Gao-Zi-Yao parandab vanade spontaansete hüpertensiivsete rottide õppimist ja mälu, 2. osa

Katseloomad

12-kuused ja kaheksanädalased isased spontaansed hüpertensiivsed rotid (SHR) osteti Nanjingi loomamudelikeskusest.

8-Nädala vanuste meeste ja mälu vahel on tugev seos. Sel perioodil areneb meessoost olendi aju kiiresti ning tema neuronitevahelised ühendused suurenevad järk-järgult, mis omakorda mõjutab tema mälu arengut.

Uuringud näitavad, et isasloomade mälu paraneb vanuse kasvades. See mitte ainult ei mõjuta oluliselt nende ellujäämist ja paljunemist, vaid aitab neil paremini kohaneda keskkonnaga ja tulla toime uute väljakutsetega.

Seetõttu peaksime aktiivselt julgustama noori mehi osalema mitmesugustes kasulikes tegevustes, nagu mõistatuste lahendamine, uute oskuste õppimine ja uute valdkondadega tutvumine. Need tegevused stimuleerivad nende aju, võimaldades neil kiiremini areneda ja parandada nende mälu.

Samas peaksime pakkuma ka noortele isasloomadele sobiva keskkonna ja õhkkonna. Kui nad tunnevad end turvaliselt ja lähedal, võib see soodustada nende aju arengut ja parandada mälu.

Lühidalt öeldes peaksime tegema kõik endast oleneva, et aidata noortel meestel oma mälu parandada, et nad muutuksid targemaks, enesekindlamaks ja võimekamaks olendiks. See ei soodusta mitte ainult nende isiklikku arengut, vaid ka kogu liigi õitsengut ja ellujäämist. On näha, et me peame parandama mälu ja Cistanche deserticola võib oluliselt parandada mälu, sest Cistanche deserticola omab antioksüdantset, põletikuvastast ja vananemisvastast toimet, mis võib aidata vähendada oksüdatiivseid ja põletikulisi reaktsioone ajus, kaitstes seeläbi närvisüsteemi tervis. Lisaks võib Cistanche deserticola soodustada ka närvirakkude kasvu ja paranemist, parandades seega närvivõrkude ühenduvust ja funktsiooni. Need mõjud võivad aidata parandada mälu, õppimist ja mõtlemiskiirust ning võivad samuti ära hoida kognitiivse düsfunktsiooni ja neurodegeneratiivsete haiguste teket.

Mälu suurendamiseks klõpsake valikul Tea toidulisandeid

Selles mudelis hakkab hüpertensioon arenema 4 kuu vanuselt ja hüpertensiooniga seotud muutused aju mikroveresoonkonnas ilmnevad 6 kuu vanuselt [37].

Rotte hoiti optimaalsetes tingimustes, järgides standardset hügieeni, temperatuuril 25 kraadi 12/12 valguse/pimeduse tsükliga ning neid toideti standardse roti toidu ja veega ad libitum.

Kõik protseduurid kiitis heaks ja viidi läbi vastavalt SoochowUniversity kehtestatud loomade hooldamise ja kasutamise juhistele, mis on kooskõlas meie eelmise aruandega[35].

Katsed viidi läbi vastavalt National Institutes of Health Guidelines for the Useof Laboratory Animals (NIH, väljaande number 85–23, muudetud 1996). Käesolevast uuringust on teatatud ARRIVE'i juhistes.

Vananemise kontrollimiseks rakendati kaheksanädalast SHR-i (SHR-Young, n=10). 12 kuu vanuseid rotte raviti destilleeritud veega (vana SHR-C, n=10), väikese annusega (vana SHR-L, n=10), keskmise annusega Gao-Zi-Yao või ilma selleta. (vana SHR-M, n=10), suur annus (vana SHR-H, n=10) maoga toitmisel.

Madala, keskmise ja kõrge Gao-Zi-Yao annused on 1/2-, 1-, kolmekordsed annused kliinilisel patsiendil kasutamiseks, mis arvutatakse vastavalt kehapinnale. Gao-Zi-Yao lahustati enne pealekandmist 5 ml destilleeritud vees ja seda manustati ühekordselt 4 nädala jooksul.

Vererõhku ja südame löögisagedust jälgiti igal nädalal sabamanseti meetodil ning vastavalt meie varasemale vaatlusele jälgiti igal nädalal ka kehakaalu [35].

4 nädala pärast viidi läbi Morrise veelabürindi eksperiment ja rotid surmati anesteesia all naatriumpentobarbitaaliga (50 mg/kg ip), hipokampuse kude koguti edasiseks analüüsiks. Kõik katseprotokollid kiitis heaks Soochowi ülikooli eetikalitsentsi komitee.

Morrise veelabürindi eksperiment

Morrise veelabürindi eksperiment (BW-MWM101, Shanghai Bio-will Co., Ltd., Shanghai, Hiina) viidi läbi nagu eelnevalt kirjeldatud, koos mõningate muudatustega [38]. Test oli planeeritud 6 päevaks, 1. kuni 5. päev oli treeningperioodiks ja 6. päev testitulemuste jaoks.

Rotid said 2-minutilist piimatreeningut, latentsusajana registreeriti platvormile sisenemise aeg. 6. päeval eemaldati platvorm. Rotid pandi kõige kaugemasse kauguse kvadranti ja ujumistrajektoor registreeriti 2 minuti jooksul.

Tarkvara arvutas õppimise ja mälu funktsioonide parameetrid.

NO ja põletikuliste faktorite taseme mõõtmine ELISA abil

NO (katalooginumber: S0023), IL-1 (katalooginumber: A301BH80153), IL-2 (katalooginumber: A31038348), IL-6 (katalooginumber: A30681042) tasemed seerumis, ja TNF- (katalooginumber: A38280855) mõõdeti kaubanduslikult saadavate ELISA komplektide abil (BiotechnologyCo., Ltd. Shanghai ensüümiuuringud. Shanghai, Hiina). Kõik etapid viidi läbi vastavalt tootja juhistele.

Nissl värvimine

Roti hipokampuse kude isoleeriti, fikseeriti, manustati parafiiniga, seejärel inkubeeriti 1% toluidiinsinises värvimislahuses 5–10 minutit toatemperatuuril. Kümme sektsiooni loputati destilleeritud vees, leotati 95% etanoolis 5–30 minutit ja dehüdreeriti 100% etanoolis.

Pärast dehüdratsiooni asetati viil ksüleeni ja kaeti vaigukeskkonnaga. Neuronite arvu hipokampuse CA1, CA2 ja dentate gyrus (DG) piirkondades vaadeldi ja analüüsiti ImageJ analüüsiprogrammi abil.

Western blot õppimise ja mäluga seotud valkude jaoks

Western blot õppimise ja mäluga seotud valkude jaoks viidi läbi nii, nagu on kirjeldatud meie eelmises aruandes koos mõningate muudatustega [39].

Hipokampuskoed homogeniseeriti RIPA puhvriga (50 mmTris, 150 mM NaCl, 1% Triton-X-100, pH 7,0), mis sisaldas fenüülmetaansulfonüülfluoriidi (R&D Systems Inc., Minneapolis, USA). Homogenaate tsentrifuugiti 12,000 × g juures 10 minutit 4 kraadi juures.

Rakuvalgud eraldati SDS-PAGE abil ja kanti üle PVDF membraanidele (Hybond TM-ECL; AmershamPharmacia Biotech, Inc.). Membraanid blokeeriti toatemperatuuril 5% rasvavaba piimaga PBS-is ja 0,1% Tween{5}}.

Seejärel inkubeeriti blotte primaarsete antikehadega: anti-glutamaadi retseptor 1 (1:1000, Abcam, Inc., katalooginumber: ab183797), anti-NMDAR2B antikeha (1:1000, Abcam, Inc., katalooginumber: ab28373), anti-fosfo -CaMKII antikeha (1:1000, Abcam, Inc., katalooginumber: ab171095), antifosfo-CREB antikeha (1:1000, Abcam, Inc., katalooginumber: 32096) või anti-GAPDH (Santa Cruz Biotech, Inc., Katalooginr: sc-47724).

Järgmisena inkubeeriti membraane 1 tund sekundaarse antikehaga (HRP-konjugeeritud küülikuvastane Ig-G, 1:2000, Abcam, Inc. katalooginumber: ab205718). Seejärel pesti membraane kolm korda 15 minutit TBS-T abil, et eemaldada liigsed antikehad enne 1-minutilist inkubeerimist kemoluminestsentsreaktiividega (ECL, R&D Systems Inc., Minneapolis, MN, USA).

Lisaks tuvastati immunoreaktiivsed ribad elektroforeesi geelanalüüsi süsteemiga (GL2200 Pro, Crestream Inc. USA). Ribade intensiivsust analüüsiti Image J tarkvaraga. Sihtvalkude kogus normaliseeriti GAPDH ekspressiooniga [39].

Statistiline analüüs

Statistilise analüüsi jaoks kasutati tarkvara SPSS 18.{1}}. Andmed on esitatud keskmisena ± SEM Grupeeritud andmeid analüüsiti ühesuunalise dispersioonanalüüsi abil, millele järgnes Student-Newman-Keulsi test. Pväärtust < 0,05 peeti statistiliselt oluliseks nagu meie eelmine aruanne [35].

Tulemused

Süstoolne vererõhk (SBP), südame löögisagedus ja kehakaal noorte ja vanade SHR-i vahel

Yong SHR näitas madalamat SBP-d esimese kahe nädala jooksul võrreldes vana SHR-iga, seejärel suurenes kahe rühma vahel kolme hilisema nädala jooksul erinevuse puudumiseni (joonis 2A).

Vastupidi, südame löögisagedus ei erinenud kahe rühma vahel esimesel kahel nädalal, seejärel tõusis noorte SHR märgatavalt võrreldes vana SHR-iga kolme hilisema nädala jooksul (joonis 2B). Noor SHR näitas kogu vaatlusperioodi jooksul madalamat kehakaalu võrreldes vana SHR-iga (joonis 2C).

Morrise veelabürindi parameetrid noorte SHR-i ja vanade SHR-i vahel

Hipokampusest sõltuva õppimise ja mälu määramiseks viidi läbi Morrise veelabürindi katse. Vana SHR näitas pikemat põgenemise latentsust esimesel neljal päeval võrreldes noorte SHR-iga (joonis 3A).

Sihtkvadrandi ületamise ajad olid vanades SHR-is lühemad kui noores SHR-is (joonis 3B).

Protsent oftime sihtplatvormi kvadrandis oli lühem inold SHR võrreldes noorte SHR (joon. 3C). Tee pikkuse protsent kvadrandis oli ka lühem vanas SHRis võrreldes vana SHR-iga (joonis 3D). Need tulemused viitavad sellele, et vanal SHR-il on kognitiivse funktsiooni kahjustus.

Neuronite arv hipokampuses noorte SHR-i ja vanade SHR-i vahel

Neuronite arv hipokampuse erinevates piirkondades loendati Nissli värvimisega. Tulemused näitasid, et vana SHR-i CA1, CA2 ja DG piirkondades on väiksem arv neuroneid võrreldes noorte SHR-iga (joonis 4).

Õppimine ja mäluga seotud valguväljendused hipokampuses noorte SHR-i ja vanade SHR-i vahel

Western blot'i tulemused näitasid, et õppimise ja mäluga seotud valkude (GluR1, NMDAR 2B, fosforüülitud-CaMK II ja fosforüülitud-CREB) ekspressioon vanas SHR-i hipokampuses oli madalam kui noores SHRhippokampuses (joonis 5).

Gao-Zi-Yao mõju SBP-le, südame löögisagedusele ja kehakaalule vanas SHR-is

Analüüsiti Gao-Zi-Yao mõju SBP-le. Gao-Zi-Yao väikese annusega ravi vähendas märkimisväärselt SBP-d vanas SHR-is teisest nädalast neljanda nädalani võrreldes vana SHR-i kontrollrühmaga, Gao-Zi-Yao keskmised ja suured annused vähendasid märkimisväärselt SBP-d vanas SHR-is esimesest nädalast kuni neljas nädal võrreldes vana SHR-iga (joonis 6A). Need tulemused näitavad, et Gao-Zi-Yao avaldab antihüpertensiivset toimet vanal SHR-il.

Võrdlesime ka andmeid Gao-Zi-Yaooni südame löögisageduse ja kehakaalu mõju kohta. Meie andmed näitasid, et kogu vaatlusperioodi jooksul ei olnud südame löögisageduses ja kehakaalus olulist erinevust kõigis rühmades (joonis 6B, C).

Gao-Zi-Yao mõju NO, IL-1, IL-2 ja TNF-tasemetele vanades SHR-is

Ravi GAO-ZIYAO keskmiste ja suurte annustega suurendas seerumi NO taset võrreldes SHR kontrollrühma tasemetega (joonis 7A). Ravi kõigi GAO-ZI-YAO testitud annustega vähendas IL-1, IL-2 seerumitasemeid võrreldes SHR kontrollrühma tasemetega (joonis 7B, C); aga ainult GAO-ZI-YAO suur annus surus alla TNF-taseme seerumis (joonis 7D).

Need tulemused näitavad, et GAO-ZI-YAO võib reguleerida oksüdatiivset stressi ja põletikku.

For more information:1950477648nn@gmail.com