Eksperimentaalne uuring tsistanšglükosiidide eeltöötluse kaitsva toime kohta neeruisheemia-reperfusioonikahjustuse korral

lisateabe saamiseks:ali.ma@wecistanche.com

Zhu Jun, Zhao Ximin

(kirurgiaosakond, Baoshani piirkonna integreeritud traditsioonilise hiina ja lääne meditsiini haigla, Shanghai 201900)

【Abstraktne】Eesmärk Luua hemorraagilise šoki elustamismudel rottidel ja jälgida nende kaitsvat toimet.Cistanchesummaarsed glükosiidid (CTG) neeruisheemia-reperfusioonikahjustuse korral. Meetodid SD-rotid jagati juhuslikult 3 rühma: võltsoperatsiooni rühm, katserühm (šokiga elustamise rühm), CTG-ravi rühm, igas rühmas 10 rotti. Eksperimentaalrühm ja CTG-ravirühm kehtestasid neeruisheemia-reperfusiooni mudelid. Ravirühma rottidele süstiti intraperitoneaalselt CTG-d 400 mg/kg ning katserühmale ja võltsoperatsiooni rühmale süstiti soolalahust. Neerufunktsiooni määramiseks määrati iga rühma vere müokardi sisaldus, uurea lämmastiku sisaldus ja tsüstatiin C, neerurakkude apoptoosi määra määramiseks kasutati voolutsütomeetria analüüsi; X-kromosoomi sideme tuvastamiseks rottidel kasutati ensüümiga seotud immunoanalüüsi (ELISA).neerudkude X-seotud apoptoosivalgu (XIAP) inhibiitori ekspressioon. Tulemused Võrreldes CTG rühma katserühmaga, vähenesid vere Cr, BUN ja tsüstatiin C oluliselt (P<0.01), renal="" cell="" apoptosis="" was="" reduced=""><0.05), ctg="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap=""><0.05). conclusion="" the="" total="" glycosides="" of="">cistancheneil on kaitsev toime neeruisheemia-reperfusioonikahjustusele rottidel, mis võib olla seotud XIAP ekspressiooni soodustamisega.

[Märksõnad] neerud; isheemia-reperfusioonikahjustus; tsistanche glükosiidid; apoptoosivalgu kromosoomiga seotud inhibiitor; apoptoos; rott

[Hiina raamatukogu klassifikatsiooninumber] R692 [Dokumendi märgistuskood] A [Artikli number] 1008 -0392 (2015) 02-0037 -04

Klõpsake Cistanche EXTRACT POWDER neerude jaoks

Isheemia-reperfusioonivigastus (I/R) on tavaline patofüsioloogiline nähtus neerukahjustuse korral hemorraagilise šoki, raske trauma,neerudsiirdamine janeerudkasvaja operatsioon. Uuringud on näidanud, et apoptoos on oluline osa I/R vigastusest põhjustatud neerufunktsiooni kahjustuses (1). X-seotud apoptoosivalgu inhibiitor (XIAP) on üks tugevamaid seni leitud endogeenseid apoptoosi inhibiitoreid (2). On vähe uuringuid XIAP apoptootilise toime kohta neerukoes pärast I / R vigastust.Cistancheüldglükosiidid (CTG) on fenüületanoidne glükosiidide koguühend, millest ekstraheeritakseCistanche, millel on mitmesugused bioloogilised funktsioonid. Selle neerude kaitse kohta pärast I/R vigastust on tehtud vähe uuringuid. . Selle uuringuga loodi rottide hemorraagilise šoki taaselustamise mudel ja süsteemse I/R vigastuse mudel, et uurida liha songa koguglükosiidide kaitsvat toimet.neerudI/R vigastusest ja uurige selle võimalikku mehhanismi.

1 Materjalid ja meetodid

1.1 Loomad ja rühmitamine

Shanghai Traditsioonilise Hiina Meditsiini Ülikooli Eksperimentaalkeskuses on 30 puhast ja tervet isasrotti, kes kaaluvad (320 ± 30) g. Juhuslikult jagatud 3 rühma: võltsoperatsiooni rühm, katserühm (šokiga elustamise rühm), CTG rühm, igas 10 rotti.

1.2 Peamised reaktiivid ja instrumendid

Liimjas riisi glükosiidid (partii number: 20081516) osteti ettevõttelt Zhejiang Hangzhou Xinghui Tianli Pharmaceutical Co., Ltd.; naatriumpentobarbitaal, Hoechst 33258 ja propionüüljodiid osteti firmalt Sigma, USA; hiire X-kromosoomiga seotud apoptoosi inhibiitor Protein Assay Kit (XIAP) ja ELISA komplekt osteti ettevõttelt Shanghai Kemin Biotechnology Co., Ltd.; mikroplaadilugeja osteti firmalt Thermo Company, USA; mitme parameetriga füsioloogiline detektor osteti firmalt Nihon Kohden Company, Jaapan; voolutsütomeeter BDFACSAria osteti firmalt Becton, USA – Dickinson Company; 24G troakaar osteti ettevõttelt Shandong Jierui Medical Devices Company.

1.3 Eksperimentaalne meetod

1.3.1 Loommudeli valmistamine SD rotte paastus 12 tundi enne katset ja tuimastati naatriumpentobarbitaali (50 mg/kg) intraperitoneaalse süstimisega.

Rott fikseeriti lamavasse asendisse, vasakusse alakõhusse tehti 3 cm sisselõige, eraldati reiearter, sisestati 24G troakaar ja ühendati mitme parameetriga füsioloogiline detektor. Roti keskmiseks vererõhuks mõõdeti (113 ± 15) mmHg, 20 ml süstal hepariini. Vererõhku langetati keemilise ühendusega kolmesuunalise seadmega 40 mmHg (l mmHg=0. 133 kPa). Šokk loeti alatuks ja vererõhku hoiti 90 minutit. Vere väljalaske maht oli (13 ± 3) ml ja seejärel autoloogne veri süstlasse Aeglane reinfusioon võtab aega umbes 30 minutit ja vererõhk taastub enam kui 90 protsendini põhiväärtusest ning elustamine loetakse õnnestunuks (3) . Troakaar tõmmati välja, reiearter ligeeriti ja sisselõige õmmeldi. Pärast seda, kui rotid olid ärkvel, viidi nad vaatluseks tagasi puuri ning nad võisid vabalt süüa ja juua. 24 tundi pärast elustamist kasutati anesteesiaks naatriumpentobarbitaali (50 mg/kg) intraperitoneaalset süstimist, laparotoomiat, alumisest õõnesveenist koguti 5 ml verd, rotid surmati kohe ning vasak ja parem neer eemaldati. kasutada.

1.3.2 Ravimeetodid CTG-ga ravirühmale manustati CTG-d 2 tundi enne rottide verelaskmist ja süstiti kõhuõõnde annuses 400 mg/kg. Katserühmale süstiti intraperitoneaalselt 3 ml tavalist soolalahust 2 tundi enne verelaskmist; fiktiivse operatsiooni grupis tehti ainult tuimestus, laparotoomia ja reiearteri eraldamine, trokaari paigaldamine ja sisselõike õmblus, kuid verejooksu ega elustamist ei tehtud. Ülejäänud olid samad, mis katserühm.

1. 4 avastamisnäitajaid ja -meetodeid

1.4.1 Vere BUN-, Cr- ja tsüstatiin C sisalduse määramine Tsüstatiin C on glomerulaarfiltratsiooni kiiruse muutuste endogeenne marker. Neerufunktsiooni kahjustuse korral glomerulaarfiltratsiooni kiirus väheneb, tsüstatiin C kontsentratsioon veres võib tõusta 10 korda ning tsüstatiin C diagnostiline täpsus on oluliselt parem kui seerumi lihasmürgistuse oma. Vere BUN, Cr ja Cystatin C sisaldus esitati meie haigla laborisse määramiseks.

1.4.2 Rakkude apoptoosi kiiruse määramine Neerurakkude apoptoosi kiiruse tuvastamiseks kasutati voolutsütomeetriat. Võtke neer ja tükeldage see teraga, lisage veidi PBS-i ja viige see katseklaasi. Lisage seedimiseks 37 P veevannis 0,3 protsenti trüpsiini, inkubeerige 20 min, kui katseklaasi sisu muutub häguseks, lisage seedimise peatamiseks 2 korda PBS-i, filtreerige 300 silmaga nailonvõrk, visake lisandid ära ja tsentrifuugige madala temperatuuriga tsentrifuugis. Tsentrifuugi raadius 8 cm, 12, 000 p/min, tsentrifuugige 5 minutit, supernatant visake ära, reguleerige rakkude kontsentratsioon väärtusele 1 ~ 1,5 x 106/ml, võtke 0,4 ml ülaltoodud rakususpensiooni ja lisage 1,2 ml Hoechst 33258 (10 pil/ml), tume 37 t: inkubeerida veevannis, sulgeda katseklaas, loputada 5 minuti pärast PBS-ga, tsentrifuugi raadius 8 cm, 12 000 p/min, tsentrifuugida 5 min , visake supernatant ära, loputage uuesti samal viisil. Lisage 0,4 ml PI-d, värvituna 5 minutit, ja tuvastage normaalsete, nekrootiliste ja apoptootiliste rakkude protsent neerus. Erinevat tüüpi rakkude kahe värvaine afiinsuse järgi on teada, et ainult PI-värvi rakud on surnud rakud, ainult Hoechst 33258 värvilised rakud on apoptootilised rakud ja kumbki neist ei ole värvilised normaalsed elusrakud.

1.4.3 Ensüümiga seotud immunoanalüüs (ELISA) XIAP ekspressiooni tuvastamiseks roti neerukudedes Võtke iga neerurühm ja töödelge värskeid neerukudesid koelüsaadiga. Tsentrifuugige madala temperatuuriga tsentrifuugis kiirusel 12 000 pööret minutis 5 minutit. Võtke supernatant ja toimige vastavalt XIAP ELISA komplekti komplekti juhistele. Testimise eest vastutab Shanghai Jiaotongi ülikool Fenghe Technology Co., Ltd.

1.5 Statistiline töötlemine

Iga rühma katseandmeid esindavad jüaani pinnase s ja SPSS 17. Statistiliseks analüüsiks kasutatakse 0 tarkvara. P<0.05 indicates="" that="" the="" difference="" is="" statistically="">

Cistanche võib parandada seksuaalfunktsiooni

2 tulemust

Neerufunktsiooni indeksite Cr, BUN ja tsüstatiin C väärtused olid statistiliselt olulised (F<0.01); the="" experimental="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" the="" sham="" operation="" group="" (p=""><0.01), indicating="" that="" the="" rat="" the="" kidney="" i/r="" model="" was="" successfully="" prepared;="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" values="" of="" cr,="" bun="" and="" cystatin="" c="" in="" the="" ctg="" group="" were="" significantly="" reduced=""><0.01). renal="" cell="" apoptosis="" rate:="" in="" the="" sham-operated="" group,="" only="" a="" few="" cells="" in="" the="" kidney="" tissue="" experienced="" apoptosis.="" apoptotic="" cells="" accounted="" for="" 0.42%="" ±="" 0.08%,="" and="" the="" experimental="" group="" had="" a="" significant="" increase="" in="" apoptosis,="" accounting="" for="" 18.="" 22%="" ±="" 5.="" 32%="" (p=""><0.01). compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" showed="" apoptosis="" the="" number="" decreased="" to="" 12.71%="" ±="" 3.81%="">< 0.01).="" the="" effect="" of="" ctg="" on="" the="" expression="" of="" xiap="" in="" i/r="" injured="" renal="" tissue:="" the="" sham="" operation="" group="" only="" had="" weak="" xiap="" expression,="" while="" the="" experimental="" group="" xiap="" expression="" increased="" significantly,="">< 0.01).="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap="" (f=""><0.05), see="" table="">

Tabel 1 Neerufunktsiooni indeksid iga rühma rottide Cr, BUN ja tsüstatiin-C väärtused Tab. 1 Neerufunktsiooni indeksid kolmes rühmas

Võrreldes võltsoperatsiooni rühmaga, *P<0.01; compared="" with="" the="" experimental="" group,=""><0.05><>

Isheemia-reperfusiooni neerukahjustuse mehhanism on väga keeruline. See on patoloogiline protsess, mis toimub mitmel viisil erinevate tegurite toimel, nagu kaltsiumioonide ülekoormus, lipiidide peroksüdatsioonikahjustused, raku apoptoos ja nekroos, mille hulgas on kaspaasist sõltuv raku apoptoos üks peamisi neerutuubulite epiteelirakkude vorme. I/R neerukahjustusest põhjustatud kahjustus (4). Apoptoosivalgu (IAP) perekonna inhibiitor on seni ainus imetajarakkudes leitud endogeenne kaspaasi inhibiitor, mis võib tõhusalt ära hoida raku apoptoosi. XIAP on liige, millel on IAP perekonna kõige tugevam inhibeeriv toime kaspaasile. See võib pärssida mitmesuguste patoloogiliste stiimulite põhjustatud raku apoptoosi ja avaldada kaitsvat toimet kahjustatud elunditele (5).

Praegu on enamik meetoditest neeru I/R vigastuse loommudelite loomiseks ühe neeru eemaldamine ja neerusiirdamise olukorra simuleerimiseks teise külje kinnitamine neerupea või neeruarteri ⑹. Selles uuringus kasutatakse hemorraagilise šoki/elustamise mudelit, mis on lähemal kliinilise traumaatilise šoki korral tekkiva süsteemse isheemia-reperfusiooni patofüsioloogilisele protsessile. Selles katses SD-rottide vere BUN-, Cr- ja tsüstatiin C-tasemed. Märkimisväärne paranemine, tõsiselt kahjustatud neerufunktsioon on ideaalne loommudel I/R-neerukahjustuse uurimiseks.

CTG on traditsioonilise hiina meditsiini lihatüdruku pasta oluline raviaine. Baklažaanipasta, mis on olemuselt soe, magus ja soolane, naaseb neerude ja jämesoole meridiaani ning sisaldub algselt Shennongi Materia Medicas. "Ben Sutra": Peamised viis tööd ja seitse vigastust, toidavad keskmist, toidavad viit siseorganit, tugevdavad yini, toidavad essentsi ja qi'd;Cistancheon minu kodumaal kasutatud kaks tuhat aastat. See on minevikus tugevust suurendavate segude osas nr 1 ja toitvate segude poolest ženšenni järel. Uuringud on näidanud, etCistanchesaabparandada seksuaalset funktsiooni, reguleerida neuroendokriinsetjaparandada immuunfunktsiooni. , Antioksüdandid, soodustab materjalide ainevahetust, kaitseb isheemilist müokardi ja muid funktsioone. Lihaperekonna püree peamise raviainena on CTG-l palju funktsioone. Ajuisheemia-reperfusioonimudelite uuringud näitasid, et CTG võib pärast isheemia-reperfusiooni vähendada ajukoes ergastavaid aminohappeid ja kaitsta SD-rottide ajukude (7). CTG-l onantioksüdantne toimehiire kudedele ja sellel on teatav kaitsev toime ägeda aju hüpoksia korral hiirtel ja südamelihase kahjustustele hiirtel (9). CTG võib oluliselt parandada närvisüsteemi käitumistParkinsoni tõbimodelleerida hiiri ja pärssida dopamiini neuronite arvu vähenemist mustas aines (9). Suurendades vabu radikaale püüdvate ensüümide aktiivsust, takistades lipiidide peroksüdatsiooni, pärssides B-amüloidpeptiidi ladestumist ajus ja pärssides ajurakkude apoptoosi, parandab CTG oluliseltAlzheimeri tõbihiired, mis on põhjustatud B-amüloidpeptiidist Mäluvõime w. See uuring näitas, et pärast CTG eeltöötlust vähenes rottide vere BUN, Cr ja tsüstatiin C sisaldus märkimisväärselt ning neerukahjustus vähenes. CTG suurendas apoptoosi inhibeerivat valku XIAP I / R vigastatud neerukoes ja blokeeris raku apoptoosi. Surma saabumisel on neerukahjustusele kaitsev toime.