Cistanche Tubulosa vesiekstrakti mõju soolestiku häiretega hiirte soolestiku mikrobiootale

Xiaowei Bao, Dongwen Bai, Xiaolu Liu, Ying Wang, Lanjun Zeng, Chenye Wei ja Weiquan Jin

Toiduteaduse ja farmaatsia kolledž, Xinjiangi Põllumajandusülikool, Urumqi 830052, Hiina

Kirjavahetus tuleks adresseerida Xiaowei Baole; xiaoweibao0723@xjau.edu.cn

Saabunud 29. aprill 2021; Vastu võetud 30. juunil 2021; Avaldatud 14. juulil 2021

See on avatud juurdepääsuga artikkel, mida levitatakse Creative Commonsi omistamislitsentsi alusel, mis lubab piiramatut kasutamist, levitamist ja reprodutseerimist mis tahes kandjatel, eeldusel, et originaalteosele viidatakse õigesti.

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Abstraktne

Soolestiku mikrobiota häired on seotud paljude haigustega. Vesiekstrakt päritCistanchetubulosa(CT), traditsiooniline Hiina taimne valem, on teadaolevalt mänginud rolli inimese soolestiku kaitsmisel. Selle mõjust soolestiku mikrobiootale on aga vähe teada. Käesolev uuring viidi läbi selleks, et teha kindlaks, kasCistancheTubulosavesiekstrakt võib moduleerida soolestiku mikrobiomi soolehäiretega hiirtel. Leidsime, et tsefiksiimravist põhjustatud kahjustatud soole morfoloogiat saab päästaCistancheTubulosavesiekstrakt. Mikroobide mitmekesisuse võrdlus Cistanche Tubulosa ekstraktiga ravitud hiirte ja kontrollhiirte vahel näitas samuti, et mudelrühmade mikrobioomikoosluse häiret saab taastada ravimisel kõrge ja keskmise kontsentratsiooniga.CistancheTubulosavesiekstrakt. Ravi tsefiksiimiga tõi kaasa piimhappebakterite arvu olulise vähenemise; aga täiendamineCistancheTubulosavesiekstrakt taastas nende piimhappebakterite kasvu. Lisaks onCistancheTubulosavesiekstrakt suutis tsefiksiimi indutseeritud dramaatilisi muutusi soolestiku mikrobiomi metaboolsetes radades leevendada. Need leiud andsid ülevaate Cistanche Tubulosa vesiekstrakti kasulikust mõjust soolestiku mikrobiootale ning andsid ka olulise viite sarnaste ravimite väljatöötamiseks tulevikus.

Cistanchetubulosasellel on palju efekte, lisateabe saamiseks klõpsake siin

1. Sissejuhatus

Soolestiku mikroorganismid koloniseerivad peamiselt soole luumenist ja limaskestakihti ning ühinevad peremeesorganismiga materjali- ja energiavahetuse, transformatsiooni ja muude protsesside kaudu [1]. *ey on signaalimiskeskused, mis integreerivad keskkonnateateid, nagu toitumine, geneetiliste ja immuunsignaalidega, mõjutades järelikult peremeesorganismi ainevahetust, immuunsust, närvisüsteemi ja vastust infektsioonidele [2]. Tavaliselt on soolefloora ja peremeesorganismide vahel dünaamiline tasakaal; soolestiku düsbioos võib aga põhjustada muutusi tervise/haiguste tasakaalus, immuunhäireid ja paljusid haigusi [3]. Mõõdukad muutused soolestiku mikrobiotas on peremeesorganismile vastuvõetavad; see võib siiski anda võimaluse võimendada muutusi muudes raskendavates tegurites, nagu bakteriofaagid, bakteriotsiinid ja oksüdatiivne stress [4].

Varasemad uuringud on näidanud, et Cistanche tubulosa (CT) etanooliekstrakt, mis on traditsiooniline Hiina taimne valem, võib reguleerida rottide soolestiku mikroobide koostist [5] ja Cistanche Tubulosa glükosiidide kogusisaldus korrigeeris korrastamata soolestiku mikrofloorat [6]. Cistanche liike, mis parasiteerivad peamiselt Tamarixi liikide juurtel, nimetatakse ka "kõrbe ženšenniks" ning taimse ravimina kasutatakse Cistanche deserticola (CD) ja Cistanche tubulosa (CT) vartest koosnevat toonikut [7] ]. Leiti, et Cistanche Tubulosa fenüületanoolglükosiidide (PHG) peamised keemilised komponendid, mis on antioksüdantsed ained [8, 9], parandavad reproduktiivfunktsiooni häireid [10], pärsivad maksa tähtrakkude aktivatsiooni, blokeerivad TGF-i signaaliradade juhtimist{{6 }}/SMAD [11] ja vältida veise seerumi albumiinist põhjustatud maksafibroosi rottidel [12]. Cistanche Tubulosa enam kui 100 komponendi hulgas on polüsahhariid ka üks olulisemaid aineid, mille sisaldus on suur [13, 14]. Varasemad uuringud on näidanud, et C. deserticola polüsahhariidid kutsuvad esile melanogeneesi melanotsüütides, vähendavad oksüdatiivset stressi[15], leevendavad kognitiivset düsfunktsiooni, reguleerides antioksüdantseid ja põletikuvastaseid protsesse rottidel [16], kaitsevad PC12 rakke OGD/RP-indutseeritud vigastuste eest [17]. , suurendab ehhinakosiidide imendumist in vivo ja mõjutab soolestiku mikrobiotat [18].

Probiootikumid on elusad mittepatogeensed mikroorganismid, millel on piisavas koguses manustamisel kasu tervisele ja mis tagavad mikroobide tasakaalu seedetraktis [19]. *ey võib tugevdada mittespetsiifilisi rakulisi immuunvastuseid, mida iseloomustab makrofaagide, looduslike tapjarakkude (NK) aktiveerimine ja antigeenispetsiifilisus toksiliste T-lümfotsüütide suhtes ning erinevate tsütokiinide vabanemine tüvespetsiifilisel ja annusest sõltuval viisil [20 ]. Probiootilised tüved parandavad sooleepiteeli omadusi TJ modulatsiooni kaudu ning on näidatud, et spetsiifilised probiootilised tüved reguleerivad mutsiini ekspressiooni, mõjutades seeläbi limakihi omadusi ja reguleerides kaudselt soolestiku immuunsüsteemi [21]. Piimhappebakterite (LAB) ja Bifidobacterium tüved on peamised probiootikumid, mida on kasutatud paljudes valdkondades [22–26]. Nende tervisega seotud eelised on arvukad, kuna nende antioksüdantne võime on nende tervisega seotud funktsioonide oluline tegur[27]. Probiootikumid võivad kelaatida metalliioone, et vältida nende oksüdatsiooni katalüüsimist [28, 29]; nad võivad samuti suurendada antioksüdantsete ensüümide ekspressiooni [30, 31], toota erinevaid antioksüdantse toimega metaboliite [32, 33], vahendada antioksüdantide signaaliülekandeteid [34–36] ning reguleerida ensüüme, mis toodavad reaktiivseid hapniku liike (ROS) ja soolestiku mikroorganismide reaktsioon oksüdatiivsele stressile[37].

cistanche lill

Hiljutine uuring näitas, et Cistanche Deserticola polüsahhariidid võivad stimuleerida mõnede piimhappebakterite kasvu, mis võib olla kasulik inimeste tervisele [38]. Cistanche Deserticola polüsahhariidide sisaldus erineb aga Cistanche Tubulosa omast [7, 39] ja see erinevus võib põhjustada soolestiku mikroorganismidele erinevat mõju. Veelgi enam, kuigi Cistanche Deserticola polüsahhariidid võivad NRF2/HO-1 raja aktiveerimise kaudu vähendada oksüdatiivset stressi [15], võib ühe polüsahhariidi toime erineda mitme Cistanche Tubulosa kompositsiooni üldmõjust. Seega on vaja täpselt määratleda Cistanche Tubulosa vesiekstraktide mõju soolestiku mikroorganismidele. Lisaks suudavad PHG-d vastu seista ka oksüdatiivsele stressile [40] ja pärssida lipopolüsahhariidide poolt vahendatud põletikulisi reaktsioone, aktiveerides Keap1/Nrf2/HO-1 raja [41]. Seetõttu on Cistanche Tubulosa vesiekstrakti toime määramine väga väärtuslik. Lisaks viitavad Cistanche Deserticola vesiekstrakti teatud koostisosade mõju oksüdatiivsele stressile ja soolefloorale sellele, et oksüdatiivse stressi vastupanu võib olla korrelatsioonis soolestiku mikrofloora muutustega.

Et täita lünki teadmistes ülalmainitud teemadel, uurisime Cistanche Tubulosa vesiekstrakti mõju soolefloora häiretega hiirte soolestiku mikrobiootale. Need tulemused annavad väärtuslikku teavet võimalike mehhanismide kohta, mille kaudu Cistanche Tubulosa muudab soolefloorat ja annab soolestiku resistentsuse oksüdatiivse stressi suhtes.

2. Materjalid ja meetodid

2.1. Katseloomad.

Kokku osteti Xinjiangi meditsiiniülikooli katseloomade keskusest 18 SPF-klassi isast C57BL/6J hiirt, kaaluga 18–22 g, litsentsinumbriga SCXK (uus) 2018-0003. Neid hoiti puurides standardsetes tingimustes: 12-tunnine valguse/pimeduse fotoperiood, temperatuur 23 ± 2 kraadi ja niiskus 55 ± 5 protsenti. *loomadele toideti kaubanduslikku dieeti (51% lämmastikuvaba ekstrakti, 25% toorvalku, 4,6% toorrasva, 6,5% toortuhka, 4{20}}% toorkiudu ja 8,9% niiskust) ja kraaniveega. . * Loomi raviti vastavalt riiklike tervishoiuinstituutide laboriloomade hooldamise ja kasutamise juhendis kirjeldatud soovitustele.

2.2. Vesiekstrakti ekstraheerimine.

Kuivatatud viilud C. tubulosa, mida tarnib Hotan Dichen PharmaceuticalBiotechnology Co., Ltd., jahvatati pulbriks ja valiti graanulid, mille osakeste suurus oli vahemikus 20 kuni 40 silma. Ekstraheerimise tingimused olid järgmised: tahke ja vedeliku suhe 1:19, temperatuur 80 kraadi, mikrolaineaeg 6 minutit, ultraheli aeg 16 minutit, mikrolainevõimsus 400 W ja ultraheli võimsus 400 W. Vesiekstrakti põhikomponentide sisaldus mõõdeti HPLC-ga (Agilent 1260 Infinity II, California, USA). Lühidalt, ehhinakosiidi (0,2 mg/ml) ja akteosiidi (0,2 mg/mL) standardained lahustati 50% metanoolis, et kasutada võrdlusaine lahusena. Seejärel lahustati 1 g CT vesiekstrakti 100 ml 50% metanoolis ja jäeti 30 minutiks seisma. Ekstrakti lahust töödeldi ultraheliga 250 W ja 35 kHz juures 10 minutit ning seejärel tsentrifuugiti kiirusel 12, 000 p/min. Supernatant infiltreeriti 0, 45 μm mikropoorse filtrimembraaniga. Seejärel tuvastati võrdlusaine lahus ja filtraat HPLC abil järgmistes tingimustes: täiteainena oli oktadetsüülsilaaniga seotud silikageel, liikuv faas A metanool ja liikuv faas B 0,1 protsenti sipelghapet. Kolonni temperatuuriks määrati 30 °C. kraadi, määrati tuvastamise lainepikkuseks 330 nm ja süstimismaht oli 10 μL.

2.3. Eksperimendid.

Pärast ühenädalast kohanemist jagati 18 hiirt juhuslikult kuue rühma: A (tavaline, millele on lisatud keskmise annusega Cistanche Tubulosa vesiekstrakti), B (normaalne ilma Cistanche Tubulosa vesiekstraktita), C (mudel ilma vesiekstraktita), D (mudel, millele on lisatud suures annuses Cistanche Tubulosa vesiekstrakti), E (mudel, millele on lisatud keskmise annusega Cistanche Tubulosa vesiekstrakti) ja F (mudel, millele on lisatud väikeses annuses Cistanche Tubulosa vesiekstrakti). Rühmi töödeldi järgmiselt: normaalset rühma leotati tavalise soolalahusega, mudelrühma leotati tsefiksiimiga (30 mg/kg, Shiyao Group OuyiPharmaceutical Co., Ltd., Shijiazhuang, Hiina) ja tavalise soolalahusega, kõrge kõrgetasemelise soolalahusega. -annuse gruppi leotati tsefiksiimi ja 221,14 mg/kg Cistanche Tubulosa vesiekstraktiga, keskmise annuse gruppi leotati tsefiksiimi ja 165,54 mg/kg vesiekstraktiga ning väikese annusega gruppi leotati tsefiksiimi ja 110,57 mg/kg vesiekstrakti kohta. A-rühma leotati 165,54 mg/kg vesiekstraktiga ja tsefiksiimi ei lisatud. Tsefiksiimi manustati iga päev kell 12:00 ja teisi aineid iga päev kell 15:00. Katsete ajal hoiti C-, D-, E- ja F-rühmi soolehäirete mudelseisundis. *väljaheited koguti iga seitsme päeva järel steriilsele opereeritavale lauale ja säilitati temperatuuril –20 kraadi.

2.4. Hiirte käärsoole histopatoloogiline vaatlus.

Katse lõpus tapeti hiired emakakaela dislokatsiooniga ja nende käärsoole sisu koguti steriilsele opereeritavale lauale ja säilitati temperatuuril -80 kraadi; samal ajal fikseeriti käärsoole koeproovid 10-protsendilises neutraalses formaliinis. Seejärel dehüdreeriti proovid etanooli gradiendikontsentratsiooniga, hüaliniseeriti ksüleeniga, sisestati parafiini, lõigati osadeks ja värviti hematoksüliin-eosiiniga. Käärsoole limaskesta morfoloogilisi muutusi vaadeldi ja võrreldi optilise mikroskoobi abil. Mõõdeti villuse pikkus ja krüpti sügavus käärsooles ning arvutati villuse pikkuse ja krüpti sügavuse suhe (V/C väärtus) (51).

2.5. DNA ekstraheerimine ja raamatukogu ehitamine. DNA ekstraheeriti väljaheitest, kasutades EZNA®Soil DNA komplekti (Omega Bio-Tek, Norcross, GA, USA) vastavalt tootja protokollile. DNA kvaliteet määrati fluoromeetriga (QuantiFluor™-ST, Promega Corporation, USA). 16s rDNA V3-V4 piirkonna paarispraimerid kavandati piirkonna võimendamiseks ja 466 bp DNA fragmentide tootmiseks. *eespidine praimer oli 341F (-5-CCTACGGGNGGCWGCAG-3-) ja vastupidine praimer oli 806R (-5-GGACTACHVGGGTATCTAAT-3-). Iga PCR-i maht oli 25 μL, mis sisaldas 2,5 μL 10 × PCR puhvrit, 2 μL dNTP-sid, 1 μL iga praimerit ja 20–30 ng matriitsi DNA-d. *et, järjestusraamatukogude loomiseks kinnitati indekseeritud adapterid amplikonide otstesse. Raamatukogud valideeriti QuantiFluor™ fluoromeetriga ja kvantifitseeriti 10 nmol-ni.

Tistanches sisalduv akteosiid võib immuunsüsteemi tugevdada

2.6. 16s rRNA geenide järjestamine ja mikroobide kogukonna analüüs.

2 × 250 bp paarisotsa andmete saamiseks kasutati Illumina platvormi (Illumina MiSeq). Operatiivsed taksonoomilised üksused (OTU-d) saadi Uparse'i tarkvara abil standardse klastrite abil 97-protsendilise sarnasusega. OTUde joondamiseks Greengene'i andmebaasi versiooniga 13.5 ja liikide annotatsiooni tegemiseks kasutati RDP klassifikaatori naiivset Bayesi määramisalgoritmi. Soolestiku mikrobiota alfa mitmekesisus arvutati Shannoni ja Simpsoni indeksite abil ning rühmadevahelisi erinevusi analüüsiti lineaarse diskriminantanalüüsi efekti suuruse (LEfSe) abil. Beeta mitmekesisust analüüsiti Brady-Curtise erinevuste põhikoordinaatide analüüsi (PCoA) abil. PICRUSt2 kasutati soolestiku mikrobioomi mikroobse metaboolse võimekuse hindamiseks [42].

2.7. Statistiliste andmete analüüs.

Ühesuunalise ANOVA jaoks kasutati SPSS 20 ja katseandmed väljendati kui X ± S; X näitab keskmist väärtust ja S tähistab standardhälvet.

3. Tulemused

3.1. Cistanche Tubulosa vesiekstrakti mõju käärsoole morfoloogiale.

Tüüpilised ühendid (ehhinakosiid ja akteosiid) ja nende kontsentratsioonid Cistanche Tubulosa ekstraktis valideeriti HPLC abil (joonis S1). Vesiekstrakti soolele mõju määramiseks uurisime pärast töötlemist Cistanche Tubulosa vesiekstraktiga käärsoole villi pikkust ja süvendite sügavust. Käärsoole villid normaalsetes ja suure annusega rühmades (A, B ja D) olid pikemad ja sõrmetaolised, samas kui mudel- ja väikese annuse rühmade (C ja F) käärsoole villid olid lühikesed ning käärsoole tipud villid olid katki (joonis 1). Sellest lähtuvalt suurendas suures annuses Cistanche Tubulosa vesiekstrakt soolehäiretega hiirtel märkimisväärselt käärsoole pikkust ja vähendas süvendite sügavust võrreldes mudelrühma hiirtega (P < 0.01).="" seevastu="" süvendi="" sügavus="" ei="" erinenud="" oluliselt="" suure="" annusega="" rühma="" ja="" normaalse="" rühma="" vahel="" (p=""> 0, 05) (tabel S1). Need tulemused näitasid, et Cistanche Tubulosa vesiekstrakti suur annus võib parandada soolehäiretega hiirte käärsoole morfoloogiat.

3.2. Cistanche Tubulosa vesiekstrakti mõju soolestiku mikrobiota mitmekesisusele.

Teostasime 16s rRNA geenide sekveneerimise, et uurida käärsoolesisese morfoloogiliste muutuste võimalikku põhjust ja uurida soolestiku mikrobiota muutusi pärast töötlemist CT vesiekstraktiga. Toorandmetest saadi keskmiselt 100 553 efektiivset märgist, vahemikus 77 734 kuni 125 144 (tabel S2). Need sildid koondati 4932 OTU-sse (tabel S3). Seejärel analüüsisime Theseuse põhjal soolestiku mikrobiota mitmekesisust. Shannoni ja Simpsoni indeksid ei näidanud erinevust A-rühma (normaalne Cistanche Tubulosa vesiekstraktiga) ja B-rühma (normaalne ilma CT-vesiekstraktita) vahel (joonis 2(a)). *on näidatud, et tsefiksiimravita hiirtel ei pruugi CT vesiekstraktil olla täiendavat kasulikku või kahjulikku mõju soolestiku mikrobiota mitmekesisusele. Mudelrühma (C) mitmekesisus näitas aga tavarühmadega võrreldes vähenevat trendi. * Suure ja keskmise annuse CT vesiekstraktidega töödeldud hiirtel ilmnesid mitmekesisuse taastumise tunnused, samas kui hiirtel, keda raviti väikese annusega CT vesiekstraktiga, sellist nähtust ei täheldatud (joonis 2 (a)). Samal ajal näitas PCoA, et normaalsetes rühmades (A ja B) ja soolehäirete rühmas, kellele manustati suurtes annustes (D) ja keskmise annusega (E) CTavesiekstraktid, olid proovidevahelised vahemaad lühemad kui näidisrühmas ja väikeses annuses CTavesiekstrakti toidulisandite rühm (F) (joonis 2(b)). Need tulemused näitasid, et CT vesiekstrakt võib aidata parandada soolestiku mikrobiota mitmekesisust soolehäiretega hiirtel.

3.3. Muutused soolestiku mikrobiota koostises, mida on töödeldud Cistanche Tubulosa vesiekstraktiga.

Mikrobioota koostise profiile võrreldi erinevate rühmade vahel. Varjupaiga tasandil oli proteobakterite suhteline arvukus mudelrühmas kõrgem kui teistes rühmades (joonis 3 (a)). Proteobakterite arvu suurenemine viitas sellele, et tsefiksiim muutis mudelhiirte mikrobioomi ja et CT vesiekstrakt võib soolestiku mikrobiootale kasu tuua, kuna proteobakterite suurenenud levimus on korrastamata soolefloora sõlmmarker [43–45]. Lisaks vähenes perekonna tasandil Lactobacillus'e suhteline arvukus mudelrühmas võrreldes normaalsete ja suurte annustega rühmadega; see aga suurenes võrreldes keskmise ja väikese annuse rühmaga (joonis 3 (b)). Need tulemused näitasid, et suures annuses CTaqueous ekstrakt võib soodustada mõne perekonna Lactobacillus bakterite kasvu.

Uuritud rühmade vaheline mikrobioot määrati vastavalt LEfSe analüüsile. See analüüs näitas, et pärast ravi tsefiksiimiga suurenes Turicibacter, Alphaproteobacteria, Acidobacteria, Betaproteobacteriales ja Chloroflflexi suhteline arvukus märkimisväärselt, samas kui lactobacillus'e, Eubacterium{0}}nodatum{1}}rühma suhteline arvukus suurenes märkimisväärselt. cardiales ja Christensenellaceae_R-7_ rühm vähenes oluliselt võrreldes normaalse rühmaga (joonis 4(a)). Hämmastav on see, et kui mudelrühma täiendati suure annusega CT vesiekstraktiga, suurenes Muribaculaceae, Lactobacilluse, Kineosporiaceae, Eubacterium no datum rühma ja Pedobacter'i suhteline arvukus võrreldes mudelrühma omadega märkimisväärselt. Samal ajal vähenes Rhodobacter, Ruminococcaceae UCG_013, Roseburia, Ruminiclostridium_9 ja Candidatus Stoquefifichus suhteline arvukus märkimisväärselt võrreldes mudelrühma kuuluvatega (joonis 4(b)).

3.4. Soolestiku mikrobiota funktsioonid, mis on seotud raviga Cistanche Tubulosa vesiekstraktiga.

Soolestiku mikrobiota metaboolsete radade ennustamiseks kasutasime tarkvara PICRUSt2 ja teiste rühmade muutuste analüüsimiseks kasutati tavarühma. Tsefiksiimravi ajal suurenes etüülbenseeni lagunemise suhteline arvukus, siderofoorrühma mitteribosomaalsete peptiidide biosüntees ja ksenobiootikumide metabolism tsütokroom P450 radade kaudu; pärast töötlemist suure ja keskmise annusega Cistanche Tubulosa vesiekstraktidega taastus nende suhteline arvukus normaalsele tasemele. Samal ajal vähenes tsefiksiimravi ajal tsüanoaminohapete metabolismi raja suhteline arvukus; see aga suurenes pärast töötlemist suure annusega CT vesiekstraktiga. Lisaks olid üldiselt muutused erinevates metaboliitide radades pärast ravi tsefiksiimiga olulised võrreldes tavarühma muutustega; Cistanche Tubulosa vesiekstrakti lisamine suutis siiski vältida liigseid muutusi (joonis 5).

4. Arutelu

Käärsoole morfoloogiat saab muuta kasv, seedimine ja imendumine, immuunregulatsioon ja soolekahjustuse parandamine [46–50]. V/C suhe võib igakülgselt kajastada sooletrakti seedeseisundit ja on otseselt võrdeline sooletrakti seede- ja neeldumisvõimega [51, 52]. Käesolevas uuringus näitasid villi ja retsessusbiopsia ning statistilised andmed, et suure annusega vesiekstrakt võib osaliselt parandada käärsoole defektset morfoloogiat. Et uurida, kuidas vesiekstrakt muudab soolestiku morfoloogiat ja mõjutab soolestiku mikrobiotat, töötasime soolestiku mikrofloora muutustest tagasi. Leidsime, et tsefiksiimravi korral suurenes tsefiksiimiga ravimisel võrreldes tsefiksiimravita raviga Proteobakterite (proteobakterite) suhteline arvukus sõlmpunkti markerite (Bacteroidetes ja Firmicutes) suhtelises arvukuses olulisi muutusi, kuigi need antioksüdandid in vitro [56] ja võib soodustada mõnede piimhappebakterite kasvu, mis võib olla kasulik peremeesorganismi tervisele [43]. Paralleelselt on Muribaculaceae probiootilised organismid, mis on seotud pikaealisusega [57]. Need viitasid sellele, et mehhanism, mille abil CT vesiekstrakt parandab soolestiku mikrobiotat, võib olla probiootiliste organismide kasvu soodustamine või kaitse. Veel üks tähelepanu vääriv bakter oli bakter YE57. Kuigi suures annuses CTaqueous ekstrakt soodustas käesolevas uuringus bakteri YE57 suhtelist arvukust (joonis 4), on varasemad uuringud leidnud, et selle arvukus oli normaalses soolestikus suurem kui kõrge kontsentratsiooniga taimetee jääkidega töödeldud soolestikus. 58] ja selle arvukus vähenes pärast Bacillus licheniformis'e ja XOS (ksülooligosahhariidide) kombineerimist [59]. Seega väärib selle bakteri roll soolestiku mikrobiotas edasist uurimist. Lisaks võib selle uuringu suhteliselt väike proovide arv põhjustada valepositiivseid ja valenegatiivseid tulemusi ning tuvastatud bakterimarkerite kinnitamiseks soovitatakse tulevasi uuringuid suuremate proovide kohta.

Cistanche Tubulosa vesiekstrakti koostis võib olla oluline selle mõju tõttu soolehäiretega hiirte soolestiku mikrobiota koostisele ja funktsionaalsetele muutustele. PHG-d on Cistanche Deserticola ja Cistacnche Tubulosa levinud aktiivsed komponendid ning ehhinakosiid tuvastati Cistache peamise PNG-na. Tubulosa [60]. Viimastel aastakümnetel on ehhinakosiidil näidatud mitmeid farmakoloogilisi toimeid, nagu vananemisvastane ja neuroprotektiivne toime, südamefunktsiooni parandamine, hüperlipideemia ja hüperglükeemia vähendamine ning rasvumisest põhjustatud diabeedi ja metaboolse sündroomi ennetamine [53, 61–65]. . Tegelikult tuvastasime muutused soolestiku mikrobiota metaboolsetes radades.* Tsefiksiimi töötlemine viis bakterite rikastamiseni, mis on seotud etüülbenseeni lagunemise ja siderofoorrühma mitteribosomaalsete peptiidide biosünteesiga, samal ajal kui ravi suure ja keskmise annusega Cistanche Tubulosa vesiekstrakt võib neid muutusi leevendada, mis näitab, et see ekstrakt leevendas nende funktsioonidega seotud bakterite kogukonda. Lisaks näitas tsüanoaminohapete metabolismi rajaga seotud suurenenud bakterite rikastumine suure annuse vesiekstraktiga töötlemisel ja selle vähenenud rikastumine mudelhiirtel, et Cistanche Tubulosa vesiekstrakt võib soodustada tsüanoaminohappe metabolismi. *Asjakohaste metaboliitide muutused võivad anda sellele vesiekstraktile farmakoloogilise toime.

cistanche ürt

Kuigi mehhanism, mille abil Cistanche Tubulosa vesiekstrakt muudab soolestiku mikrobiota koostist ja funktsiooni, on keeruline, on võimaliku mehhanismi kohta spekuleerida mõningaid vihjeid. On teatatud, et nii piimhappebakterid kui ka Cistanche Tubulosa vesiekstraktid võivad antagoniseerida oksüdatiivset stressi. Põletiku ajal tekkiv oksüdatiivne stress on tavaline tegur, mis süvendab soolehäireid, vähendades tugevalt soolestiku mikroobide mitmekesisust ja soodustades spetsiifiliste bakterite levikut (4). Vastupidi, reaktiivsed hapnikuliigid soodustavad ka bakterirühmade selektiivset kasvu nitraadi ja tetrationaadi hingamise kaudu. [66–68]; Näiteks bakterid perekonnast Enterobacteriaceae võivad kiiresti kasvada soolefloora koostise muutuste tagajärjel põletiku ajal oksüdatiivsetes tingimustes [69, 70]. Enamik elusorganisme arendab hapnikuradikaalide eemaldamiseks ensümaatilisi kaitsemehhanisme, mitteensümaatilisi antioksüdantseid kaitsemehhanisme ja parandusmehhanisme [71]. Kuid need looduslikud antioksüdandid ei ole üldiselt piisavad elusorganismide oksüdatiivsete kahjustuste vältimiseks. Oksüdatsiooni vähendamiseks on laialdaselt kasutatud mitmeid täiendavaid sünteetilisi antioksüdante, sealhulgas butüülitud hüdroksüanisooli ja butüülitud hüdroksütolueeni, kuid nende ohutus on seatud kahtluse alla [72, 73]. Seetõttu on teadlased pöördunud looduslikult esinevatest ainetest saadud ohutumate ja looduslikumate antioksüdantide leidmise poole. Kuna nii polüsahhariidid kui ka piimhappebakterid suudavad kõrvaldada oksüdatiivset stressi, vajab Cistanche Tubulosa vesiekstraktide täpse antioksüdatiivse mehhanismi määramine soolestiku mikrobiootas tulevikus täiendavat uurimist.

Kokkuvõtteks leidsime, et Cistanche Tubulosa vesiekstrakt suutis parandada soolestiku mikrobiootat soolehäiretega hiirtel, edendades mitmekesisust, aeglustades metaboolseid muutusi ja remodelleerides soolestiku mikrobiota struktuuri ning need tulemused võivad anda võrdlusaluse selle arendamiseks. seotud ravimitega tulevikus.

Andmete kättesaadavus

Operatiivsete taksonoomiliste üksuste statistika iga selle uuringu tulemuste toetamiseks kasutatud prooviandmete hulgas on lisatud täiendava teabe failidesse ja selle uuringu tulemuste toetamiseks kasutatud 16s rRNA järjestusandmed avaldatakse pärast avaldamist.

Huvide konfliktid

Autorid kinnitavad, et neil ei ole huvide konflikti.

Tänuavaldused

Seda uuringut toetasid rahaliselt Hiina riikliku loodusteaduste fondi (81860766) stipendiumid.

Täiendavad materjalid

Joonis S1: Cistanche tubulosa vesiekstrakti HPLC tuvastamine. ( a ) Ehhinakosiidi ja akteosiidi piik võrdlusmaterjalis ilmub eraldi 5, 066 minuti ja 9, 988 minuti pärast. (b) *ehinakosiidi ja akteosiidi piik vesiekstraktis ilmub eraldi 5,097 minuti ja 10,076 minuti järel ning kontsentratsioonid on eraldi 236 mg/g ja 12,7 mg/g. Tabel S1: käärsoole villi pikkus ja süvendite sügavus. Tabel S2: 16S rRNA sekveneerimisandmete statistiline teave. Tabel S3: iga valimi operatiivsete taksonoomiliste üksuste statistika. (lisamaterjal).

Viited

[1] A. Heintz-Butchart ja P. Wilmes, "Inimese soolestiku mikrobioom: funktsioon on oluline", Trends in Microbiology, vol. 26, nr. 7, lk 563–574, 2018.

[2] CA Thaiss, N. Zmora, M. Levy ja E. Elinav, "The microbiome and innate immunity", Nature, vol. 535, nr. 7610, lk 65–74, 2016.

[3] G. Quaranta, M. Sanguinetti ja L. Masucci, "Fecal microbiota transplantation: a potentsiaalsed vahendid inimeste naiste reproduktiivtrakti haiguste raviks", Frontiers in Immunology, vol. 10, lk. 2653, 2019.

[4] GA Weiss ja T. Hennet, "Intestinaalse düsbioosi mehhanismid ja tagajärjed", Cellular and Molecular Life Sciences, vol. 74, nr. 16, lk 2959–2977, 2017.

[5] Y. Li, Y. Peng, P. Ma jt, "Cistanche tubulosa ekstrakti antidepressantidelaadsed mõjud kroonilistele ettearvamatutele stressirohtudele soolestiku mikrobiota homöostaasi taastamise kaudu", Frontiers in Pharmacology, vol. 9, lk. 967, 2018.

[6] L. Fan, Y. Peng, J. Wang, P. Ma, L. Zhao ja X. Li, "Cistanche tubulosa varte totalglükosiidid leevendavad depressioonilaadset käitumist: fütokemikaalide ja soolestiku mikrobiota kahesuunaline koostoime, Fütomeditsiin, vol. 83, artikli ID 153471, 2021.

[7] Y. Li, Y. Peng, M. Wang, P. Tu ja X. Li, "Cistanche herba vesiekstrakti inimese gastrointestinaalne metabolism invitro: metaboolse profiili selgitamine, mis põhineb ulatuslikul metaboliitide tuvastamisel maomahlas, soolemahl, inimese soolebakterid ja soolestiku mikrosoomid," Journal of Agricultural and Food Chemistry, vol. 65, nr. 34, lk 7447–7456, 2017.

[8] H. Wang, Y. Sun, W.-C. Ye et al., "Antioxidative phenylethanoid and phenolic glycosides from Picrorhiza Scrophularia flora", Chemical and Pharmaceutical Bulletin, vol. 52, nr. 5, lk 615–617, 2004.

[9] S.-L. Ji, K.-K. Cao, X.-X. Zhao et al., "Fenüületanoidglükosiidide antioksüdantne aktiivsus glutamaadiga indutseeritud neurotoksilisusel", Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry, vol. 83, nr. 11, lk 2016–2026, 2019.

[10] Q. Wang, J. Dong, W. Lu jt, "Cistanche tubulosa fenüületanoolglükosiidid parandasid reproduktiivset düsfunktsiooni, reguleerides munandite steroide CYP450-3 -HSDpathway kaudu", Journal of Ethnopharmacology, vol. 251, artikli ID112500, 2020.

[11] S.-P. Teie, L. Ma, J. Zhao, S.-L. Zhang ja T. Liu, "Cistanche tubulosa fenüületanoolglükosiidid pärsivad maksa tähtrakkude aktivatsiooni ja blokeerivad signaaliradade juhtivust TGF- 1/smad-is kui potentsiaalsed maksafibroosivastased ained", Molecules, vol. 21, nr. 1, lk. 102, 2016.

[12] S.-P. Teie, J. Zhao, L. Ma, M. Tudimat, S.-L. Zhang ja T. Liu, "Cistanche tubulosa fenüületanoidglükosiidide ennetav toime veise seerumi albumiinist põhjustatud maksafibroosile rottidel", DARU Journal of Pharmaceutical Sciences, vol. 23, nr. 1, lk. 52, 2015.

[13] T. Morikawa, H. Xie, Y. Pan jt, "A Review of Biologicalactive Natural products from a kõrbetaime Cistanche tubulosa", Chemical and Pharmaceutical Bulletin, vol. 67, nr. 7, lk 675–689, 2019.

[14] J. Li, J. Li, A. Aspire jt, "Cistanche tubulosa fenüületanoidglükosiidid inhibeerivad B16-F10 rakkude kasvu nii in vitro kui ka in vivo, indutseerides apoptoosi mitokondrite kaudu sõltuv rada," Journal of Cancer, vol. 7, nr. 13, lk 1877–1887, 2016.

[15] Y. Hu, J. Huang, Y. Li jt, "Cistanche deserticola polüsahhariid indutseerib melanogeneesi melanotsüütides ja vähendab oksüdatiivset stressi NRF2/HO-1 raja aktiveerimise kaudu", Journal of Cellular and Molecular Medicine, vol. 24, nr. 7, lk 4023–4035, 2020.

[16] S. Peng, P. Li, P. Liu jt, "Cistanches leevendab sevofluraanist põhjustatud kognitiivset düsfunktsiooni, reguleerides PPAR-c-st sõltuvat antioksüdanti ja põletikuvastast toimet rottidel", Journal of Cellular and Molecular Medicine, vol. 24, nr. 2, lk 1345–1359, 2020.

[17] Y. Liu, H. Wang, M. Yang jt, "Cistanche deserticola polüsahhariidid kaitsevad PC12 rakke OGD/RP-indutseeritud vigastuste eest", Biomedicine & Pharmacotherapy, vol. 99, lk 671–680, 2018.

[18] Z. Fu, L. Han, P. Zhang jt, "Cistanche polüsahhariidid suurendavad ehhinakosiidide absorptsiooni in vivo ja mõjutavad soolestiku mikrobiotat", International Journal of Biological Macromolecules, vol. 149, lk 732–740, 2020.

[19] NT Williams, "Probiotics", American Journal of Health-System Pharmacy, kd. 67, nr. 6, lk 449–458, 2010.

[20] R. Ashraf ja NP Shah, "Immuunsüsteemi stimulatsioon probiootiliste mikroorganismide poolt", Critical Reviews in Food Science and Nutrition, vol. 54, nr. 7, lk 938–956, 2014.

[21] G. La Fata, P. Weber ja MH Mohajeri, "Probiotics and the gut immune system: indirectregulation", Probiotics and antimicrobial Proteins, vol. 10, ei. 1, lk 11–21, 2018.

[22] MA Zocco, LZ dal Verme, F. Cremonini et al., "Efficacy of lactobacillus GG in säilitada haavandilise koliidi remissioon", Alimentary Pharmacology and 8erapeutics, vol. 23, nr. 11, lk 1567–1574, 2006.

[23] MJ Saez-Lara, C. Gomez-Llorente, J. Plaza-Diaz ja A. Gil "*e probiootiliste piimhappebakterite ja bifidobakterite roll põletikulise soolehaiguse ja muude seotud haiguste ennetamisel ja ravis: süstemaatiline ülevaade randomiseeritud kliinilistest inimestel tehtud kliinilistest uuringutest," BioMed Research International, vol. 2015, artikli ID 505878, 15 lehekülge, 2015.

[24] MAO Dawood, S. Koshio, M. Ishikawa jt, "Lactobacillus rhamnosus'e ja/või lactococcus lactis'e toidulisandite mõju punase merilatika kasvule, soolestiku mikrobiootale ja immuunvastustele, Pagrus major", Fish & ShellfishImmunology, vol. 49, lk 275–285, 2016.

[25] A. Sivan, L. Corrales, N. Hubert jt, "Commensal bifidobacterium soodustab kasvajavastast immuunsust ja hõlbustab PD-L1-vastast efektiivsust", Science, vol. 350, nr. 6264, lk 1084–1089,2015.

[26] PJ Whorwell, L. Altringer, J. Morel jt, "Effifficacy of an kapseldatud probiootikumi Bifidobacterium infant is 35624 in women in ärritunud soole sündroom", 8e American Journal of Gastroenterology, vol. 101, nr. 7, lk 1581–1590, 2006.

[27] Y. Wang, Y. Wu, Y. Wang jt, "Probiootiliste bakterite antioksüdantsed omadused", Nutrients, vol. 9, nr. 5, lk. 521, 2017.

[28] JMC Gutteridge, R. Richmond ja B. Halliwell, "Rauaga katalüüsitud hüdroksüülradikaalide moodustumise inhibeerimine superoksiidist ja lipiidide peroksüdatsioon desferrioksamiini poolt", Biochemical Journal, vol. 184, nr. 2, lk 469–472, 1979.

[29] E. Deriu, JZ Liu, M. Pezeshki jt, "Probiootilised bakterid vähendavad salmonella Typhimurium'i soolestiku kolonisatsiooni, konkureerides raua pärast", Cell Host & Microbe, vol. 14, nr. 1, lk 26–37, 2013.

[30] T. Kullisaar, M. Zilmer, M. Mikelsaar jt, "Two antioxidative lactobacilli strains as promissioning probiotics", International Journal of Food Microbiology, vol. 72, nr. 3, lk 215–224, 2002.

[31] JG LeBlanc, S. del Carmen, A. Miyoshi jt, "Superoksiidi dismutaasi ja katalaasi produtseerivate piimhappebakterite kasutamine TNBS-is indutseeritud Crohni tõvega hiirtel", Journal of Biotechnology, vol. 151, nr. 3, lk 287–293, 2011.

[32] M. Rossi, A. Amaretti ja S. Raimondi, "Folaadi tootmine probiootiliste bakterite poolt", Nutrients, vol. 3, ei. 1, lk 118–134,2011.

[33] A. Pompei, L. Cordisco, A. Amaretti jt, "Folaatide tootmist tootvate bifidobakterite manustamine suurendab folaadi staatust Wistari rottidel", 8e Journal of Nutrition, vol. 137, nr. 12, lk 2742–2746, 2007.

[34] L.-X. Wang, K. Liu, DW Gao ja JK Hao, "Protectiveeffffects of two Lactobacillus Plantarum strains in hyperlipidemic hiir", World Journal of Gastroenterology, vol. 19, nr. 20, lk 3150–3156, 2013.

[35] EO Petrof, K. Kojima, MJ Ropeleski jt, "Probiootikumid inhibeerivad tuumafaktor-κB ja indutseerivad soojusšoki valke käärsoole epiteelirakkudes proteasoomi inhibeerimise kaudu", Gastroenterology, vol. 127, nr. 5, lk 1474–1487, 2004.

[36] A. Seth, F. Yan, DB Polk ja RK Rao, "Probiootikumid parandavad vesinikperoksiidist põhjustatud epiteeli barjääri häireid PKC- ja MAP-kinaasist sõltuva mehhanismi tõttu", American Journal of Physiology-Gastrointestinal and maksa Physiology , vol. 294, nr. 4, lk G1060–G1069, 2008.

[37] M. G´omezGuzm´an, M. Toral, M. Romero jt, "Antihypertensive effects of probiotics Lactobacillus strains in spontaanselt hüpertensiivsed rotid", Molecular Nutrition & FoodResearch, vol. 59, nr. 11, lk 2326–2336, 2015.

[38] H. Zeng, L. Huang, L. Zhou, P. Wang, X. Chen ja K. Ding, "Cistanchedeserticola YC Ma. isoleeritud galaktoglukaan ja selle bioaktiivsus soolestiku bakteritüvedele", Carbohydrate Polymers, vol. 223, artikli ID 115038, 2019.

[39] S. Zheng, X. Jiang, L. Wu, Z. Wang ja L. Huang, "Cistanche herba keemiline ja geneetiline diskrimineerimine UPC-QTOF/MS ja DNA vöötkoodi alusel", PLoS One, vol. 9, nr. 5, artikli ID e98061, 2014.

[40] M. Li, T. Xu, F. Zhou jt, "Nelja fenüületanoidglükosiidi neuroprotektiivne toime H2O2-indutseeritud apoptoosile PC12 rakkudel Nrf2/ARE raja kaudu", International Journal of Molecular Sciences , vol. 19, nr. 4, lk. 1135, 2018.

[41] A. Wu, Z. Yang, Y. Huang jt, "Callicarpa kwangtungensis'est eraldatud looduslikud fenüületanoidglükosiidid vähendasid lipopolüsahhariidide poolt vahendatud põletikulist vastust, aktiveerides RAW 264-s Keap1/Nrf2/HO258 raja. makrofaagide rakk," Journal of Ethnopharmacology, vol. 258, artikli ID 112857, 2020.

[42] GM Douglas, VJ Maffffei, JR Zaneveld jt, "PICRUSt2 for ennustamine metagenoomi funktsioonide jaoks", Nature Biotechnology, vol. 38, nr. 6, lk 685–688, 2020.

[43] H.-L. Li, L. Lu, X.-S. Wang et al., "Alteration of soolestiku mikrobiota ja põletikuliste tsütokiinide/kemokiinide profiilid 5-fluorouratsiili põhjustatud intestinaalse mukosiidi korral", Frontiers in Cellular and infektsiooni Microbiology, vol. 7, lk. 455, 2017.

[44] M. Pammi, J. Cope, PI Tarr jt, "Soolte düsbioos enneaegsetel imikutel enne nekrotiseerivat enterokoliiti: süstemaatiline ülevaade ja metaanalüüs", Microbiome, vol. 5, ei. 1, lk. 31. 2017.

[45] N.-R. Shin, TW When ja J.-W. Bae, "Proteobakterid: düsbioosi mikroobne signatuur soolestiku mikrobiotas", Trends in Biotechnology, vol. 33, nr. 9, lk 496–503, 2015.

[46] M. de Oliveira Bel´em, CP Cirilo, AP de Santi-Rampazzoet al., "Toitumise piirangutest põhjustatud soolestiku morfoloogia kohandused parandavad rottide toiteväärtust vananemisprotsessi ajal", Experimental Gerontology, vol. 69, lk 85–93, 2015.

[47] B. Potsic, N. Holliday, P. Lewis, D. Samuelson, V. DeMarco ja J. Neu, "Glutamiini lisamine ja deprivatsioon: mõju kunstlikult kasvatatud roti peensoole morfoloogiale", Pediatric Research, vol. 52, nr. 3, lk 430–436, 2002.

[48] ​​JL Daniels, RJ Bloomer, M. van der Merwe, SL Davis, KK Buddington ja RK Buddington, "Soolestiku kohandused erinevate dieetide kombinatsiooniks vastupidavustreeningutega ja ilma", Rahvusvahelise Sporditoitumise Ühingu ajakiri, vol. 13, nr. 1, lk. 35, 2016.

[49] L. Muñoz, MJ Borrero, M. Ubeda jt, "Düsbioosi põhjustatud soolestiku immuunsüsteemi düsregulatsioon soodustab tsirroosiga rottidel barjääri katkemist ja bakterite translokatsiooni", Hepatology, vol. 70, nr. 3, lk 925–938, 2019.

[50] X. Li, Y. Wu, Z. Xu et al., "Effects of hetiao Jianping decoction on intestinal vigastus and reparation in rotts with antibiootikum-asssociated diarrhea", Medical Science Monitor, vol. 26, artikli IDe921745, 2020.

[51] Y. Xie, F. Ding, W. Di et al., "Rasvarikka dieedi mõju soolestiku tüvirakkudele ja epiteeli barjääri funktsioonile keskealistel emastel hiirtel", Molecular Medicine Reports, vol. 21, nr. 3, lk 1133–1144, 2020.

[52] BL Bivolarski ja EG Vachkova, "Küülikute võõrutamisega seotud morfoloogilised ja funktsionaalsed sündmused", Journal of Animal Physiology and Animal Nutrition, vol. 98, nr. 1, lk 9–18, 2014.

[53] H. Shimoda, J. Tanaka, Y. Takahara, K. Takemoto, S.-J. Shan ja M.-H. Su, "*e Hiina traditsioonilise toormeditsiini Cistanchetubulosa ekstrakti hüpokolesteroleemilised toimed hiirtel", 8e American Journal of Chinese Medicine, vol. 37, nr. 6, lk 1125–1138, 2009.

[54] RE Ley, PJ Turnbaugh, S. Klein ja JI Gordon, "Inimese soolestiku mikroobid seotud rasvumisega", Nature, vol. 444, nr. 7122, lk 1022-1023, 2006.

[55] J.-Y. Kim, YM Kwon, I.-S. Kim et al., "Pruunvetika laminaria japonica lisamise mõju IgG, triglütseriidide ja kolesterooli kontsentratsioonile seerumis ning soolestiku mikrobiota koostisele rottidel", Frontiers in Nutrition, vol. 5, lk. 23. 2018.

[56] W. Zhang, J. Huang, W. Wang jt, "Cistanche tubulosa polüsahhariidide ekstraheerimine, puhastamine, iseloomustamine ja antioksüdantne toime", International Journal of BiologicalMacromolecules, vol. 93, lk 448–458, 2016.

[57] M. Sibai, E. Altuntas¸, B. Yıldırım, G. ¨Ozt¨urk, S. Yıldırım ja T. Demircan, "Mikrobioom ja pikaealisus: pikaealisusega seotud Muribaculaceae suur arvukus pikaealise närilise Spalax leucodoni soolestikus", OMICS: A Journal of IntegrativeBiology, vol. 24, nr. 10, lk 592–601, 2020.

[58] Y. Xie, Z. Chen, D. Wang jt, "Kääritatud taimetee jääkide mõju kuumastressi all olevate holsteini mullikate soolestiku mikrobiota omadustele", Frontiers in Microbiology, vol. 11, lk. 1014, 2020.

[59] Y. Li, M. Liu, H. Liu jt, "Bacillus licheniformis zhengchangshengi ja ksülooligosahhariidide kombineeritud suukaudsed toidulisandid parandavad kõrge rasvasisaldusega dieedist põhjustatud rasvumist ja moduleerivad rottide soolestiku mikrobiotat", BioMed Research International, vol. . 2020, artikli ID 9067821, 17 lehekülge, 2020.

[60] Y. Jiang ja P.-F. Tu, "Cistanche liikide keemiliste koostisosade analüüs", Journal of Chromatography A, vol. 1216, nr. 11, lk 1970–1979, 2009.

[61] F. Li, Y. Yang, P. Zhu jt, "Ehhinakosiid soodustab luude taastumist, suurendades OPG/RANKL suhet MC3T3-E1 rakkudes", Fitoterapia, vol. 83, nr. 8, lk 1443–1450, 2012.

[62] F. Tang, Y. Hao, X. Zhang ja J. Qin, "Ehhinakosiidi mõju neerufibroosile TGF- 1/Smadsi signaaliraja inhibeerimise teel diabeetilise nefropaatia DB/DB hiirte mudelis ”, Drug Design, Development and 8erapy, vol. 11, lk 2813–2826, 2017.

[63] W.-T. Xiong, L. Gu, C. Wang, H.-X. Sun ja X. Liu, "Cistanche tubulosa antihüperglükeemilised ja hüpolipideemilised toimed II tüüpi diabeediga DB/DB hiirtel", Journal of Ethnopharmacology, vol. 150, nr. 3, lk 935–945, 2013.

[64] X.-x. Bao, H.-h. Ma, H. Ding, W.-w. Li ja M. Zhu, "Hiina taimsete ravimite valemi esialgne optimeerimine, mis põhineb neuroprotektiivsel toimel rotenoonist põhjustatud Parkinsoni tõve rotimudelis", Journal of IntegrativeMedicine, vol. 16, nr. 4, lk 290–296, 2018.

[65] Y. Chen, Y.-Q. Li, J.-Y. Fang, P. Li ja F. Li, "Osteoporoosi samaaegse eksperimentaalse mudeli loomine koos Alzheimeri tõvega rottidel ning ehhinakosiidi ja Cistanche tubulosa akteosiidi kahekordne toime", Journal of Ethnopharmacology, vol. 257, artikli ID 112834, 2020.

[66] M. Hensel, AP Hinsley, T. Nikolaus, G. Sawers ja B. C. Berks, "*e geneetiline alus tetrationaathingamisel Salmonella Typhimuriumis", Molecular Microbiology, vol. 32, nr. 2, lk 275–287, 1999.

[67] SE Winter, P. Thiennimitr, MG Winter et al., "Soolepõletik annab salmonelloosi hingamisteede elektronaktseptori", Nature, vol. 467, nr. 7314, lk 426–429, 2010.

[68] SE Winter, MG Winter, MN Xavier jt, "peremeesorganismist saadud nitraat suurendab E. coli kasvu põletikulises soolestikus", Science, vol. 339, nr. 6120, lk 708–711, 2013.

[69] C. Lupp, ML Robertson, ME Wickham jt, "Peremeesorganismi poolt vahendatud põletik häirib soolestiku mikrobiotat ja soodustab Enterobacteriaceae ülekasvu," Cell Host &Microbe, vol. 2, ei. 2, lk 119–129, 2007.

[70] B. Stecher, R. Robbiani, AW Walker jt, "Salmonellaenterica serovar Typhimurium kasutab põletikku, et konkureerida soolestiku mikrobiotaga", PLoS Biology, vol. 5, ei. 10, lk e244–2189, 2007.

[71] V. Mishra, C. Shah, N. Mokashe, R. Chavan, H. Yadav ja J. Prajapati, "Probiootikumid kui potentsiaalsed antioksüdandid: süstemaatiline ülevaade", Journal of Agricultural and Food Chemistry, vol. 63, nr. 14, lk 3615–3626, 2015.

[72] JMP Mart´ın, PF Freire, L. Daimiel jt, "Antioksüdant, butüülitud hüdroksüanisool tugevdab propüülparabeeni toksilisi toimeid kultiveeritud imetajarakkudes", Food andChemical Toxicology, vol. 72, lk 195–203, 2014.

[73] RS Lanigan ja TA Yamarik, "Lõpparuanne BHT ohutuse hindamise kohta", International Journal of Toxicology, vol. 21, nr. 2, lk 19–94, 2002.