Polygona-polüsahharoosi mõju ferroptoosile diabeetiliste nefropaatiaga rottidel

Märksõnad:diabeetiline nefropaatia;polügona-polüsahharoos; ferroptoos; transferriin; FTH1; GPX4

 

Diabeetiline nefropaatia(DN) on tõsine mikrovaskulaarne tüsistussuhkurtõbi [1] DN is a serious diabeedi mikrovaskulaarsed tüsistusedmellitus [1], mis avaldub algstaadiumis tavaliselt mikroalbuminuuriana, millele järgneb progresseeruv areng. Varajases staadiumis esineb tavaliselt mikroalbuminuuria, millele järgneb massilise proteinuuria progresseeruv areng, glomerulaarfiltratsiooni kiiruse progresseeruv langus ja vere kreatiniinisisalduse järkjärguline tõus [2] ]. kreatiniini järkjärguline tõus[2]. Kui haigust ei ravita, võib see põhjustada kroonilist haigust. Kui seda ei ravita, võib see põhjustada kroonilist progresseeruvat neerukahjustust ja lõpuks lõppstaadiumis haigust. Kui seda ei ravita, võib see põhjustada kroonilist progresseeruvat neerukahjustust ja lõpuks lõppstaadiumis neerupuudulikkust[3]. Rauasurm Rauasurm on rauast sõltuv küllastumata rasvhapete kuhjumine rauasurm on rauast sõltuv küllastumata rasvhapete fosfolipiidide kuhjumine, mis põhjustab rakusurma, mis avaldub peamiselt rauasurma peamiseks ilminguks rauast sõltuvate rasvhapete kuhjumine. intratsellulaarsed lipiidperoksiidid[4] . [4] . Uuringud On leitud, et neerutuubulite epiteelirakkude vigastus on tihedalt seotud rauasurmaga[5]. Wang et al.

Wang jt [6] leidsid, et glutatioonperoksüdaas 4 (GPX4) ekspressioon neerutuubulite interstitsiaalses (GPX4) ekspressioonis on tihedalt seotud DN-haiguse raskuse ja progresseerumisega. GPX4 kui oluline sihtmärk rauasurma programmi käivitamisel, on oksüdatiivse stressi ja rakusurma signalisatsiooni andur ning vähenenud GPX4 ekspressioon toob kaasa elusa GPX4 ekspressiooni vähenemise olulise suurenemise, mille tulemuseks on elushapniku sisalduse oluline suurenemine kehas. 7]. . Seetõttu võib neerutuubulite epiteelirakkude surma pärssimine rauasurma reguleerimise kaudu Seetõttu võib neerutuubulite epiteelirakkude surma inhibeerimine rauasurma reguleerimise kaudu DN-i neerukahjustuse leevendamiseks olla tõhus strateegia DN-i raviks. epiteelirakkude surm rauasurma reguleerimise kaudu võib olla DN-ravi tõhus strateegia.
ThepolüsahhariidkohtaC. flavuson kõige rikkalikum ja olulisem farmakoloogiline See on üks C. flavuse kõige rikkalikumaid ja olulisemaid farmakoloogilisi komponente. Eksperimentaalses uuringus leiti, et see mängib olulist rolli DN-i neerufunktsiooni parandamisel ja põletikulise reaktsiooni leevendamisel. Li jt[8]. Li jt[9]. leidsid, et Li jt [9] leidsid, et C. flavus polüsahhariidi sekkumine parandas oluliselt glükolipiidide metabolismi häireid ja insuliinitaluvust diabeetilistel hiirtel. Li et al. Teises uuringus leiti, et diabeetilise nefropaatiaga hiirte glükoosi-, 24-tunnise glükoosi- ja insuliinitaluvus paranes oluliselt pärast kollase ekstrakti polüsahhariidi sekkumist. Teises uuringus leiti, et vere glükoosisisaldus, 24-h uriini mikroalbumiin, vere kreatiniini (SCr) ja vere uurea lämmastiku (BUN) sisaldus diabeetilise nefropaatia mudelhiirtel paranes pärast Fructus flavus polüsahhariidi sekkumist märkimisväärselt. ja vere uurea lämmastiku (BUN) tase oli diabeetilise nefropaatia mudelis oluliselt vähenenud[10]. DN-i töötlemine Flos Chrysanthemi polüsahhariidiga Selle konkreetne toimemehhanism pole aga selge. Seetõttu kasutati käesolevas uuringus DN roti mudeli loomiseks kõrge rasvasisaldusega dieeti koos streptozototsiini (STZ) süstimisega.
Seetõttu lõime selles uuringus DN roti mudeli kõrge rasvasisaldusega dieediga koos streptozototsiini (STZ) süstimisega ja jälgisime C. flavus polüsahhariidi mõju rauasurmale rottidel. Seetõttu viidi käesolev uuring läbi, et jälgida C. flavus polüsahhariidi mõju rauasurmale rottidel, keda toideti kõrge rasvasisaldusega dieediga koos streptozototsiini (STZ) süstimisega, ja et selgitada C. flavus polüsahhariidi toimemehhanismi DN-ile.

materjalid ja meetodid
1.1 Loomad
Viiskümmend tervet isast SD-rotti kehamassiga (200±20) g hoiti Hiinas Pekingis asuvas Hiina Meditsiiniteaduste Akadeemia Radioloogiainstituudis 12-h valguse-pimeduse tsüklis temperatuuril (25±2) kraadi ja suhtelist õhuniiskust (50±15) protsenti ning toidetakse ad libitum. Kõrge suhkru- ja rasvasisaldusega dieet (10 protsenti seapekki, 20 protsenti sahharoosi, 2,5 protsenti kolesterooli, 67,5 protsenti tavasööta), (4,8 protsenti rasva, 20 protsenti valku ja 59,4 protsenti üldsuhkrut), Beijing Huafukang Biotechnology Co. Selle katse kiitis heaks Cangzhou integreeriva meditsiini haigla (CZX2022-KY-023).

1.2 Ravim ja valmistis
PolüsahhariidkohtaFlos Astragalus(puhtus 70 protsenti, partii number S27804), Shanghai Yuanye Biotechnology Co. Ltd. valmistati soolalahusega kontsentratsiooniga vastavalt 200, 800 mg/ml. 800 mg/ml lahus. Irbesartaani tabletid (partii 8A411), Sanofi (Hangzhou) Pharmaceutical Co. (Hangzhou) Pharmaceutical Co., Ltd. valmistati soolalahuses kontsentratsiooniga 30 mg/ml. lahendus.

 

1.3 Peamised reaktiivid ja instrumendid
Uriini valk (partii number C035-2-1), SCr (partii number C011-2-1), BUN (partii number C013-2-1) BUN (partii number C013-2-1), malondialdehüüd ( MDA, partii number C003-1- 2), glutatioon (GSH, partii C006-2-1), raua ioonide kogusisaldus (partii number A039-2-1), Nanjing Jianchengi bioloogilise inseneri uurimisinstituut Bioloogiatehnika instituut , Nanjing, Hiina; Transferriin (partii number ab278498), ferritiin Transferriin (partii ab278498), ferritiini raske ahel (FTH1, partii ab75973), GPX4 (partii ab252833) ja -ferritiin (partii ab252833). ab252833), -aktiin (partii ab179467), Abcam, Ühendkuningriik. iMark680 multifunktsionaalne ensüümimarker, Bio-Rad, USA. Fresco17 tsentrifuug, Thermo, USA; 5810 benchtop külmutatud tsentrifuug, Eppndorf, Saksamaa; ABI Prism® 7500 fluorestsentsi kvantifitseerimine, Applied Biosystems, USA; DYCZ-24DN vertikaalne elektroforeesipaak, Pekingi Liuyi instrumenditehas, Peking, Hiina; SH-523 kemoluminestsentskujutised Ltd, Hangzhou Shenhua Technology Co.

 

1.4 Modelleerimine, rühmitamine ja ravimite manustamine
Pärast 1-nädalast adaptiivset toitmist valiti juhuslikult 10 rotti normaalseks. Ülejäänud 40 rotti viidi DN-roti mudeli loomiseks kirjanduse meetodile [11]. Rotte toideti 7 nädalat kõrge suhkru- ja rasvasisaldusega dieediga ning seejärel paastus 12 tundi ilma veeta. Rotte toideti 7 nädalat kõrge suhkru- ja rasvasisaldusega dieediga, seejärel paastus toidu ja veega 12 tundi. STZ-d süstiti intraperitoneaalselt annuses 30 mg/kg. 72 tunni pärast koguti sabaveenist verd, et tuvastada juhuslikku veresuhkru taset, ja veresuhkru taset, mis oli suurem või võrdne 16,7 mmol/L, peeti diabeedi edukaks modelleerimiseks. Rotte toideti ühe nädala jooksul kõrge suhkru- ja rasvasisaldusega dieediga ning metaboolsest puurist koguti 24-h uriini.

 

 

1.5.5 Western blot test
Koguge neerukoed, lisage 150 μL RIPA lüüsipuhvrit, homogeniseerige Valgu supernatant säilis pärast tsentrifuugimist. Valgu üldkontsentratsioon määrati BCA valguanalüüsi komplekti abil. Valgu üldkontsentratsioon määrati BCA valguanalüüsi komplekti kasutades ja valgu kontsentratsioon homogeniseeriti. Valkude eraldamiseks kasutati võrdses koguses valku 20 ug, 8 protsenti -12 protsenti SDS-PAGE-d ja valk kanti üle. Membraanid suleti 5-protsendilise lõssipulbriga toatemperatuuril 2 tunniks. Lisati küüliku rotivastane primaarne antikeha Transferriin (1:2 000), FTH1 (1:3 000) ja GPX4 (1:3 000). 3,000), GPX4 (1:3,000), -aktiini (lahjendatud 1:5,000) ja inkubeeriti üleöö 4 kraadi juures. Inkubeerige öö läbi 4 kraadi juures. Membraan pesti, lisati sekundaarne antikeha (1:9 000) ja inkubeeriti 2 tundi toatemperatuuril. Membraanid pesti TBST-ga, töötati välja ECL kemoluminestsentsiga ja tuvastati kasutades
Ribade halltoonide väärtuste analüüsimiseks kasutati Image J tarkvara.

 

1.6 Statistilised meetodid
Analüüsiks kasutati SPSS Statistics25.{1}} statistikatarkvara. Katse Tulemused väljendati xˉ±s ja kõiki andmeid testiti normaalsuse ja hii-ruudu suhtes. Kõiki andmeid testiti normaalsuse ja hii-ruut suhtes ning t-teste kasutati, kui need olid rahul, ja mitteparameetrilisi teste, kui need ei olnud rahul. P<0.05 indicates that the difference is statistically significant.

 

2 tulemust
2.1 Flavopiriidiumpolüsahhariidi mõju mudelrottide kehamassile ja tühja kõhu veresuhkrule Võrreldes normaalrühmaga oli mudelrühma rottide kehamass oluliselt vähenenud (P<0.01) and FBG was significantly increased (P<0.01); compared with the model group, the body mass of rats in the positive drug group was significantly increased (P<0.05), and the differences in FBG of rats in each group were not statistically significant (P>0.05). Vaata tabelit 2.

2.2 Flavopiridium polüsahhariidi mõju mudelrottide neerufunktsiooni indeksitele
Võrreldes normaalse rühmaga oli mudelrühma rottide SCr, BUN tase ja 24 h uriini valgusisaldus oluliselt kõrgem (P<0.01); compared with the model group, the Cr, BUN level and 24 h urine protein content of rats in the positive drug group and the high dose group of Flavopiridium polysaccharide were significantly lower (P<0.05, P<0.01). See Table 3.

2.3 Kollase ekstrakti polüsahhariidi mõju mudelrottide neerude histopatoloogilisele morfoloogiale
Normaalse rühma rottide glomerulus ja torukujuline struktuur ei näidanud kõrvalekaldeid ning tülakoidmembraan ja tülakoidstroom ei olnud vohanud ning ei esinenud põletikurakkude infiltratsiooni jne; mudel Mudelrottidel täheldati fokaalset tubulaarset degeneratsiooni ja atroofiat ning glomerulaarbaadri membraan oli veidi. Mudelrühma rottidel esines fokaalne tubulite degeneratsioon ja atroofia, veidi paksenenud glomerulaarbaadri membraan, tülakoidide hüperplaasia ning glomerulite ja rasvade degeneratsioon. torukesed. Iga ravimi manustamisrühma rottidel esines kahjustuste vähenemine ja paranemine oli ilmsem positiivsete ravimite rühmas ja Flavopiridium polüsahhariidi suures annuses. Paranemine oli ilmsem positiivsete ravimite rühmas ja Flavopiridium polüsahhariidi suures annuses. Vaata joonist 1.