Fenüületanooli glükosiidide erinevus tabelitsinches Herba ja 2 peremeesorganismis Fenüületanoolglükosiidide erinevus tabelitsinches Herba kahes peremeesorganismis põhineb UPLC-QQQ-MS ja PLS-DA analüüsil UPLC-QQQ-MS ja PLS-analüüsil-
May 30, 2025
Cistanche deserticolaon orobanchaceae perekonda kuuluv mitmeaastane holoparasiittaim. See on kuivatatud lihakas vars, mis on kaetud soomusetaoliste lehtedegaCistanche deserticola YC Ma[1-2]. Seda taime levitatakse peamiselt Sise-Mongoolias, Xinjiangis ja Gansus, kus see parasiteerib.Haloksülon-ammodendron (CA Mey.) Bunge, Chenopodiaceae kserofüütiline kõrbetaim [3-4]. Peamised aktiivsed komponendidCistanche deserticolahõlmavad fenüületanoidglükosiide, iridoide ja polüsahhariide [5-7], millel on sellised omadused nagu reproduktiivfunktsiooni kaitse, antioksüdatsioon ja maksakaitse [8-10]. Hiinas üle 2000-aastase kasutusega on see traditsioonilise hiina meditsiini retseptide hulgas esikohal, mille eesmärk on tugevdada elujõudu, ja teisel kohal vananemisvastaste koostiste osas [11]. Ülepüügi ja keskkonna hävitamise tõttu hävivad aga looduslikud ressursidCistanche deserticolaon väljasuremise äärel, mistõttu on see klassifitseeritud riiklikult kaitstud taimeks (II kategooria) ja lisati taimekaitsealasse.Loodusliku taimekaitse rahvusvaheline nimekiri[12]. Pakkumise ja nõudluse tasakaalustamatuse lahendamiseks ravimiturul on kunstlik kasvatamine muutunud hädavajalikuks, et tagada ravimituru säästev areng.Cistanche deserticolatööstusele.
Müüa Cistanche deserticola ekstrakt
Hiljutised uuringud on teatanud edukast inokuleerimisestCistanche deserticolasisseAtriplex canescens[13], Chenopodiaceae sugukonna igihaljas põõsas. Tavaliselt nimetatakse seda "bioloogiliseks magestajaks"Atriplex canescenson kvaliteetne puuliik soolase-leeliselise pinnase parandamiseks [14]. KasvatamineCistanche deserticolasisseAtriplex canescenspakub olulisi eeliseid, nagu kõrge saagikus ja suurepärane kvaliteet. Selle tulemusena hinnatakse kvaliteetiAtriplex canescens-Cistanche deserticolaon muutunud uurimistöö keskuseks [15–16]. Varasemad uuringud on keskendunud peamiselt kuivatatud raviomadusteleCistanche deserticola, samas kui uuringuid aktiivsete komponentide kohta värskel kujul on vähe. Eelkõige pärast lisamistCistanche deserticolaToidu- ja raviainena katsehaldussüsteemis (National Health Commission, 2023. aasta teatis nr. 9), on selle väljatöötamine ja kasutamine kaheotstarbelise ravimtaimena pälvinud traditsioonilise hiina meditsiini valdkonnas märkimisväärset tähelepanu [17]. VärskeCistanche deserticolaon eelistatud selle suurepärase maitse ja mugavuse tõttu, mistõttu on see arendamiseks paljulubav. Värsked ravimmaterjalid on töötlemata värsked taimsed, loomsed või seened, millel on ravi või tervist edendavad omadused. 2000 tavaliselt kasutatavast Hiina ravimtaimest on 486 värsket sorti [18].
Üliefektiivse vedelikkromatograafia-kolme kvadrupoolne tandemmassispektromeetria (UPLC-QQQ-MS) meetod on väga tundlik, mistõttu sobib see madala kontsentratsiooniga ja keerukate komponentide tuvastamiseks [19]. Suure veesisalduse probleemi lahendamiseksCistanche deserticola, kus fenüületanoidglükosiidid on altid ensümaatilisele hüdrolüüsile, mille tulemuseks on vähenenud sisaldus, säilitab ensüümi inaktiveerimise kuivatamise meetod tõhusalt fenüületanoidglükosiidide sisaldust [20]. Selles uuringus kasutatakse UPLC-QQQ-MS-i, et hinnata 8 fenüületanoidglükosiidi, sealhulgas ehhinakosiidi ja akteosiidi, kui peamisi aktiivseid komponente värskes toidus.Cistanche deserticolakahelt peremeestaimelt [21-22]. Uuringus vaadeldakse mahla komponentide sisalduse ja värskete jääkide erinevusiCistanche deserticolakasvanud kahel peremehel. Lisaks töödeldi jääki ensüümidega inaktiveerimisega 80 kraadi juures 5 minutit, millele järgnes kuivatamine, et veelgi võrrelda aktiivsete komponentide säilimistCistanche deserticola. Tulemuste eesmärk on pakkuda teaduslikke tõendeid ja tehnilist tuge värske kaheotstarbelise väärtuse kohtaCistanche deserticolaja selle töötlemismeetodite optimeerimine.
1 Instrumendid ja materjalid
1.1 Instrumendid
1290-6460 üliefektiivne vedelikkromatograafia-kolme kvadrupoolne tandem-massispektromeeter (Agilent Technologies, USA).
AL104 elektrooniline analüütiline kaal (Mettler-Toledo, Šveits).
H-2050R tsentrifuug (Changsha Xiangyi Centrifuge Instrument Co., Ltd.).
Ultrahelipuhasti SB25-12DTD (Ningbo Xinzhi Biological Technology Co., Ltd.).
1.2 Materjalid
TheAtriplex canescens-Cistanche deserticolajaHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolaproovid koguti 2024. aasta märtsis, aprillis ja maisCistanche deserticolaviljelusbaas Xiquani linnas, Jingtai maakonnas, Gansu provintsis. Professor Sun Xuegang Gansu Põllumajandusülikoolist tuvastas proovide lihavad varred.Cistanche deserticola YC Masoomuslehtedega.
Võrdlusstandardid:
Ehhinakosiid (partii number: 23031605; puhtus: 99,74%).
Akteosiid (partii number: 21102103; puhtus: 98,83%).
Tsistanosiid A (partii number: 23041703; puhtus: 98,30%).
Isoakteosiid (partii number: 23052508; puhtus: 99,90%).
2'-atsetüüllakteosiid (partii number: 210053102; puhtus: 97,12%).
Salidrosiid (partii number: 22051208; puhtus: 98,43%).
Tsistanosiid B (partii number: 20120903; puhtus: 98,57%).
Tubulosiid A (partii number: 21060302; puhtus: 93,24%).
Kõik osteti ettevõttelt Chengdu Pfeide Biotechnology Co., Ltd.
Reaktiivid:
Metanool (partii number: O1140576, kromatograafiliselt puhas).
Atsetonitriil (partii number: S3641440, kromatograafiliselt puhas). Mõlemad osteti ettevõttelt Shanghai Anpu Experimental Technology Co., Ltd.
Sipelghape (partii number: 20230710, kromatograafiliselt puhas) osteti ettevõttelt Tianjin Kermio Chemical Reagent Co., Ltd.
Puhastatud vesi (Hangzhou Wahaha Group Co., Ltd.).
2 Meetodid ja tulemused
2.1 Meetodid
2.1.1 Proovi ettevalmistamine
Kolm partiidAtriplex canescens-Cistanche deserticola(partiinumbrid: 20240330-1, 20240420-1, 20240510-1) ja kolm partiidHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticola(partiinumbrid: 20240330-2, 20240420-2, 20240510-2), koguti kokku kuus partiid, viie taimega partii kohta. Taimed pesti veega puhtaks.
Töötlemine:
Proovid purustati ja pressiti mahla, mille tulemuseks oli kahest peremeesorganismist saadud mahl ja jäägid.Cistanche deserticola.
Jäägid kuivatati kahel tingimusel:
Ilma ensüümide inaktiveerimiseta.
Ensüümide inaktiveerimisega (5 minutit 80 kraadi juures ahjus).
Kuivatatud jäägid säilitati edasiseks analüüsiks. Iga ravimmaterjali partii jagati nelja rühma, nagu on näidatud tabelis 1.
Vahekaart. 1 Rühmitamise näidisteave
| Grupp | Tüüp | Atriplex canescens-Cistanche deserticola | Haloxylon ammodendron-Cistanche deserticola |
|---|---|---|---|
| ① | Jääk | C1 | S1 |
| ② | Mahl | C2 | S2 |
| ③ | Ensüümiga inaktiveeritud jääk (5 minutit kuivatamist, purustatud) | C3 | S3 |
| ④ | Ensüümiga inaktiveerimata jääk (kuivatatud ja purustatud) | C4 | S4 |
2.1.2 Kromatograafilised tingimused
Veerg: Agilent Zorbax Eclipse Plus C18 kolonn (2,1 mm × 150 mm, 1,8 μm).
Voolukiirus: 0,3 ml/min.
Süstimismaht: 1 μL.
Kolonni temperatuur: 35 kraadi.
Mobiilne faas: 0,1% sipelghape vees (A) ja atsetonitriilis (B).
Analüüsi aeg: 12 minutit.
Elueerimise gradient:
0–1,5 min: 10% → 20% B.
1,5–3 min: 20% → 30% B.
3–5 min: 30% → 32% B.
5–8 min: 32% → 38% B.
8–9,6 min: 38% → 10% B.
9,6–12 min: 10% B.
Segatud võrdlusstandardite ja uuritavate proovide kromatogrammid on näidatud joonisel 1.(Kinnitage, kas liikuv faas on 0,01% sipelghapet vees (A) ja atsetonitriilis (B).)
Joonis. 1 Võrdlusainete (A) ja proovi (B) kromatogrammid 1-salidrosiid; 2-ehhinakosiid; 3-tsistanosiidA; 4-tuubulosiidA; 5-akteosiid; 6-isoakteosiid; 7-2'-atsetüüllakteosiid; 8-tubulosiid B.
2.1.3 Massispektromeetria tingimused
Iooniallika tüüp: Elektropihustusionisatsioon (ESI).
Režiim: Mitme reaktsiooni jälgimine (MRM) negatiivse iooni režiimis.
Iooniallika temperatuur: 350 kraadi.
Nebulisaatori rõhk: 35 psi.
Kokkupõrkegaas: Lämmastik, seatud keskmisele tasemele.
Analüüsitavate komponentide massispektromeetrilised parameetrid on toodud tabelis 2.
2.1.4 Segastandardlahuse valmistamine
Kaaluge täpselt sobivas koguses võrdlusstandardeidehhinakosiid, akteosiid, tsistanosiid A, isoakteosiid, 2'-atsetüüllakteosiid, salidrosiid, tsistanosiid Bjatubulosiid Aja asetage need 10 ml merevaigukollastesse reaktiivipudelitesse. Lisage 50% metanooli, et valmistada segatud standardlahus kontsentratsiooniga 0,2 mg·mL⁻¹ ja säilitada seda hilisemaks kasutamiseks.
2.1.5 Testlahuste valmistamine
Kaaluge täpselt 0,2 g värsketAtriplex canescens-Cistanche deserticolajääk (C1), värskeHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolajääk (S1), kuivatatudAtriplex canescens-Cistanche deserticolajäägid (C3, C4) ja kuivatatiHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolajäägid (S3, S4). Asetage proovid 10 ml merevaigukollastesse mõõtekolbidesse, lisage 50% metanooli, viige mahuni ja registreerige mass. Leota 0,5 tundi, ultraheliga 40 minutit (250 W, 35 kHz), jahuta toatemperatuurini ja salvesta mass uuesti. Kasutage kaalukaotuse kompenseerimiseks 50% metanooli, segage hästi, tsentrifuugige ja laske lahusel settida. Filtraadi saamiseks filtreerige supernatant läbi 0,22 μm mikropoorse membraani.
VärskeksAtriplex canescens-Cistanche deserticolamahl (C2) ja värskeHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolamahl (S2), võtke igast 10 ml, kaaluge täpselt, segage hästi, tsentrifuugige ja laske lahusel settida. Filtraadi saamiseks filtreerige supernatant läbi 0,22 μm mikropoorse membraani.
2.1.6 Lineaarsusuuring
Sobivad kogused punktis 2.1.4 valmistatud segatud standardlahust lahjendati nii, et tekiks kontsentratsioonigradient.51,2, 128,0, 320,0, 800,0, 4000,0 ja 20 000,0 ug·L⁻¹. Proovid süstiti järjestikku madalast kuni kõrge kontsentratsioonini, järgides punktides 2.1.2 ja 2.1.3 kirjeldatud tingimusi. Viidi läbi lineaarne regressioon, kasutades X-teljena süstimiskontsentratsiooni ja Y-teljena piigi pindala. Kaheksa komponendi lineaarsed seosed on näidatud tabelis 3.
Tabel. 3 Tabelis Cistanches Herba 8 komponendi lineaarse seose uurimise tulemused
| Komponent | Regressioonivõrrand | r | Lineaarne vahemik (ug·L⁻¹) |
|---|---|---|---|
| ehhinakosiid | Y = 16.410 × X − 0.804 | 0.9996 | 51.2–20,000.0 |
| Akteosiid | Y = 102.794 × X − 55.793 | 0.9998 | 51.2–20,000.0 |
| Isoakteosiid | Y = 31.007 × X − 45.169 | 0.9999 | 51.2–20,000.0 |
| 2'-atsetüüllakteosiid | Y = 110.235 × X − 8.953 | 0.9992 | 51.2–20,000.0 |
| Salidrosiid | Y = 19.678 × X − 0.557 | 0.9993 | 51.2–20,000.0 |
| Tubulosiid A | Y = 26.785 × X − 13.630 | 0.9997 | 51.2–20,000.0 |
| Tubulosiid B | Y = 71.810 × X − 0.993 | 0.9998 | 51.2–20,000.0 |
| Tsistanosiid A | Y = 0.578 × X + 1.531 | 0.9994 | 51.2–20,000.0 |
2.1.7 Täpsuskatse
Punktis 2.1.4 kirjeldatud tingimustel valmistatud segastandardlahus lahjendati 50% metanooliga ja süstiti kuus korda järjestikuste punktide 2.1.2 ja 2.1.3 tingimustel. Suhtelised standardhälbed (RSD) piigi pindalade jaoksehhinakosiid, akteosiid, isoakteosiid, 2'-atsetüüllakteosiid, salidrosiid, tsistanosiid B, tubulosiid Ajatsistanosiid Aolid vastavalt 0,95%, 1,47%, 0,56%, 1,05%, 0,93%, 1,08%, 1,19% ja 0,91%, mis näitab head täpsust.
2.1.8 Stabiilsuse test
Üks proovCistanche deserticola(S4) valmistati punktis 2.1.5 kirjeldatud tingimustel. Uuritav lahus süstiti ja analüüsiti 0, 2, 4, 8, 12 ja 24 tunni pärast punktides 2.1.2 ja 2.1.3 kirjeldatud tingimustel. Tipppiirkondade RSD-dehhinakosiid, akteosiid, isoakteosiid, 2'-atsetüüllakteosiid, salidrosiid, tsistanosiid B, tubulosiid Ajatsistanosiid Aolid vastavalt 1,46%, 0,79%, 0,95%, 1,29%, 1,22%, 0,56%, 0,49% ja 1,18%, mis näitab, et proovilahus oli 24 tunni jooksul stabiilne.
2.1.9 Korratavuse test
Üks partiiCistanche deserticola(S4) proov (partii number: 20240420-2) valmistati kuues paralleelses katselahuses punktis 2.1.5 kirjeldatud tingimustel. Proove süstiti ja analüüsiti punktides 2.1.2 ja 2.1.3 kirjeldatud tingimustel. Sisu RSD-dehhinakosiid, akteosiid, isoakteosiid, 2'-atsetüüllakteosiid, salidrosiid, tsistanosiid B, tubulosiid Ajatsistanosiid Aolid vastavalt 1,26%, 0,98%, 1,55%, 1,06%, 1,33%, 0,99%, 1,65% ja 0,95%, mis näitab head korratavust.
2.1.10 Taastetest
Üheksa proovi samast partiistCistanche deserticola(S4, partii number: 20240420-2) valmistati 0,1 g proovi kohta. Proovid jagati kolme rühma, iga rühma kohta tehti kolm kordust. Igale rühmale lisati 80%, 100% ja 120% võrdlusstandardi sisaldusest.Cistanche deserticolanäidis. Katselahused valmistati punktis 2.1.5 kirjeldatud meetodil ja analüüsiti punktides 2.1.2 ja 2.1.3 kirjeldatud tingimustel. Arvutati kaheksa fenüületanoidglükosiidi saagised ja tulemused on näidatud tabelis 4.
Tab. 4 Cistanches Herbas 8 testitud komponendi taastamise määrad
| Komponent | Näidissisu (mg) | Suurenenud (mg) | Mõõdetud (mg) | Keskmine taastumine (%) | RSD (%) |
|---|---|---|---|---|---|
| ehhinakosiid | 0.513 8 | 0.410 1 | 0.911 2 | 99.85 | 1.37 |
| ehhinakosiid | 0.513 8 | 0.513 8 | 1.015 2 | 99.88 | 0.95 |
| ehhinakosiid | 0.513 8 | 0.616 5 | 1.129 4 | 99.85 | 1.06 |
| Akteosiid | 0.421 5 | 0.337 2 | 0.759 6 | 99.90 | 1.02 |
| Akteosiid | 0.421 5 | 0.421 5 | 0.843 5 | 99.87 | 1.18 |
| Akteosiid | 0.421 5 | 0.505 8 | 0.926 7 | 99.84 | 1.24 |
| Isoakteosiid | 0.327 1 | 0.261 7 | 0.588 6 | 99.85 | 0.86 |
| Isoakteosiid | 0.327 1 | 0.327 1 | 0.654 2 | 99.86 | 1.05 |
| Isoakteosiid | 0.327 1 | 0.392 5 | 0.719 1 | 99.84 | 1.13 |
| 2'-atsetüüllakteosiid | 0.110 2 | 0.088 2 | 0.198 3 | 99.87 | 1.15 |
| 2'-atsetüüllakteosiid | 0.110 2 | 0.110 2 | 0.220 1 | 99.86 | 1.09 |
| 2'-atsetüüllakteosiid | 0.110 2 | 0.132 2 | 0.242 4 | 99.85 | 1.21 |
| Salidrosiid | 0.081 6 | 0.065 3 | 0.146 7 | 99.84 | 1.18 |
| Salidrosiid | 0.081 6 | 0.081 6 | 0.163 1 | 99.85 | 1.02 |
| Salidrosiid | 0.081 6 | 0.097 9 | 0.179 7 | 99.84 | 1.17 |
| Tubulosiid B | 0.072 3 | 0.057 9 | 0.130 0 | 99.86 | 1.09 |
| Tubulosiid B | 0.072 3 | 0.072 3 | 0.144 1 | 99.86 | 1.05 |
| Tubulosiid B | 0.072 3 | 0.086 8 | 0.159 2 | 99.84 | 1.24 |
| Tubulosiid A | 0.043 8 | 0.035 0 | 0.078 5 | 99.86 | 1.16 |
| Tubulosiid A | 0.043 8 | 0.043 8 | 0.087 5 | 99.86 | 1.02 |
| Tubulosiid A | 0.043 8 | 0.052 5 | 0.096 2 | 99.84 | 1.15 |
