Laminaria Japonica ja Cistanche Tubulosa ekstraktide kombineeritud ravi efektiivsus juuste kasvu korral

Kontakt: emily.li@wecistanche.com

Kyungha Shin1# et al

Kuna peanaha juuste väljalangemine on viimasel ajal sagenenud isegi noortel inimestel, mõjutades tõsiselt inimeste elukvaliteeti,juuste kasvu-Laminaria japonica ekstrakti (LJE) stimuleeriv toime jaCistanche tubulosaekstrakti (CTE) uuriti. Pärast folliikulite anageense faasi kinnitamist raseerimise ajal manustati isastele C57BL/6 hiirtele naha kaudu 3% minoksidiili või suukaudselt koos LJE ja CTE kombinatsiooniga.Cistanche tubulosaväljavõte)21 päevaks. Minoksidiil soodustas juuste taaskasvu ja suurendas -glutamüültranspeptidaasi (-GTP) ja aluselise fosfataasi (ALP) aktiivsust. Lisaks reguleeris minoksidiil epidermise kasvufaktori (EGF) ja veresoonte endoteeli kasvufaktori (VEGF) taset. LJE ja CTE koosmanustamine（Cistanche tubulosaväljavõte)54 mg/kg LJE pluss 162 mg/kg, CTE (Cistanche tubulosaväljavõte)avaldas sünergistlikku soodustavat toimet juuste taaskasvule, mis on võrreldav 3-protsendilise minoksidiiliga. LJE suurendas eelistatavalt ALP aktiivsust, samas kui CTE（Cistanche tubulosaväljavõte)suurendas nii -GTP ja ALP aktiivsust kui ka EGF ja VEGF ekspressiooni. In vivo õhukotipõletiku mudel, karraginaanist põhjustatud veresoonte eksudatsioon ning suurenenud lämmastikoksiidi ja prostaglandiini E2 kontsentratsioon eksudaatides suruti sünergistlikult alla LJE ja CTE koosmanustamisel.（Cistanche tubulosaväljavõte). Lisaks pärssis kombineeritud ravi oluliselt põletikuliste rakkude infiltratsiooni. Tulemused viitavad sellele, et kombineeritud suukaudne ravi LJE ja CTE-ga（Cistanche tubulosaväljavõte)sobimatud annused ja suhted hoiavad ära juuste väljalangemise ja parandavad alopeetsiat, mida võib osaliselt vahendada nende põletikuvastane toime.

Märksõnad Juuste kasv, põletik, Laminaria japonica,Cistanche tubulosa, kombineeritud ravi

Cistanche tubulosaekstraktil on palju funktsioone

Viimasel ajal on peanaha juuste väljalangemine sagenenud isegi noortel inimestel, mõjutades tõsiselt inimeste elukvaliteeti. Kuigi kiilaspäisus ei kuulu terviseprobleemide hulka, võib see põhjustada sügavat psühholoogiliselt ebamugavat sotsiaalset stressi. Seetõttu pakub suurt huvi uute ennetavate ja/või terapeutiliste materjalide väljatöötamine juuste väljalangemise ja taaskasvamise vastu. Hoolimata miljardi dollari suurusest turust on saadaval mõned praegu tõhusad tooted [1].
Juuksefolliikulid moodustuvad tsüklilise kasvu (anageeni), taandarengu (katageen), puhkeperioodi (telogeen) ja väljalangemise (eksogeen) ajal [2]. Katageeni ajal läbivad paljud folliikulite rakud programmeeritud rakusurma (apoptoosi) [3], vähendades folliikulite suurust, kui folliikulid sisenevad telogeeni. Harva tsükliliste epiteeli tüvirakkude aktiveerimine, mis paiknevad folliikulite kühmupiirkonnas, põhjustab folliikulite regeneratsiooni järgmise anageenfaasi alguses [4]. Tüvirakkude järglased moodustavad varajase anageeni ajal uue follikulaarse maatriksi ning karvavõll ja juure sisemine ümbris on saadud nendest suhteliselt diferentseerumata maatriksirakkudest [5]. On hästi teada, et juuksefolliikuli suurus ja anageenifaasi kestus määravad vastavalt juuksevõlli suuruse (läbimõõdu) ja pikkuse. Seda juuste tsüklilist kasvu reguleerivad mitmesugused kasvufaktorid.

Minoksidiil, finasteriid ja Propecia on kaubanduslikult saadaval juuste väljalangemise aeglustamiseks ja juuste taaskasvu hõlbustamiseks. Minoksidiil on vasodilataator, millel on hõlbustav kõrvaltoimejuuste kasvu[6], mis võib olla tingitud selle toitainetega varustavast ja kaaliumikanalit avavast tegevusest [7,8]. Minoksidiil on efektiivne androgeense alopeetsia korral, lisaks muudele kiilaspäisuse ravidele, kuigi selle efektiivsus kaob mõne kuu jooksul pärast ravi katkestamist. Võrdluseks, finasteriid ja Propecia, eesnäärme healoomulise hüperplaasia ja eesnäärmevähi ravimid, on paljudes riikides registreeritud androgeense alopeetsia (meeste tüüpi kiilaspäisus) raviks. Finasteriid ja Propecia on sünteetilised antiandrogeenid, mis inhibeerivad II tüüpi 5- reduktaasi, ensüümi, mis muudab testosterooni dihüdrotestosterooniks (DHT) juuksefolliikulite põhjas asuvates papillarakkudes [9].

Paljudes riikides laialt levinud Laminaria japonica, Undaria pinnatifida ja Cladosiphon okamuranus on idamaade meditsiinis pikka aega kasutatud ravimitena. Varasemates uuringutes ekstraheeriti ja identifitseeriti merevetikatest fukoidaan, sulfaatpolüsahhariidide kompleks, millel on antioksüdatiivne, antikoagulatiivne, vähivastane ja põletikuvastane toime [10,11]. Seejärel on näidatud fukoidaani kasulikku mõju põletikulistele haigustele, isheemiale, immuunpuudulikkusele ja kasvajatele [12,13]. Teiselt poolt,Cistanche tubulosaekstrakti (CTE) on Hiinas laialdaselt kasutatud ka traditsiooniliste ravimite jaoks. CTE（Cistanche tubulosaväljavõte)parandab verevoolu, alandades vere kolesteroolitaset [14]. Hiljuti teatati, et CTE vähendas kasvaja-nekroosifaktori (TNF-) ja interleukiini -4 (IL-4) tootmist, mis on peamised tegurid lämmastikoksiidi (NO) tootmisel põletikulises rajas. [15]. Samuti näitasime, et fukoidaan Laminaria japonica ekstraktist (LJE) ja CTE（Cistanche tubulosaväljavõte)sünergistlikult nõrgestatud põletikku in vitro ja in vivo [16]. Eelkõige on näidatud, et naha (eriti pisaranäärme) põletiku ja alopeetsia vahel oli tihe seos [17]. Seega on esile kerkimas alopeetsia ravi põletikuvastased aspektid [18].
Tuginedes verevoolu ja põletikku parandavatele tegevustele, uurime LJE ja CTE kombineeritud efektiivsust（Cistanche tubulosa väljavõte)pealjuuste kasvuja selle aluseks olevad mehhanismid, võrreldes 3-protsendilise minoksidiiliga (Hyundai Pharmaceutical, Seoul, Korea), mis on hästi tuntudjuuste kasvuvõimendaja.

Cistanche tubulosaekstrakt sobib hästiJuuste kasv

Materjalid ja meetodid

Materjalid

LJE ja CTE (Cistanche tubulosaväljavõte)saadi firmalt Misuba RTech Co., Ltd. (Asan, Korea). Laminaria japonica kuivatatud pulbrit ekstraheeriti puhastatud vees temperatuuril 6{2} oC 24 tundi, filtreeriti läbi 0,45 μm membraani, desinfitseeriti ja pihustuskuivatati.Cistanche tubulosaEkstraheeriti 80% etanooliga, desinfitseeriti, kontsentreeriti ja kuivatati. LJE ja CTE (Cistanche tubulosaväljavõte)hoiti temperatuuril 4oC, segati (1:3) ja lahustati enne kasutamist puhastatud vees ning manustati suukaudselt mahus 5 ml/kg.
Loomad
Isased C57BL/6 hiiredjuuste kasvuuuring ja põletikuuuringute jaoks mõeldud isased ICR-hiired osteti ettevõttest Daehan Biolink (Eumseong, Korea) ja neid hoiti püsivate keskkonnatingimustega ruumis (23±2ºC; suhteline õhuniiskus 45-65 protsenti; 12-tunnine valgustus). -tume tsükkel; 150-300 luksi heledus). Pelletite sööt ja puhastatud vesi olid saadaval ad libitum. Kõik loomkatsed kiitis heaks Korea Chungbuki riikliku ülikooli (CBNU) institutsionaalne loomade hooldamise ja kasutamise komitee (IACUC) ja need viidi läbi vastavalt CBNU laboratoorsete loomade uurimiskeskuse standardsetele tööprotseduuridele (SOP).

Ravi juuste kasvu jaoks

Pärast anageeni faasi kinnitamist, jälgides C57BL/6 hiirte (6 nädalat vanad, n=8/rühm) seljanaha homogeenselt roosat nahavärvi pärast lõikamist telogeenfaasis, karvad raseeriti [1,19 ,20]. Järgmisest päevast valiti hiired ilma nähtavate kriimustusteta ja suu kaudu
raviti LJE-ga (18 või 54 mg/kg), CTE-ga (54 või 162 mg/kg) või nende seguga (18 pluss 54 või 54 pluss 162 mg/kg) üks kord päevas 21 päeva jooksul. LJE (18 mg/kg) ja CTE (54 mg/kg) väikesed doosid pärinesid hinnangulistest inimdoosidest 100 mg/keha (70 kg) ja 300 mg/keha kohta pärast kehamassi pindala translatsiooni (Km{14}). } inimese/km=3 hiire jaoks). LJE ja CTE suured annused（Cistanche tubulosaväljavõte)maksimaalse sünergilise mõju hindamiseks määrati 3 korda, eraldi või kombinatsioonis [16]. Minoksidiili (3 protsenti, 0,2 ml) manustati paikselt üks kord päevas raseeritud nahale sama ajakava järgi LJE/CTE-raviga.

Juuste kasvu põhjalik vaatlus

Päevadel 3-päevaste intervallidega pärast raseerimist ja ravi ajal tuimastati hiired kergelt dietüüleetriga ja nende seljast tehti fotod. Juuste taaskasvamise suhet (taaskasvanud ala / raseeritud ala) fotodel analüüsiti arvutipõhise pildianalüüsi süsteemi abil (Imageinside, Daejeon, Korea).

Juuksefolliikulite mikroskoopiline uurimine

14. ja 21. päeval ohverdati hiired dietüüleetriga sügava anesteesia abil ja nende seljanahad eemaldati [1]. Seljanahk lõigati kaheks osaks. Karvanääpsude arvu ja histoloogiliste leidude uurimiseks värviti ühe osa formaliiniga fikseeritud parafiiniga manustatud koelõigud (läbimõõt 5 μm) hematoksüliin-eosiiniga. Teine osa koest külmutati vedelas lämmastikus ensüümanalüüsi ja immuunanalüüsi jaoks.

Ensüümide aktiivsuse analüüs

Nahakude homogeniseeriti 4 mahus fosfaatpuhvris (pH 7,4). Homogenaati tsentrifuugiti kiirusel 3, 000 pööret minutis 20 minutit ja supernatanti kasutati -glutamüültranspeptidaasi (-GTP) ja aluselise fosfataasi (ALP) aktiivsuse testimiseks, kasutades p-nitrofenüülfosfaati (PNPP)-DEAV-i. substraat [1,21].

Cistanche tubulosa

Kasvufaktorite kvantifitseerimine

Epidermaalse kasvufaktori (EGF) ja vaskulaarse endoteeli kasvufaktori (VEGF) kvantifitseerimiseks kasutati ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsi (ELISA) komplekte (R&D Systems, Minneapolis, USA) vastavalt tootja juhistele [1, 22].

Põletiku ravi

ICR-hiiri (7 nädala vanused, n=8/rühm) raviti suukaudselt LJE-ga (18 või 54 mg/kg), CTE-ga（Cistanche tubulosaväljavõte)(54 või 162 mg/kg) või nende segu (18 pluss 54 või 54 pluss 162 mg/kg) üks kord päevas 7 päeva jooksul [16]. LJE ja CTE 1. päeval（Cistanche tubulosaväljavõte)ravi ajal süstiti hiirtele tagaküljele subkutaanselt 10 ml steriilset õhku, et moodustada kott [16, 23, 24]. 2 ja 5 päeva pärast süstiti kotti uuesti 5 ml õhku. Üks tund pärast viimast LJE-d ja CTE-d（Cistanche tubulosaväljavõte)töötlemisel süstiti kotti 1 ml karrageeni (1% soolalahuses; Sigma-Aldrich, St. Louis, USA) või selle kandjat (soolalahust).

Eksudaatide analüüs

Õhukotti pesti 1 ml külma soolalahusega 6 tundi pärast karrageeni süstimist ja registreeriti loputusvedeliku kogumaht [16]. Põletikuliste rakkude, sealhulgas neutrofiilide, monotsüütide ja lümfotsüütide koguarv määrati colteri loenduri abil.

NO ja prostaglandiin E2 (PGE2) kontsentratsioonid määrati vastavalt Griessi reagendi (Sigma-Aldrich) ja ensüümi immuunanalüüsiga (EIA), kasutades Correlate-EIA komplekti (Assay Designs, Ann Arbor, USA) [16].

Statistiline analüüs

Andmed on esitatud keskmise ± standardveana. Statistiline olulisus määrati ühesuunalise dispersioonanalüüsiga, millele järgnes posthoc Tukey mitmekordse võrdluse test. P-väärtused<0.05 were="" considered="" to="" be="" statistically="">

Tulemused

Võrdlusmaterjali minoksidiili (3 protsenti) kasutamine hõlbustas märkimisväärseltjuuste kasvuC57BL/6 hiirtel, mis katsid peaaegu täielikult (92,4 protsenti) raseeritud ala (joonised 1, 2B) võrreldes 29,2 protsendiga normaalses kasvus (joonised 1, 2A) 21. päeval. Kuigi vähem efektiivne kui minoksidiili kasutamine , LJE suukaudne ravi hõlbustas kajuuste kasvu, mille tulemuseks on 33,5 ja 69,1 protsendiline katvus vastavalt 18 ja 54 mg/kg juures (joonised 1, 2C, 2D). CTE（Cistanche tubulosaväljavõte)oli tõhus ka suurendamiseljuuste kasvu, saavutades 73,6 ja 80,4 protsendi katvuse vastavalt 54 ja 162 mg/kg juures (joonised 1, 2E, 2F). Eelkõige kombineeritud ravi suurte LJE (54 mg/kg) ja CTE annustega（Cistanche tubulosaväljavõte)(162 mg/kg) suurendas märkimisväärseltjuuste kasvualates 12. päevast, mis on võrreldav minoksidiili toimega (joonised 1, 2H), kuigi LJE (18 mg/kg) ja CTE väikeste annustega（Cistanche tubulosaväljavõte)(54 mg/kg) avaldavad sünergistlikku toimet ainult varases faasis (joonised 1, 2G).

Joonis 1. Minoksidiili või Laminaria japonica ekstraktiga (LJE) ja/või töödeldud hiirte karvade taastumise ajaline kulgCistanche tubulosaekstrakt (CTE). ,

○ normaalne; ●, Minoksidiil (3 protsenti ) rakendus; △, 18 mg/kg LJE; ▼, 54 mg/kg LJE; □, 54 mg/kg CTE; ■, 162 mg/kg CTE; ◇, 18 mg/kg LJE pluss 54 mg/kg CTE; ◆, 54 mg/kg LJE pluss 162 mg/kg CTE（Cistanche tubulosaväljavõte).

Joonis 2. Minoksidiili või Laminaria japonica ekstraktiga (LJE) ja/või ravitud hiirte karvade taaskasvu tüüpilised leiudCistanche tubulosaekstrakt (CTE) 21. päeval.

A, normaalne; B, minoksidiili (3 protsenti) rakendus; C, 18 mg/kg LJE; D, 54 mg/kg LJE; E, 54 mg/kg CTE（Cistanche tubulosaväljavõte); F, 162 mg/kg CTE; G, 18 mg/kg LJE pluss 54 mg/kg CTE; H, 54 mg/kg LJE pluss 162 mg/kg CTE（Cistanche tubulosaväljavõte).

Võrreldes tavaliste juuksefolliikulitega (joonis 3A), parandas minoksidiili kasutamine juuksefolliikulite terviklikkust, näidates suuremaid folliikuleid ja paksemaid juuksevõlle (joonis 3B). Selliseid toimeid leiti ka LJE ja/või CTE-ga ravitud hiirte nahal（Cistanche tubulosaväljavõte)(joonised 3C-3H). Eelkõige LJE ja CTE kombineeritud ravi juuksefolliikulisid tugevdav efektiivsus (Cistanche tubulosaväljavõte)oli võrreldav minoksidiili omaga.

Joonis 3. Tüüpilised mikroskoopilised leiud karvakasvu kohta hiirtel, keda raviti minoksidiili või Laminaria japonica ekstraktiga (LJE) ja/võiCistanche tubulosaekstrakt (CTE) 21. päeval.

A, normaalne; B, minoksidiili (3 protsenti) rakendus; C, 18 mg/kg LJE; D, 54 mg/kg LJE; E, 54 mg/kg CTE（Cistanche tubulosaväljavõte); F, 162 mg/kg CTE（Cistanche tubulosaväljavõte); G, 18 mg/kg LJE pluss 54 mg/kg CTE; H, 54 mg/kg LJE pluss 162 mg/kg CTE

Minoksidiili kasutamine suurendas -GTP aktiivsust, mis indutseerib juuksefolliikulisid anageenfaasi, 14. ja 21. päeval 90-120 protsenti võrreldes normaalse naha tasemega (joonis 4). LJE (54 mg/kg) suurendas samuti ensüümi aktiivsust, kuigi esines suuri erinevusi. CTE avaldas sarnast mõju, suurendades oluliselt -GTP aktiivsust 14. päeval. Huvitaval kombel LJE ja CTE kombineeritud ravi（Cistanche tubulosaväljavõte)suurendas ensüümi aktiivsust veelgi kõrgemaks kui ekstraktide eraldi kasutamisel.
ALP aktiivsus, luu kasvu ja angiogeneesi marker, suurenes märkimisväärselt nahas 14. ja 21. päeval pärast minoksidiili paikset manustamist (joonis 5). LJE ja CTE（Cistanche tubulosaväljavõte)suurendas ka ALP aktiivsust pärast suukaudset manustamist annusest sõltuval viisil. Nimelt suurendas ensüümi aktiivsust sünergistlikult kombineeritud ravi LJE ja CTE-ga.

Joonis 4. Minoksidiili (MXD, 3 protsenti) või Laminaria japonica ekstrakti (LJE) ja/võiCistanche tubulosaekstrakti (CTE) (mg/kg) -glutamüültranspeptidaasi (-GTP) aktiivsusele ravi päeval 14 (A) ja 21 (B).

*Erineb oluliselt tavalisest (Nor) kontrollist (lk<>

Joonis 5. Minoksidiili (MXD, 3 protsenti) või Laminaria japonica ekstrakti (LJE) ja/võiCistanche tubulosaekstrakti (CTE) (mg/kg) aluselise fosfataasi (ALP) aktiivsuse kohta ravi päeval 14 (A) ja 21 (B).

*Erineb oluliselt tavalisest (Nor) kontrollist (lk<>

EGFi analüüsis on hästi teadajuuste kasvuMinoksidiili kasutamine suurendas EGF-i taset normaalsest kontrollist 3,5 korda nii päeval 14 kui ka 21 (joonis 6). LJE (18 mg/kg) suurendas EGF-i ainult 21. päeval, samal ajal kui CTE (162 mg/kg) reguleeris oluliselt oma tootmist 14. ja 21. päeval. Huvitav on märkida, et LJE ja CTE kombineeritud ravi（Cistanche tubulosaväljavõte)isegi väikeste annuste korral ilmnesid märkimisväärsed sünergilised toimed.

Minoksidiilravi suurendas ka VEGF-i taset 50-80 protsenti üle kontrollväärtuse (joonis 7). Kuigi LJE oli ebaefektiivne, CTE (Cistanche tubulosaväljavõte)avaldas märkimisväärset tugevdavat mõju. Lisaks LJE ja CTE kombineeritud ravi（Cistanche tubulosaväljavõte)ilmutas sünergistlikku aktiivsust varases faasis 14. päeval.

Joonis 6. Minoksidiili (MXD, 3 protsenti) või Laminaria japonica ekstrakti (LJE) ja/võiCistanche tubulosaekstrakti (CTE) (mg/kg) epidermise kasvufaktori (EGF) sisalduse kohta 14. (A) ja 21. (B) ravipäeval.

*Erineb oluliselt tavalisest (Nor) kontrollist (lk<>

Joonis 7. Minoksidiili (MXD, 3 protsenti) või Laminaria japonica ekstrakti (LJE) ja/võiCistanche tubulosaekstrakti (CTE) (mg/kg) vaskulaarse endoteeli kasvufaktori (VEGF) sisaldusele ravi päeval 14 (A) ja 21 (B).

*Erineb oluliselt tavalisest (Nor) kontrollist (lk<>

Karrageeni süstimine ICR hiire õhukotti suurendas eksudaadi mahtu kotis 6 korda kontrolltasemest (tabel 1). Selline suurenenud eksudatsioon vähenes oluliselt ravi LJE-ga (18 ja 54 mg/kg) või CTE-ga（Cistanche tubulosaväljavõte)(54 ja 162 mg/kg). Nimelt vähendas kombineeritud ravi LJE ja CTE-ga eksudaadi mahtu veelgi, võrreldes individuaalsete mõjudega. Karrageeni süstimine suurendas järsult põletikuliste rakkude arvu: neutrofiilide, monotsüütide ja lümfotsüütide kontrolltasemed vastavalt 34,6, 4,2 ja 24,9 korda (tabel 1). Küll aga LJE ja CTE（Cistanche tubulosaväljavõte)vähendas oluliselt põletikulisi rakke annusest sõltuval viisil, milles LJE oli mõnevõrra parem kui CTE（Cistanche tubulosaväljavõte). Eeldatavasti saavutati LJE ja CTE koosmanustamisel sünergistlik toime põletikuliste rakkude infiltratsioonis（Cistanche tubulosaväljavõte).
Paralleelselt põletikuliste rakkude infiltratsiooniga kotis suurenes karrageeni süstimise järel drastiliselt ka NO ja PGE2 sisaldus kotis (tabel 1). Võrreldes LJE, CTE kerge toimega（Cistanche tubulosaväljavõte)alandas märkimisväärselt NO kontsentratsiooni. LJE ja CTE kombineeritud ravi（Cistanche tubulosaväljavõte)vähendas NO taset veelgi annusest sõltuval viisil. Sarnasel viisil surus LJE ja CTE kombineeritud ravi sünergistlikult alla suurenenud PGE2 taset (tabel 1).

Arutelu

Inimese peas on keskmiselt 100,{1}} juuksefolliikulit. Elu jooksul kasvab ja eraldub iga folliikuli umbes 20 korda, mis näitab 100 juuksekarva igapäevast väljalangemist [25]. Juuste väljalangemine, sealhulgas alopeetsia ja kiilaspäisus, on meeste ja naiste jaoks murettekitav seisund, eriti tänapäeva ühiskonnas. Seetõttu on väga oluline välja töötada uued ravimeetodid, mis hoiavad ära juuste väljalangemise ja soodustavad juuste taaskasvu. Selles osas on alternatiivmeditsiin äratanud uurijate huvi.

Meeste kiilaspäisuse vananemisega seotud morfoloogilised, histokeemilised ja biokeemilised aspektid on paljastatud kännu-saba-makaakide kohta tehtud uuringutes. Meeste tüüpi kiilaspäisuse korral pikenes telogeenfaas, samas kui anageenfaas lühenes. Seega leitakse, et juuste väljalangemise parandamiseks on väga oluline säilitada juuksefolliikulite pikenemine, mis toimub varasest anageenist keskmise anageenini [26]. Käesolevas uuringus näitasimejuuste kasvu- LJE ja CTE kombineeritud ravi hõlbustamine（Cistanche tubulosaväljavõte). Kõige tähtsam on see, et LJE (54 mg/kg) ja CTE (162 mg/kg) kombineeritud retseptil oli vaatamata ekstraktide suukaudsele manustamisele suurepärane juuste taaskasvamise aktiivsus. Kombineeritud ravi mõju oli võrreldav puhastatud ühendi minoksidiili kõrge kontsentratsiooniga (3 protsenti) nahakaudse manustamisega, kuigi LJE ja CTE toimeainete kontsentratsioonid（Cistanche tubulosaväljavõte)nahale pärast suukaudset manustamist ei kinnitatud.
Jalgrattahiire nahas on -GTP aktiivsus väljendunud anageeni ajal, kuid väheneb oluliselt telogeeni ajal [27]. Nahas eksisteerib ensüüm eranditult juuksefolliikulite välimises ja sisemises juurekestas allpool rasunäärmete taset, milles -GTP puudub [27]. Võrdluseks, ALP väljendub silmatorkavalt karvkatte üksustes ja aktiivsus suureneb juuste taaskasvamise piirkonnas. ALP kui angiogeenne tegur parandab nahapapillide toitumist ja suurendab seeläbi anageeni ajal paksust [28]. Siiski leidis kinnitust, et ALP aktiivsus alopeetsia naha puhul vähenes [21]. Mehhaanilises uuringus suurendas võrdlusühend minoksidiil märkimisväärselt -GTP ja ALP aktiivsust, mis tähendab, et minoksidiil hõlbustabjuuste kasvumitte ainult juuksefolliikulisid esile kutsudes
anageenfaasi, vaid ka parandades verevoolu angiogeneesi kaudu. Kuna LJE suurendas ALP aktiivsust, on tehtud ettepanek, et LJE avaldab kasulikku mõjujuuste kasvuoma angiogeense potentsiaali kaudu, nagu järeldati eelmisest uuringust, et LJE toimeainel fukoidaanil on verevoolu parandav toime [29]. Võrdluseks CTE（Cistanche tubulosaväljavõte)suurendas nii -GTP kui ka ALP aktiivsust, mis viitab selle mõjule anageeni faasi induktsioonile ja verevoolu paranemisele. Vastavalt sünergilisele toimele -GTP ja ALP ensüümidele arvatakse, et LJE ja CTE koosmanustamisel on võimalik saavutada suurem juuste taaskasv.（Cistanche tubulosaväljavõte).
On hästi teada, et mitmesugused tsütokiinid ja kasvufaktorid, sealhulgas EGF ja VEGF, osalevad juuste morfogeneesi ja kasvu reguleerimises [30, 31]. Huvitav on märkida, et naha papillarakkudest pärinevatel teguritel on ümbritsevatele rakkudele kemotaktiline toime, mis omakorda soodustabjuuste kasvu[32]. EGF väljendub seoses juuksefolliikulite arenguga [33,34]. Kuigi nii EGF-i kui ka selle retseptori (EGFR) ekspressioon välimises juurekestas on folliikulite kasvu lõppedes allareguleeritud, taastub nende ekspressioon, kui folliikulite rakud sisenevad anageenfaasi. VEGF mängib olulist rolli angiogeneesis põletikulise reaktsiooni ja kasvaja arengu ajal [35]. Eelkõige on veresoonte võrgustik tihedalt seotud juuste kasvutsükliga [36-38]. Seetõttu kinnitati, et VEGF-i geeniekspressioon varieerub vastavalt inimese juuste tsüklile [39].

Käesoleva uuringu tulemuste põhjal on selgitatud, etjuuste kasvuMinoksidiili soodustav toime võib olla tingitud selle potentsiaalsest ülesreguleerivast EGF-ist ja VEGF-ist, mis soodustavad folliikulite kasvu ja angiogeneesi. Kuigi LJE ei mõjutanud VEGF-i ekspressiooni, suurendas see pärast suukaudset manustamist EGF-i sisaldust nahas. Võrdluseks CTE（Cistanche tubulosaväljavõte)oli efektiivne nii EGF-i kui ka VEGF-i ekspressioonis. Eelkõige LJE ja CTE（Cistanche tubulosaväljavõte)avaldas aditiivset mõju kasvufaktorite ekspressioonile.

Lisaks karvade pikenemisele paranes pärast ravi minoksidiili, LJE ja/või CTE-ga märkimisväärselt juuksefolliikulite terviklikkus.（Cistanche tubulosaväljavõte)mikroskoopilisel uurimisel. Inimpatsientide ja loommudelite juuste väljalangemise ja kiilaspäisuse varases faasis oli folliikulite terviklikkus halvenenud ja karvavõlli paksus vähenenud, samas kui folliikulite terviklikkus ja võlli paksus taastusid taastuvates karvades. Huvitaval kombel saavutati selline positiivne mõju juuksekomponentide terviklikkusele ja taaskasvule LJE pluss CTE suukaudse manustamisega.（Cistanche tubulosaväljavõte), mille toime oli võrreldav kõrge kontsentratsiooniga minoksidiili paikse manustamisega. Seetõttu eeldatakse, et LJE ja CTE suukaudseks manustamiseks mõeldud kombinatsioon（Cistanche tubulosaväljavõte)võib olla retsepti alusel suhteliselt mugav, võrreldes minoksidiili nahakaudse kasutamisega.
Hiire alopeetsia mudelis on tavaline steroiditundlik lümfotsüütide infiltratsioon juuksefolliikulite ümber, mis sarnaneb pisaranäärmepõletikuga inimese alopeetsia immunoteraapiaga [17, 40]. Käesolevas uuringus nõrgendasid LJE ja CTE karrageenist põhjustatud nahapõletikku märkimisväärselt（Cistanche tubulosaväljavõte)ravi; st vaskulaarne eksudatsioon ja põletikuliste rakkude infiltratsioon suruti sünergistlikult alla. Kvantitatiivses analüüsis olid peamised põletikumediaatorid NO ja PGE 2 oluliselt kontrolli all pärast LJE ja CTE suukaudset manustamist.Cistanche tubulosaväljavõte). Huvitav on see, et kuna LJE-l oli suurem põletikuvastane toime kui poolpuhastatud fukoidaanil [16], siis eeldatakse, et LJE-s võib lisaks fukoidaanile olla veel üks(ad) toimeaine(d).

Kokkuvõttes näitavad tulemused, et kombineeritud suukaudne ravi LJE ja CTE-ga（Cistanche tubulosaväljavõte)parandab juuste väljalangemist, reguleerides kasvufaktoreid ja nendega seotud ensüümide aktiivsust ning osaliselt põletikuvastase potentsiaali kaudu. Seetõttu on soovitatav kombineerida LJE-d ja CTE-d（Cistanche tubulosaväljavõte)sobimatud kliinilised annused ja suhted võivad olla juuste väljalangemise patsientide retseptiks.

Cistanche tubulosaekstrakti tooted

Tänuavaldused

Seda uurimistööd toetasid rahaliselt Chungcheongi juhtiva tööstuse büroo majanduspiirkonna juhtiv tööstuse arendus, Korea Tehnoloogia Edendamise Instituut (KIAT) ja Teadmusmajanduse ministeerium (MKE) ning osaliselt kõrge lisandväärtusega toidutehnoloogia arendusprogramm. , Põllumajandus-, Toidu- ja Maaeluministeerium (MAFRA; toetuse number 113034-3).

Huvide konflikt

Autorid kinnitavad, et nende tulemuste avaldamisel puudub rahaline huvide konflikt.

Autor: "Laminaria japonica ja Cistanche tubulosa ekstraktide kombineeritud ravi efektiivsus juuste kasvus"Kyungha Shin1# et al

--- Lab Anim Res 2015: 31(1), 24-32http://dx.doi.org/10.5625/lar.2015.31.1.24

VIITED

1. Kim JS, Kang BS, Park HJ, Kim DY, Hwang SY, Nam SY, Yun YW, Lee BJ. Taimeekstraktide segude mõju C3H/HeJ hiirte karvade taastumisele. J Biomed Res 2009; 10(3): 99-108.
2. Paus R, Cotsarelis G. Juuksefolliikulite bioloogia. N Engl J Med 1999; 341 lõige 7; 491-497.
3. Cotsarelis G. Karvanääps: suremine tähelepanu saamiseks. Am J Pathol 1997; 151(6): 1505-1509.
4. Cotsarelis G, Sun TT, Lavker RM. Märgistust säilitavad rakud asuvad pilosebaceous üksuse kühmupiirkonnas: mõju folliikulite tüvirakkudele, juuste tsüklile ja naha kantserogeneesile. Cell 1990; 61(7): 1329-1337.
5. Oshima H, Rochat A, Kedzia C, Kobayashi K, Barrandon Y. Täiskasvanute multipotentsetest tüvirakkudest pärit juuksefolliikulite morfogenees ja uuendamine. Cell 2001; 104(2): 233-245.
6. Burton JL, Marshall A. Minoksidiilist tingitud hüpertrichoos. Br J Dermatol 1979; 101(5): 593-595.
7. Meisheri KD, Cipkus LA, Taylor CJ. Minoksidiilsulfaadist põhjustatud vasodilatatsiooni toimemehhanism: roll suurenenud K pluss läbilaskvuses. J Pharmacol Exp Ther 1988; 245(3): 751-760.
8. Buhl AE, Waldon DJ, Baker CA, Johnson GA. Minoksidiilsulfaat on aktiivne metaboliit, mis stimuleerib juuksefolliikulisid. J Invest Dermatol 1990; 95(5): 553-557.
9. Kaufman KD, Dawber RP. Finasteriid, 2 5-tüüpi alfa-reduktaasi inhibiitor meeste androgeense alopeetsia ravis. Expert Opin Investig Drugs 1999; 8(4): 403-415.
10. Feldman SC, Reynaldi S, Stortz CA, Cerezo AS, Damont EB. Leathesia difformis'e fukoidaani fraktsioonide viirusevastased omadused. Fütomeditsiin 1999; 6(5): 335-340.
11. Wang J, Zhang Q, Zhang Z, Song H, Li P. Laminaria japonicast ekstraheeritud madala molekulmassiga fukoidaani fraktsioonide potentsiaalne antioksüdant ja antikoagulant. Int J Biol Macromol 2010; 46(1): 6-12.
12. Bojakowski K, Abramczyk P, Bojakowska M, Zwoliñska A, Przybylski J, Gaciong Z. Fucoidan parandab neerude verevoolu roti neeruisheemia/reperfusioonikahjustuse varases staadiumis. J Physiol Pharmacol 2001; 52(1): 137-143.
13. Li N, Zhang Q, Song J. Laminaria japonicast ekstraheeritud fukoidaani toksikoloogiline hindamine Wistari rottidel. Food Chem Toxicol 2005; 43(3): 421-426.
14. Shimoda H, Tanaka J, Takahara Y, Takemoto K, Shan SJ, Su MH. Hiina traditsioonilise toormeditsiini Cistanche tubulosa ekstrakti hüpokolesteroleemiline toime hiirtele. Am J Chin Med 2009; 37(6): 1125-1138.
15. Yamada P, Iijima R, Han J, Shigemori H, Yokota S, Isoda H. Cistanche tubulosast eraldatud akteosiidi inhibeeriv toime keemilise vahendaja vabanemisele ja põletikulise tsütokiini tootmisele RBL-2H3 ja KU812 rakkude poolt. Planta Med 2010; 76(14): 1512-1518.
16. Kyung J, Kim D, Park D, Yang YH, Choi EK, Lee SP, Kim TS, Lee YB, Kim YB. Laminaria japonica fukoidani ja Cistanche tubulosa ekstrakti sünergistlik põletikuvastane toime. Lab Anim Res 2012; 28(2): 91-97.
17. Chee E, Fong KS, Al Jajeh I, Nassiri N, Rootman J. Pisaranäärme põletiku seos alopeetsiaga. Orbiit 2015; 34(1): 45-50.
18. Brzezinska-Wcislo L, Bergler-Czop B, Wcislo-Dziadecka D, LisSwiety A. Alopeetsia areata ravi uued aspektid. Postepy Dermatol Alergol 2014; 31(4): 262-265.
19. Hattori M, Ogawa H. Biokeemiline analüüsjuuste kasvuvananemise ja ensüümitegevuse aspektidest. J Dermatol 1983; 10(1): 45-54.
20. Lee SH, Lee HJ, Baek IJ, Yon JM, Nam SY, Lee BJ, Yun YW, Kim YB, Hwang SY, Hong JT. DREAMMO® peanahakreemi mõjujuuste kasvuedendamine C57BL/6 hiirte alopeetsia mudelis. Lab Anim Res 2006; 22(1): 91-96.
21. Handjiski BK, Eichmüller S, Hofmann U, Czarnetzki BM, Paus R. Aluselise fosfataasi aktiivsus ja lokaliseerimine hiire juuste tsükli ajal. Br J Dermatol 1994; 131(3): 303-310.
22. Cross MJ, Dixelius J, Matsumoto T, Claesson-Welsh L. VEGF retseptori signaaliülekanne. Trends Biochem Sci 2003; 28(9): 488-494.
23. Shin S, Jeon JH, Park D, Jang JY, Joo SS, Hwang BY, Choe SY, Kim YB. Angelica gigas etanooliekstrakti põletikuvastane toime karrageeni-õhukoti põletikumudelis. Exp Anim 2009; 58(4): 431-436.
24. Kim D, Park D, Kyung J, Yang YH, Choi EK, Lee YB, Kim HK, Hwang BY, Kim YB. Houttuynia cordata superkriitilise ekstrakti põletikuvastane toime karrageeni-õhukoti põletiku mudelis. Lab Anim Res 2012; 28(2): 137-140.
25. Rebora A. Androgeense alopeetsia patogenees. J Am Acad Dermatol 2004; 50(5): 777-779.
26. Shirai A, Ikeda J, Kawashima S, Tamaoki T, Kamiya T. KF19418, uus ühendjuuste kasvuin vitro ja in vivo hiiremudelite edendamine. J Dermatol Sci 2001; 25(3): 213-218.
27. Kawabe TT, Kubicek MF, Johnson GA, Buhl AE. Gamma-glutamüültranspeptidaasi aktiivsuse kasutamine karvatsükli ja anageeni indutseerimise markerina hiire juuksefolliikulites. J Invest Dermatol 1994; 103(1): 122-126.
28. Hamada K, Suzuki K. Biokeemiliste indeksite hindamine karvatsükli markerina C3H hiirtel. Exp Anim 1996; 45(3): 251-256.
29. Park SJ, Lee KW, Lim DS, Lee S. Sulfaaditud polüsahhariid fukoidaan stimuleerib inimese rasvkoest pärinevate tüvirakkude osteogeenset diferentseerumist. Stem Cells Dev 2012; 21(12): 2204-2211.

30. Danilenko DM, Ring BD, Pierce GF. Kasvufaktorid ja tsütokiinid juuksefolliikulite arengus ja tsüklis: hiljutised teadmised loommudelitest ja kliinilise ravi võimalused. Mol Med Today 1996; 2(11): 460-467.
31. Ozeki M, Tabata Y. In vivo soodustas hiirte juuksefolliikulite kasvu kasvufaktorite kontrollitud vabanemisega. Biomaterjalid 2003; 24(13): 2387-2394.
32. Fujie T, Katoh S, Oura H, Urano Y, Arase S. Dermal papilla cell-derived factor kemotaktiline toime välisjuure ümbrise rakkudele. J Dermatol Sci 2001; 25(3): 206-212.
33. Stenn KS, Paus R. Juuste folliikulite ringluse kontroll. Physiol Rev 2001; 81(1): 449-494.
34. Chapman RE, Hardy MH Intradermaalselt süstitud ja paikselt manustatud hiire epidermise kasvufaktori mõju meriinolammaste villa kasvule, nahale ja villafolliikulisse. Aust J. Biol. Sci 1988; 41(2): 261-268.
35. Dvorak HF, Brown LF, Detmar M, Dvorak AM. Vaskulaarne läbilaskvusfaktor/vaskulaarne endoteeli kasvufaktor, mikrovaskulaarne hüperpermeaablus ja angiogenees. Am J Pathol 1995; 146(5): 1029-1039.
36. Ellis RA, Moretti G. Inimese peanaha katageensete juuksefolliikulitega seotud veresoonte mustrid. Ann NY Acad Sci 1959; 83: 448-457.
37. Stenn KS, Fernandez LA, Tirrell SJ. Roti vibrissa karvanääpsu angiogeensed omadused on seotud sibulaga. J Invest Dermatol 1988; 90(3): 409-411.
38. Yano K, Brown LF, Detmar M. Control ofjuuste kasvuja folliikulite suurus VEGF-vahendatud angiogeneesi kaudu. J Clin Invest 2001; 107(4): 409-417.
39. Lachgar S, Charveron M, Ceruti I. VEGF mRNA ükskõiksete juuksefolliikulite etappide jaotus fluorestsentsi in situ hübridisatsiooniga kombineerituna konfokaalse lasermikroskoopiaga. In: Hair Research for the Next Millennium (Van Neste DJJ, toim), Elsevier, Amsterdam, 1996; lk 407-12.
40. Freyschmidt-Paul P, Sundberg JP, Happle R, McElwee KJ, Metz S, Boggess D, Hoffmann R. Alopeetsia areata-sarnase juuste väljalangemise edukas ravi kontaktsensibilisaatoriga ruuthappe dibutüülestriga (SADBE) C3H/HeJ hiirtel . J Invest Dermatol 1999; 113(1): 61-68.