Eksperimentaalne uuring Cistanche Deserticola spordiväsimuse vastaste mehhanismide kohta
Mar 09, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com
YANG Hong-Xin, YANG Yong², YAN Xiao-hong'
Abstraktne:Eesmärk Uurida mõjucistanche deserticolamaksa laktaatdehüdrogenaasi (LDH) isoensüümi, glükogeeni ja lämmastikoksiidi süntaasi 3 (NOS3) kohta hiirtel, kes koormavad ujumist ja uurivad selle olulisi molekulaarseid mehhanisme.spordivastane väsimus. Meetod Hiired jaotati normaalseks kontrollrühmaks, sportlikuks kontrollrühmaks jacistanche deserticolakatserühm. Igale normaalse kontrollrühma ja spordi kontrollrühma hiirele anti päevas 0,2 ml soolalahust. Igale cistanche deserticola katserühma hiirele anti veekeetmistcistanche deserticola0.2 ml (3 g/kg päevas. Manustamisaeg oli 15 päeva. Ujumine 90 minutit viidi läbi spordi kontrollrühma hiirtel jacistanche deserticola1 tund pärast viimast manustamist. Hiirte maksad eemaldati pärast 10-tunnist ujumist. Üks osa maksast fikseeriti parafiinilõikude valmistamiseks neutraalses formaliini vedelikus ja teisi kasutati LDH aktiivsuse mõõtmiseks. Maksa struktuuri jälgiti HE värvimisega ja maksa glükogeeni mõõdeti glükogeeni värvimisega. NOS3 uuriti SP immunohistokeemilise meetodiga. Rei Spordi kontrollrühma maksa struktuur oli tõsiselt vigastatud, LDH4 ja LDH5 isoensüümid olid kõrgemad, maksa glükogeen kehv, NOS3 vähenes võrreldes normaalse kontrollrühmaga (P<0.05). the="" liver="" structure="" of="" the="" cistanche="" deserticola="" experimental="" group="" was="" good,="" ldh5="" isoenzyme="" was="" low,="" the="" glycogen="" was="" rich="" and="" expression="" of="" nos3="" was="" upregulated="" compared="" with="" the="" sport="" control="" group=""><0.05). conclusion:="">Cistanche deserticolavõib vähendada LDH5 taset, kaitsta hiirte ujumiskoormust ja kiirendada glükogeeni akumuleerumist, suurendades NOS3 ekspressiooni, et kaitsta maksa ja parandada füüsilise võime taastumist.
Märksõnad; cistanche deserticola;maksa glükogeen; lämmastikoksiidi süntaas 3; hiired
Cistanche, tuntud ka kui Dayun, on Lydanaceae perekonna kaheaastane parasiittaim. Sellel on kuivad lihavad varred koos soomustega. Seda toodetakse peamiselt liivastel muldadel ja poolliivastel rohumaadel Sise-Mongoolias, Gansus, Xinjiangis ja Qinghais.CistancheSise-Mongoolias on tootmispiirkondade seas parim kvaliteet.Cistancheon oma olemuselt magus, soolane ja soe. See siseneb neerudesse ja jämesoole meridiaani. Selle põhiülesanne on turgutada neere ja tugevdada yangi, toita essentsi ja verd ning toita soolestikku. Seda kasutatakse sageli impotentsuse, viljatuse, vöö- ja põlveliigese nõrkuse, lihaste ja luude nõrkuse, soolte kuivuse ja kõhukinnisuse raviks. . Selle uuringu eesmärk on jälgida selle mõjuCistanchemaksa laktaatdehüdrogenaasi (LDH), maksa glükogeeni ja lämmastikoksiidi süntaasi 3 (NOS3) kohta kaaluga ujumishiirtel läbi hiirte kandevõime ujumise testi ja uurida selle kaitsemehhanismi maksas. Esitage teoreetiline alus põhjalik uurimine, arendus ja kasutamineCistanchespordi tervisetoidus.
1 Katsematerjal
1.1 Loomad 30 isast Kunmingi rotti, puhas hinne, kaal (20±0,5) g, tarninud Sise-Mongoolia ülikooli loomakeskus.
1.2 Meditsiin Cistanche (Cistanche deserticolaYC Ma) toodetakse Sise-Mongoolias Ejina Banneris ja see on tuvastatud. Originaalravimaterjali järgi: vesi=100g: 400mL, leotada 30 min, kuumutada ja keeta, seejärel keeda soojal tulel 30 min, valada ravimlahus välja ja uuesti kaunistada vahekorras 100g: 200 ml. Segage kaks keetmist kokku, filtreerige need kahe kihiga marli ja seejärel kontsentreerige need 1 g originaalravimite ekvivalendini 1 milliliitri esialgse keetmise kohta ja hoidke seda külmkapis 4 kraadi juures. 1.3 Reaktiivid ja instrumendid NOS3 polüklonaalne antikeha osteti ettevõttelt Wuhan Boster Bioengineering Co., Ltd. SP komplekt osteti ettevõttelt Fujian Maixin Reagent Company. Laktaatdehüdrogenaasi isoensüümi komplekt osteti ettevõttelt Inner Mongolia Tongri Reagent Co., Ltd (täisomanduses Nissanile). Nanjing JD{12}} värvilise kujutise analüsaator. Ameerika UVP-geeli kujutise analüüsisüsteem.
Väsimusevastanecistanche toidulisand
2. Eksperimentaalsed meetodid
2.1 Rühmitamine ja manustamine Kunmingi hiired jaotati juhuslikult normaalseks kontrollrühmaks, treeningu kontrollrühmaks jaCistanchekatserühm, igaühes 10 hiirt. Normaalsele kontrollrühmale ja treeningu kontrollrühmale anti tavalist soolalahust üks kord päevas, 0,2 ml/kord; aCistanchekatserühmale anti tsistanši keetmist (võtke 3 ml algset veekeetmist ja lisage vett 10 ml-ni), üks kord päevas, 0 ．2 ml/kord, päevane annus 3 g/kg, pidev manustamine 15 päeva jooksul. Tund pärast viimast manustamist laaditi treeningu kontrollrühma ja Cistanche katserühma hiirte sabadele 1 g pliiraskust ning nad pandi basseini, mille kõrgus oli 50 cm, pikkus 50 cm ja laius 35 cm ujumiseks. Temperatuuri hoiti (30±0,5) kraadi juures ja hoiti konstantsena. Jälgige hiirt, kui leiate, et hiir lõpetab ujumise, kasutage puupulka, et stimuleerida selle liikumist 90 minuti jooksul. Pärast treeningut sööge normaalset dieeti, puhake 10 tundi ja surmake hiired koos normaalse kontrollrühma hiirtega kaela eemaldamise meetodil, võtke maks välja, kinnitage osa 10 protsendilise neutraalse formaldehüüdiga, kuivatage, läbipaistma, leotage vahas , ja sisestage 4 paksu pideva viilu tegemiseks, kasutage iga rühma maksakoe struktuuri jälgimiseks HF-värvimismeetodit: teine osa pesti tavalise soolalahusega, külmutati 20 kraadi juures, sulatati mõõtmise ajal toatemperatuuril, kuivatati filterpaberiga ja kaaluti ja seejärel valmistati maksa homogenaat tavalise soolalahusega, tsentrifuugige 3500 r 15 minutit kiirusel /min ja võtke supernatant, et mõõta laktaatdehüdrogenaasi isoensüümi aktiivsust elektroforeesiga.
2.2 Laktaatdehüdrogenaasi aktiivsuse määramine Polüakrüülamiidgeelelektroforeesi abil eraldatakse LDH isoensüümid vastavalt nende elektroforeetilisele liikuvusele. Proovi eraldusgeeli kontsentratsioon on 7 protsenti, pH 8,9 ja kontsentreeritud geeli kontsentratsioon on 4 protsenti, pH 6,8,10. Proov segatakse 1 tilga glütseriini ja bromofenoolsinise indikaatoriga. Elektroodipuhvriks on Tris-Glycine (pH 8,7), hakake rõhku stabiliseerima 1o0-150V juures, lisage see 30 minuti pärast 2o0-250V-ni ja tehke 4 tundi elektroforeesi. Pärast elektroforeesi värviti see laktaatdehüdrogenaasi isoensüümi komplektiga, värviti 37 kraadi juures 30 minutit, näidates sinist laktaatdehüdrogenaasi isoensüümi riba, seejärel loputati veega, fikseeriti jää-äädikhappega ja kasutati UVP geeli kujutise analüüsisüsteemi. Tehke andmete analüüs. .
2,3 Glükogeeniga värvimine 4 um paksused seerialõigud deparafiinitakse tavapäraselt veeks, pannakse 15 minutiks 37-kraadisesse 1-protsendilisse perioodilise happe lahusesse, loputatakse voolavas vees, pannakse 60 minutiks Schiffi lahusesse, loputatakse voolavas vees, kuivatatakse gradiendiga. etanool, ksüleen on läbipaistev, neutraalne. Kinnitage alusklaasid kummiga ja jälgige värvimistulemusi mikroskoobi all.
2.4 Immunohistokeemilise värvimise sektsioon deparafineeriti rutiinselt veega ja antigeen parandati sidrunhappepuhvriga mikrolaineahjus ning endogeenne peroksidaas eemaldati vedelikuga A 10 minutiks ja seejärel blokeeriti vedelikuga B (lahjendatud kitseseerum) 10 minutiks. Lisage primaarne antikeha üleöö temperatuuril 4 kraadi niiskes kastis, peske pH 7,4 PBS lahusega 5 min × 3 korda teisel päeval, lisage biotiiniga märgistatud lahus C (sekundaarne antikeha töölahus) 10 minutiks, peske PBS lahusega. 5 min × 3 korda ja lisage Mädarõika peroksidaasiga märgistatud D lahust inkubeeriti 10 minutit, pesti PBS lahusega 5 min x 3 korda ja lõpuks töötati DAB lahuses 5 minutit, pesti kraaniveega, HE vastuvärviti, dehüdreeriti gradientalkoholiga, läbipaistev ksüleeniga ja paigaldatud neutraalse kummiga. Pärast kile paigaldamist jälgige valgusmikroskoobi all. Igas katsepartiis kasutati primaarse antikeha asemel negatiivse kontrollina fosfaatpuhverdatud soolalahust (PBS).
2.5 Lämmastikoksiidi süntaasi ekspressiooni analüüs 3 Esialgselt visuaalse poolkvantitatiivse meetodiga valgusmikroskoobi all vaadeldes on NOS3 positiivne saadus tumepruun või pruunikaskollane ning positiivne produkt paikneb hepatotsüütide tsütoplasmas või hepatotsüütide vahel. . Endoteelirakkude tsütoplasmas on sinine taust negatiivne. Seejärel kasutatakse värvilise kujutise analüüsisüsteemi positiivse reagendi halli väärtuse mõõtmiseks ja 4 vaatevälja parameetrid mõõdetakse juhuslikult iga filmi jaoks 40-volditava objektiivi all ning keskmine väärtus on võetud. Seda parameetrit kasutatakse NOS3 värvi intensiivsuse muutuse kajastamiseks. 2.6 Statistilised meetodid Kõik andmed on tähistatud. SPSS11.{11}} kasutatakse t-testi jaoks statistilist tarkvarapaketti ja P<0.05 is="" considered="" a="" significant="">
Väsimusevastane
3 tulemust
3.1 Kudede struktuuri vaatlemine valgusmikroskoobiga Normaalses kontrollrühmas on maksasagarate struktuur selge, rakujuhtmed on korralikult paigutatud, maksa sinusoidid on normaalsed, maksarakkudel pole ilmseid kahjustusi ja tuuma struktuur on selge. Treeningu kontrollrühmas kadus normaalne koe struktuur, sagarad olid ebaselged, rakujuhtmed olid korrastamata, enamus maksa sinusoididest kadus ja hepatotsüütides esines ulatuslik vakuolaarne degeneratsioon, mis väljendub rakumahu suurenemises, lahtise tsütoplasma, valguse värvumises, ja isegi selge ja läbipaistev. Mõned maksarakud näitasid tüüpilist õhupallitaolist muutust koos vähese fokaalse või täpilise nekroosiga. MaksarakudCistanchekatserühm olid kergelt hägused, kuid need olid korrapäraselt paigutatud, rakkudes ei olnud ilmseid vakuoole ja lõtvumist, rakujuhtmed olid korralikult paigutatud ja tuuma struktuur oli selge.
3.2 Mõju maksa laktaatdehüdrogenaasi isoensüümide aktiivsusele koormuse all olevatel hiirtel (vt tabel 1)
Tabel 1 MõjuCistanchelaetud Xiaofengi maksa laktaatdehüdrogenaasi isoensüümil (x±s)
Märkus. Võrreldes tavalise kontrollrühmaga on P<0, 05;="" compared="" with="" the="" exercise="" control="" group,=""><0.05 (the="" same="">
3.3 Maksa glükogeeni värvimise valgusmikroskoobi vaatlus. Kuigi normaalse kontrollrühma glükogeenisisaldus ei ole kõrge, on glükogeen igas maksarakus ühtlaselt jaotunud ilma vakuoolideta; treeningu kontrollrühmas on vähem glükogeeni, hajus maksas Rakud, mõnes piirkonnas tekkisid vakuoolid; aCistanchekatserühm oli rikas glükogeeni poolest, kuid kogunes palju raku ühele küljele. 3.4 Lämmastikoksiidi süntaasi 3 ekspressiooni jälgimine valgusmikroskoobiga ja kvantitatiivne pildianalüüs. Normaalsete kontroll-hepatotsüütide tsütoplasmas ilmnes tugev positiivne ekspressioon difuusses jaotuses, eriti binukleaarsetes rakkudes, ja positiivne ekspressioon endoteelirakkudes. . Treeningu kontrollrühma hepatotsüütide ja endoteelirakkude ekspressioon tsütoplasmas oli nõrgenenud. Tistanche katserühm näitas positiivset ekspressiooni hepatotsüütide tsütoplasmas ja tugevat positiivset ekspressiooni endoteelirakkudes. Värvilise pildianalüsaatori analüüsitulemused on toodud tabelis 2.
Tabel 2 №s3 ekspressioonierinevuste võrdlus hepatotsüütides ja endoteelirakkudes (x±s)
4 Arutage
Et inimese keha vajab energiat liikumiseks ja keha vajab energiat ka ainevahetuse protsessis. Rakkude metabolism kasutab otseselt adenosiintrifosfaadi (ATP) lagunemisel tekkivat energiat. ATP sünteesiks vajalik energia saadakse lõpuks peamiselt suhkru katabolismist. Uuringud on näidanud, et pärast rasket treeningut toodab keha suures koguses H'-d, vabu radikaale, piimhapet ja muid aineid, mis mõjutavad rakkude normaalset ainevahetust. Samal ajal põhjustab glükoosi puudus rakkudestreeningväsimusja rakukahjustused. Selle uuringu tulemused näitavad, et maksakoe struktuuri kahjustus on pärast suurt hulka harjutusi väga tõsine ning see mõjutab ka rakkude sünteesi, näiteks maksa glükogeeni sünteesi vähenemist. Pärast palju harjutusi, hiired võttesCistanchevõib täheldada maksakahjustuste vähenemist, mis on peamiselt tingitud LDH5 vähenemisest, ja maksa glükogeenisisaldus on oluliselt kõrgem kui treeningu kontrollrühmal, mis viitab sellele, et Cistanche võib LDH5 funktsiooni vähendamise kaudu saavutada maksa kaitse ja säilitada normaalse füsioloogia. Glükogeeniga värvimise tulemustest.
Cistanche katserühma glükogeenisisaldus on kõrgem kui normaalsel kontrollrühmal. Kas Cistanche suurendab maksa glükogeeni ladestumist enne treeningut või kiirendab glükogeeni sünteesi stressi korral pärast treeningut. Sest ei ole mitte-harjutuse kontrolliCistancheeksperimendis. Järeldust on võimatu teha ja see tuleb kinnitada järgmises etapis, kuid kaitsevCistanche'i mõjumaksale ja glükogeeni sünteesi soodustamine pärast palju harjutusi on ilmne. N{{0}} on väikese molekuliga aine, mida spordiringkond on viimastel aastatel kõrgelt hinnanud. NOS on N0 tootmise peamine kiirust piirav tegur. On kinnitatud, et NOS-il on kolme tüüpi isoensüüme ja NOSI-d nimetatakse neuronaalseks lämmastikoksiidi süntaasiks.
Neuronaalsetes rakkudes, skeletilihasrakkudes jne esinev ensüüm osaleb peamiselt närvisüsteemi arengus, neurosekretsioonis, õppimises ja mäluprotsessides: NOS2 on indutseeritav lämmastikoksiidi süntaas, mida leidub peamiselt silelihasrakkudes, makrofaagides ja lümfotsüütides. see ensüüm indutseeritakse, võib see jätkata NO sünteesimist kuni substraadi ammendumiseni või rakusurmani. Praegu arvatakse, et see on seotud rakukahjustusega; 'NOS3 on endoteeli lämmastikoksiidi süntaas, mis jaotub peamiselt endoteelirakkudes ja hepatotsüütides, toodab NO. Peamiselt osaleb füsioloogilistes funktsioonides. Selle uuringu tulemused näitavad, et pärast rohket treeningut nõrgeneb NOS3 ekspressioon endoteelirakkudes ja hepatotsüütides ning sellest tulenev N0 väheneb, mistõttu veresooni ei saa tõhusalt laiendada, verevool väheneb, ja glükogeeni sünteesi toorainet ei saa transportida maksarakkudesse, mistõttu glükogeeni süntees väheneb. ;Cistanchesuudab ülesreguleerida NOS3 ekspressiooni endoteelirakkudes ja maksarakkudes, laiendada reaktiivselt veresooni, suurendada verevoolu, kiirendada glükogeeni sünteesi tooraine transportimise võimet, kiirendada glükogeeni sünteesi ja hoida organismi normaalsel füsioloogilisel metaboolsel tasemel. Seetõttu võib LDH5 vähendamine maksa kaitsmiseks ja NOS3 ekspressiooni ülesreguleerimine piimhappe glükoneogeneesi soodustamiseks olla oluline mehhanismCistanchekaitsta maksa ja soodustada füüsilist taastumist. See uuring annab teadusliku eksperimentaalse aluse selle edasiseks arendamiseks ja kasutamiseksCistanchespordimeditsiini valdkonnas ning paneb aluse ka arendamisele ja puhastamiseleCistanche'i efektained.
