Eksperimentaalne uuring Cistanche koguglükosiidide (CTG) kaitsva toime kohta neerude isheemilise reperfusioonikahjustuse korral

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

ZHU Jun, ZHAO Xi

Abstraktne:Eesmärk luua hemorraagilise šoki ja elustamise roti mudel, et jälgida hemorraagilise šoki kaitsvat toimet.cistanche üldglükosiidid(CTG)neerude pealisheemiline-reperfusioonikahjustus. Meetodid SD-rotid randomiseeriti võltsoperatsiooni rühma, šoki- ja elustamisrühma (katserühm) ja CTG-rühma, millest igaühes oli 10 rotti. Pärast modelleerimist said CTG rühma rotid intraperitoneaalselt CTG-d 400 mg/kg. Katserühmas ja võltsoperatsiooni rühmas süstiti 3 ml füüsilist soolalahust. Neerufunktsiooni tuvastamiseks igas rühmas määrati Cr, BUN ja Cys – C tasemed. Neerurakkude apoptoosi kiiruse tuvastamiseks kasutati voolutsütomeetriat. ELISA-d kasutati XIAP ekspressiooni tuvastamiseks neerukoes. Tulemused Võrreldes katserühmaga olid Cr, BUN ja Cys – C tasemed ilmselt langenudCTGrühmas ( P ＜ {{0}},01) ja neerurakkude apoptoos vähenes ( P ＜ 0,01). CTG parandas oluliselt XIAP ekspressiooni (P<0.05). conclusion="">CTGannab kaitsva efektiisheemiline reperfusioonneerukahjustus rottidel, mis on tõenäoliselt seotud XIAP ekspressiooni soodustamisega.

【Võtmesõnad】 Neer; Isheemiline reperfusioonikahjustus; Cistanche koguglükosiidid; XIAP; Rakkude apoptoos

Cistanche üldglükosiidid

Isheemia-reperfusiooni (I/R) vigastuson tavaline neerukahjustuse patofüsioloogiline nähtus hemorraagilise šoki, raske trauma, neerusiirdamise ja neerukasvaja operatsiooni käigus. Uuringud on näidanud, et apoptoos on oluline lüli I/R vigastusest põhjustatud neerufunktsiooni kahjustuses [1]. X-kromosoomiga seotud apoptoosivalgu inhibiitor (XIAP) on seni leitud üks tugevamaid endogeenseid apoptoosi inhibiitoreid [2]. On vähe uuringuid XIAP apoptootilise toime kohta neerukoes pärast I / R vigastust.Cistanche üldglükosiidid(CTG) pärinevad fenüületanoolglükosiidiühendite loendist, millest ekstraheeritakseCistancheneil on erinevad bioloogilised funktsioonid. Selle neerude kaitse kohta pärast I/R vigastust on tehtud vähe uuringuid. Selles katses loodi hemorraagilise šoki elustamise roti mudel ja süsteemse I / R vigastuse mudel, et uurida CTG eelravi kaitsvat toimet neerudele I / R vigastuse eest ja uurida selle võimalikku mehhanismi.

Tistanche mõju: ennetadaIsheemia-reperfusiooni (I/R) vigastus

1 Materjal ja meetodid

1.1 Katsematerjalid

1.1.1 Laboriloomad 30 puhta kvaliteediga tervet isast SD-rotti, hankinud Shanghai Traditsioonilise Hiina Meditsiini Ülikooli Eksperimentaalkeskus, loomasertifikaadi number: SYXK (Shanghai) 2009-0069, kehakaal (320 ± 30) g.

1.1.2 Eksperimentaalne reaktiivCTG(ostetud ettevõttest Zhejiang Hangzhou Xinghui Tianli Pharmaceutical Co., Ltd., partii number: 20081516); naatriumpentobarbitaal (partii number: P3761), propiidiumjodiid (PI), Rhodamin123 (mõlemad ostetud (firmast Sigma, USA); roti XIAP määramiskomplekti ELISA komplekt (ostetud ettevõttest Shanghai Kemin Biotechnology Co., Ltd., partii number CSB-ELO26172MO) .

1.1.3 Laboratoorse instrumendi mikroplaadi lugeja (American Thermo Company); Mitmeparameetriline füsioloogiline detektor (ostetud firmalt NIHON KOHDEN Company, Jaapan); Voolutsütomeeter (ostetud firmast Becton-Dickinson Company, USA); 24 G troakaar (Shandong Jierui Medical Equipment Company).

1.2 Katsemeetodid

1.2.1 Loommudeli valmistamine SD rotte paastus 12 tundi enne katset ja tuimastati naatriumpentobarbitaali (50 mg/kg) intraperitoneaalse süstimisega. Rotid fikseeriti lamavasse asendisse, vasakusse alakõhusse tehti 3 cm sisselõige ja eraldati. Reiearterisse sisestatakse 24 G trokaar, ühendatakse mitme parameetriga füsioloogiline tester, hepariniseeritakse 20 ml süstal ja vererõhk langeb 40 mm Hg-ni. Vererõhk langeb 40 mm Hg-ni. Arvatakse, et šokk on alanud ja vererõhk püsib 90 minutit. See on (13 ± 3) ml ja seejärel juhitakse süstlas olev autoloogne veri aeglaselt tagasi. Vererõhu taastamiseks enam kui 90 protsendini baasväärtusest kulub umbes 30 minutit. Arvatakse, et elustamine õnnestus [3]. Tõmmake troakaari nõel välja, ligeerige reiearter ja õmble sisselõige. Pärast seda, kui rotid olid ärkvel, viidi nad vaatluseks tagasi puuri ning neil oli vaba juurdepääs toidule ja veele. 24 tundi pärast elustamist anesteseeriti rotid pentobarbitaalnaatriumiga (50 mg/kg) intraperitoneaalse süstimise ja laparotoomiaga ning alumisest õõnesveenist koguti 5 ml verd. Rotid tapeti kohe ning vasak ja parem neer võeti kasutamiseks välja.

1.2.2 Loomade rühmitamine ja manustamine 30 rotti jagati juhuslikult näidiskirurgia rühma, šokiga elustamise rühma (eksperimentaalne rühm) ja CTG rühma, igas rühmas oli 10 rotti.

Katserühmale süstiti intraperitoneaalselt 3 ml tavalist soolalahust 2 tundi enne verelaskmist. AastalCTGrühmas manustati CTG-d 2 tundi enne rottidele vere laskmist ja annus süstiti kõhuõõnde annuses 400 mg/kg. Näidisoperatsiooni rühmas tehti ainult tuimestus, laparotoomia ja reiearteri trokaari paigutamise ja õmbluse sisselõiked jms eraldamine, verelaskmist ja elustamist ei tehtud ning ülejäänud olid samad, mis katserühmas.

1.3 Testimisnäitajad ja -meetodid

1.3.1 Vere kreatiniini (Cr), uurea lämmastiku (BUN), tsüstatiin C Cr, BUN ja tsüstatiin C määramine määratakse meie haigla laboris. Tsüstatiin C on glomerulaarfiltratsiooni kiiruse muutuste endogeenne marker. Neerufunktsiooni kahjustuse korral väheneb glomerulaarfiltratsiooni kiirus ja tsüstatiin C kontsentratsioon veres võib tõusta rohkem kui 10 korda. Tsüstatiin C diagnostiline täpsus on oluliselt parem kui seerumi kreatiniini täpsus.

1.3.2 Rakkude apoptoosi kiiruse määramine Neerurakkude apoptoosi kiiruse tuvastamiseks kasutati voolutsütomeetriat. Võtke neer ja tükeldage see teraga, lisage veidi PBS-i ja viige see katseklaasi. Lisage seedimiseks 37-kraadises veevannis 0,3 protsenti trüpsiini ja inkubeerige 20 min. Kui katseklaasis olev aine muutub häguseks, lisage seedimise peatamiseks kaks korda PBS-i, filtreerige 300 võrgusilmaga nailonvõrguga, visake lisandid ära ja kasutage madala temperatuuriga tsentrifuugi. Tsentrifuugi kiirusel 1500 g/s 5 minutit, visake supernatant ära, reguleerige rakkude kontsentratsioon väärtusele 1 × 106 ~ 1,5 × 106 / ml, võtke 0,4 ml ülaltoodud rakususpensiooni ja lisage 10 ul / ml Rhodamin123 0 ．4 ml, inkubeerige 37-kraadine valguse eest kaitstud veevann, sulgege katseklaas, loputage 30 minuti pärast kaks korda PBS-iga, seejärel tsentrifuugige 1500 g/s 5 minutit, visake supernatant ära ja loputage uuesti samal viisil. Lisage PI 0,4 ml, värvige 15 minutit ja kontrollige normaalsete, nekrootiliste ja apoptootiliste rakkude protsenti neerus. Vastavalt nende kahe värvaine afiinsusele erinevat tüüpi rakkudes on teada, et ainult PI-värvi rakud on surnud rakud, ainult Rhodamin123 värvilised rakud on elusrakud ja mõlemad värvilised rakud on apoptootilised rakud.

1.3.3 Ensüümiga seotud immunoanalüüsi (ELISA) kasutati XI-AP ekspressiooni tuvastamiseks roti neerukudedes. Iga rühma neerud võeti ja värskeid neerukudesid töödeldi koelüsaadiga. Tsentrifuugige 1500 g/s madalatemperatuurilises tsentrifuugis 5 minutit. Võtke supernatant ja toimige vastavalt XI-AP ELISA komplekti juhistele. Testimise eest vastutab Shanghai Jiaoda Fenghe Technology Co., Ltd.

1.4 Statistiline töötlemine

Kõiki andmeid analüüsiti statistiliselt, kasutades tarkvara SPSS17.{1}} ja andmed väljendati kui keskmine ± standardhälve (x ± s) ja P<0.05 indicated="" that="" the="" difference="" was="" statistically="">

cistanche üldglükosiidid

2 tulemust

2.1 Neerufunktsiooni indeksid Cr, BUN, tsüstatiin C Cr, BUN, tsüstatiin C võrdlus katserühmas olid oluliselt kõrgemad kui näidisoperatsiooni rühmas (P<0.01), indicating="" that="" the="" rat="" kidney="" i/r="" model="" was="" prepared="">

Võrreldes katserühmaga on Cr, BUN ja tsüstatiin C väärtusedCTGrühmas vähenes oluliselt ja erinevus oli statistiliselt oluline (P<0.01). the="" results="" are="" shown="" in="" table="">

Tabel 1 Iga rühma rottide neerufunktsiooni indeksite Cr, BUN ja tsüstatiin C võrdlus (x ± s)

Märkus. Võrreldes võltsoperatsioonide rühmaga on P＜{{0}}.01; võrreldes katserühmaga, bP＜0,01

2.2 Neerurakkude apoptoosi kiirus ja XIAP ekspressioon neerukoes. Vaid mõned võltsoperatsioonirühma neerukoes olevad rakud läbivad apoptoosi.

Apoptoosi arv katserühmas suurenes oluliselt ja erinevus oli statistiliselt oluline võrreldes võltsoperatsiooni rühmaga (P<0.01); the="" number="" of="" apoptosis="" in="" the="" ctg="" group="" was="" decreased="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01)>

Näidisoperatsiooni rühmal oli ainult nõrk XIAP ekspressioon, samas kui katserühmas oli XIAP ekspressioon oluliselt suurenenud (P<0.01). compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap=""><0.05). the="" results="" are="" shown="" in="" table="">

Tabel 2 Roti neerurakkude apoptoosi kiiruse ja XIAP ekspressiooni võrdlus igas rühmas (x± s)

Märkus. Võrreldes võltsoperatsioonide rühmaga aP＜{{0}}. 01; Võrreldes katserühmaga, b P＜0. 05, cP<0.>

3 Arutelu

I/R neerukahjustuse mehhanism on väga keeruline. See on patoloogiline protsess, mis toimub mitmel viisil erinevate tegurite toimel, nagu kaltsiumioonide ülekoormus, lipiidide peroksüdatsiooni kahjustus, apoptoos ja nekroos, mille hulgas on endogeensed kaspaasid Kaspaasist sõltuv apoptoos on üks peamisi neerutuubulite epiteeli vorme. I/R-neerukahjustusest põhjustatud rakukahjustus [4]. Apoptoosivalgu (IAP) perekonna inhibiitor on seni ainus imetajarakkudes leitud kaspaasi inhibiitor, mis võib tõhusalt ära hoida apoptoosi teket. XIAP on IAP perekonna tugevaim kaspaasi inhibeeriv liige, mis võib pärssida mitmesuguste patoloogiliste stiimulite poolt põhjustatud raku apoptoosi ja avaldada kaitsvat toimet kahjustatud organitele [5].

Praegu kasutatakse neeru I/R vigastuse loommudelite loomiseks enamasti neeru ühe külje eemaldamist ja neerupea või neeruarteri teise külje kinnitamist [6], et simuleerida neerusiirdamise seisundit. Autor kasutas selles uuringus hemorraagilise šoki/elustamise mudelit, mis on lähemal kliinilise traumaatilise šoki korral tekkiva süsteemse isheemia-reperfusiooni patofüsioloogilisele protsessile. Selles katses suurenes SD-rottide vere BUN, Cr ja tsüstatiin. C kogus on oluliselt suurenenud ja neerufunktsioon on tõsiselt kahjustatud. See on ideaalne loommudel I/R-neerukahjustuse uurimiseks.

CTG on traditsioonilise hiina meditsiini oluline meditsiiniline komponentCistanche. Cistanche, mis on oma olemuselt soe, magus ja soolane, kuulub neerude ja jämesoole meridiaani ning sisaldus algselt Shennongi Materia Medicas. "Ben Jing," ütleb: "Säilitab viis tööd ja seitse vigastust, toidab keskmist, toidab viit siseorganit, tugevdab yini ning toidab essentsi ja qi'd." Samuti."Cistancheon minu kodumaal kasutatud kaks tuhat aastat. See on minevikus tugevust suurendavate segude poolest esikohal ja toitvate koostiste poolest alles ženšenni järel.Cistanchesaabparandada seksuaalfunktsiooni, reguleerida neuroendokriinseid toiminguid ja parandada keha immuunfunktsiooni. Antioksüdandid, soodustavad materjalide ainevahetust, kaitsevad isheemilist müokardi ja muid funktsioone. Peamise raviainenaCistancheCTG-l on palju funktsioone. Ajuuuringudisheemia-reperfusioonmudel

Uuringud on leidnud, etCTGvõib pärast isheemia-reperfusiooni vähendada ajukoes ergastavaid aminohappeid ja kaitsta SD-rottide ajukude [7]. CTG-l on antioksüdantne toime hiire kudedele ja teatav kaitsev toime ägeda aju hüpoksia korral hiirtel ja südamelihase kahjustuste korral hiirtel [8]. CTG võib märkimisväärselt parandada Parkinsoni tõve mudelhiirte neurokäitumist ja pärssida dopamiini neuronite arvu vähenemist substantia nigras [9]. Suurendades vabu radikaale püüdvate ensüümide aktiivsust, takistades lipiidide peroksüdatsiooni, pärssides amüloidpeptiidi ladestumist ajus ja pärssides ajurakkude apoptoosi, suurendas CTG märkimisväärselt -amüloidpeptiidist põhjustatud Alzheimeri tõve hiirte õppimisvõimet ja mälu [10]. See uuring näitas, et pärast CTG eeltöötlust vähenes SD rottide vere BUN, Cr ja tsüstatiin C sisaldus märkimisväärselt ning neerufunktsiooni kahjustus vähenes. CTG suurendas apoptoosi inhibeerivat valku XIAP I / R vigastuse neerukudedes ja blokeeris rakud. Apoptoosi esinemine mängib neeru kahjustamisel kaitsvat rolli.

viited

[1] Cassis P, Azzollini N, Solini S jt. Nii darbepoetiin alfa kui ka karbamüleeritud erütropoetiin hoiavad ära isheemiast/reperfusioonist tingitud neerutransplantaadi düsfunktsiooni rottidel ［J］． Transplantation, 2011, 92 (3): 271-279.

[2] West T, Stump M, Lodygensky G jt. Apoptoosivalgu X-seotud inhibiitori puudumine põhjustab vastsündinu ajukahjustuse järgselt suurenenud apoptoosi ja kudede kadu (J］). ASN Neuro, 2009, 1 (1). PII: e00004. doi:10. 10421AN20090005.

[3] Fu X, Tian H, Wang D jt. Mitme elundi vigastused ja rikked, mis on põhjustatud šokist ja reperfusioonist pärast laskehaavu［J］． J Trauma, 1996, 40 (3 lisa): S135-139.

[4] Padanilam BJ. Ägeda neerukahjustuse põhjustatud rakusurm: perspektiiv apoptoosi ja nekroosi panusele (J］). Am J Physiol Renal Physiol, 2003, 284 (4): F608-F627.

[5] Galbán S, Hwang C, Rumble JM jt. IAP-de tsütoprotektiivne toime, mis ilmnes väikese molekuli antagonisti poolt［J］． Biochem J, 2009, 417 (3): 765-771.

[6] Wu Jianguo, Zhang Dan, Wu Xinsheng jne. Ägeda isheemia-reperfusiooni neerukahjustuse mudeli loomine ja kogemus hiirtel [J]. Meditsiiniline teave: Handbook of Surgery, 2007, 20 (12): 1103-1105.

[7] Zhu Zheng. Cistanche glükosiidide mõju ergastavatele aminohapetele rottide ajukoes pärast ajuisheemiat ja reperfusiooni [J]. Anhui Medicine, 2010, 14 (12): 1393 -1394.

[8] Julia Y, Wang XW, Wubuli AS jt. Cistanche deserticola koguglükosiidide kaitsev toime hapnikupuudusele ［J］． Rep Chin Pharm, 2003, 20 (1): 73-76.

[9] Li Wenwei, Yang Ru, Cai Dongfang jt. Tistanche koguglükosiidide kaitsev toime dopamiinergilistele neuronitele MPTP Parkinsoni tõve mudelhiirte mustaines

[10] Liu Fengxia, Wang Xiaowen, Luo Lan jne. Tistanche glükosiidide kogusisalduse mõju ja mehhanism Alzheimeri tõve hiiremudeli õppimisele ja mälule, mis on indutseeritud amüloidpeptiidiga [J]. Chinese Pharmacology Bulletin, 2006, 22 (5): 595-599.