Etanoolne lambaläätse ekstrakt: selle molekulaarsed mehhanismid naha vananemise vastu ja nanokapseldamise tõhustatud funktsioonid 2

Palun võtke ühendustoscar.xiao@wecistanche.comrohkem informatsiooni

2.5. LNF ja lambaläätse ekstrakti mõju rakkude elujõulisusele ja kollageeni tootmisele inimese naha fibroblastirakkudes

Valmistatud LNF-i tsütotoksilisuse uurimiseks töödeldi rakke 24 tunni jooksul tühikatse, LNF-i ja lambaläätse ekstraktidega {{0}} ug/ml (kahekordne lahjendus). Rakkude elujõulisust mõõdeti MTT testi abil. Nagu on näidatud joonisel fig 6a, vähenes rakkude elujõulisus ekstraktiga töödeldud rakkudes, samas kui tühikatsetes ja LNF-ga töödeldud rakkudes mingit toimet ei täheldatud. Andmed näitasid, et LNF-l oli madalam toksilisus kui ekstraktil. Lisaks uurisime LNF-i võimet indutseerida kollageeni tootmist inimese naha fibroblastirakkudes. Rakke töödeldi 7 ug/mL ekstraktiga ja 1{{20}}0 ug/mL LNF-iga (ekstrakti ekvivalent 7 ug/mL) koos tühjade osakestega kontrollina. ja 14 päeva. Nagu on näidatud joonisel fig 6b, suurenes LNF-ga töötlemise korral värvunud kollageeni kogus 7 ja 14 päeva pärast vastavalt 30% ja 50% võrreldes ekstraktiga töötlemisega. Lisaks, joonisel fig 2a, suurendas formuleeritud LNF kollagenaasivastast aktiivsust, kuna IC5o vähenes oluliselt 0,21 ± 0,03 mg/ml võrreldes lambaläätse ekstraktiga (0,57 ± 0,02 mg/ml). Need tulemused näitasid, et LNF-i preparaat võib võimendada kollageeni tootmise indutseerimist inimese naha fibroblastirakkudes ja suurendada lambaläätse ekstrakti kollagenaasivastast aktiivsust. Võimalik, et lambaläätse ekstrakti nanokoostis parandab oluliselt selle tõhusust vananemisvastaste toodete toimeainena.

2.6. Formuleeritud LNF-i roll MMP1, MMP9, IL-6 ja IL-8 inhibeerimisel pärast UV-kiirgust

Järgmisena uurisime mõnda võimalikku LNF-i vananemisvastase toime mehhanismi. UV-kiirgus on üks peamisi naha vananemise regulaatoreid, kuna on teatatud, et see indutseerib teatud maatriksi metalloproteinaaside (MP) perekonna liikmete ekspressiooni, mis põhjustab kollageeni kollapsi, sealhulgas MMP1, MMP3 ja MMP9 [34,35]. . Me täheldasime, et UV-kiirgus oli väga toksiline koos kultiveeritud naharakkudele (joonis 7a) ja suurendas MMP1 ja MMP9 tsütokiinide tootmist (joonis 7b). Lisaks suutsid lambaläätse ekstrakti ja LNF-i töötlemine märkimisväärselt vähendada sekretsiooni. MMP1 ja MP9 võrreldes kontrollrakkudega pärast UV-kiirgust. Need tulemused olid kooskõlas rutiini ja resveratrooli raviga vananemisvastase vahendina. Nimelt oli MMP1 ja MMP9 ekspressioonide vähenemine LNF-ga töödeldud rakkudes oluliselt madalam kui ekstraktiga töötlemisel. Seega võib LNF UV-kiirgusega kokkupuutel vähendada MPI ja MMP9 sekretsiooni ning seejärel vältida fotost põhjustatud naha vananemist.

Lisateabe saamiseks klõpsake siin

Lisaks võib UVR-i kokkupuude inimese nahaga vahendada ka põletiku esilekutsumist ja põletikueelsete tsütokiinide, nagu TNF- ja interleukiinid, sealhulgas IL-1, IL-2, IL{{4} } ja IL-8 [36]. Seejärel uurisime LNF-i funktsiooni UV-stimuleeritud põletikuliste tsütokiinide, sealhulgas IL-6 ja IL-8 tootmise pärssimisel. Joonisel 7c täheldasime, et UV-kiirgus suurendas oluliselt IL{{ tootmist. 11}} ja IL-8 tsütokiinid koos kultiveeritud naharakkudes. IL-6 ja IL-8 ekspressioonide olulist vähenemist täheldati raudrohi ekstraktiga ravimisel võrreldes kontrolliga. Huvitav on see, et lambaläätse ekstrakti ravimisel ilmnes tunduvalt suurem IL-6 ja IL-8 inhibeerimine võrreldes rutiiniga, kus need inhibeerivad toimed olid sarnased resveratrooliga ravitud rühmadega. Märkimisväärne on see, et IL-6 ja IL-8 ekspressioon LNF-ga töödeldud rakkudes oli pärast UV-kiirgust märkimisväärselt madalam võrreldes lambaläätse ekstrakti rühmaga. Need tulemused näitasid koos, et LNF võib potentsiaalselt pärssida UV-vahendatud IL-6 ja IL-8 tootmist ning seejärel ennetada fotostimuleeritud nahapõletikku ja naha vananemist.Sellest tulenevalt viitavad need tulemused sellele, et lambaläätse etanooliekstrakti ja selle nanopreparaati võib potentsiaalselt kasutada vananemise ennetamiseks aktiivsete koostisosadena.

3. Arutelu

Mitmetes uuringutes on näidatud, et lambaläätse ekstraktil on antioksüdantne, antiradikaalne ja põletikuvastane toime [29,37], kuigi selle kortsudevastast omadust ei ole ikka veel ära kasutatud. See uurimus oli esimene, mis tuvastas in vitro kollagenaasi inhibeeriva testi abil lambaläätse ekstrakti vananemisvastase toime. Varasemad uuringud on soovitanud kasutada kollagenaasivastase toimega taimeekstrakte aktiivse koostisosana kosmeetikatoodetes, nagu viinamarjajääkide ekstrakt [38], rohelise tee ekstrakt [39] ja seeneekstrakt [40]. Lisaks ei ole kunagi teatatud lambaläätse ekstrakti mõjust kollageeni tootmisele inimese naha fibroblastirakkudes. Tamara et al. (2006) on näidanud flavonoidide mõju kollageeni sünteesile inimese fibroblastides, kasutades rutiini kui lambaläätse ekstrakti aktiivset ühendit, mis aitab suurendada kollageeni [41]. See lambaläätse uuring näitas selle paljulubavat vananemisvastast võimet ja esindas rutiini bioloogilise markerina.

Selles uuringus kasutati rutiini (3),4',57-tetrahüdroksüflavon-3-rutinosiidi, kuna see on flavonoolglükosiid, mida on kirjeldatud mitmetes taimedes, sealhulgas Fagopyrum esculentum Moench, Ruta. graveolens L, Sophora japonica L., Eucalyptus spp. [37l ja raudrohi[17]Rutiinil on antioksüdantne, tsütoprotektiivne, kantserogeenne, neuroprotektiivne ja kardioprotektiivne toime, pakkudes välja selle rakenduse vananemise ja vananemisega seotud haiguste ennetamisel. Meie tulemused näitasid, et valmistatud ekstraktis oli palju rutiinisisaldust, mida teistes uuringutes ei leitud ega tuvastatud lambaläätse ekstrakti komponendina. Enamik teisi uuringuid on näidanud, et trigoneliini on lambaläätse ekstrakti peamine keemiline koostisosa [18,37,38,42-47].

Isegi lambaläätse ekstraktil on potentsiaalne toime vananemisvastase ainena. Selle värv ja stabiilsus on selle rakenduse jaoks endiselt väljakutseks. Nanokapseldamist on kirjeldatud kui spetsiifilist tehnoloogiat, mis suudab stabiliseerida, varjata lõhna, parandada vees lahustuvust, kontrollida bioloogiliste ühendite vabanemist [48, 49] ja parandada looduslike toodete füüsilist välimust. Liponiosoomi on selles uuringus kasutatud tänu selle ainulaadsetele omadustele, mis koosnevad hüdrofiilsetest ja hüdrofoobsetest osadest, mis võivad kapseldada paljusid erineva lahustuvusega aineid [50]. Koostasime lambaläätse ekstraktiga kapseldatud liposoomid (LNF), mis on liposoomide ja niosoomide omadusi sisaldav hübriidkandja. Arenenud LNF-i hübriidkomponendid kinnitati sulamistemperatuuriga, kasutades DSC-d, peegeldades nii liposoomide kui ka niosoomide termilisi omadusi.

cistanche võib vananemisvastane

Sarvkiht on naha välimine kiht, mis toimib tõhusa barjäärina kahjulike ainete vastu, piirates nende liikumist läbi naha. Siiski on tõestatud, et nanokandjate kasutamine parandab transdermaalset manustamist, suurendades ravimite või ainete tungimist läbi selle barjääri[51]. LNF-i tugevuse uurimiseks transdermaalsel manustamisel on kasutatud ex vivo sigade naha tungimist, kuna selle anatoomilised omadused on enamasti sarnased inimese naha omadega naha paksuse, folliikulite struktuuri ja karvade tiheduse osas [52]. Meie tulemused näitavad, et LNF-i läbilaskvus oli suurem ja sügavam kui lambaläätse ekstraktil ja rutiinil ning LNF-i vabanemisprofiilil oli aeglasem vabanemine kui lambaläätse ekstraktil, mis viitab sellele, et valmistatud LNF oli naha läbitungimisel märgatavalt parem kui ekstrakti oma. Lisaks suurendas formuleeritud LNF kollagenaasivastast aktiivsust, kuna IC-A vähenes oluliselt kuni 0,205±0.03mg/ml võrreldes lambaläätsega ekstrakti (0,567±0,02 mg/ml). Need tulemused näitasid, et LNF-i preparaat võib võimendada kollageeni tootmise indutseerimist inimese naha fibroblastirakkudes ja suurendada lambaläätse ekstrakti kollagenaasivastast aktiivsust. Lamaralbamarja ekstrakti nanokoostis aitab potentsiaalselt parandada selle tugevust, kasutades seda aktiivse koostisosana vananemise ennetamiseks.

UV-kiirgusega kokkupuude on naha välise vananemise peamine tegur, mida nimetatakse enneaegseks vananemiseks või fotovananemiseks [53.54]. Kiirgus põhjustab naha keratinotsüütide ja fibroblastide rakupinna retseptorite aktivatsiooni, mis põhjustab naha rakuvälise maatriksi, eriti maatriksi metalloproteinaaside perekonna (MP) ekspressioonide indutseerimist. On tõestatud, et krooniline kokkupuude UVA väikeste annustega põhjustab kollagenaasi-1 (MMP1), stromelüsiini-1 (MMP3) ja želatinaas A (MMP2)[55] mRNA taseme ülesreguleerimist. Selle tulemusena toimub naha kollageeni elastsete kiudude lagunemine ja uue kollageeni sünteesi seiskumine. See nähtus mõjutab naha terviklikkust, elastsust ja struktuure pärast naha kaitsefunktsioonide dereguleerimist, võttes arvesse kortsude teket ja naha vananemise märke [54,56]. Lisaks vahendab UVR-i kokkupuude inimese nahaga TNF-alfa ekspressiooni, mis on oluline põletikulise kaskaadi regulaator nahas. UV-kiirgus käivitab ka nii põletiku kui ka põletikueelsete tsütokiinide sekretsioonide, nagu interleukiin-2 (IL-2) ja interleukiin-6 (1L-6) [36]. . Selle tulemusena on sellel UVR-indutseeritud põletikulisel reaktsioonil oluline roll põlenud naha esilekutsumisel koos punetuse, ärrituse ja erüteemiga [35.59].

Seetõttu oleks enneaegse vananemise põhjuste ärahoidmiseks ideaalne leida mõned uudsed toimeained, millel on need ennetavad funktsioonid. Meie tulemused näitasid, et LNF-i koostis võib võimendada kollageeni tootmise indutseerimist inimese naha fibroblastirakkudes, vähendada MP1, MP9, IL-6 ja IL-8 sekretsiooni UV-kiirguse mõjul ja võib tugevdab lambaläätse ekstrakti kollagenaasivastast toimet. Seetõttu võiks etanoolset lambaläätse ekstrakti ja selle nanokoostist potentsiaalselt kasutada kosmeetikatoodete uudse toimeainena ning et nanokapseldamine on võimeline parandama lambaläätse ekstrakti kui vananemisvastase ainena funktsiooni ja aktiivsust. 4. Materjalid ja meetodid

4.1.Taimsed materjalid ja keemilised reaktiivid

Fenugreek seed powder was received from Herbal Acharn'sHome Co.,Ltd. (Bangkok, Thailand). Rutin trihydrate (>98-protsendiline puhtus), tritsiinipuhver, Clostridium histolyticumi kollagenaas ja FALGPA (N-[3(2-furüül)akrüül)-Leu-Gly-Pro-Ala), otsene punane 80, pikriinhape ja dimetüülsulfoksiid. ostetud ettevõttelt Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) Atsetonitriil, etüülatsetaat, absoluutne etanool, sipelghape, naatriumdehüdraatfosfaat, dinaatriumvesinikfosfaat, vesinikkloriidhape ja naatriumhüdroksiid osteti ettevõttelt Carlo Erba (Emmendingen, Saksamaa). Kaubandusliku kvaliteediga etanool osteti ettevõttelt Italmar Co., Ltd. (Bangkok, Tai). Kolesterool osteti firmalt Cosmeplus Co., Ltd. (Bangkok, Tai). Propüleenglükooli ja solubilisaatori segu osteti firmalt S.Tong Chemicals Co,Ltd. (Nonthaburi, Tai). Sorbitaanoleaat osteti ettevõttelt Croda Co., Ltd. (Bangkok, Tai). Fosfolipiid (Phospholipon 90G) osteti ettevõttelt Cargill Siam Ltd. (Bangkok, Tai). Tokoferoolatsetaat osteti ettevõttelt Namsiang Co, Ltd. (Bangkok, Tai). Säilitusaine osteti firmalt Forecus Co., Ltd. (Bangkok, Tai). Paraformaldehüüd osteti ettevõttest Himadia Laboratories (Mumbai, India) ja 3-(4,5-dimetüültiasool-2-üül)-2,5-difenüültetrasooliumbromiid osteti ettevõttest Calbiochem (Burlington, MA, USA).

4.2.Ekstraheerimine

Fenugree seemnepulbrit (500 g) leotatakse 95% etanooliga (1:5) 3 päeva. Ekstraheerimist korrati kolm korda (3 x 2500 ml). Kogu ekstraktilahus filtriti ja etanooli aurustati rõhul 100 mbar 40 kraadi juures, kasutades rotaatoraurustit (Heidolph, Schwabach, Saksamaa). Saadud ekstrakt oli õline kollakaspruun pasta saagisega 5% (mass/mass) ja seda hoiti kuni kasutamiseni 4 kraadi juures.

4.3. Rutiini UHPLC valideerimine ja tuvastamine lambaläätse ekstraktis

Rutiintrihüdraati kui standardset markerit kasutati lambaläätse ekstrakti analüüsimiseks. UHPLC-meetodi töötas välja ja valideeris lineaarsuse, täpsuse, täpsuse ja tundlikkuse[31,32] osas Shimadzu LC-30 AD UHPLC-süsteem, mis sisaldab dioodimassiividetektorit SPD-M20A ja autosampler SIL-30AC. Meetod kasutas SUPLECO Titan C18 kolonni (5 cm × 2,1 mm, 1,9 um, SUPLECO, Burlington, VT, USA) 30 kraadi juures ja tuvastas lainepikkuse 26{{ 19}} nm. Mobiilne faas kohandati Kenny et al. [45]. Lühidalt, 0.0Valmistati 5 mahuprotsenti sipelghappe lahust ülipuhtas vees (A) ja 0,05 mahuprotsenti sipelghapet atsetonitriilis (B). vooluga 0,25 ml/min gradiendirežiimis: lähtetingimus oli 10 protsenti B 1,0 minuti jooksul, suurendati 75 protsendini B 3,5 minutiks, vähenes 10 protsendini B 0,75 minutiks ja hoiti 0,25 minutit.

4.4. Kollagenaasi test

Kollagenaasivastase aktiivsuse määramiseks viidi läbi kollagenaasi test [60]. Valmistati segulahus, mis sisaldas 25 μL 50 mM tritsiini puhverlahust (pH 7,5), 25 μL 2 ühikut/ml kollagenaasi (clostridium histolyticum tüüp IA) ja 25 μL proovi, ja inkubeeriti toatemperatuuril 15 °C juures. min. Reaktsiooni käivitamiseks lisati segu lahusele 10 uL sünteetilist substraati ja 2 mM N-[3-(2-furüül)akrüloüül-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA) ja inkubeeriti. 20 min. Iga supernatandi neeldumise muutust mõõdeti 340 nm juures (Synergy H1 mikroplaadilugeja) ja ICso väärtused arvutati lineaarse regressioonikõvera joonestamise teel, mis näitas proovi kontsentratsioone x-teljel ja inhibeerimise protsenti y-teljel. Inhibeerimise protsent arvutati järgmise võrrandi abil:

4.5.Rakukultuur

Inimese naha fibroblastirakud osteti Ameerika tüüpkultuuride kollektsioonist: ATCC (PCS-201-010) ja inimese immortaliseeritud keratinotsüüdid (HaCaT) osteti ettevõttest Cell Lines Service, Saksamaa (kat. nr 300493). Rakke kasvatati Dulbecco modifitseeritud Eagle'i söötmes (DMEM) (Gibco, UK), millele oli lisatud 10 protsenti FBS-i (Gibco, UK), 1 protsenti penitsilliini (100 ühikut/ml) ja streptomütsiini (100 ug/ml) (Gibco, St. , MO, USA). Rakke inkubeeriti 37 kraadi juures 5% süsinikdioksiidi keskkonnas.

4.6. Kollageenisisaldus ja Picrosiriuse punane värvumine

Inimese naha fibroblastirakud külvati tihedusega 2,5 × 104 rakku süvendi kohta 48 süvendiga plaatidele ja inkubeeriti 24 tundi. Seejärel töödeldi rakke 7 ja 14 päeva erinevas kontsentratsioonis liponio-some ilma ekstraktideta (näidatud kui tühi), liponiosoome kapseldava lambaläätse ekstraktiga (LNF) ja lambaläätse ekstraktiga 7 ja 14 päeva 005 protsendiga. DMSO-d kasutatakse sõiduki juhtimiseks. Meediat vahetati iga 2 päeva tagant. Seejärel pesti rakke PBS-ga ja fikseeriti 100 ui 4% PFA-ga 10 minutit. Rakke pesti PBS-ga (kaks korda) ja värviti 100 uL 0,1% otsese punase 80 lahusega 10 minutit. Pärast värvimist lisati üleliigse värvaine pesemiseks 0,01 NHCl 70% etanoolis. Värvitud kollageen lahustati 10 uL 0,5 N NaOH-s ja neeldumist mõõdeti 540 nm juures, kasutades mikroplaadilugejat (Synergy H1 mikroplaadilugeja). Kollageenisisalduse protsent arvutati järgmise võrrandi abil:

4.7.Rakkude elujõulisuse test

Inimese naha fibroblastirakud külvati tihedusega 2 × 104 rakku süvendi kohta 96 süvendiga plaatidele ja inkubeeriti 24 tundi. Pärast inkubeerimist lisati erinevad kontsentratsioonid (0-100 ug/mL) liposoome ilma ekstraktideta (tühikatse), LNF-i ja lambaläätse ekstrakti ning kultiveeriti 24 tundi. Seejärel lisati igasse süvendisse 100 µl MTT-d (1 mg/mL) ja inkubeeriti 4 tundi. Formasaani produkti lahustamiseks lisati DMSO. Neeldumist mõõdeti lainepikkusel 570 nm, kasutades mikroplaadilugejat (Synergy Hl mikroplaadilugeja). Rakkude elujõulisuse protsent arvutati järgmise võrrandi abil:

4.8. Liponiosoomide koostis

Liposoomide valmistamisel kasutati homogeniseerimisele järgnenud eelemulgeerimist. Sfäärilise lipiidide kaksikkihi moodustamiseks kasutati fosfolipiidi ja emulgaatori segu ning osakeste jäikuse suurendamiseks kolesterooli [15]. Lühidalt, sojaoa letsitiin, kolesterool ja emulgaator dispergeeriti propüleenglükoolis ja kuumutati 70-80 kraadini (õlifaas), nagu on näidatud tabelis 2. Fenugree ekstrakt lahustati propüleenglükooli/vees (veefaas) ja kuumutati sama veevann. Ekstrakti vesilahust lisati pidevalt lipiidkomponentidesse ja homogeniseeriti kiirusel 8000-100 pööret minutis 5-10 minutit, kasutades kiiret segamist (Heidolph Silent Crusher M, Kenilworth, N, USA). Segu jahutati 50 kraadini ja lisati tokoferoolatsetaati ja homogeniseeriti veel 10 min, et saada LNF. LNF morfoloogiat vaadeldi transmissioonelektronmikroskoopia abil (TEM, JEOL, Peabody, MA, USA), hüdrodünaamilist suurust, polüdisperssuse indeksit Pdl ja zeta potentsiaali uuriti dünaamilise valguse hajumise abil (DLS, Nanosizer ZS, Malvern Instruments, Worcestershire, Ühendkuningriik). Liposoomide sulamiskäitumise kinnitust uuriti diferentsiaalse skaneeriva kalorimeetria (DSC, Mettler Toledo DSC1) abil. Proovi viskoossust mõõdeti digitaalse Brookfieldi viskosimeetriga (mudel HBDV-IIIU CP). Lühidalt öeldes kasutati 0,5 g proove ja viskoossust uuriti CP-40 spindli abil kontrollitud kiirusega 0,5 pööret minutis 20 minutit ümbritseval temperatuuril.

LNF stabiilsuse hindamiseks hoiti osakesi 3 kuud 4 kraadi, 25 kraadi ja 40 kraadi juures ning uuriti osakeste suuruse ja morfoloogia muutusi.

Liposoomi ja müraga kapseldatud lambaläätse ekstrakt (LF ja NF) valmistati sarnase meetodi abil nagu LNF. LF valmistati ilma sorbitaanoleaati õlifaasi lisamata, samas kui niosoom (NF) valmistati ilma fosfolipiidkomponendi lisamiseta. Nende füüsikalis-keemilised iseloomustused on esitatud täiendavas tabelis S1.

4.9. Kapseldamise efektiivsuse ja bioaktiivse koormuse protsendid

LNF-i kapseldamise efektiivsus (EE-protsent) ja bioaktiivne laadimine (BL-protsent) arvutati kapseldatud ravimi koguse määramise teel ultrafiltratsioonitehnika abil. Rutiini kogust kasutati standardse markerina. Pärast 20 mg/ml LNF-i lahustamist DI vees tsentrifuugiti seda 80, 000 p/min 4 tundi. Supernatant koguti ja seejärel hinnati kapseldamata rutiini, kasutades ülikõrge jõudlusega vedelikkromatograafia tehnikat (UHPLC)[61]. EE protsent ja BL protsent arvutati järgmiste võrrandite abil:

4.10.Franzi difusioonrakk

Franzi difusioonirakkude süsteemis uuriti in vitro läbilaskvat uuringut 7 mg/ml lambaläätse ekstrakti ja LNF-i kohta [62]. Sünteetiline membraan (Biomax 500 kDa ultrafiltratsiooniketas, Merck, MA, USA) asetati doonori ja retseptori sektsiooni vahele. Fosfaatpuhversoolalahust (PBS) pH-ga 5,5 segati kiirusel 50 p/min (37 kraadi) ja kasutati retseptorkeskkonnana. Fenugreek ekstrakt ja LNF kanti doonorraku korgis olevale membraanile. Proovid immutati läbi membraani ja koguti retseptori kambrist 0, 2, 4, 6, 8, 12 ja 24 tunni pärast. Kumulatiivset läbitunginud rutiini hinnati ja arvutati UHPLC tehnikaga.

4.11.Sigade naha läbilaskvus

LNF-i läbitungimist läbi sea naha visualiseeriti kujutise massimikroskoobiga (IMS, SHIMADZU, mudel: iMScopoe TRIO, Kyoto, Jaapan). Sea nahk lõigati 1,5 × 1,5 cm2 suurusteks. Rutiin, lambaläätse ekstrakt ja LNF kanti lõigatud sea nahale ja hoiti 4 kraadi juures 24 tundi. Proovid lõigati krüostaadi abil, asetati indiumtinaoksiidiga kaetud alusklaasile ja pihustati 9-aminoakridiini maatriksainega (9-AA). Proove säilitati -20 kraadi juures. enne analüüsi. Rutiini optiliste kujutiste ülekatet analüüsiti sagedusel 609,15 m/z.

4.12.Diferentsiaalsete skaneerivate kalorimeetrite (DSC) iseloomustus

LNF sulamistemperatuuri määramiseks viidi läbi diferentsiaalse skaneeriva kalorimeetria (DSC) analüüs, kasutades diferentsiaalset skaneerivat kalorimeetrit (DSC, Mettler Toledo DSC1)[63]. Pärast täpset kaalumist asetati proovid alumiiniumist pannidesse ja suleti kaanega. Skaneerimisprotsessis rakendati kuumutuskiirust 10 kraadi temperatuurivahemikus 25 kuni 350 kraadi gaasilise lämmastiku all, mida puhastati kiirusega 40 ml/min. 4.13.Inimese kooskultuursete naharakkude konstrueerimine

Inimese naha fibroblastirakud külvati tihedusega 8, 5 × 104 rakku süvendi kohta 12 süvendiga kultuuri sisestustesse (Corning, Corning, NY, USA) ja kultiveeriti 24 tundi. Esimesele kihile lisati järjestikustel päevadel korduvalt naha fibroblastide teist ja kolmandat kihti. Pärast 24-tunnist kolmanda kihi lisamist külvati HaCaT 8, 5 × 10 kraadi raku kohta süvendi kohta moodustunud fibroblastikihtidele ja kultiveeriti enne katset veel 24 tundi.

4.14. Rakkude elujõulisuse ja MMP-de sekretsiooni uurimine pärast UV-kiirgust koos kultiveeritud naharakkudes

Inimese ühiselt kultiveeritud naharakke töödeldi eelnevalt 7 ug/ml ekstrakti ja 100 ug/ml LNF-iga (ekstrakti ekvivalent 7 ug/mL) ning positiivse kontrollina 100 ug/ml tühja katse ja 10 ug/ml resveratrooliga. , 24 tundi. Seejärel pesti koos kultiveeritud naharakke kaks korda PBS-ga ja allutati 5J/cm2 UVA- ja 30mJ/cm2 UVB-kiirgusele (Solar Simulators, NY, USA). Pärast UV-kiirgust inkubeeriti koos kultiveeritud naharakke testitud proovidega 24 tundi. Seejärel koguti supernatant MMP1 ja MP9 kvantifitseerimiseks. UV-indutseeritud MMP1 ja MMP9 sekretsioonide taset inimese ühiselt kultiveeritud naharakkudes mõõdeti ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsi komplektidega (MMP1: ab215083 ja MMP9: ab100610, abcam, Cambridge, UK) vastavalt tootmisprotokollidele.

Inimese kooskultiveeritud naharakkude elujõulisust pärast UV-kiirgust hinnati CellTiter-Glo luminestseeruvate rakkude elujõulisuse testi komplekti (Promega, Madison, WI, USA) abil. Pärast 24-tunnist kokkupuudet UV-kiirgusega pesti koos kultiveeritud naharakke kaks korda PBS-iga ja igasse süvendisse lisati 100 μL Glo Lysis puhvrit (Promega, Madison, WI, USA). Pärast 10-minutilist inkubeerimist lisati 50 uL CellTiter-Glo reaktiivi ja inkubeeriti toatemperatuuril 10 minutit. Seejärel mõõdeti luminestsentssignaali mikroplaadi luminomeetriga (SpectraMax L, Molecular Devices).

4.15.Statistiline analüüs

Tulemused esitati kui keskmine ± standardhälve (SD). Olulisi erinevusi analüüsiti Studenti testi või ühe- või kahesuunalise dispersioonanalüüsi (ANOVA) abil, millele järgnes Tukey post hoc test (GraphPad Prism 9) p väärtustega.<0.05 considered="" statistically="">

5. Kokkuvõtted

Kokkuvõttes andis see uuring kaks alternatiivset ettepanekut. Esiteks ei täheldatud rutiini mitte ainult ultraviolettkiirguse kaitse ja antioksüdatiivse aine seisukohast, vaid seda kasutati ka kromatogrammi sõrmejälgede standardmarkerina ja lambaläätse seemne pulbriekstrakti vananemisvastase toime peamise viitena. Teiseks demonstreeriti etanooliekstrakti vananemisvastaseid molekulaarseid mehhanisme. Ekstraktil ilmnesid uued bioloogilised omadused, nagu kollagenaasivastane toime, kollageeni tootmise indutseerimine ja kollageeni lagunemise pärssimine, mis viitab potentsiaalsele alternatiivsele looduslikule vananemisvastasele ainele vananemisvastaste toodete jaoks. Kapseldamise tehnikaid saab kasutada bioaktiivsete ühendite ning keemiliste ja füüsikaliste lagunemisprotsesside kaitsmiseks ning nende bioloogilise aktiivsuse pikendamiseks kuni kasutamiseni. See meetod vähendab ka ravimtaimede ekstraktide toksilisust. Selles uuringus on formuleeritud liposoomid väga stabiilsed ja neil on pikaajaline vabanemine. Nanopreparaat võib samuti tugevdada lambaläätse ekstrakti vananemisvastaste omadustega. Selle uuringu põhjal pakume välja, et LNF-i võiks potentsiaalselt kasutada paljulubava toimeainena naha vananemise ennetamisel.

See artikkel on välja võetud ajakirjast Pharmaceuticals 2022, 15, 254. https://doi.org/10.3390/ph15020254 https://www.mdpi.com/journal/pharmaceuticals