Tsistanche tõhusad koostisosad: fenüületanoidglükosiidide eraldamise ja puhastamise meetod

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com

Fenüületanoidglükosiidide eraldamine ja puhastamine Cistanche Deserticolast kiire vastuvoolukromatograafia abil

Li a,b, Rong Tsao b,*, Raymond Yang b, Chunming Liu a,

J. Christopher Young sünd, Honghui Zhu sünd

Changchuni tavaülikooli keemiaosakond, Changchun 130032, Hiina

b Guelph Food Research Centre, Agriculture and Agri-Food Canada, 93 Stone Road West, Guelph, Ontario, Kanada N1G 5C9

Saabunud 31. mail 2007; saadetud parandatud kujul 16. oktoobril 2007; vastu võetud 29. oktoobril 2007

Abstraktne:

Viisfenüületanoidglükosiidid(PhG-d),ehhinakosiid, tsistanosiid A, akteosiid, isoakteosiid ja 20-atsetüüllakteosiid eraldati ja puhastatiCistanche deserticolaesimest korda kiire vastuvoolukromatograafiaga (HSCCC), kasutades kahte kahefaasilist süsteemi, millest üks koosneb etüülatsetaadist-etanoolist-veest (5:0.5:4,5, maht/maht) ja teine etüülatsetaat-n-butanool-etanool-vesi ({{10}},5:0,5:0,1:1, v/v/v/v). Kokku 28,5 mg ehhinakosiidi, 18,4 mgtsistanosiid A, 14,6 mgakteosiid1412 mg n-butanooli ekstraktist puhastati 30,1 mg isoakteosiidi ja 25,2 mg 20-atsetüüllakteosiidi.Cistanche deserticolapuhtusaste üle 92,5%, määratuna HPLC abil. Struktuurid identifitseeriti nende retentsiooniaja, UV, LC-ESI-MS järgi negatiivse iooni režiimis ja need kinnitati NMR-katsetega. Arutatakse viie ühendi iseloomulikku LC-ESI-MSn fragmentatsioonimustrit ning leitakse, et see on väga spetsiifiline ja kasulik vahend PhG-de struktuurseks identifitseerimiseks sellest olulisest ravimtaimest.

Crown Autoriõigus © 2007 Väljaandja Elsevier Ltd. Kõik õigused kaitstud.

Märksõnad:Cistanche deserticola; fenüületanoid;ehhinakosiid; tsistanosiid A;Akteosiid; Isoakteosiid; 20-Atsetüüllakteosiid; HSCCC; LC-ESI-MS; NMR

1. Sissejuhatus

Cistanche deserticolaYC Ma on tuntud Hiina taimne ravim ja seda on laialdaselt kasutatud traditsioonilistes preparaatides, mis sarnanevad tänapäeva funktsionaalse toidu koostisosade või toidulisanditega (Wong, Li, Cheng, & Chen, 2006). C. deserticola peamised bioaktiivsed koostisosad onfenüületanoidglükosiidid (PhG), sealhulgasehhinakosiid, akteosiid, isoakteosiid, 20-atsetüüllakteosiid jatsistanosiid A(Kobayashi, Karasawa ja Miyase, 1984; Kobayashi et al., 1987). PhG-d on taimeriigis laialt levinud ja neid on põhjalikult uuritud nende erinevate bioloogiliste funktsioonide, nagu hepatoprotektiivne (Xiong et al., 1998), põletikuvastane, antinotsitseptiivne toime (Schapoval et al., 1998) ja antioksüdantne toime (Cheng). , Wei, Guo, Ni ja Liu, 2005; He, Lau, Xu, Li ja But, 2000; Li, Wang ja Wang, 1997; Li, Wang, Zheng, Liu ja Jia, 1993; Wang, Jiang , Wu ja Wang, 2001; Xiong, Kadota, Tani ja Namba, 1996), seksuaalfunktsiooni parandamise (Xie & Wu, 1993; Zong, He, Wu ja Chen, 1996) ja rahustava toime (Lu, 1998) .

Ülaltoodud oluliste bioaktiivsuste tõttu on hädasti vaja suurtes kogustes puhtaid ühendeid võrdlusstandarditena ning mitmesuguste traditsiooniliste hiina ravimite kasutamisega seotud in vitro ja in vivo uuringute jaoks. Seetõttu on vaja tõhusaid meetodeid PhG-de eraldamiseks, puhastamiseks ja struktuuri iseloomustamiseks. Kuid selline töö nõuab proovi puhastamiseks ja eraldamiseks tavaliselt mitme kromatograafilise etapi kasutamist (Gross, Lahloub, Anklin, Schulten ja Sticher, 1988; Nishimura, Sasaki, Inagaki, Chin ja Mitsuhashi, 1991; Ravn, Nishibe , Sasahara ja Li, 1990; Shoyama, Matsumoto ja Nishioka, 1987), mille tulemuseks on tavaliselt madal taastumismäär, mis on tingitud PhG-de pöördumatust adsorptsioonist tahkele alusele eraldamise ajal (Lei et al., 2001). Seevastu kiire vastuvoolukromatograafia (HSCCC) on muutunud tõhusaks alternatiiviks tavapärastele kromatograafilistele tehnikatele mõnede PhG-de eraldamiseks taimeekstraktidest (Lei et al., 2001; Li et al., 2005). Lei et al. edukalt eraldatudakteosiidja 20-atsetüüllakteosiid Cistanches salsast (CA Mey.) G. Beck, kasutades HSCCC-d (Lei et al., 2001). Selle artikli autorid on varem teatanud eraldamisestakteosiidja isoakteosiid taimelt Plantago psyllium L., HSCCC poolt (Li et al., 2005). Siiski ei ole avaldatud ühtegi aruannet mitmete PhG-de eraldamise ja puhastamise kohtaCistanche deserticolakasutades HSCCC-d. Standardite puudumise tõttu on LC-MS meetodid välja töötatud ja kasutatud võimsa analüütilise vahendina mõnede PhG-de kiireks iseloomustamiseks ja tuvastamiseks taimeekstraktis (Li et al., 2005; Wang et al., 2000).

Selles artiklis kirjeldame ehhinakosiidi valmistamiseks välja töötatud HSCCC meetodit,tsistanosiid A, akteosiid, isoakteosiid ja 20-atsetüüllakteosiidCistanche deserticola. Viie eraldatud PhG iseloomustamine ja analüüs viidi läbi LC-ga, mis oli ühendatud reasisese ESI massispektromeetria ja NMR-katsetega. Viie PhG retentsiooniaeg, molekulmass ja iseloomulikud fragmendi ioonid on esitatud ja arutatud selles artiklis. Selles uuringus tuvastatud viie PhG struktuurid on näidatud joonisel 1.

ehhinakosiidin cistanche

2. Eksperimentaalne

2.1. Kemikaalid ja reaktiivid

Akteosiidosteti firmalt Sigma-Aldrich (Oak-Ville, ON), ehhinakosiid osteti firmalt ChromaDex (Santa Ana, CA). Isoakteosiid eraldati P. psyllium L.-st (Li et al., 2005).Cistanche deserticolaosteti Pekingi TongRenTang Medicinal Store'ist (Hiina). Kõik lahustid olid HPLC kvaliteediga ja ostetud ettevõttest Caledon Laboratories Ltd. (Georgetown, ON).

2.2. Proovi ettevalmistamine

Cistanche deserticola(20 g) ekstraheeriti viis korda toatemperatuuril 12 tundi iga kord 100 ml 80% etanooli vesilahusega. Iga kord, kui ekstraheerimissegu filtreeriti läbi Whatman No.1 filterpaberi (Whatman International Ltd., Maidstone, Inglismaa). Ühendatud filtraat kontsentreeriti vaakumis < 40="" kraadi="" juures="" mahuni="" 100="" ml.="" saadud="" vesilahus="" rasvatustati="" kaks="" korda,="" kumbki="" 100="" ml="" heksaaniga,="" ja="" seejärel="" ekstraheeriti="" järjest="" viis="" korda,="" iga="" kord="" 100="" ml="" n-butanooliga.="" butanooli="" kihid="" ühendati="" ja="" kontsentreeriti="" vaakumis="" kuivaks="" temperatuuril="">< 40="" °c,="" mis="" andis="" 2,2="" g="" n-butanooli="" ekstrakti.="" ekstrakti="" säilitati="" enne="" hsccc="" eraldamist="" -20="" kraadi="">

2.3. HSCCC eraldamise protseduur

Preparatiivne HSCCC viidi läbi mudeli CCC{{0}} suure kiirusega vastuvoolukromatograafias (Pharma-Tech Research, Baltimore, Maryland USA). Sellel seadmel oli kolm järjestikku ühendatud ettevalmistavat mähist (kogumaht 325 ml). Seadme pöörlemiskiirust sai reguleerida vahemikus 0 kuni 2000 p/min. HSCCC süsteem oli varustatud HPLC pumbaga (Pharma-Tech Research, Baltimore, Maryland, USA), Model 450 UV-detektoriga (Alltech, USA), Model L 120 E lame voodisalvestiga (Linseis Inc., Princeton Jct, USA), fraktsioonikoguja (Advantec MFS Inc., USA) ja 10-mL prooviaasaga proovi süstimisklapp.

Etüülatsetaadi-etanooli-vee segu (5:0.5:4,5, v/v/v) loksutati tugevalt jaotuslehtris ning lasti seista ja eralduda toatemperatuuril. Neid kahte faasi kasutati HSCCC-s pärast tasakaalu saavutamist. Kogu keritud kolonn täideti esmalt ülemise kihiga, mis toimib statsionaarse faasina. Alumine kiht (liikuv faas) pumbati seejärel kolonni peaossa voolukiirusega 1,5 ml/min. Pöörlemiskiiruseks määrati 1050 pööret minutis. Proov (iga kord ca 230 mg), mis oli lahustatud 8 ml etüülatsetaadi-etanooli-vee segus (5:0,5:4,5, v/v/v), laaditi sissepritseventiilisse pärast seda, kui süsteem saavutas hüdrodünaamilise taseme. tasakaal. See kahefaasiline lahustisüsteem valiti jaotusteguri (K) alusel, mis oli 0,87, 1,11 ja 1,32.akteosiid, isoakteosiidi ja 20 atsetüüllakteosiidi. K väärtus oli sama ühendi ülemise ja alumise kihi kontsentratsioonide suhe, mis määrati HPLC abil (joonis 2). Kolonni väljalaskeavast väljuvat vedelikku jälgiti pidevalt UV-detektoriga lainepikkusel 254 nm ja see koguti katseklaasidesse, mille fraktsioonikoguja oli iga katseklaasi jaoks seatud 4 minutiks.

2.4. LC tingimused

n-butanooli ekstraktis sisalduvate PhG-de analüüsimiseks kasutati staatilist automaatset proovivõtturit ja fotodioodide massiividetektorit (DAD).Cistanche deserticolaja HSCCC eraldamisel kogutud fraktsioonid. Eraldamine viidi läbi Phenomenex ODS-C18 kolonnis (250 × 4,6 mm, 5 lm) koos C18 kaitsekolonniga. Binaarne liikuv faas koosnes atsetonitriilist (lahusti A) ja veest, mis sisaldas 2 protsenti äädikhapet (lahusti B). Kõik lahustid filtriti läbi a

{{0}}.45 lm filter enne kasutamist. Voolukiirust hoiti konstantsena 1.{6}} ml/min kogu tööaja jooksul 25 minutit. Süsteemi käitati gradientprogrammiga: 0–20 min: 90 protsenti B kuni 60 protsenti B; 20–22 min: 60 protsenti B kuni 0 protsenti B; ja 22–25 min, 0 protsenti B kuni 90 protsenti B. Proovi süstimise maht oli 10 l. Huvipakkuvaid piike jälgiti 320 nm juures DAD-detektoriga.

2.5. LC-ESI-MS katsed

LC-MS katsed viidi läbi, kasutades Finnigan LCQ DECA ioonlõksu massispektromeetrit (Thermo Finnigan, San Jose, CA, USA), mis oli varustatud elektropihustusionisatsiooni (ESI) allikaga. Proove analüüsiti samades kromatograafilistes tingimustes. Andmete kogumiseks kasutati negatiivset mudelit. Kattegaasi ja lisavoolukiiruseks määrati vastavalt 96 ja 7 (suvaline ühik). Kapillaari pingeks seati 29 V ja selle temperatuuri reguleeriti 350 kraadini. Sisendläätse pinge fikseeriti 40 V ja mitmepooluselise raadiosagedusliku amplituud 540 V. ESI nõela pinget reguleeriti 4,5 kV juures. Toruläätse nihe oli 16 V, mitmepooluselise läätse 1 nihe oli 8,20 V ja mitmepooluselise läätse 2 nihe oli 10,5 V. Ioonide tuvastamiseks määrati elektronide kordaja pinge 980 V.

2.6. NMR identifitseerimiseks

NMR spektrid registreeriti Bruker Avance{0}} spektromeetriga (Bruker BioSpin Ltd., Milton, Kanada). Ainult ühendid 2 ja 5 (standardid puuduvad) allutati NMR-katsetele. Proovid lahustati CD3OD-s.

3. Tulemused ja arutelu

3.1. HSCCC eraldamine

n-butanooli ekstraktCistanche deserticolaja igale HSCCC-ga eraldatud piigile vastavaid fraktsioone analüüsiti HPLC abil ning tulemused on toodud joonisel 2. Viis peamist ühendit (piigid 1–5) eraldati ja tuvastati retentsiooniaegadega 9,2 min, 10,7 min ja 12,3 min. ,

vastavalt 13,3 min ja 16,2 min.

Edukas HSCCC eraldamine sõltub suuresti sobivast kahefaasilisest lahustisüsteemist, mis tagab soovitud ühendi ideaalse jaotuskoefitsiendi (K) ligikaudu 1. Selline kahefaasiline süsteem peaks andma ka mõistlikult lühikese settimisaja (Chen, Games & Jones, 2003; Foucault & Chevolot, 1998; Oka, Oka ja Ito, 1991). Meie katses valisime neli lahustisüsteemi seeriat vastavalt sihtühendite lahustuvuseleCistanche deserticola. Igas faasis kontsentratsiooni mõõtmiseks kasutati HPLC-d, millest arvutati sihtühendite K väärtused. Kaks süsteemi, etüülatsetaat-n-butanool-etanool-vesi (4:0.6:0.6:5, v/v/v/v) ja etüülatsetaat-vesi (1: 1, v/v), on varem kasutatud HSCCC-s eraldamiseksakteosiidja 20-atsetüüllakteosiid C. salsa,akteosiid, ja vastavalt P. Psyllium isoakteosiid (Lei et al., 2001; Li et al., 2005). Kuigi esimesel süsteemil oli suhteliselt lühike settimisaeg, oli see kehv jõudlus PhG-de eraldamiselCistanche deserticola, mis on tingitud ühendite 1 ja 2 madalatest K väärtustest ning ühendite 3–5 kõrgetest K väärtustest. Teise süsteemi ühendite 1–4 K väärtused olid väga madalad, kuid ühendi 5 puhul väga kõrged (tabel 1). Modifitseeritud süsteem, mis sisaldas etüülatsetaati-etanooli-vett (5:{{10}},5:4,5, v/v/v), andis ühendite 3–5 jaoks ideaalse K väärtuse 0,87, 1,11, ja 1,32, ning tulemuseks oli nende kolme ühendi hea eraldumine (joonis 3A ja B). See süsteem aga tootis

liiga väike K väärtus ühendite 1 ja 2 jaoks, põhjustades nende kahe ühendi kooselueerumise lahusti rinde lähedal (fraktsioon 1 joonisel 3A). Süsteemi täiendav modifikatsioon (etüülatsetaat-n-butanool-etanool-vesi (0.5:0.5:0.1:1, v/v/v/) v) tõstis ühendite 1 ja 2 K väärtused vastavalt väärtusele 0,52 ja 0,92 ning viis täieliku eraldumiseni (joonis 3C). Joonisel 3A on näidatud HSCCC eraldamine proov, mis sisaldab 230 mg n-butanooli ekstraktiCistanche deserticolakasutades etüülatsetaati-etanooli-vett (5:0.5:4,5, v/v/v). Fraktsioonid, mille kohta HPLC kinnitas, et need sisaldavad ainult ühendeid 3, 4 või 5, ühendati eraldi ning need, mis sisaldasid ühendeid 3 ja 4, ühendati, külmkuivatati ja allutati edasiseks eraldamiseks uuesti HSCCC-le (joonis 3B). Ülalkirjeldatud kaheetapiline HSCCC eraldamine andis 1412 mg n-butanooli ekstraktist kokku 14,6 mg, 30,1 mg ja 25,2 mg ühendeid 3–5. Joonisel 3C on kujutatud ühendeid 1 ja 2 (fraktsioon 1 esimesel eraldamisel) sisaldava proovi HSCCC eraldamist, kasutades etüülatsetaadi-n-butanooli-etanooli-vett (0.5:0.5). :0,1:1, v/v/v/v). Kokku saadi 28,5 ja 18,4 mg ühendeid 1 ja 2. Külmkuivatatud ühendite 1–5 kromatograafiline puhtus oli üle 92,5%, mida kasutati vahetult LC-ESI-MS ja NMR analüüsides.

3.2. Struktuuri identifitseerimine LC-ESI-MS ja NMR abil

Ühendite 1, 3 ja 4 esialgne identifitseerimine saavutati autentse ehhinakosiidi omadega ühtsete retentsiooniaegade ja UV-spektriandmetega,akteosiidja isoakteosiid (joonis 2). Ühendid 2 ja 5 olid tundmatud, kuid kõigi viie ühendi UV-spektrid olid väga sarnased, mis viitab sarnastele struktuurilistele tunnustele.

Nende viie ühendi struktuuride edasiseks uurimiseks prooviti teha LC-ESI-MSn katseid ning tulemused on näidatud joonisel 4 ja tabelis 2. Joonisel 2 kujutatud piikide (1-5) ühenditel ilmnesid intensiivsed deprotoneeritud molekulaarsed ioonid. [MH] – m/z vastavalt 785, 799, 623, 623 ja 665 negatiivses režiimis. Dimeerseid [2M H]-ioone täheldati ka piikide 1–4 puhul joonisel 2. Need kinnitasid, et piikide 1–5 molekulmassid on vastavalt 786, 800, 624, 624 ja 666. LC-MSN-i andmed (tabel 2) andsid viie PhG kohta väga kasulikku struktuuriteavet, nagu näiteks neutraalne kadu.

Eksperimentaalne protseduur: ligikaudu 1 mg igast proovist kaaluti 10 ml katseklaasis, kuhu lisati 1 ml eelnevalt tasakaalustatud kahefaasilise lahustisüsteemi igast faasist. Katseklaas suleti ja loksutati tugevalt 1 minut ning lasti seista, kuni see täielikult eraldus. Igast kihist võeti välja 100 l alikvoot ja aurustati eraldi vaakumis kuivaks<40 °c.="" the="" residue="" was="" dissolved="" in="" 10="" ll="" methanol="" and="" analyzed="" by="" hplc="" for="" determining="" the="" partition="" coefficient="" (k)="" of="" compounds="" 1–5.="" the="" k="" value="" was="" expressed="" as="" the="" peak="" area="" of="" the="" target="" compound="" in="" the="" upper="" phase="" divided="" by="" that="" in="" the="" lower="">

kofeoüülrühm (162), glükoosiosa (162), ramnoosiosa (146), CH2 radikaal (14) ja COCH2 rühm (42).

Piigi 1 LC-ESI-MS on näidatud joonisel 4A. Deprotoneeritud molekulaarne ioon [MH] – m/z 785 juures suure arvukusega ja dimeerne deprotoneeritud molekul

ioon [2M H] – m/z 1571 juures täheldati negatiivses režiimis, mis viitab molekulmassile 786, mis oli sama mis ehhinakosiidil. M/z 785 ioonide LC–MS2 eksperimendi edasine uurimine andis ühe peamise tütariooni m/z 623 juures (joonis 4B), mis saadi otse m/z 785-st kofeoüülrühma või heksoosifragmendi kadumise tõttu [M 162 H]-. LC-MS3 spekter m/z 623 näitas kahte peamist iooni m/z 477 ja 461 juures ning kahte väiksemat iooni m/z 315 ja 179 juures (joonis 3C, tabel 2). Massierinevused m/z 623 ja fragmendi ioonide m/z 477 ja 461 vahel olid vastavalt 146 ja 162, mis vastab ramnoosiühiku ja glükoosiosa või kohv-fragmendi [M 162 H] – kadumisele. M/z 623 ioonid kaotasid m/z 315 ioonide saamiseks ka kofeoüülrühma ja ramnoosiosa. Ioon m/z 179 juures tekkis kofeoüülrühma lõhustumisel, kusjuures negatiivne laeng jäi kofeoüülrühma osale. LC-ESI-MSN katse autentse ehhinakosiidiga näitas sama killustumise mustrit. Seetõttu kinnitati, et tipp 1 on ehhinakosiid.

Piigi 2 puhul näitas LC-ESI-MS m/z 799 deprotoneeritud molekuliioonina [MH] ja m/z 1599 dimeerse ioonina, mis viitab molekulmassile 800. MS2 katsete ajal oli m/z 799 iooni moodustasid kolm tütart

ioonid m/z juures 637, 623 ja 475 (tabel 1). Ioon m/z 637 juures toodeti otse m/z 799 lähteioonist kofeoüüli [M-162-H]- või glükoosiosa [M-162-H]- neutraalse kao tõttu. Ioon m/z 623 juures tulenes CH2 radikaali kadumisest. Ioon m/z 475 juures tekkis nii kofeoüülrühma [M162H]- kui ka lähteiooni glükoosiosa neutraalsest kadumisest. MS3 katse m/z 637 andis kolm iooni m/z 619, 491 ja 475 juures, mis vastavad vastavalt ühe vee, ramnoosiühiku ja glükoosiosa kadudele. Tütarioon m/z 623 andis MS3 uuringus m/z 461 ja 315, mis järgis samu killustamisradasid nagu ehhinakosiid, nagu eespool kirjeldatud. LC-ESI-MSN andmed toetasid 2. tipu esialgset tuvastamist kuitsistanosiid A.

Piikide jaoks viidi läbi ka LC-ESI-MS katsed

3 ja 4 (tR 12,49 ja 13,46 min joonisel 2). Mõlemad piigid näitasid negatiivses režiimis sama [MH]-iooni m/z 623 juures ja dimeeri m/z 1247 juures (tabel 1), mis näitab, et need võivad olla sama molekulmassiga isomeerid.

624, sama misakteosiidja isoakteosiid. [MH]-ioonide MS2 spektrid näitasid ka ühte sama tütariooni m/z 461, mis näitas kofeoüüli fragmendi kadumist lähteioonist m/z 623 (tabel 1). Kahe ühendi puhul saadi sarnased MS3 spektrid. Piigi 3 puhul moodustas iooni MS3 spekter m/z 461 juures kolm iooni m/z 315, 161 ja 135 juures. M/z 315 moodustub pärast ramnoosi kadu, nagu eespool kirjeldatud. Ioon m/z 161 tekkis kofeoüülrühma lõhustamisel, millele järgnes veel ühe vee kadu; laeng jäi kofeoüülrühma osale. Ioon m/z juures 135 [aglükoon 18 H] – tekkis glükosiidsideme lõhustumisel positsioonis C1 koos täiendava veekaoga, jättes laengu aglükooni osale. Piigi 4 MS3 spekter järgis sama fragmentatsioonirada kui piigi 3, välja arvatud puuduv ioon m/z 135 juures. Nende kahe ühendi molekulaarsed ioonid ja fragmentatsioonimustrid on kooskõlas kirjanduse andmetegaakteosiidja isoakteosiid (Wang et al., 2000), kuigi leiti täiendav ioon m/z 153 ja

määratud [aglükoon H] - Wang et al. (Wang et al., 2000). See ioon võis olla ebastabiilne ja kaotanud vett, andes meie katses m/z 135. Tuginedes MS andmetele ja piikide 3 ja 4 ühtsetele retentsiooniaegadele standarditega, on need seega identifitseeritud kuiakteosiidja vastavalt isoakteosiid.

Piigi 5 LC-ESI-MS andmed on toodud tabelis 2. Deprotoneeritud molekuliioon [MH]— (m/z 665) oli ainus negatiivses režiimis leitud ioon, mis tähendab, et molekulmass on 666. Kolm tütariooni MS2 katses täheldati m/z väärtustel 623, 503 ja 461 (tabel 2). Tütarioonid m/z 623 ja 503 juures moodustusid otse lähteioonist vastavalt COCH2 rühma ja kofeoüülrühma kadumisel. Ioon m/z 461 juures tulenes nii kofeoüüli kui ka COCH2 fragmendi [M 162 42 H] kadumisest lähteioonist. MS katses andis m/z 623 m/z 461 ja m/z 503 kolm iooni m/z 485, 461 ja 315 juures. Tütariooni MS3 spekter m/z 461 andis kaks iooni 443 juures. ja 315. Võrreldes piigi 5 LC-MSN fragmentatsioonimustrit teiste selles uuringus kirjeldatud ühenditega ja teiste teatatud ühenditega (Li et al., 2005; Wang et al., 2000), jõudsime järeldusele, et tipp 5 oli struktuurselt väga seotud. akteosiidiks, ainsaks erinevuseks on COCH3 üksus asendis R3. Seetõttu anti piigile 5 esialgne identsus 20-atsetüüllakteosiidina (joonis 1).

Kahe esialgselt identifitseeritud ühendi, piik 2 (tsistanosiid A) ja piik 5 (20-atsetüülakteosiid) struktuurid kinnitati 1H NMR abil. Kõikide ühendite 2 ja 5 prootonite keemilised nihked ja sidestuskonstandid, nagu on näidatud tabelis 3, kattusid esitatud NMR andmetegatsistanosiid Aja 20-atsetüüllakteosiid vastavalt (Kobayashi et al., 1984, 1987). Käesolevas uuringus viidi läbi ka 2D NMR katsed (kaugmaa COSY, ROESY ja CH korrelatsioon) ja need kinnitasid veelgi identifitseerimist (andmeid pole näidatud).

fenüületanoidglükosiidid cistanche'is

4. Järeldused

Käesolevas artiklis kasutati HSCCC-d edukalt ehhinakosiidi eraldamiseks ja puhastamiseks,tsistanosiid A, akteosiid, isoakteosiid ja 20-atsetüüllakteosiid C. deserticola n-butanooli ekstraktist. Seetõttu on see tõestatud vahend bioaktiivsete ainete poolpreparatiivseks eraldamiseks. Vahepeal on Cistanche deserticola viie PhG struktuure uuritud LC-ESI-MSN abil; leiti mõned PhG-dele iseloomulikud tunnused, mis võimaldasid määrata struktuurides funktsionaalrühmi. LC-ESI-MSN meetod on seega võimas tööriist kiireks tuvastamiseksfenüületanoididja nende glükosiididCistanche deserticolaekstraktid, eriti kui need on tõestatud NMR andmetega.

Tunnustus

Autorid soovivad tänada Jun Gu-d Kanada Ontario Guelphi ülikooli tuumamagnetresonantskeskusest abi eest NMR-katsetes. Seda projekti toetas osaliselt Hiina Jilini provintsi rahastus (nr 20060904).

Viited

Chen, LJ, Games, DE ja Jones, J. (2003). Nelja flavonoidkomponendi eraldamine ja identifitseerimine Oroxylum Indicum'i seemnetest kiire vastuvoolukromatograafia abil. Journal of Chromatography A, 988, 95–105.

Cheng, XY, Wei, T., Guo, B., Ni, W. ja Liu, CZ (2005).Cistanche deserticolarakususpensiooni kultuurid:Fenüületanoidglükosiidide biosüntees ja antioksüdantne aktiivsus. Process Biochemistry, 40, 3119–3124.

Foucault, AP ja Chevolot, L. (1998). Vastuvoolukromatograafia: mõõteriistad, lahusti valik ja mõned hiljutised rakendused looduslike toodete puhastamiseks. Journal of Chromatography A, 808, 3–22.

Gross, G.-A., Lahloub, MF, Anklin, C., Schulten, H.-R. ja Sticher, O. (1988). Teukriosiid, fenüülpropanoidglükosiid firmalt Teucrium Chamaedrys. Phytochemistry, 27, 1459–1463.

He, ZD, Lau, KM, Xu, HX, Li, PC ja But, PPH (2000).

Antioksüdantne aktiivsusfenüületanoidglükosiidid Brandisia juhusest. Journal of Ethnopharmacology, 71, 483–486.

Kobayashi, H., Karasawa, H. ja Miyase, T. (1984). Uuringud Cistanchis Herba koostisosade kohta. III. Uute fenüülpropanoidglükosiidide eraldamine ja struktuurid,Tsistanosiid Aja B. Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 32, 3009–3014.

Kobayashi, H., Oguchi, H., Takizawa, N., Miyase, T., Ueno, A., Usmanghani, K. jt. (1987). Uusfenüületanoidpärit glükosiididCistanchetubulosa (Schrenk) Konks. FI Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 35, 3309–3314.

Lei, L., Yang, FQ, Zhang, TY, Tu, PF, Wu, LJ ja Ito, Y. (2001).

Ettevalmistav isoleerimine ja puhastamineakteosiidja 2'-atsetüülakteosiid firmalt Cistanches salsa (CA Mey) G. Beck, kasutades vastuvoolu kromatograafiat. Journal of Chromatography A, 912, 181–185.

Li, L., Tsao, R., Liu, ZQ, Liu, SY, Yang, R., Young, JC jt. (2005). Isoleerimine ja puhastamineakteosiidja isoakteosiid taimest Plantago psyllium L. kiire vastuvoolukromatograafia abil. Journal of Chromatography A, 1063, 161–169.

Li, LL, Wang, XW ja Wang, XF (1997). Antilipiidide peroksüdatsioon ja glükosiidide radikaalide vastane toime herba Cistanches. China Journal of Chinese Materia Medica, 22, 364–367.

Li, J., Wang, PF, Zheng, RL, Liu, ZM ja Jia, ZJ (1993). Pedicularise fenüülpropanoidglükosiidide kaitse oksüdatiivse hemolüüsi eest in vitro. Planta Medica, 59, 315–317.

Lu, MC (1998). Uuringud sedatiivse toime kohtaCistanche deserticola.Etnofarmakoloogia ajakiri, 59, 161–165.

Nishimura, H., Sasaki, H., Inagaki, N., Chin, M. ja Mitsuhashi, H. (1991). Üheksa fenetüülalkoholi glükosiidi firmalt Stachys szeboldzz. Phytochemistry, 30, 965–969.

Oka, F., Oka, H. ja Ito, Y. (1991). Kiire vastuvoolukromatograafia jaoks sobivate kahefaasiliste lahustisüsteemide süstemaatiline otsimine. Journal of Chromatography, 538, 99–108.

Ravn, H., Nishibe, S., Sasahara, M. ja Li, X. (1990). Plantago Asiatica fenoolsed ühendid. Phytochemistry, 29, 3627–3631.

Schapoval, EES, Winter de Vargas, MR, Chaves, CG, Bridi, R., Zuanazzi, JA ja Henriques, AT (1998). Stachytarpheta cayennensis'e ekstraktide ja eraldatud ühendite põletikuvastane ja antinotsitseptiivne toime. Journal of Ethnopharmacology, 60, 53–59. Shoyama, Y., Matsumoto, M. ja Nishioka, I. (1987). Rehmannia glutinosa Var. haigete juurte fenoolglükosiidid. Purpurea. Phytochemistry, 26, 983–986.

Wang, XW, Jiang, XY, Wu, LY ja Wang, XF (2001). Glükosiidide eemaldav toimeCistanche deserticolavabadele radikaalidele ja selle kaitsele OH-indutseeritud DNA kahjustuste eest in vitro. Journal of Chinese Pharmacology, 36, 29–31.

Wang, YM, Zhang, SJ, Luo, GA, Hu, YN, Hu, JP, Liu, L., Zhu,

Y., & Wang, HJ (2000). Analüüsfenüületanoidglükosiidid ürtide ekstraktis Cistanchis LC/ESI-MS/MS meetodil. Acta Pharmaceutica Sinica, 35, 839–842.

Wong, C.-C., Li, H.-B., Cheng, K.-W. ja Chen, F. (2006). Süstemaatiline uuring 30 Hiina ravimtaime antioksüdantse aktiivsuse kohta, kasutades rauda redutseeriva antioksüdantide võimsuse testi. Food Chemistry, 97, 705–711. Xie, JH ja Wu, CF (1993). Etanooliekstrakti toimeCistanche deserticolamonoamiini neurotransmitterite sisalduse kohta rottidel

aju. Hiina traditsioonilised ja ravimtaimed, 24, 417–419.

Xiong, Q., Hase, K., Tezuka, Y., Tani, T., Namba, T. ja Kadota, S. (1998). Hepatoprotektiivne aktiivsusfenüületanoididalatesCistanche deserticola. Planta Medica, 64, 120–125.

Xiong, QB, Kadota, S., Tani, T. ja Namba, T. (1996). Fenüületanoidide antioksüdatiivne toime alatesCistanche deserticola. Biological & Pharmaceutical Bulletin, 19, 1580–1585.

Zong, G., He, W., Wu, GL ja Chen, LH (1996). Võrdlused vahelCistanche deserticolaYC Ma jaCistanchetorukujuline (Schenk) Wight mõnele farmakoloogilisele tegevusele. Traditsioonilise hiina meditsiini ajakiri, 21, 436–438.