Cistanche Deserticola ekstrakti mõju peenise erektsioonireaktsioonile kastreeritud rottidel

Abstraktne:Cistanche deserticola(CD) on peetud reproduktiivfunktsiooni tugevdavaks aineks tuhandeid aastaid. CD ekstrakti mõju kohtapeenise erektsioonvastuseid uuriti käesolevas uuringus. Pärast kastreerimisoperatsiooni raviti rotte intragastraalselt CD ekstraktiga ({{0}},45, 0,90 ja 1,8 g/kg) iga päev nelja nädala jooksul.Peenise erektsioonmõõdeti vastust ja katse lõpus analüüsiti seerumi hormoone. Hinnati, eterektsioonihäiredmuutus pikemaks jaerektsiooni kestusoluliselt lühem kastreeritud rottidel võrreldes fiktiivselt opereeritud kontrollidega. Kuid CD väljavõte lühendaserektsiooni latentsusja pikendas erektsiooni kestust, et minimeerida kastreerimise negatiivseid mõjusid. Annuse 0,9 g/kg korral reguleeris CD ekstrakt luteiniseeriva hormooni kontsentratsiooni seerumis normaalsele tasemele kastreeritud rottidel. Need leiud näitasid, et CD soodustas peenise erektsioonireaktsiooni ja moduleeris teatud määral seerumi hormooni taset.

Märksõnad:Cistanche deserticola; erektsioonireaktsioon; kastreerimine; hormoon

Lisateavet cistanche kohta seksuaalfunktsiooni parandamiseks

SISSEJUHATUS

CistancheHoffmg. Et Link, üks Orobanchaceae perekonna perekondadest, on levinud peamiselt põhjapoolkera põudadel ja kõrbetes, näiteks Sise-Mongoolias,Xinjiang, Ningxia autonoomsed piirkonnad Hiinas ja Iraanis, Indias, Mongoolias jne. Tistanchesi liigid kuuluvad mitmeaastaste parasiitide hulka, mis kinnituvad tavaliselt liiva siduvate taimede juurtele, nagu haloksülox ammodendron, H. persicum, Kalidium foliatum ja Tamarix taimed jne (Jiang) ja Tu 2009). Herba Cistanche'i, Cistanche'i liigi vart, on peetud suurepäraseks toonikuks ja pälvinud "kõrbete ženšenni" au. Cistanche'i liikide hulgas on Cistanche'i esmaseks lähtematerjaliks märgitud Cistanche deserticola YC MA (Stefanova et al.2011). Viimaste aastate liigse saagikoristuse tõttu on aga loodusliku C. deserticola (CD) loodusvarad puudulikud, kuna see on kogutud üheks Hiinas kaitset vajavatest II klassi taimedest, seega ka selle perekonna teistest liikidest, nagu C. salsa. ja C. sinensis, kasutatakse mõnes piirkonnas ka asendajatena. Alates esmakordsest ShenNongi väljaandes Chinese Material Medica (iidne farmakoloogiline kogumik) salvestamisest arvatakse, et CD toniseerib neere ja elavdab "Yangi" kliinilises praktikas traditsioonilise hiina meditsiini teooria kohaselt, mis väidetavalt on tõhus paljunemise, arengu ja viljakusfunktsiooni jaoks. Vahepeal on CD-d keedetud ka lambaliha, kartuli või riisiga, et saada toniseerivat toitu, mis ravib ülepingest põhjustatud kahjustusi sadade aastate jooksul, mis viitab sellele, et seda on ohutu suukaudselt võtta (Xiong et al. 2013). Selliseid anekdootlikke kasutusviise leidub aga peamiselt Hiina inkunaablites, kus on piiratud teaduslikku teavet, mida arutatakse tänapäevaste farmakoloogiliste kontseptsioonide raames. Erektsioonihäired (ED) on seisund, mida iseloomustab peenise ebapiisav erektsioon või erektsioon, mis ei kesta täiskasvanud meestel piisavalt kaua (Cohan ja Korenman 2000). ). Vastuseks kaasaegsetele keerukatele keemilistele ainetele on tekkinud taas huvi ED-i raviks kasutatavate tõhusate ja ohutute ravimite otsimise vastu (Adimoelja 2000). Eelmine uuring (Liuet al. 2009) näitas, et CD electuary kiirendas peenise erektsiooni normaalsetel rottidel, kuid puuduvad andmed CD mõju kohta erektsioonihäiretele. Loomade puhul peeti kahepoolse orhiektoomiaga kirurgilist kastreerimist kastreerimise standardiks. ED uurimiseks (Tombal 2005). Seetõttu viidi käesolev uuring läbi, et hinnata CD potentsiaalset mõju ED-le, uurides erektsiooni latentsust ja kestust kastreeritud rottidel.

MATERJALID JA MEETODID

 Chemicals and materials Echinacoside (purity >98%) and acteoside (purity >98 protsenti osteti riiklikest toidu- ja ravimikontrolliinstituutidest (Peking, Hiina). HPLC puhtusastmega metanool osteti firmalt Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Puhastatud vesi valmistati MilliporeMilli-Q Integral 3 süsteemi ja Q-POD Milli-Q süsteemiga (Bedford, MA, USA). C. deserticola varred osteti ettevõttest Shenzhen GURU Biology Co., Ltd (GuangDong, Hiina) ja jahvatati peeneks pulbriks pulbristajaga, mis lasti läbi 60-meššilise sõela. HPLC analüüs ja taimse materjali ettevalmistamine CD pulbri ehhinakosiidi ja akteosiidi sisaldus määrati meie eelmise meetodiga. (Zhao et al.2011). Seejärel keedeti iga 100 g kuivatatud pulbrit 1,5 l vees 1,5 tundi. Toatemperatuuril maha jahutades tsentrifuugiti segatud vedelikku kiirusel 2000 p/min 10 minutit (Eppendorf 5810R, Saksamaa) ja sade ekstraheeriti kaks korda samades tingimustes. Kombineeritud supernatandid kontsentreeriti vaakumrotaatoraurustiga (Heidolph laborota 4001-efektiivne, Saksamaa) 60 kraadi juures, seejärel lüofiliseeriti ja saadi umbes 42% kuivatatud ekstrakti pulbrit. Järgmise loomkatse läbiviimisel lahustati kuivatatud ekstrakt puhastamata vees toatemperatuuril.

Katseloomad

Täiskasvanud isased Sprague-Dawley rotid (200-220 g) saadi ettevõttest Medicine Experimental Animal

Guangdongi provintsi keskus (Guangzhou, Hiina PR), mida hoitakse kontrollitud temperatuuriga kvartalites 12-h valguse/pimeduse tsüklitega toatemperatuuril (22-24 kraadi) ja konstantse niiskusega (40-70 protsenti) SPF-is (spetsiifiline). patogeenivaba) laboris ja toidetakse ad libitum. Katseprotseduurid olid kooskõlas riikliku terviseinstituudi laboriloomade hooldamise ja kasutamise juhendiga. Katseprotseduur

Üks nädal enne manustamist tuimastati viiskümmend isast SD-rotti intraperitoneaalselt naatriumpentobarbitaaliga (40 mg/kg) (Jung et al. 1999) ja jagati juhuslikult viieks rühmaks: välja arvatud võltsoperatsiooniga rühmas (Sham), ülejäänud kastreeriti kahepoolselt munandikoti meetodil (Anders 2003, Schlatt et al. 2002). Samal ajal manustati CD-ga ravitud rühmadele intragastraalselt 0,45 g/kg (madal annus CD ekstrakti, LCD pluss Cas), 0,9 g/kg (CD ekstrakti, MCD pluss Cas keskmine annus) ja 1,8 g/kg (CD suur annus) ekstrakti, HCD pluss Cas) CD ekstrakti, samas kui võlts- ja kastreeritud rühmadele manustati ainult vastav kogus vett. Kehakaalu mõõtmine tehti protseduuri alguses ja seejärel igal nädalal. Kõigile rottidele tehti laparotoomia kohe pärast surma, et eemaldada ja kaaluda järgmised elundid: eesnahanäärmed, seemnepõiekesed, eesnääre ja lihase tõstmine.

Peenise erektsioonivastuse mõõtmine

Iga rühma rottide erektsioonifunktsiooni hinnati eelmiste meetoditega (Ji et al. 2009, Luo et al. 2006). Lühidalt, roostevabast terasest bipolaarne elektrood (BL420F Data Acquisition & Analysis System, TmeTechnology Co., Ltd, Chengdu, PR China) asetati peenisele ettevaatlikult, kuni see püstitati elektrilise stimulatsiooni impulsiga (5 V) 0,2 s. Stimuleerimisest erektsioonini kulunud aeg registreeriti peenise erektsiooni latentsusena. Kui peenise erektsioonireaktsiooni täheldati, võis elektrode peenisest eemaldada ja erektsiooni kestusena registreeriti peenise erektsiooni säilitamise aeg.

Vereproovide võtmine ja seerumi hormoonide analüüs

Rotid anesteseeriti naatriumpentobarbitaaliga intraperitoneaalselt (40 mg/kg) (Jung et al. 1999).

Võeti vereproovid ja hüübiti 4 kraadi juures 4 tundi, millest seerum koguti tsentrifuugimisega kiirusel 4000 p/min 5 minutit 4 kraadi juures (Eppendorf 5810 R, Saksamaa) ja säilitati kohe -20 kraadises sügavkülmas kuni edasine analüüs. LH ja FSH üldtasemeid mõõdeti kaubanduslike radioimmunoanalüüsi (RIA) komplektide abil (Beijing North Institute of Biological Technology, Peking, Hiina), viidates tootja juhistele (Matsumoto etal. 1986). Konkureeriva radioaktiivse immuuntehnika põhjal kasutati testis I125-märgistatud LH-d (või FSH-d). Lühidalt, 100 µl seerumiproovile lisati 100 µl I125-märgistatud LH- (või FSH) ainet ja inkubeeriti 100 µl puhastatud küüliku antikeha temperatuuril 4 kraadi (või 37 kraadi) üleöö. Seejärel lisati antigeen-antikeha kompleksile eesli-küülikuvastane immuuneraldusaine ja tsentrifuugiti (3500 p/min, 15 min), et eraldada vaba ja antikehaga seotud 125I-LH (või FSH). Seejärel mõõdeti sademe radioaktiivsust radioimmuunanalüüsi loenduriga (DMF-96, Zhongcheng Electric Technology Development Co., Ltd., Hefei, Hiina). LH ja FSH testi tundlikkuse piirid olid mõlemad 1,0 mIU/ml.

STATISTILINE ANALÜÜS

Andmete analüüs viidi läbi SPSS-i versiooni 16.{1}}tarkvara abil.

Väärtused väljendati kui keskmine ± standardhälve (SD). Parameetrilisi andmeid analüüsiti ühesuunalise dispersioonanalüüsi (ANOVA) abil, millele järgnesid post hoc LSD testid. Mitteparameetrilisi andmeid analüüsiti Kruskal-Wallise testiga. Erinevusi peeti statistiliselt olulisteks, kui kõrvalekalde tõenäosus oli väiksem kui 0,05.

TULEMUSED

CD pulbri ehhinakosiidi ja atsetoniidi sisalduse kvantitatiivne määramine

Ehhinakosiidi ja atsetoniidi sisaldus CD pulbris oli 1,27±0.01 protsenti ja 0.52±0,003 protsenti, mis vastas Hiina farmakopöa nõuetele. CD pulbri HPLC kromatogramm on näidatud joonisel fig. 1.

(4,6 mm × 250 mm, 5 µm, Waters, Milford, MA, USA); liikuv faas: 0,5 protsenti (V/V) äädikhappe vesilahus (A) ja metanool ( B) koostisaine (0 min, A: B=25:75; 10-30 min, A: B=40: 60; 30 min, A: B=0: 100); voolukiirus: 1 ml/min; detektiivi lainepikkus: 330 nm; temperatuur: 30.

Joonis 2: Peenise erektsiooni latentsus ja kestus kastreeritud inimestel. Andmed on väljendatud keskmisena ± SD (n=10). ##lk<0.01 relative="" to="" sham-operated="" group,=""><0.01 relative="" to="" castrated="" group.="" abbreviation="" (below):="" sham,="" sham-operated="" group;="" cas,="" castration="" control="" group;="" lcd="" +cas="" (0.45g/kg),="" mcd="" +cas="" (0.9g/kg)="" and="" hcd="" +cas="" (1.8g/kg),="" three="" groups="" of="" cd="" extract="" treated="" in="" castrated="">

Joonis 3: CD ekstrakti mõju seerumi LH kontsentratsioonile kastreeritud rottidel. Andmed on väljendatud keskmisena ± SD (n=10). #lk<0.05 relative="" to="" sham-operated="" group,="" *=""><0.05 relative="" to="" castrated="" group.="" body="" weights="" and="" relative="" accessory="" organs="" weights="" shown="" in="" table="" 1,="" all="" rats="" were="" of="" similar="" initial="" body="" weights="" with="" an="" increase="" from="" day="" 1="" to="" day="" 28.="" however,="" mean="" values="" in="" castrated="" group="" increased="" from="" 216.8±9.2="" g="" to="" 251.4±12.7,="" 283.3±15.1,="" 306.8±15.4="" and="" 322.2±18.4="" g,="" gaining="" less="" weights="" compared="" to="" the="" sham="" operated="" counterparts=""><0.05). there="" were="" no="" statistical="" difference="" between="" sham="" group="" and="" cd="" treated="">

Lisaks olid eesnaha, eesnäärme ja seemnepõiekeste ning levator ani lihasega inkastreeritud rottide keskmised suhtelised kaalud oluliselt madalamad (p<0.05) than="" those="" of="" normal="" controls,="" respectively.="" compared="" with="" the="" rats="" castrated="" only,="" the="" relative="" values="" of="" these="" organs="" weight="" tended="" to="" be="" higher="" under="" the="" treatment="" of="" cd="" extract.="" erectile="" response="" assessment="" in="" contrast="" to="" sham="" group,="" castration="" made="" the="" rats="" spend="" more="" time="" gaining="" penis="" erection="" under="" electric="" stimulation=""><0.01). however,="" the="" erectile="" latency="" was="" shortened="" by="" cd="" extract,="" exhibiting="" a="" significant="" decrease="" by="" 52.7%="" in="" lcd="" +cas="" group=""><0.01), 73.5%="" in="" mcd="" +cas="" group=""><0.01) and="" 74.5%="" in="" hcd="" +cas="" group=""><0.01), respectively.="" furthermore,="" castration="" shortened="" the="" erectile="" duration="" with="" the="" mean="" value="" of="" 37.2±17.3="" s="" compared="" to="" sham="" operated="" group=""><0.01). however,="" the="" erectile="" duration="" in="" rats="" was="" significantly="" prolonged="" approximately="" by="" 2.6-fold="" in="" mcd="" +cas="" group=""><0.01) and="" 2.1-fold="" in="" hcd="" +cas="" group=""><0.01). it="" showed="" no="" strict="" dose-related="" correlation.="" (fig.="">

Seerumi hormoonide tase

Analüüsides RIA analüüsiga, oli LH keskmine kontsentratsioon seerumis kastreeritud rottidel 2,50±0,34 mIU/ml, mis näitab tõusu võrreldes fiktiivselt opereeritud kontrolliga (p<0.05). however,="" the="" value="" descended="" about="" 49.2%="" in="" mcd="" +cas="" group="" relative="" to="" that="" in="" castrated="" control=""><0.05) (fig.="" 3).="" shown="" in="" fig.="" 4,="" no="" statistical="" differences="" were="" observed="" among="" all="" groups="" on="" fsh="">

ARUTELU

Meie tulemused näitasid, et kastreerimine pikendas märkimisväärselt peenise erektsiooni latentsust ja lühendas erektsiooni kestust, millega kaasneb märkimisväärne lisaorganisatroofia. Siiski soodustas CD ekstrakt peenise erektsioonireaktsiooni ja moduleeris kastreeritud rottidel teatud määral seerumi LH taset. Spontaanset erektsiooni stimuleerivad ja säilitavad peamiselt androgeenid rakuliste, molekulaarsete ja füsioloogiliste mehhanismide kaudu, mis hõlmavad kavernoosi silelihaste lõdvestamist (Traish et al., 2007). Talha et al.2007). Ebapiisav testosterooni tase põhjustab selle lõdvestumise vähenemist (McClure 1988), mis põhjustab meestel impotentsust (Bivalacqua et al. 2000).

Spetsiaalselt rottidel säilitavad seda laias vahemikus süsteemse testosterooni kontsentratsioonid {{0}} protsendina, millest madalamal nõrgeneb erektsioonivastus annusest sõltuval viisil (Armagan et al. 2006). Käesolevas uuringus oli kõigi kastreeritud rottide testosterooni kontsentratsioon vereringes liiga madal, et ületada tundlikkuse piiri (0,02 ng/ml) (andmeid tulemustes ei näidatud). Siiski lühendas CDextract märkimisväärselt peenise erektsiooni latentsust kolme annusega ja pikendas erektsiooni kestust 0,90 g/kg ja 1,8 g/kg juures. Tõenäoliselt oli see mõnes varasemas uuringus mainitud CD androgeenilaadse toime tagajärg (He et al. 1996a, He et al. 1996b). Mõned abiorganid, nagu eesnääre ja seemnepõiekes, on androgeenist sõltuvad, seega võivad kaalumuutused peegeldada muutused endokriinses seisundis (Trisomboon et al. 2007, Jang jt 2011).

Sellel oli testosterooni lävitase, millest allpool oli nende organite ainevahetus pärsitud (Trachtenberg 1985). Meie uuringus kinnitati, et kastreerimine põhjustas testosterooni puudulikkuse tõttu täiendavate suguelundite kaalu vähenemise. Testosterooni eritavad peamiselt munandid Leydigi rakud ja seda reguleerivad hüpofüüsilised hormoonid, nagu aluteiniseeriv hormoon (LH) ja folliikuleid stimuleeriv hormoon (FSH). oluline roll kastreeritud loomade peenise funktsiooni säilitamisel (Robert et al. 2004). Kuna hüpotalamuse-hüpofüüsi-gonaadi (HPG) telg on suletud ahela tagasiside kontrollimehhanism, võib sugunäärmete hormoonide madal tase omakorda reguleerida LH ja FSH sekretsiooni (Morales et al. 2004). Meie uuringus on uuritud, et seerumi LH tase tõusis märkimisväärselt kastreeritud rottidel ja langes seejärel normaalsele tasemele CD ekstraktiga 0, 90 g/kg, mis oli kooskõlas eelmise järeldusega, et LH taseme tõus oli seotud suurema erektsioonihäirete riskiga (Kupelian et al. 2006).

Munandites stimuleerib LH testosterooni sünteesi ja vabanemist, mille tagasiside kontroll on suhteliselt ühtlane, samas kui FSH toimib otse Sertoli rakkudele, et neid tagasisidekontrolli kompleksiga toita (Hellqvist et al. 2008). Need leiud toetasid rohkem oletust, et CD avaldas androgeenilaadset toimet, mis võib olla peamiselt vastutav seerumi LH taseme languse eest rohkem kui FSH. Praeguse vaatluse kohaselt oli kastreerimise mõju isaste rottide kehakaalu arengule sarnane eelmise uuringu tulemustega (Christoffersen). jt 2006), kuigi vastupidiselt emastel rottidel saadud tulemustele (Pantaleão jt 2010). CD ekstrakt ei suutnud oluliselt parandada kehakaalu, mis oli tõenäoliselt tingitud ravi ebapiisavast kestusest või komplekssetest mõjudest üldisele terviseseisundile. Kokkuvõtteks võib öelda, et kastreerimine pikendas peenise erektsioonihäireid ja lühendas oluliselt kestust, põhjustas seerumi LH suurenemise ja abisuguorganite atroofia. CD ekstrakt hõlbustas peenise erektsioonireaktsiooni, lühendades kastreeritud rottide erektsiooni latentsust ja pikendades erektsiooni kestust. Need mõjud olid tõenäoliselt tingitud androgeenitaolisest toimest, mida toetas tähelepanek, et CD ekstrakt normaliseeris selle LH kontsentratsiooni seerumis, eriti annuses 0,90 g/kg.

Siiski on vaja täiendavaid tõendeid, et demonstreerida CD ekstrakti mõju ED atüpotalamuse ja limbilise taseme vastu ning sellele väärtuslikule traditsioonilisele meditsiinile võiks tänapäeva maailmas rohkem tähelepanu pöörata.