Suu- ja sõrataudi vaktsiini väljatöötamine ja väljakutsed pikaajalise immuunsuse tekitamisel: suundumused ja praegused väljavaated

Abstraktne:

Suu- ja sõrataud (FMD) on äärmiselt nakkav kariloomade viirushaigus, mille põhjustab suu- ja hiirehaiguse viiruse perekond: Aphtovirus, mis avaldab tõsist majanduslikku mõju nii üksikutele põllumeestele kui ka riigi majandusele. Paljud katsed arendada suu- ja sõrataudi vaktsiini ei ole steriilset immuunsust esile kutsunud. Vaktsiini valmistamise klassikalised meetodid olid tingitud mutatsioonide selektiivsest kuhjumisest antigeensete ja seondumiskohtade ümber. Agensi tagasipöördumine positiivse selektsiooni ja kvaasiliikide sülemi abil, selle meetodi kasutamine ei ole kohaldatav mitteendeemilistes piirkondades. Keemiline nõrgenemine, kasutades binaarset etüleenimiini (BEI), kaitses kapsiidi terviklikkust ja tekitas tugeva immuunsuse nakatava tüve vastu.

Suu- ja sõrataud on viirushaigus, mis mõjutab looma immuunsüsteemi. Suu- ja sõrataudiviirus võib tungida loomarakkudesse, hävitada rakumembraane ja siseorganeid, kahjustada loomade immuunfunktsiooni ja muuta ta vastuvõtlikuks teiste patogeenide poolt nakatumisele.

Samas võib suu- ja sõrataudi vaktsiini vaktsineerimine parandada loomade immuunsust ja muuta nad viiruse suhtes immuunseks. Pärast vaktsineerimise õnnestumist hakkab loom tootma antikehi ja uuesti suu- ja sõrataudiviirusega kokku puutudes suudab ta kiiresti tekitada immuunvastuse, mis hoiab ära viiruse edasise nakatumise ja haiguse tekitamise. ilmnema.

Seetõttu on loomade immuunsuse parandamine, eriti suu- ja sõrataudi vastu vaktsineerimine, oluline vahend suu- ja sõrataudi ennetamiseks. Samal ajal võivad teaduslikud söötmise korraldamine ja kanalisatsioon ning epideemia ennetusmeetmed aidata vähendada viiruse levikut ja suu- ja sõrataudi esinemist. Sellest vaatenurgast tuleb mõelda, kas inimkeha peab pöörama tähelepanu immuunsuse parandamisele. Cistanche võib oluliselt parandada inimese immuunsust. Cistanche'il on ka viiruse- ja vähivastane toime, mis võib tugevdada immuunsüsteemi võitlusvõimet ja parandada organismi immuunsust.

Click cistanche tubulosa eelised

Loomade vaktsineerimisel katsetati viiruse antigeene, mida on keemiliselt sünteesitud või ekspresseeritud viirustes, plasmiidides või taimedes. Loomade immuniseerimiseks on proovitud DNA vaktsiine, mis ekspresseerivad kas struktuurseid või mittestruktuurseid valguantigeene. Interleukiinide kasutamisel DNA vaktsiinide geneetilise adjuvandina on paljutõotav mõju. Kuigi steriilse immuunsuse esilekutsumise väljakutsed seisnevad FMDV mittestruktuursetes (NS) valkudes, mis vastutavad dendriitrakkude apoptoosi eest ja millel on negatiivne mõju lümfoproliferatiivsetele vastustele, mis põhjustavad mööduvat immunosupressiooni. Lisaks pärssis peremeesvalkude kaubitsemise hävitamine mittestruktuursete valkude poolt CD8 ja T-rakkude proliferatsiooni. See ülevaade püüdis käsitleda vaktsiinide väljatöötamise katsete mitmeid lähenemisviise ja steriilse immuunsuse loomise kitsaskohti.

Märksõnad:

Suu- ja sõrataudi vaktsiin, pikaajaline immuunsus, steriilne immuunsus.

Taust

Suu- ja sõrataud (FMD) on kariloomade äärmiselt nakkav viirusnakkus, mille põhjustavad suu- ja hiirehaiguse viirus, perekond: Aphthovirus ja perekond Picornaviridae; mis põhjustab tõsist majanduslikku kahju.1,2 Kodu- ja looduslikud kabiloomad on tugevalt mõjutatud suu- ja sõrataudist.3–5 5S protomeerid toodavad spontaanselt üksikud küpsed valgud; VP1, VP3 ja VP0, millest viis koonduvad 12S pentameeriks. Kui viiruse 75S kapsiid moodustub 12 pentameeri kokkupanemisel,6,7 on suu- ja sõrataudiviiruse (FMDV) täielikul 146S antigeenil teatatud väga sarnase antigeeni spetsiifilisusest viiruse kapsiidiga.8,9 -suuhaiguse viirusel on lai peremeeste hulk, suur geneetiline varieeruvus ja suured antigeensed erinevused ning sellel on seitse serotüüpi (A, O, C, Asia1, SAT1, SAT2 ja SAT3) ja rohkem kui 100 serosalatüüpi. Kvaasiliikide sülemi tõttu tekib igal aastal ka palju uusi variante. Seitsme serotüübi poolt esile kutsutud ristimmuunsus puudub. Sama serotüübi erinevate alatüüpide vahel on ka ainult osaline ristimmuunsus.11 Suu- ja sõrataudi varieeruvus ja polümorfism on muutnud suu- ja sõrataudi ennetamise ja tõrje väga keeruliseks.10 Erinevate serotüüpide P12A ja 3C valke ekspresseerivad adenoviiruse rekombinantsed suu- ja sõrataudid. näidanud kaitsvat toimet.12–14

Klassikalistel inaktiveeritud vaktsiinidel on palju puudusi, sealhulgas termiline ebastabiilsus, lühiajaline immuunsus, kõrge hind, metsikute tüvedega rekombinatsiooni oht ja patogeensuse pöördumine.11,15,16

Vaatamata 90-aastasele uurimistööle ei ole olemas tõhusat vaktsiini, mis tekitaks suu- ja sõrataudi vastu steriilse ja tugeva immuunsuse, kuid haigus jääb ensootiliseks suurtel aladel maailmas. Paljud katsed välja töötada suu- ja sõrataudi vastu vaktsiini ei ole suutnud tekitada steriilset immuunsust, millel on väike ristserotüüpide kaitse ja ebapiisav immuunsuse kestus.17 Klassikalised vaktsiini tootmise meetodid, nagu viiruse järjestikune kulgemine rakukultuuris,18 mittelubavates tingimustes. loomad ja nende loomulik peremees suutis viirust nõrgestada. See on tingitud mutatsioonide selektiivsest kuhjumisest antigeensete ja sidumissaitide ümber.19–21 Kuid toimeaine tagasipööramise kasutamine positiivse selektsiooni ja kvaasiliikide sülemi meetodil ei ole mitteendeemilistes piirkondades kasutamiseks kohaldatav.22 DNA ja valgutehnoloogiad on täiustanud uurimistööd, muutes integriini retseptoreid,23 kasutades sünteetilisi peptiide, mis võivad loomal esile kutsuda selge immuunvastuse.24 G-H ahela piirkonnale omased T-abistajaraku epitoobid on tugevad B-raku epitoobid, mis indutseerida humoraalset immuunsust.25 Rekombinantse interferooni (IFN ) ja veise interleukiin 18 (IL-18) kasutamine adjuvandina on parandanud laboriloomade pikaajalist immuunsust.26,27

Viimasel ajal on rekombinantsed elusvektori DNA vaktsiinid tugevad tsütotoksiliste T-lümfotsüütide (CTL) indutseerijad.28,29 Selle toime esilekutsumiseks suu- ja sõrataudi puhul on vaja sobivat adjuvanti.30 Selle toime ületamiseks on peremees-Ig superperekonna ja suu- ja sõrataudi epitoobi rekombineerimine parandanud humoraalset epitoobi. ja looma rakuline immuunvastus.

Kitsaskoha probleemi steriilse ja pikaajalise immuunsuse tekitamisel takistab peremeesvalkude kaubitsemise hävitamine mittestruktuursete (NS) valkude, eriti 3A poolt, nii et see ei kutsu esile klastri diferentseerumise 8 positiivset (CD8 pluss) T-raku vastust, mis on tingitud nõrk CTL ja viirus püsib loomas.31 Integriini retseptorid, mis vahendasid luuüdist pärinevat dendriitrakkude (DC) apoptoosi, takistasid peremeesorganismi kaasasündinud immuunsust.32 Guzman jt33 ja Joshi jt34 analüüsisid asendusreaktsioone CTL-i tapmise suhtes, näiteks proliferatsiooni. või IFN tootmine CD8 ekspresseerivate rakkude poolt, kuid paljud CD8 pluss ekspresseerivad lümfotsüüdid, mis ei ole CTL-id, toodavad IFN-i, kaasa arvatud looduslikud tapjarakud (NK) ja gamma delta (δ) T-rakkude alamhulgad. 35–37

Vastavalt Oh jt38 andmetele saab IFN-vastust uuesti stimuleerida vaktsineeritud veistel, kellel on nakatumise päeval ilmnenud kõrge viirust neutraliseerivate antikehade tiiter vereringes, mis on otseselt seotud vaktsiini poolt indutseeritud kaitsega IFN-iga. - ja neutraliseerivad antikehad. Lisaks on CD4 pluss T-rakud peamised õitsevad fenotüübid ja IFN-i tootvad rakud. Loodusliku infektsiooni korral esines aga lümfopeenia, mis kattus vireemia tipu ja seerumi IFN-vastusega, samas kui in vivo plasmotsüütide DC (pDC) arv ja in vitro pDC IFN-sekretsioon vähenesid lühiajaliselt 2 päeva jooksul pärast nakatumist.39 IFN-i tootmine monotsüütidest pärinevad DC-d (MoDC-d) ja nahast pärinevad DC-d (nahast pärinevad DC-d) inhibeeritakse sigade nakatumise ägedas faasis.40 Samuti indutseeris FMDV ebaküpsetes dendriitrakkudes apoptoosi.32 Viiruse immuunpatogeneesi ületamiseks. suurendades antikehade tootmist ja T-rakkude proliferatsiooni, saavutati CTL aktiivsuse ja IFN-i ekspressiooni kõrgem tase CD8 T-rakkudes sünteetiliste oligonukleotiidide abil limaskesta vaktsiini adjuvantidena.41 Käesoleva artikli põhieesmärk on vaadata läbi suu- ja sõrataudi vaktsiinide väljatöötamise suundumused ja väljakutsed steriilse ja pikaajalise immuunsuse tekitamisel.

Nõrgestatud ja inaktiveeritud vaktsiin

Nõrgestatud suu- ja sõrataudi elusvaktsiine on tehtud palju katseid tavapäraste meetoditega, nagu seeriapasseerimine mittelubavatel loomadel või rakukultuur. Nõrgendamine saavutati mittetundlike liikide, nagu hiired, küülikud ja embrüoneeritud munad, passaažiga, kuni see kaotas veiste virulentsuse. FMDV C-S8c1 järjestikused passaažid suure nakkuse korral rakukultuuris andsid tulemuseks defektse genoomi (C-S8p260), mis kaitses täielikult hiiri surmava nakatumise eest FMDV C-S8c1-ga ja oli sigadele pärast ühekordse annusega vaktsineerimist ohutu. C-S8p260.42. Samuti kutsus see sigadel esile kõrge neutraliseerivate antikehade ja aktiveeritud T-rakkude tiitrid.

Väga patogeense sigadele kohandatud O Taiwan 97 isolaadi seeriakontaktne ülekanne sigadel vähendab oluliselt virulentsust pärast 14. passaaži ja kaotas selle pärast 16. passaaži.43 Aminohapete muutused in vivo passaažide ajal olid väga vaikne asendus ja muutused VP1-s. (1D) olid ajutised. Suu- ja suu- ja sõrataudi vaktsiini väljatöötamine mittelubavatel peremeesorganismidel võib käivitada agensi kasutama muid raku retseptoreid peale Arg-GlyAsp (RGD), BHK 21 testi naastude test võib osutuda negatiivseks, kui viirus on terve.43 Aminohappe asendamine kõrvalahelad, mis paiknevad kapsiididevahelise alaühiku lähedal mõne teise aminohappe poolt, võivad luua uusi disulfiidsidemeid või elektrostaatilisi interaktsioone alaühiku liideste vahel ning on kas projitseeritud või initsieeritud olema nakatumiseks kulutatavad, suurendades suu- ja sõrataudi vaktsiinide vaktsiinitüvede kuumustaluvust44, kasutades praeguseid protseduure. mis sõltuvad vähem ideaalsest külmaketist. FMDV C-S8p260 tüved on segmenteeritud ja replikatsioonikompetentsed, mis võivad olla aluseks vaktsiinide nõrgenemisele kahe ohutusbarjääriga.45

Enamik uuringuid näitab, et loommudeli FMDV inaktiveerimine, kasutades aminohappe asendust 2C-s, ei olnud C-S8c1 puhul tuvastatav, kuid see esines vähesel määral meriseaga kohandatud FMDV-s.46 See aminohappe asendus muutus viiruspopulatsioonis kiiresti ülimuslikuks pärast seda, kui meriseaga kohanenud viiruse taastoomine sigadele. Need leiud näitavad, kuidas vähemusvariandi viiruste sissetoomine tehisperemeesorganismi võib algse peremeesliigi uuesti nakatamisel tõusta nende domineerimiseni.47 Lisaks sellele positiivsele selektsioonile ja kvaasiliikide sülemile võib vaktsiinitüvi muutuda patogeenseks tüvegaks. 22

Viiruse inaktiveerimine formaliini ja endonukleaasi abil ei võimalda viirust inaktiveerida ja vastavalt antigeenseid saite lagundada.48 Viiruse nõrgestamiseks on kasutatud ka binaarset etüleenimiini (BEI), säilitades samal ajal kapsiidi terviklikkuse.15,49 BEI- Inaktiveeritud suu- ja sõrataudi rakulisi retseptoreid, integriine, kasutatakse kinnitumiseks ja sisestamiseks kultiveeritud rakkudesse, interaktsiooni vahendab aminohappejääk, mis asub VP1 kapsiidivalgu GH ahelas. inaktiveeritud suu- ja sõrataudid sisestati koos markervalguga BHK-sse{10}}, mida vahendas integriini siduv motiiv RGD.50 Lisaks ei mõjuta BEI-inaktiveerimine GH ahela antigeensust.20,51 BEI inaktiveerimine, säilinud virioni arhitektuur ja retseptorid soodustasid viiruse sisestamist kultiveeritud rakkudesse, samuti in vivo, vahendab integriini äratundmine, 47, 52, 53, kuid kogu viiruse kvantifitseerimine näitab formaliini omaga võrreldes minimaalset tulemust. inaktiveerimine (65–71,6 protsenti), samas kui BEI inaktiveerimine on 44,2 protsenti .49

Sigade ja merisigade C-tüüpi suu- ja sõrataudi viiruste järjestikune passeerimine sigadel ja imetavatel hiirtel põhjustab aminohapete asendusi (I2483T 2C-s, Q443R 3A-s ja L1473P VP1-s). Asendatud aminohape (L1473P) integriini siduva RGD motiivi kõrval lõpetas viiruse kasvu erinevates rakuliinides ja muutis selle antigeensust.47 Teine Burmani jt uuring20 näitas, et ühe aminohappe muutus RGD-s pluss 1 ja RGD pluss 4 saiti inhibeerivad viiruse kinnitumist ja nakatumist, mida soodustavad v 6 või v 8, kuid viirus kasutab raku kinnitumiseks saiti v 3. Asendused metioniini või arginiiniga seondumiskohas on tõhusad v 6 inhibiitorid. Kaks leutsiinijääki täppides RGD pluss 1 ja RGD pluss 4 stabiliseerisid seostumise, mis sõltus struktuurist kohe C-otsast RGD-ga.20,54 EDTA-resistentne seondumine v 6 on iseloomulik tunnus ja stabiilne kompleks koos selle rakulise retseptoriga pidi tekitama märkimisväärse suu- ja sõrataudi nakkavuse.21

Alaniini asendamine leutsiinidega esimeses ja neljandas positsioonis RGD pluss 1 ja RGD pluss 4 kohas põhjustab viiruse seondumise ja viiruse v 6 või v 8 külge kinnitumise inhibeerimise. Siiski kasutab viirus rakku sisenemiseks v 3.20 rakukultuuriga kohandatud tüved kasutavad alternatiivse retseptorina heparaansulfaadi proteoglükaane (HSPG). Nende ektodomeenide ja integriinide ligandiga seondumise seisundi kinnitamine on viiruste tropismi oluline tegur.54

Heparaansulfaati siduvad viirused sisestasid DC tõhusalt, kuid ei esitanud lümfotsüütidele antigeeni, kutsudes esile FMDV-spetsiifilise IgG vastuse.55 Need tulemused näitavad, et FMDV DC-internaliseerimine on kõige tõhusam HS-i sidumisvõimega vaktsiiniviiruste puhul, kuid HS-i sidumine ei ole eksklusiivne nõue.

Peremeesorganismi humoraalse immuunvastuse avaldatud selektiivsel rõhul on oluline roll nii antigeensete FMDV variantide valikul kui ka stabiliseerimisel, mille tulemuseks on muutused raku tropismis. In vitro testid näitasid, et FMDV paralleelne passimine subneutraliseerivate homoloogsete seerumite juuresolekul põhjustas mutantide säilimise.56 Siiski inokuleeriti veistesse SGD järjestust raku retseptoriga seonduvas kohas sisaldava suu- ja sõrataudi A24 paljundamine. , kasvas viirus BHK-21 rakkudes halvasti ja järjestus püsis stabiilselt paljundamise ajal veise V 6 integriini (BHK3 V 6) ekspresseerivates BHK-21 rakkudes, samuti katseliselt nakatatud ja kontaktveistel. .56

Veiste kahest sõltumatust ülekandeahelast ilmnevad genoomilised muutused, mis on tingitud järjestikusest kulgemisest FMDV BHK{0}}rakuga kohandatud (heparaansulfaati siduva) tüvel. VP1 356 aminohappemutatsiooniga metsiktüüpi varianti valiti kiiresti in vivo viiruse replikatsiooniks.57

Deletsioonigeenid kodeerivad NS-valku, mis ei ole viiruse in vitro replikatsiooni jaoks otsustava tähtsusega, on alternatiivne meetod nõrgestatud elusvaktsiinide loomiseks. Kuid selleks, et see deletsiooniviirus oleks vaktsiinina kasulik, peab see siiski suutma vastuvõtlikes loomades paljuneda. Selle lähenemisviisi eelis võrreldes klassikalise nõrgestamismeetodiga, mis üldiselt toob mutatsioonid sisse piiratud arvus kohtades, seisneb selles, et virulentsuse taastumise oht on oluliselt vähenenud58 ja NS-valgud on tugevad T-raku epitoobid.

Mõju on näidatud geneetiliselt muundatud suu- ja sõrataudi vaktsiinitüvedel, mille antigeensetes kohtades on teatud aminohappeid asendatud ja millel on metsiku viirusega sarnased kasvuomadused, mis on tõestanud, et need kaitsevad täielikult looma nakatumise eest, kuid on võimelised paljunema in vitro.60

Erakorraline topeltõli adjuvandiga suu- ja sõrataudi vaktsiin näitas vireemia ja viiruse varjutuse vähenemist ning kliinilisi tunnuseid ei ilmnenud. Vaktsineeritud loomadel tuvastati järjekindlalt IL-6, IL-8 ja IL-12.61 Samas kui teised tsütokiinid IL-1, IL-2, TNF , TGF-i ja interferoone ei tuvastatud; see näitab, et vaktsiin ei kutsunud esile süsteemset põletikulist vastust ega T-lümfotsüütide aktiivsuse süsteemset tõusu, mis on seotud lühiajalise kaitsega suu- ja sõrataudi vastu.61

Inimese rekombinantne IL-2 on hiire mudeli suu- ja sõrataudi vaktsiinis võimas humoraalne immuunsüsteemi indutseerija.62 Vaktsineeritud loomad jäävad serokonversiooni positiivseks 7–8 kuuks ja tsütokiinide süsteemne tase (IL-6, IL{{5) }} ja IL-12) suurenesid pärast vaktsineerimist.63

Tühjad viiruskapsiidid

Tühjad viiruse kapsiidid, mida tuntakse ka viiruselaadsete osakestena (VLP), hõlmavad tervet immunogeensete saitide repertuaari, mis on leitud puutumatutel viirustel, kuid neil puuduvad nakatavad nukleiinhapped ja need hõlmavad viiruse sünteesiks, töötlemiseks ja kokkupanemiseks vajaliku viiruse genoomi kloonimist. struktuurvalgud tühjadeks viiruskapsiidideks (P1-2A ja 3Cpro kodeerivad geenid; joonis 1).64 Tühjad kapsiidid toodetakse looduslikult rakukultuuris in vitro, on antigeenselt sarnased ja immunogeensed.65

Tühja kapsiidvaktsiini kasutamine on paljulubav kandidaat, kuna sellega hoitakse kõrvale viiruse kasutamisest vaktsiini tootmisel ja säilitatakse epitoopide konformatsioon.45 Lisaks puudub viiruse taastumise ja rekombinatsiooni oht metsikute tüvedega. FMDV rekombinantsete tühjade kapsiidide transientseks geeniekspressiooniks (TGE) on kasutatud seerumivabu suspensioonis kasvavaid imetajarakke.66 Vaktsineeritud loomade tuvastamine nakatunud või taastumisjärgus olevate loomade seast on praegu olemasoleva tehnoloogia abil lihtne.67–69

Allüksuse vaktsiin

Subühikvaktsiin sisaldab viiruse antigeene, mis on kogutud kultuurisöötmes minimaalse koguse mitteviiruse antigeenide keemilise ekstraheerimise või bioekspressiooni teel.70 Uurijad on avastanud, et VP1 on üks suu- ja sõrataudi kapsiidi valkudest, mille pind oli 1970. aastatel märkimisväärne. , ja hiljutised edusammud struktuurses viroloogias.71

Geenitehnoloogiat on viimastel katsetel nõrgestatud vaktsiinide loomisel kasutatud genoomi osade muteerimiseks või VP1 valku kodeeriva piirkonna kaotamiseks. Kasutades rekombinantset DNA-d, konstrueeriti viirus, mille RGD retseptori sidumissait VP1-st eemaldas FMDV.72 7- kuni 10-päevastel hiirtel või sigadel ei suutnud see viirus rakkudele kleepuda ega kleepunud indutseerida infektsiooni.73

FMDV VP1 kapsiidivalgul ja VP1 karboksüterminaalsel piirkonnal on G-H silmus, mis on väga immunogeenne ja vastab B-raku epitoopidele. Keemiliselt sünteesitud peptiid, mis koosneb FMDV serotüübi O viiruse kattevalgu (VP1) piirkondadest (jäägid 141 kuni 158), on esile kutsunud kõrge neutraliseerivate antikehade taseme ja kaitsnud veiseid nakkusliku viiruse nahasisese inokuleerimise eest24, mis viitab G tähtsusele. -H-silmus humoraalse immuunvastuse esilekutsumisel. VP1 sisaldab ka hüpervarieeruvat piirkonda ja immunogeenset saiti; saidi ärakasutamine oleks laiaulatusliku immunogeensuse aluseks.74

IFN-i lisamine geneetilise adjuvandina põhjustas kliiniliste nähtude hilinenud ilmnemise ja vireemia tekke.75 Rekombinantne siidiussi bakuloviirus, mis kodeerib FMDV Asia 1 P1-2A ja 3C proteaase, suutis toota spetsiifilisi antikehi. vaktsineeritud loomadel ja kaitstud pärast virulentse homoloogse viirusega nakatamist ning kliinilised nähud leevenesid ja aeglustusid.64

Indutseeriti ühekordne annus defektset adenoviirust 5 (Ad5), mis sisaldas FMDV serotüübi A (Ad5A24) P1 ja 3C kodeerivat piirkonda, neutraliseerides antikehi ja kaitstes sigu homoloogse nakatamise eest.76 Siiski ei uuritud mõju rakulisele immuunsüsteemile. .

Nii vaktsiiniaviiruse kui ka bakuloviiruse poolt põhjustatud tühjade A-serotüübi kapsiidide ekspressiooni jaoks; sisaldades ratsionaalselt kavandatud mutatsioone, paranes eukarüootsete rakkude stabiilsus.77 Sellel vaktsiiniantigeeni tootmise meetodil on võrreldes praeguste tehnoloogiatega mitmeid eeliseid tootmiskulude, nakkusohu ja termotolerantse vaktsiini osas.45

Inimese adenoviiruse tüüp 5 vektor, mis ekspresseerib kapsiidvalku (P1-2A ja muteeritud viiruse 3C proteaas), annab BALB/c hiirtel esile kutsutud olulise humoraalse, rakulise ja limaskesta immuunsuse. Merisigade vaktsineerimine kutsus esile olulisi neutraliseerivaid antikehi ja FMDV-vastaseid immunoglobuliin A (IgA) antikehi, mis kaitsesid merisigadel 100 protsenti nakatumise eest.78

Rekombinantne koera adenoviirus tüüp 2 (CAV2), mis ekspresseerib kapsiidvalke (P1/3C) (joonis 1), suutis merisigadel vallandada tugeva humoraalse immuunvastuse. Kuid koerte adenoviiruse tüüp 2 (CAV2) ekspresseeriv VP1 valk ei kutsunud merisigadel ega hiirtel esile püsivat antikehavastust.79

Adenoviirus 5-ga vaktsineeritud sigadel koos tsütomegaloviiruse võimendajaga, mis kodeerib A24-2B (Ad5-CI-A24-2BC), tekkis maksimaalne neutraliseerivate antikehade reaktsioon 7–14 dpv võrra ja kutsus esile kõrgema IgM produktsiooni 7 dpi.14 Modifitseeritud tsütomegaloviiruse promootor suurendas vektori efektiivsust ja suurendas rakuinfektsiooni rakukultuuris, vaktsiini saanud rühm oli pärast nakatamist täielikult kaitstud.14

Hiirte intramuskulaarne inokuleerimine rekombinantidega, FMDV bakuloviiruse rekombinantse kapsiidvalguga, mis on kloonitud promootorina tsütomegaloviiruse vahetu varajase võimendajaga (CMV-IE), ja T-raku immunogeene kodeeriva piirkonnaga T-raku epitoopidega, indutseeriti tõhusalt neutraliseerivaid antikehi ja gamma-interferooni ( IFN- ).80 P1- 2A ja 3C kodeerivad piirkonnad Siidiussi nukkudes (Bombyx mori) ekspresseeritud suu- ja sõrataudi serotüüp A olid võimelised esile kutsuma spetsiifiliste antikehade kõrgeid tiitreid ja olid täielikult kaitstud virulentse homoloogse viirusega nakatumise eest.81

Mitme antigeense peptiidi süsteem on võrreldes suu- ja sõrataudi vaktsiiniantigeenide üksiku lineaarse peptiidiga väga immunogeenne.82 Sünteetilised dendrimerpeptiidid, mis sisaldavad kahte koopiat peamisest FMDV antigeensest B-raku antigeensest saidist [VP1 (140–158)], kovalentselt seotud On näidatud, et mittestruktuurse valgu 3A [3A (21–35)] heterotüüpilisele T-raku antigeensele saidile kaitseb sigu viirusliku nakatamise eest.83 Dendrimerpeptiid, mis reprodutseerib heterotüüpset ja väga konserveerunud FMDV 3A (21–35) T-raku epitoop on samuti parandanud neutraliseerivate antikehade ja IFN-vastuseid.84 70 protsendil B2T-ga vaktsineeritud sigadest täheldati täielikku kaitset – haiguse kliinilisi tunnuseid ei esinenud – viirusega nakatumisel 25. päeval pärast immuniseerimist.84

DNA vaktsiinid

Entsefalomüokardiidi viiruse (EMCV) sisemine ribosoomi sisenemissait (IRES) on kustutatud ja L-geen, mis osaleb rakkude sulgemises eIF46,85 proteolüüsi teel, on eemaldatud ning EMCV IRES, mis on näidanud ekspressioonitõhusust, on eemaldatud. sisestatud P1 järjestustest ülesvoolu.86 DNA vaktsiin, mis kodeerib P1-2A ja GM-CSF-i kui adjuvandist indutseeritud tugevat FMDV-spetsiifilist ja neutraliseerivat antikeha, samuti indorseerivaid tsütokiine IL-8 ja IFN tootmine sigadel.87

DNA vaktsiinid, mis põhinevad viiruse minigeenidel, mis vastavad VP1 (aminohappejärjestus 133–156) -3A (aminohappejärjestus 11–40) ja VP4 (20–34) kolmele peamisele B- ja T-raku FMDV epitoobile kaitsta hiiri spetsiifiliste antikehade puudumisel nakatamise ajal.88

FMDV DNA vaktsiini intranasaalne manustamine; Kitosaani kasutamine kohaletoimetamise vehiikulina ja IL{0}} molekulaarse adjuvandina on esile kutsunud limaskesta ja süsteemse immuunvastuse koos tugevdatud rakuvahendatud immuunsusega (CMI), mida näitab kõrgem T-rakkude proliferatsiooni tase, CTL-vastus, ja IFN- ekspressioon nii CD4 pluss kui CD8 pluss T-rakkudes. 73

Hiirtel, keda on vaktsineeritud geneetilise adjuvandina VP1 ja IL9 ekspresseeriva plasmiidiga ja käivitatud apoptoosivastane mehhanism, on tekkinud tugev humoraalne reaktsioon, kõrge IFN- ja perforiini tase CD8 pluss T-rakkudes, kuid mitte IL-ga{{6} } nendes T-rakkudes. IL-9 reguleeris üles Beclini geeni ekspressioonid ja takistas T-rakkude apoptoosi.89

Teine uuring näitas, et interleukiini-6 ja IFN-i ekspresseerival VP1 DNA vaktsiinil, mida kasutatakse molekulaarsete adjuvantidena, on paranenud antigeenispetsiifilised rakuvahendatud vastused. Samuti indutseeris see kõrge IgG2a/IgG1, IFN-, IL-4 tiitri ja dendriitrakkude küpsemise.90

Kasutades IL-2 geneetilise adjuvandina DNA vaktsiini kodeerimisel, peavad kaks FMDV VP1 epitoopi (aminohappejäägid 141–160 ja 200–213), mis sisaldavad mitut epitoopi, kutsuma sigadel esile nii T-rakkude proliferatsiooni kui ka neutraliseerivad antikehad suu- ja sõrataudi vastu. kasutades IL-2 geneetilise adjuvandina.91,92

FMDV-vastase DNA vaktsiini plasmiidiga, mis kodeerib P1-2A3C3D ja sigade TNF perekonda kuuluvat B-rakke aktiveerivat faktorit (BAFF) ekspresseeriva plasmiidiga immuniseeritud sead, soodustasid B-rakkude küpsemise aktivatsiooni ja immunoglobuliinide klassi vahetamist.93

Replica-põhine DNA vaktsiin koos regulaarse võimendamisega pakkus tõhusat vaktsiinistrateegiat FMDV vastu.94 Erinevate antigeensete sihtmärkide lisamine DNA vaktsiinidesse on suurepärane viis antigeenikokteili valmistamiseks ühes vaktsiinikoostises. Suu- ja sõrataudi viiruse (FMDV), pseudorabiesviiruse (PRV) ja sigade klassikalise katku viiruse (CSFV) antigeeni kodeeriva kolme plasmiidiga immuniseeritud hiired on andnud paljulubavaid tulemusi.95

Merisigade intramuskulaarne inokuleerimine FMDV-d ekspresseerivate DNA plasmiididega, mis sisaldasid nakatatud sigade IgG geeni signaaljärjestust, näitas neutraliseerivat antikehavastust ja põrnarakkude proliferatsioon suurenes pärast võimendamist, kuid loomi ei kaitstud viirusega nakatumise eest.96

DNA vaktsiin, mis kodeerib T-raku epitoopi ja B-raku epitoope VP1 saitidelt 135–167 ja sait 1 sisaldab 141–160 piirkonda (G-H silmus) ja FMDV O tüüpi VP1 karboksüülots, on kutsunud esile tugeva rakulise immuunvastuse nagu on täheldatud T-rakkude proliferatsiooni testi kasutades.97

Kapsiidivalku kodeeriva FMDV DNA vaktsiini, katioonset PLGA-d (polü(laktiid-ko-glükoliid) kui vehiiklit ja veise IL-6 kui geneetilist adjuvanti, intranasaalne manustamine on näidanud vaktsineeritud loomade limaskestade ja süsteemse immuunvastuse paranemist.98

Kapsiidivalku (P1-2A, 3C ja 3D) ekspresseeriv DNA vaktsiin, mis oli praimitud pGM-CSF-ga ja võimendatud inaktiveeritud FMDV antigeeniga, näitas vaktsineeritud sigadel märkimisväärset ristserotüüpide reaktiivsust. Viiruse neutraliseerimise ja ELISA testides teatati märkimisväärsest serotüüpidevahelisest reaktiivsusest A, C ja Asia1 vastu.99 Kuid DNA vaktsiin, mis ekspresseeris VP1 valku ja toodab FMDV 5ʹUTR-i suunatud antisenss-RNA-d, kutsus vaktsineeritutel esile spetsiifilise immuunvastuse. hiired.72

VP1-d ekspresseeriv DNA vaktsiin koos IL-15-ga (molekulaarne adjuvant) suurendas limaskesta sekreteeritavat IgA-d ja seerumi IgG-d ning rakuvahendatud immuunsust (CMI), mida tõestab antigeenispetsiifilise T-rakkude proliferatsiooni ja tsütotoksiliste T-lümfotsüütide kõrgem tase (CTL) vastus ja IFN- suurem ekspressioon nii CD4 pluss kui ka CD8 pluss T-rakkudes, teavitades põrna ja limaskesta saite.73

Rekombinantsed vaktsiinid valmistatakse peremees-Ig superperekonna rekombineerimisel ja viiruse epitoobid on parandanud vaktsineeritud loomade humoraalset ja rakulist immuunvastust. RNA vaktsiinid on tugevad IgG klassi lülitid, lisaks sellele on vaktsineeritud hiirtel täheldatud ka kõrget IgM tiitrit.100 Suu- ja suu- ja sõrataudi epitoope sisaldaval plasmiidsel DNA-l on hiirtel ideaalne kudede jaotus.101

Pikaajalise immuunsuse tekitamise väljakutsed

T-lümfotsüütide alampopulatsioonid, funktsionaalne pädevus ja arvukus on oluliselt muutunud pärast nakatumist FMDV erinevate serotüüpidega.102 BoCD4 pluss ja boCD8 pluss T-rakkudes on allareguleerimine kuni 48 tundi pärast nakatumist (pi). FMDV serotüübiga O täheldati aga boWC1 pluss T-rakkude allareguleerimist kuni 48 hj. Vaktsineeritud loomade lümfotsüüdid näitasid pärast FMDV-ga kokkupuudet boCD4 pluss, boCD8 pluss ja boWC1 pluss T-rakkudes olulist ülesreguleerimist. 102

Pärast loomulikku nakatumist suureneb oluliselt 3A-NS valgu ekspressioon lümfotsüütides, mis erinevad haiguse erinevatel kulgedel, mis põhjustab CD4 pluss ja CD8 pluss T-rakkude mööduvat immuunsupressiooni. 34

Peremeesvalguga kaubitsemise hävitamine NS-valkude, eriti 3A poolt, häirib täielikult, seega ei kutsu see esile CD8 pluss T-raku vastust31 Nõrga CTL-i tõttu püsis viirus loomas. Integriini retseptorid vahendavad luuüdist pärinevat alalisvoolu apoptoosi, takistades peremeesorganismi kaasasündinud immuunsust.32 Teine oluline nähtus, mis häirib peremeesorganismi immuunsust, on Lbpro, väga konserveerunud domeen, mis mängib olulist rolli peamiste signaalmolekulide ubikvitinatsiooni pärssimisel teatud tüüpi aktiveerimisel. I IFN-vastus nagu retinoehappega indutseeritav geen I (RIG-I), TANK-i siduv kinaas 1 (TBK1), TNF-i retseptoriga seotud faktor 6 (TRAF6) ja TRAF3.103 See vähendab IFN-i kohese ja varajase initsiatsiooni taset mRNA ja IFN-stimuleeritud geeniproduktid.102 Lisaks blokeerib 3Cpro Golgi-sisese transpordi, lagundades Golgi-siseseks transpordiks vajalikku valku.

Guzman jt33 ja Joshi jt34 analüüsisid asendusreaktsioone CTL-ide tapmiseks, nagu proliferatsioon või IFN tootmine CD8 ekspresseerivate rakkude poolt, millest teatati, kuid paljud CD8 pluss ekspresseerivad lümfotsüüdid, mis ei ole IFN-i tootvad CTL-id, sealhulgas NK-rakud ja δT alamhulgad. -rakud. 35–37,39,104

CTL-i aktiivsus, mida hinnati 10 päeva pärast Ad5-FMDV-3C-ga nakatamist, näitas CTL-i aktiivsuse olulist suurenemist 10 päeva pärast nakatamist, võrreldes võimendustasemega, kuid taastus algtasemele 17 päeva pärast. väljakutse.17 Kuid katsel hinnata CTL aktiivsust 4. päeval ei õnnestunud saada piisavalt rakke. Selle põhjuseks oli lümfopeenia ja FMDV põhjustatud immunopatoloogia. Lisaks suu- ja sõrataudi viiruse pikaajalise püsivuse vähenemisele on IFN-vastuse ja vaktsiinist põhjustatud kaitse vahel positiivne seos.38

Oh et al.38 järgi on CD4 pluss T-rakud peamised paljunevad fenotüübid ja IFN-i tootvad rakud.

Sõltumata FMDV serotüübist saavutas seerumi IFN-i haripunkti 2–3 päeva pärast nakatumist, lümfopeenia vastas maksimaalsele vireemiale ja seerumi IFN-vastusele ning tsirkuleerivate plasmotsüütide dendriitrakkude (pDC) arv ja in vitro pDC IFN-i produktsioon langes ajutiselt 48 tunni pärast. Sõltumata süstitud FMDV serotüübist või mõjutatud looma vanusest ei leitud kunagi lümfotsüütide ega pDC-de nakatumist.39

IFN-i teke monotsüütidest pärinevatest DC-dest (MoDC-dest) ja nahast pärinevatest DC-dest (naha DC-dest) on sigade nakatumise ägedas faasis alla surutud. See mõju ilmneb paralleelselt viiruse tiitrite suurenemisega veres, kuid need rakud ei ole produktiivselt nakatunud. Huvitav on see, et nende DC-de võime osakesi omastada ja antigeene töödelda ei muutu, mis näitab, et antigeenid ei mõjuta nende võimet osakesi omastada ja antigeene töödelda.35

Järeldus

Ülaltoodud kirjanduse ja uurimislünkade põhjal esitab komisjon järgmised soovitused. Uurida tuleks rakkude sisestamist, glükosüülimismustrit, antigeeni esitlust ja traditsiooniliste vaktsiinide positiivse selektsiooni (patogeensete tüvede arenemise) mehhanisme. Vaktsiiniga indutseeritud CD8 pluss T CMI tugevdab pikaealist immuunvastust ja ristkaitset. δ T-raku retseptoritel on roll immuunpatogeneesis, püsivuses ja CTL-i tootmises, mida tuleks põhjalikult uurida. Rekombinantne valk voolutsütomeetri ja ELISpot ELISA abil vaktsiiniosakeste sisestamise, antigeeni esitluse ja antigeeni esitlevate rakkude ristkõnede analüüsimiseks.

Tuleks välja töötada uued veebipõhised tööriistad, mis näitaksid kõrvalahelate mõju B- või T-raku epitoobile. Loommudelite nakkuse ning vaktsiinide väljatöötamise ja tõhususe testide kasutamist tuleks selgelt taotleda, kuna laboriloomadel on märkimisväärne erinevus integriini retseptorite vahel ning sigade ja mäletsejaliste puhul. Kogu genoomi hõlmavate CTL epitoopide arvutuslik hindamine, integreerides epitoopide oletustööriistu suure hulga viirusjärjestuste arvutamisse ja sellele järgnevat in vivo hindamist, on pikaajalise kaitse ja ristkaitsevõimega vaktsiinide tootmisel suur eelis.

Lühendid

3A, mittestruktuurne valk; Ad5, adenoviirus 5 vektor; 3Cpro, 3C proteaas (mittestruktuurivalk); BEI, binaarsed etüleenamiinid; BHK rakk, beebi hamstri neerurakk; CD4 pluss , klastri diferentseerumistegur neli positiivne; CD8 pluss , klastri diferentseerumistegur kaheksa positiivne; cDNA, komplementaarne DNA; CTL, tsütotoksilised T-rakud; DC, dendriitrakk; ELISA, ensüümseotud immunosorbentanalüüs; Suu- ja sõrataudi, suu- ja sõrataud; FMDV, suu- ja sõrataudiviirus; GM-CSF, granulotsüüdid ja monotsüüdid kolooniaid stimuleeriv faktor; IFN-, interferoon alfa; IFN-, gamma-interferoon; Ig, immunoglobuliin; IL, interleukiin; LTR, pikk terminali kordus; NK-rakud, looduslikud tapjarakud; NS-valk, mittestruktuurne valk; P1-2A, struktuurse valgu prekursori geen; P1-2A3C3D, viiruse struktuurvalgu prekursor P1–2A ja mittestruktuursed valgud 3C ja 3D; PBMC, perifeerse vere mononukleaarne; RT-PCR, pöördtranskriptsiooni polümeraasi ahelreaktsioon; SAT, Lõuna-Aafrika tüüp; TGE, transientne geeniekspressioon; TGF, kasvaja kasvufaktor; TNF, kasvaja nekroosi faktor; Th-rakud, T-abistajarakud; VP1, viiruse valk 1; δ T-rakud, Gamma delta T-rakud.

Andmete jagamise avaldus

Selles ülevaates kasutatud andmed on teisejärgulised ja sisalduvad artiklis.

Tunnustus

Olen väga tänulik Gondari ülikooli teadusuuringute ja kogukonnateenuste asepresidendi büroole materjalide ja rahalise toetuse eest. Samuti tänan Gondari ülikooli veterinaarmeditsiini ja loomateaduste kolledžit täiendava toetuse eest.

Rahastamine

Autor tänab Gondari ülikooli teadusuuringute ja kogukonnateenuste asepresidenti.

Avalikustamine

Autor kinnitab, et selles töös ei ole huvide konflikti.

Viited

1. Kitching P, Hammond J, Jeggo M jt. Ülemaailmne suu- ja sõrataudi kontroll – kas see on valik? Vaktsiin. 2007;25(30):5660–5664. doi:10.1016/j. vaktsiin.2006.10.052

2. Raza S, Siddique K, Rabbani M jt. Aftoviiruse serotüüpide nelja struktuurse valgu mikroobse patogeneesi in silico analüüs näitas olulisi B- ja T-raku epitoope. Mikroobide patoog. 2019;128 (august 2018): 254–262. doi:10.1016/j.micpath.2019.01.007

3. Arzt J, Belsham GJ. Suu- ja sõrataudi ülekandumine püsivalt nakatunud kandjaveistelt naiivsetele veistele orofarüngeaalse vedeliku ülekandumise kaudu. Loomaarstide maailm. 2018;3:318. doi:10.1128/ mSphere.{8}}

4. Arzt J, Pacheco JM, Stenfeldt C. Virulentse ja nõrgestatud suu- ja sõrataudi viiruse patogenees veistel. Loomaarstide maailm. 2017;14:89. doi:10,1186/s12985-017-0758-759

5. Sobhy NM, Bayoumi YH, Mor SK, El-Zahar HI, Goyal SM. Suu- ja sõrataudi puhangud Egiptuses: molekulaarne epidemioloogia, evolutsioon ja südame biomarkerite prognostiline tähtsus. Int J Vet Sci Med. 2018;6(1):22–30. doi:10.1016/j. just.2018.02.001

6. Senthilkumaran C, Yang M, Bittner H jt. Genoomi, antigeeni ja antikehade tuvastamine suu- ja sõrataudiviirusega nakatunud sigade suuvedelikest. Can J Vet Res. 2017;81:82–90.

7. Palinski RM, Bertram MR. Lõuna-Vietnamist pärit suu- ja sõrataudi viiruse serotüübi O alamliini Ind2001e esimene genoomijärjestus. Microbiol Resour Announc. 2019;8: e01424–18. doi:10.1128/mra.{10}}

8. Pulido MR, Sobrino F, Borrego B jt. Nõrgestatud suu- ja sõrataudiviiruse RNA, mis kannab deletsiooni 3' mittekodeerivas piirkonnas, võib sigadel esile kutsuda immuunsuse. J Virol. 2009;83(8):3475–85. doi:10.1128/JVI.{11}}

9. Saravanan P, Iqbal Z, Selvaraj DPR, Aparna M, Umapathi V. Keemiliste ekstraheerimismeetodite võrdlus 146S sisalduse määramiseks suu- ja sõrataudi õliadjuvandiga vaktsiinis. J Appl Microbiol. 2019;1(Rueckert 1985):1–9. doi:10.1111/jam.14465

10. Jamal SM, Belsham GJ. Suu- ja sõrataud: minevik, olevik ja tulevik. Vet Res. 2013;44(1):1–14. doi:10.1186/1297-9716- 44-116

11. Robinson L, Knight-Jones TJ, Charleston B jt. Ülemaailmne suu- ja sõrataudi uuringute värskendus ja lünkade analüüs: 7 - patogenees ja molekulaarbioloogia. Transbound Emerg Dis. 2016;63(1):63–71. doi:10.1111/tbed.12520

12. Sreenivasa BP, Mohapatra JK, Pauszek SJ jt. Inimese rekombinantne adenoviirus-5, mis ekspresseerib India suu- ja sõrataudiviiruse vaktsiinitüvede kapsiidvalke, kutsub veistel esile tõhusa antikehavastuse. Vet Microbiol. 2017;203:196–201. doi:10.1016/ j.vetmic.2017.03.019

13. Neilan JG, Schutta C, Barrera J jt. Adenoviiruse vektoriga suu- ja sõrataudi viiruse serotüüpide A subühiku vaktsiini efektiivsus veistel, kasutades otsekontakti ülekande mudelit. BMC Vet Res. 2018;14(1):1–9. doi:10,1186/s12917-018- 1582-1

14. Pena L, Pires M, Koster M jt. Suu- ja sõrataudiviiruse tühja kapsiidi subühiku antigeeni kohaletoimetamine mittestruktuurse valguga 2B parandab sigade kaitset. Vaktsiin. 2008;26 (45): 5689–5699. doi:10.1016/j.vaccine.2008.08.022

15. Barteling SJ, Cassim NI. Väga kiire (ja ohutu) suu- ja sõrataudi viiruse ja enteroviiruste inaktiveerimine binaarse etüleenimiini ja formaldehüüdi kombinatsiooniga. Dev Biol (Basel). 2004;119:449–455

16. Rweyemamu MM, Umehara O, Giorgi W, Medeiros R, Neto DL, Baltazar M. Formaldehüüdi ja binaarse etüleenimiini (BEI) mõju suu- ja sõrataudiviiruse kapsiidi terviklikkusele. Rev Sci Tech. 1989;8(3):747–764. doi:10.20506/rst.8.3.425

17. Patch JR, Kenney M, Pacheco JM, Grubman MJ, Golde WT. Tsütotoksiliste T-lümfotsüütide funktsiooni iseloomustus pärast suu- ja sõrataudi viirusnakkust ja vaktsineerimist. Viiruslik immunool. 2013;26(4):239–249. doi:10.1089/vim.2013.0011

18. Rodriguez-Calvo T, Ojosnegros S, Sanz-Ramos M, Garcia-Arriaza J, Escarmis C, Domingo E, Sevilla N. Uus vaktsiini disain, mis põhineb defektsetel genoomidel, mis ühendavad nõrgestatud ja inaktiveeritud vaktsiinide tunnuseid. PLoS One. 2010;5(4):1–11. doi:10.1371/ journal.pone.0010414

19. Núñez JI, Baranowski E, Molina N jt. Mittestruktuurse valgu 3A happeasendus võib vahendada suu- ja sõrataudi viiruse kohanemist merisigadega. J Virol. 2001. doi:10.1128/JVI.75.8.3977-3983.2001

20. Burman A, Clark S, Abrescia NGA jt. Suu- ja sõrataudi viiruse VP1 GH ahela spetsiifilisus v 6 integriinide suhtes. J Virol. 2006;80(19):9798–9810. doi:10.1128/JVI.{12}}

21. Dicara D, Burman A, Clark S jt. Suu- ja sõrataudiviirus moodustab väga stabiilse, EDTA-resistentse kompleksi oma peamise retseptoriga integriin v 6: mõju nakkavusele. J Virol. 2008;82(3):1537–1546. doi:10.1128/JVI.{12}}

22. Domingo E, Sheldon J, Perales C jt. Viiruse kvaasiliikide evolutsioon. Microbiol Mol Biol Rev. 2012;76(2):159–216. doi:10.1128/MMBR.{8}}

23. Mckenna TS, Lubroth J, Rieder E jt. Retseptorit siduva saidiga kustutatud suu- ja sõrataudi (FMD) viirus kaitseb veiseid suu- ja sõrataudi eest. J Virol. 1995;69(9):5787–5790. doi:10.1128/ jvi.69.9.5787-5790.1995

24. Dimarchi R, Brooke G, Gale C, Cracknell V, Doel T, Mowat N. Veiste kaitsmine suu- ja sõrataudi eest sünteetilise peptiidiga. Teadus. 1986; 232:639–641. doi:10.1126/teadus.3008333

25. Gómez N, Salinas J, Escribano JM jt. Kaitsev immuunvastus suu- ja sõrataudiviirusele VP1-ga, mida ekspresseeritakse transgeensetes taimedes, kaitsev immuunvastus suu- ja sõrataudiviirusele, mille VP1 ekspresseeritakse transgeensetes taimedes. J Virol. 1998;72:2–5.

For more information:1950477648nn@gmail.com