segu loksutati. Toatemperatuuril ja pimedas keskkonnas viidi reaktsioonisegu täielik protsess läbi. Oksüdatsiooni-/redutseerimisreaktsioon oli selgelt nähtav pärast värvitu reaktsioonisegu inkubeerimist ja vajaliku aja jooksul reageerimist [25]. Et eemaldada värskelt sünteesitud FeNP-dest vesiekstrakti jäljed, millel lasti pärast soovitud reaktsiooniperioodi jooksul tsentrifuugimist kiirusel 10, 000 p/min kümme 10 minutit pulbrina kuivada, tsentrifuugiti FeNP-sid sisaldav vesisegu. teist korda ja dispergeeriti uuesti topeltdestilleeritud vees ja kuivatati [26].

2.6. FeNP-de iseloomustus

Mitmed meetodid, nagu ultraviolett-nähtav spektroskoopia (UV-Vis), Fourier-teisendus infrapunaspektroskoopia (FTIR), skaneeriv elektronmikroskoopia ja energiat hajutav röntgenspektroskoopia, röntgendifraktsioon (XRD), osakeste suuruse analüsaator ja zeta potentsiaali kasutati FeNP-de iseloomustamiseks.

2.6.1. UV-nähtava spektroskoopiapõhine analüüs

Esiteks hinnati 1 ml kolloidse FeNP-de lahuse alikvooti kvartsküvettides UV-nähtava spektroskoopia abil (U-3310, Hitachi, Tokyo, Jaapan), kasutades võrdlusmaterjalina destilleeritud vett ja 0,05 mM FeSO4. pimekatsena, et kinnitada raudioonide redutseerimist kolloidlahuses [27].

2.6.2. FTIR-põhine analüüs

Funktsionaalrühmad (rühmad), mis olid seotud raua pinnal ja osalesid FeNP-de sünteesis, tuvastati FTIR-spektroskoopia abil (S700, Nicolet, MA, USA), [28]. Pärast 72-tunnist inkubeerimist eraldati FeNP-d reaktsioonisegu korduva tsentrifuugimisega (3–4 korda) kiirusel 10, 000 pööret minutis 15 minuti jooksul. Supernatant asendati deioniseeritud veega ja pelletit säilitati pulbrina. Pärast kuivatamist viidi FeNP-d läbi FTIR analüüsi, kasutades kaaliumbromiidi granuleerimisprotsessi vahekorras 1:100.

2.6.3. Skaneerimisel-elektronmikroskoopial põhinev analüüs

Nanoosakeste uurimiseks ja nende pinnakuju määramiseks kasutati skaneerivat elektronmikroskoopiat (JSM-IT 500, Jeol, Boston, MA, USA). Substraadid valmistati puhtale 5 mm × 5 mm Si substraadile, mis oli lõhustatud 100 mm läbimõõduga vahvlilt. Substraadil lasti reageerida 2 kuni 6 tundi ja proov valmistati, tsentrifuugides kolloidset lahust kiirusel 10, 000 p/min 5 minutit. Pellet kuivatati pärast mitmekordset taasfuugimist, misjärel see dispergeeriti uuesti deioniseeritud vees ja protseduuri korrati. Lõpuks saadi kuiv pellet, mille struktuuri iseloomustati SEM-analüüsiga vastavalt protseduurile, mida kirjeldas National Institute of Standards and Technology, NIST{10}} [29].

2.6.4. Energiat hajutav röntgen

Pärast kuivatamist süsinikuga kaetud vaskvõrgul analüüsiti redutseeritud FeNP-sid EDX-i (JSM-IT 500, Jeol, Boston, MA, USA) abil, mis võimaldas määrata ka elementide koostist.

2.6.5. Zeta potentsiaal

NP-de vaatlused Zeta potentsiaal on kasulik vahend täiendava ülevaate saamiseks kolloidsete NP-de stabiilsuse kohta. Zeta potentsiaali amplituud annab vihje kolloidi võimalikule stabiilsusele. Vastavalt Meléndrez jt. (2010) järgi loetakse osakesi stabiilseks, kui nende zeta potentsiaali väärtused on positiivsemad kui pluss 30 mV või negatiivsemad kui 30 mV [30]. Seda asjaolu tuleks arvesse võtta. Laser-zeta-meetrit kasutati pinna zeta potentsiaalide näitude saamiseks (Malvern zeta seizer 2000, Malvern, UK). Nanoosakeste vedelaid proove, kokku 5 milliliitrit, lahjendati 50 milliliitri topeltdestilleeritud veega ja suspendeeriva elektrolüüdi lahusena kasutati naatriumkloriidi 2 mm ruutmeetri kohta. Pärast seda muudeti pH-d, kuni see saavutas soovitud taseme. Proove loksutati kokku 30 minutit. Pärast mahuti loksutamist märgiti pH tasakaalus ja määrati metalliosakeste zeta potentsiaal. FeNP-de pinnapotentsiaali määramiseks kasutati zeta potentsiaali. Igal juhul oli märgitud väärtus kolme individuaalse mõõtmise tulemuste keskmine. Kui zeta potentsiaali väärtused olid vahemikus suurem kui pluss 30 mV kuni alla 30 mV, määrati NP stabiilsuse kriteeriumid [31].

2.6.6. Osakeste suuruse analüsaator

Proovi osakeste suuruse määramiseks viidi proovile PSA-test läbi pärast seda, kui see oli lüofiliseeritud ja seejärel ultraheliseadme abil hajutatud (SZ-100, Horiba, Kyoto, Jaapan).

2.6.7. Röntgendifraktsioonianalüüs (XRD) analüüs

V. leucoxyloni lehtede vesiekstraktist sünteesitud raua nanoosakesed allutati XRD analüüsile (Smart Lab SE, Rigaku, Tokyo, Jaapan), et määrata nanoosakeste olemus ja keskmine suurus.

2.7. Antioksüdandi aktiivsuse määramine in vitro meetoditega

2.7.1. Raua ioonide redutseeriva antioksüdandi võimsuse test (FRAP)

Oyaizu (1986) järgi hinnati raudioonide redutseerimisvõimet väikese modifikatsiooniga [32]. 30 minutiks temperatuuril 50 ◦C lisati 2,5 ml 20 mM fosfaatpuhvrit ja 2,5 ml 1% kaaliumferritsüaniidi 2,5 ml V. leucoxyloni leheekstraktile ja selle sünteesitud FeNP-dele segati kombinatsioon. Pärast inkubeerimisperioodi lisati segule 2,5 ml 10% (mass/maht) trikloroäädikhapet ja 0,5 ml 0,1% (mass/maht) raudkloriidi, enne kui inkubeeriti veel 10 minutit. Lõpuks kasutati UV-V spektrofotomeetrit neeldumise tuvastamiseks lainepikkusel 700 nm. Standardina kasutati askorbiinhapet. Iga proovi testiti kolm korda.

2.7.2. Vesinikperoksiidi eemaldamise analüüs

Tuginedes V. leucoxyloni lehtede vesiekstrakti ja selle sünteetiliste FeNP-de võimele eemaldada vesinikperoksiidi, hinnati nende ühendite antioksüdantset toimet. Esmalt lisati 0,5 ml teadaolevas kontsentratsioonis standardsele askorbiinhappele {{0}},6 ml fosfaatpuhvrit (pH-7,4), mis sisaldas 4 mM H2O2, samuti tuubid, mis sisaldasid erinevates kontsentratsioonides taimeekstrakte. vahemikus 100 µL kuni 500 µL (pH-7,4). Kasutades fosfaatpuhvrit ja vesinikperoksiidivaba pimelahust, hindasime 10 minuti pärast lahuse neeldumist lainepikkusel 230 nm. Kontrolli loomiseks kasutati proovi või standardi asemel fosfaatpuhvrit [33]. Iga proovi testiti kolm korda. Inhibeerimisprotsendi arvutamiseks kasutati valemimeetodit.

2.7.3. DPPH vabade radikaalide eemaldamine

Analüüs V. leucoxyloni lehtede ekstrakti ja sünteesitud FeNP-sid testiti nende võime suhtes vabu radikaale eemaldada, kasutades reagendina DPPH radikaali [34]. Proovid kombineeriti DPPH radikaali lahusega (60 M) etanoolis (100 µL) erinevatel kontsentratsioonidel (mass/maht). Segu neeldumise mõõtmiseks lainepikkusel 517 nm kasutati UV-Vis spektrofotomeetrit pärast 30-minutilist inkubeerimist pimedas toatemperatuuril. Katse standardina kasutati askorbiinhapet. Iga proovi DPPH eemaldamisaktiivsuse määramiseks kasutati järgmist võrrandit:

kus Ac tähistab kontrollreaktsiooni neeldumist, mis viiakse läbi 100 l etanooli segamisel 100 l DPPH lahusega, ja At tähistab uuritava proovi neeldumist. Katsed viidi läbi kolmikutena. Iga proovi jaoks arvutati IC50 väärtus. Kõrgemat vabade radikaalide aktiivsust näitas reaktsioonisegu väiksema neeldumisega.

2.7.4. Fosfomolübdeeni (PM) analüüs

Üldine antioksüdantne aktiivsus määrati Prieto et al., 1999, standardtehnika abil. Iga katseklaas, mis sisaldas 3 ml destilleeritud vett ja 1 ml molübdaadi reagendi lahust, sisaldas V. leucoxyloni ja selle FeNP-de lehtede vesiekstrakti erinevates kontsentratsioonides vahemikus 100 µL kuni 500 µL. Neid torusid inkubeeriti 90 minutit temperatuuril 95 °C. Reaktsioonisegu neeldumist mõõdeti 695 nm juures pärast seda, kui need torud viidi pärast inkubeerimist 20–30 minutiks toatemperatuurile. Võrdlusstandardiks oli askorbiinhape [35].

2.8. In vitro põletikuvastase toime hindamine

V. leucoxyloni lehtede vesiekstrakti ja selle tekitatud FeNP-de põletikuvastast toimet hinnati valkude denatureerimise meetodil, mille on kirjeldanud Elias et al., 1988, koos väikeste muudatustega [36]. Standardravimina kasutati diklofenaknaatriumi. Reaktsioonisegu, mis sisaldas 2 ml teadaoleva kontsentratsiooniga valmistatud FeNP-sid (100 g/ml) standardse diklofenaknaatriumiga (100 g/ml) ja 2,8 ml fosfaatpuhverdatud soolalahust (pH 6,4), segati 2 ml värske kanamunaga. albumiini (1 mM) ja inkubeeriti 27 ± 1 °C juures 15 minutit. Denatureerimine kutsuti esile, pannes reaktsioonisegu 10 minutiks veevanni temperatuurile 70 °C. Pärast jahutamist mõõdeti neeldumine 660 nm juures, kasutades pimekatsena topeltdestilleeritud vett. Iga katse viidi läbi kolm korda. Valkude denaturatsiooni inhibeerimise protsendi arvutamiseks kasutati järgmist valemit:

kus=uuritava proovi neeldumise juures; Ac=kontrolli neeldumine.

2.9. Raua nanoosakeste tsütotoksilise ja vähivastase aktiivsuse määramine MTT analüüsi abil

Hinnati V. leucoxyloni ja selle sünteesitud FeNP-de mõju mittevähiliste fibroblastirakkude L292 elujõulisusele ning selle vähivastast toimet nahavähile (A375), kopsuvähile (A549) ja suuvähile (KB-3-1). kasutades standardset MTT testi, vastavalt Carmichael et al., (1987) [37]. Kõik rakuliinid saadi riiklikust rakuteaduse keskusest (NCCS), Pune, India. Rakkude kasvu inhibeerimise protsendi (IC50) väärtused tuletati iga rakuliini annuse-vastuse kõverate abil ja kasvu inhibeerimise protsendi arvutamiseks kasutati järgmist valemit. Selle katse aluseks on MTT muundamine purpurseks formazaani produktiks tervete rakkude mitokondriaalse dehüdrogenaasi poolt [38].

2.10. In vitro haavade paranemise uuring kriimustustesti abil

Käesolevas uurimises uuriti teadaolevate taimeekstrakti ja raua nanoosakeste kontsentratsiooniga proovidest põhjustatud L292 rakuliini rakkude levimis- ja rändevõimet [39]. Rakukultuuri protsessi alustamiseks kasutati loomarakukultuuri plaate DMEM söötmega, millele oli lisatud 10 protsenti FBS-i ja 2 protsenti Pen-Strep antibiootikumi (Darmstadt, Saksamaa). Steriilset plastist pipetiotsikut kasutati rakkude ühekihilise konfluendi kriimustamiseks pärast seda, kui need olid kasvanud ligikaudu 50,000 rakuni ml kohta. Soovimatute rakujäätmete eemaldamiseks kasutati PBS lahust. Negatiivse kontrollina kasutati töötlemata rakke, samas kui teadaoleva kontsentratsiooniga polümeeriproovide positiivse kontrollina kasutati standardset askorbiinhapet. Järgmise 24 tunni jooksul hoiti rakke temperatuuril 37 ◦C 5% CO2-ga. Rakkude suhtelise migratsiooni ja haava sulgemise uurimiseks inkubeeriti kriimustatud rakukihte ja pildistati intervalliga 0 kuni 6 tundi kuni 12 tundi ja 24 tundi. Vahekauguse kvantifitseerimiseks kasutati MagVision Software mõõtmist (X64, 2016, Magnus, New Delhi, India) 4× eraldusvõimega kalibreerimist. Haava sulgumise ja migratsioonikiiruse määramiseks kasutati allolevat valemit:

seoses järgmisega: A0h=haava pindala mõõdetuna vahetult pärast kriimustamist; ATh=haava pindala mõõdetuna h tunni pärast; Rm=migratsioonikiirus (µm/h); Wf=haava esialgne laius (µm); ja T=migratsiooniaeg (tund).

2.11. Statistiline analüüs

Andmed on esitatud keskmise standardhälbe ja standardveana ning iga katse viidi läbi kolm korda. SPSS tarkvara versiooni 20 kasutati ühesuunalise dispersioonanalüüsi (ANOVA) läbiviimiseks rühmade vahel esinenud keskmiste skooride erinevuste kohta.

Küsi lisa:

E-post:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel: pluss 86 15292862950

pood:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop