Dieet-Cistanche leevendab pardi ägedat iileumi kahjustust

Kokkuvõte: Aflatoksiin B1 (AFB1) on stabiilne toksiline metaboliit, mis ohustab inimeste ja loomade tervist ning laialdaselt saastunud loomasööta ja inimtoitu. Käesoleva uuringu eesmärk oli uurida selle mõjudieettsüstancheAFB1 manustamisest põhjustatud niudesoole vigastuse kohta ja uurige selle aluseks olevaid mehhanisme. Sarnase kaaluga pardid (N=450, ühepäevane isane) jaotati juhuslikult 3 rühma, kuhu kuulusid kontrollrühm, AFB1 rühm (60 µg AFB1 kg-1 kehamass) ja tsistanche (500 mg cistanche kg−1 dieet) pluss AFB1 rühm. AFB1 manustamine suurendas märkimisväärselt niudesoole kahjustust, AFB1-DNA adukte plasmas ning oksüdatsioonistressi ja põletikku. Tistanši lisamine toidule kaitses niudesoolt AFB1 manustamisest põhjustatud morfoloogiliste kahjustuste eest, vähendas AFB1-DNA aduktide sisaldust plasmas ning kõrvaldas oksüdatsioonistressi ja põletiku partide niudesooles.Antioksüdatsioonjapõletikuvastane cistanche mõjuvõib kaitsta niudesoole ägedate kahjustuste eest, aktiveerides Nrf{0}}ARE signaaliraja ja pärssides NF-κB signaalirada. Lõplikultcistancheoli dieetantioksüdatsioonjapõletikuvastaneagens, aktiveerides Nrf{0}}ARE signaaliraja ja inhibeerides NF-κB signaaliraja ägedat kahjustust, mis on põhjustatud AFB1 manustamisest.

Märksõnad:cistanche; äge niudesool; AFB1-DNA aduktid; Nrf2-ARE;

Cistanche vananemisvastaste toodete vaatamiseks klõpsake siin

Küsi lisa:

E-post:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp pluss 86 15292862950

1. Sissejuhatus

Liha on inimeste toitumises oluline kvaliteetse valgu allikas. Pardiliha tarbitakse rohkesti kogu maailmas, eriti Aasias selle ihaldusväärsete toiteomaduste tõttu [1]. Seetõttu on pardikasvatus pälvinud inimeste tähelepanu. Pardide jaoks on aretusprotsessis mitmesuguseid puudusi, näiteks AFB1, mis ohustavad partide tervist. Aflatoksiin B1 (AFB1) on üks Aspergillus'e liikide poolt toodetud toksilistest metaboliitidest. AFB1 peetakse aflatoksiinide (AF) rühmade seas kõige mürgisemaks, lisaks on see inimeste ja loomade tervist ohustav valik [2].

Inimeste või loomade jaoks on toit või sööt tavaline ja oluline viis AFB1-ga kokkupuuteks, kuid arvesse võetakse ka sissehingamist ja otsest kokkupuudet naha või limaskestaga ning neid ei jäeta tähelepanuta [3]. Varasemad uuringud on tõestanud, et AFB1 avaldab tugevat toksilisust, mis on väga keeruline ja tugev, põhjustades kasvupeetust, bioloogilisi väärarenguid, maksatoksilisust, seedetrakti häireid ja isegi vähki [4,5]. Toidu või limaskestaga kokkupuutel saadud AFB1 avaldas negatiivset mõju hingamisteedele, seedesüsteemile ja kudedele ning kasvuvõimele [3, 6, 7]. Oksüdatsioonistressi ja põletikuga seotud AFB1 manustamisest põhjustatud kudede ja elundite kahjustused. AFB1 manustamine suurendas AFB{11}}DNA aduktide sisaldust vigastatud elundis [8]. Toitainete ja toksiinide imendumine ja muundamine on toimunud maos ja peensooles, seega

Soole limaskesta immuunsüsteem on esimene rida, mis kaitseb keha vigastuste eest [9]. Tervisliku seedetrakti funktsionaalsust ja morfoloogiat võivad hävitada sellised ebasoodsad tegurid nagu toksilised ained, bakterid ja viirused [10,11]. AFB1 kutsus esile soolestiku struktuuri hävimise, mis väljendub epiteelirakkude eraldumises jejunaal villus ja lümfotsüütide rakkude infiltratsioonis kana soolestikus [12,13]. Funktsionaalsuse ja morfoloogia varieeruvus võib olla tingitud toksiinide metabolismi protsessist, millega sageli kaasneb oksüdatiivne stress, põletik. Kiireloomuline on leida vastumürk, et vähendada ja minimeerida AFB1 ohtu inimestele ja loomadele.

Järelikult on AFB1 oma tugeva mürgisuse tõttu kodulinnutööstuses üks peamisi probleeme. cistanche on teatud tüüpi polüfenoolkomponent, mis esineb kurkumi risoomides (Cur cuma Longa Linn) funktsionaalse söödalisandina, mida kasutatakse loomasöödas [14] ja mida kasutatakse laialdaselt.

rohelise ja loodusliku vürtsina, värvainena, säilitus- ja maitseainena toiduainetööstuses. Taimsed ekstraktid, nagu polüfenoole sisaldav tsistanche, parandasid organismi immuunsust [15]. Tistanche mängib võtmerolli oksüdatiivse stressi vahendatud patoloogiliste-patoloogiliste seisundite ja tegevuste vastu, kui seda kasutatakse krooniliste haiguste ravi ja ennetamise teraapiana [16,17]. Kliinilised uuringud näitasid, et tsistanche ei oma tugevat toksilist ega kõrvaltoimet ning omab kantserogeenseid ja antitoksikogeenseid omadusi, mis viis cistanche kui atraktiivse kemopreventiivse vahendini AFB1-indutseeritud koekahjustuste vastu [18–20]. Kirjandus on näidanud, et cistanche'il on põletikuvastane, apoptoosivastane ja antioksüdatiivne toime, aktiveerides Nrf2/HO-1 raja, suurendades antioksüdantset võimet kõrvaldada põletik ja oksüdatiivne stress organismis ning kõrvaldada AFB1-indutseeritud oksüdatiivne stress [21–25]. cistanche pärssis oksüdatsioonistressi ja põletikuliste protsesside moodustumist, aktiveerides Nrf{17}}ARE ja pärssides NF-κB signaalirada jääkneeru deemoneerimisel [26], oksüdatsiooni- ja põletikuvastast omadust. Lisaks parandas toidutsüstanche märkimisväärselt broilerite [27] ja partide [28] antioksüdantide võimet. Tsistanche rolli Nrf2-ARE ja NF-κB signaalirajas ning ägeda AFB1 manustamise loommudelis ei püütud seostada.

See uuring valgustas seda küsimust ja andis teoreetilise aluse tsitanchele kui söödalisandile, et kaitsta pardi tervist AFB1 manustamise eest ning vähendada AFB1 reostusest põhjustatud majanduslikke kahjusid sööda- ja aretustööstusele.

2. Materjalid ja meetodid

2.1. Kemikaalid

cistanche osteti ettevõttelt Nanjing Nutri-herb Biotech Co., Ltd. (Nanjing, Jiangsu, Hiina, CAS: 458-37-7), selle puhtus oli HPLC analüüsi järgi üle 98 protsendi. AFB1 (puhtus 98 protsenti või suurem, CAS NR. 1162-65-8) osteti ettevõttelt Shanghai Yuan ye Bio-Technology Co., Ltd. (Shanghai, Hiina). Selles uuringus kasutatud antikehad osteti ettevõttest Bey time Biotechnology, Shanghai, Hiina, sealhulgas GAPDH (kataloogi number: AG019), Nrf2 (kataloogi number: AF7623), Phospho-NF-κB p65 (Ser276) (kataloogi number: AF5875), HRP märgistatud Goat Anti-Rabbit IgG (H plus L) (katalooginumber: A0208) ja HRP-märgisega kits

Anti-Mouse IgG (H pluss L) (katalooginumber: A0216).

2.2. Pardid ja loomakasvatus

Katseprotokoll viidi läbi vastavalt Kirde Põllumajandusülikooli põllumajandusloomade hooldamise ja kasutamise põllumajandusuuringutes ja õpetamisel (protokolli number: NEAU-[2011]-9) kirjeldatud tavadele.

Pardid (n {0}}, ühepäevased isased Anas platyrhynchos, 33,8 ± 0,2 g), millel ei olnud märkimisväärset erinevat kaalu, osteti kaubanduslikust haudejaamast ja jaotati juhuslikult 3 rühma (tabel 1), kus oli 10 parte. korduvad aedikud (puurid) rühma kohta ja 15 parti aediku kohta 70-päeva jooksul

söötmiskatse. Põhitoidud koostati vastavalt riiklikule uurimisnõukogule (1994). Rühma T0 ja T0 pluss AFB1 partidele toideti maisi-sojaoa põhitoitu (tabel 2), T500 pluss AFB1 rühma kuuluvaid parte toideti põhitoiduga, millele oli lisatud 500 mg

cistanche kg−1 dieedi (T500) 70-päevane katse. 70 päeval toideti sarnase kehakaaluga partidele T0 pluss AFB1 ja T500 pluss AFB1 rühmades 60 µg AFB1 kg-1 kehakaaluga ja T0 rühma partidele toideti võrdses koguses PBS lahust. Parte toideti Kirde Põllumajandusülikooli Achengi katsebaasis ning neile võimaldati ad libitum juurdepääs veele ja pulbrilisele toidule. Igast rühmast valiti välja viisteist sarnase kehamassiga (1,4 ± 0,3 kg) parti ja neid paastati 12 tundi, seejärel söödeti T0 rühma partidele PBS lahusega ja T0 pluss AFB1 ja 60 µg AFB1 kg-1 kehakaaluga partidele. T500 pluss AFB1 rühmad korraga. 12 tunni pärast pidid iga rühma viisteist parti võtma pardiproove.

2.3. Näidiskogu

Vereproovid (10 ml) võeti parditiibade veenidest hepariinituubide abil ja tsentrifuugiti 1000 × g juures 15 minutit temperatuuril 4 °C. Saadud plasma eraldati kohe ja säilitati analüüsiks temperatuuril –80 ◦C. Pardid anesteseeriti eetri sissehingamise teel ja tapeti niudesoole saamiseks. Iileumi pesti kolm korda PBS-is koheselt ja hoiti individuaalselt vedela lämmastiku paagis, seejärel temperatuuril –80 ◦C qRT-PCR ja antioksüdantide mahu analüüsi jaoks. Seejärel saadi umbes 0,125 cm3 niudesool, mis pandi kudede sektsiooni jaoks 4% paraformaldehüüdi lahusesse ja umbes 1 mm3 niudesool pandi elektronmikroskoobi.

lahus temperatuuril 4 ◦C hilisemaks ultrastruktuuriliseks vaatluseks.

2.4. Antioksüdantide taseme analüüs plasmas

Üldise superoksiidi dismutaasi (T-SOD), glutatioonperoksidaasi (GSH Px), glutatiooni S-transferaasi (GSH-ST) ja malondialdehüüdi (MDA) taset plasmas mõõdeti testikomplektidega (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Hiina). vastavalt koos

UV-VIS spektrofotomeeter (UV1100, MAPADA, Shanghai, Hiina).

2.5. AFB1-DNA aduktide taseme analüüs plasmas

AFB1-DNA aduktide teke plasmas määrati ELISA komplektide abil vastavalt komplekti spetsifikatsioonidele (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nan Jing, Hiina).

2.6. Antioksüdantide võime analüüs iileumis

Ileum (100.00 mg) eraldati ja segati 0,9 ml insuldi füsioloogilise soolalahusega (4 ◦C, 0,9 protsenti NaCl, pH=7,2). –7.4), et saada 10 protsenti niudesoole/SPSS homogenaati. Üldise superoksiidi dismutaasi (T-SOD U/mg valk), redutseeriva Glu-glutatiooni (GSH-PX µmol/mg valgu), glutatiooni S-transferaasi (GSH-ST U/mg valk) ja malondialdehüüdi (MDA nmol/) aktiivsus või sisaldus mg valku) niudesooles hinnati testikomplektide abil (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Hiina) UV-VIS-iga.

spektrofotomeeter (UV1100, MAPADA, Shanghai, Hiina).

2.7. RNA eraldamine ja reaalajas kvantitatiivne polümeraasi ahelreaktsioon (qRT-PCR)

Pardi niudesoole kogu RNA (100,00 mg) eraldati reaktiivikomplekti (TaKaRa, Jaapan) abil vastavalt tootjate soovitatud protokollile. Kogu RNA kontsentratsioon ja puhtus tuvastati spektrofotomeetriga (IMPLEN, Saksamaa) suhtega A260/A280. 1 µg kogu RNA-d igas proovis muundati cDNA-ks Prime Script™ RT reaktiivikomplektiga koos gDNA Eraseriga (TaKaRa, Dalian, Hiina) vastavalt

tootjate soovitatud protokollile. Igast pardi niudesoolest saadud cDNA-d kasutati matriitsina TB Green™ Premix Ex Taq™ (TaKaRa, Dalian, Hiina) RT-PCR (qRT-PCR) komplektis. Partide geenide liitumisnumber saadi NCBI-st ja

pardi geeni praimerid sünteesis Sangon Biotech Co., Ltd. (Shanghai, Hiina) (tabel 3). Asjakohane geeniekspressioon pardi iileumis määrati Quanta geeni Q225 termotsükleri aparaadiga. qRT-PCR viidi läbi Monad Selected Real-Time's

PCR-süsteem (ABI 7500 reaalajas PCR-seade (USA)), mis voolab tingimuseni: üks tsükkel temperatuuril 95 °C 30 sekundit, 40 tsüklit temperatuuril 95 °C 5 sekundit ja temperatuuril 60 °C 30 sekundit. Detekteeriva mRNA suhteline geeniekspressiooni suhe tuvastati 2−∆∆Ct meetodil ja normaliseeriti -aktiini ekspressiooniks.

2.8. Western Blotting

Pardi niudesool peenestati ja lüüsiti jääs RIPA puhvris, mis sisaldas 1 mmol/l PMSF-i (Beyotime, Shanghai, Hiina). Valgu kogukontsentratsioon niudesooles määrati bitsinhoniinhappe (BCA) testikomplektiga (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Hiina). 12 protsenti ja 10 protsenti SDS-polüakrüülamiidgeeli elektroforeesiks olid

kasutatakse erineva molekulmassiga sihtvalkude saamiseks. Seejärel viidi sihtvalgud üle polüvinülideen-difluoriid (PVDF) membraanile (Beyotime, Shanghai, Hiina) trans-blot-aparaadiga blotimiseks. PVDF-i membraani pesti 3 korda 10 minutit iga kord 1 × PBST-s ja blokeeriti seejärel 2 tundi 5-protsendilises kooritud piimas. PVDF-i membraani pesti uuesti kolm korda ja inkubeeriti GAPDH, Nrf2 ja P-P65 (Beyotime Biotechnology, Shanghai, Hiina) primaarsete antikehadega 8–12 tundi temperatuuril 4 °C. Järgmisel päeval pesti PVDF membraani uuesti 3 korda ja inkubeeriti vastava mädarõika peroksidaasiga märgistatud antikehaga temperatuuril 37 ◦C 1 tund, seejärel pesti uuesti 3 korda.

Sihtvalgu ribad tuvastati ja visualiseeriti täiustatud fluorestsentsi tuvastamise komplekti BeyoECL Star (Beyotime Biotechnology, Shanghai, Hiina) toimel. Blottide pildid salvestati ja analüüsiti Essential V6 pildiplatvormiga (UVITEC, Cambridge,

Inglismaa). GAPDH valk toimis sisemise kontrollvalguna. Kõiki katse tulemusi korrati kolmes eksemplaris. Sihtvalkude suhtelised ekspressioonid väljendati valkude riba intensiivsuse ja GAPDH suhtena.

2.9. Statistiline analüüs

Katse andmed saadi vähemalt kuus korda ja iga proovi mõõdeti kolm korda. Uurimisandmete analüüs SPSS-i Independent-Samples T Testiga (versioon 22.0, SPSS Inc., Chicago, IL, USA) 5 protsendiga Vea tõenäosus ja statistiline olulisus oli p < {{4} }.05 selles uuringus